Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якуток


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2461005:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и касается способа прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якуток. Выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови и методом полимеразной цепной реакции выявляют T45G полиморфизм гена адипонектина (ADIPOQ). При выявлении генотипа *Т/*Т и аллеля *Т прогнозируют риск развития диабетической ретинопатии. Способ обеспечивает выявление группы риска по диабетической ретинопатии при сахарном диабете 2 типа у якуток для дальнейшего определения тактики профилактических и лечебных мероприятий. 2 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано в офтальмологии, а также в эндокринологии, медицинской генетике, общественном здоровье и здравоохранении, медико-социальной экспертизе, генной инженерии, генотерапии для прогнозирования развития и профилактики диабетической ретинопатии (ДР) при сахарном диабете типа 2 (СД типа 2) у якуток.

Известен способ прогнозирования возникновения и развития диабетической ретинопатии у больных инсулинзависимым сахарным диабетом (заявка 2003122404/15, G01N 33/68, БИПМ №6, 27.02.2005 г.), который позволяет прогнозировать возникновение и прогрессирование диабетической ретинопатии у больных инсулинзависимым сахарным диабетом при проведении иммунологического исследования сыворотки крови путем определения содержания интерлейкина - 1β при наличии его в концентрации 50 пкг/мл и выше. Возникновение диабетической ретинопатии при отсутствии клинических явных изменений на глазном дне прогнозируют при концентрации интерлейкина - 1β 700 пкг/мл и более.

Известен способ прогнозирования клинической манифестации диабетической ретинопатии у больных сахарным диабетом 2 типа (патент 2292549, G01N 33/487, БИПМ №3, 27.01.2007 г.), который позволяет исследовать индуцированную хемолюминесценцию слезной жидкости и световую чувствительность макулы с помощью фотостресс-теста. При значениях индуцированной хемолюминесценции слезной жидкости от 0,031-0,043 отн. ед. и показателях световой чувствительности макулы от 56 до 75 секунд прогнозируют высокий риск клинической манифестации диабетической ретинопатии на ранней стадии.

Известен способ прогнозирования развития диабетической ретинопатии (заявка 2005112169/15, G01N 33/48, БИПМ №30, 27.10.2006 г.), который включает определение нитритов в крови, а в слезной жидкости - холестерин, СОД и каталазу, по этим показателям составляют карту, по которой определяют стадии развития ДР.

Известен способ диагностики диабетической ретинопатии (патент 2071059, G01N 33/68, БИ №36, 27.12.1996 г.), который позволяет диагностировать диабетическую ретинопатию при определении в сыворотке крови повышенного уровня тироксинсвязывающего гормона в 1,5 и более раз.

Известен способ прогнозирования развития диабетической ретинопатии (патент 2124727, G01N 33/53, A61F 9/00, БИ №1, 10.01.1999 г.), который обеспечивает возможность прогнозирования перехода непролиферативной стадии диабетической ретинопатии в пролиферативную путем иммунологического исследования слезной жидкости и определения концентрации иммуноглобулина А при его значениях не менее 0,20 г/л.

Однако все перечисленные выше способы не позволяют в полном объеме определять специфические и генетические признаки диабетической ретинопатии непосредственно у больных сахарным диабетом типа 2, в частности, в зависимости от этнической принадлежности обследуемых пациентов, а именно у якутов.

Известен способ диагностики риска развития у субъекта атеросклероза или диабетической ретинопатии (заявка 2001130755/14, C12Q 1/68, БИПМ №24, 27.08.2003 г.), включающий определение у диабетика наличия полиморфизма на участке сигнального пептида препро- NPY человека. Полиморфизм заключается в замене лейцина на пролин в 7-ом положении на участке сигнального пептида препро- NPY человека и является индикатором повышенного риска развития диабетической ретинопатии и атеросклероза.

Данный способ диагностики разработан на основе изучения генетической предрасположенности к ДР при сахарном диабете независимо от его типа в гетерогенной популяционной среде и поэтому не приемлем для медико-генетического консультирования по ДР при СД типа 2 в других регионах, в частности в Республике Саха (Якутия). Это обусловлено тем, что генетическая предрасположенность к ДР при СД типа 2, как и к другим многофакторным заболеваниям, формируется в зависимости от особенностей популяционно-генетической структуры этноса, к которому относится этническая группа якутов.

Задача предлагаемого способа - прогнозирование риска развития ДР при СД типа 2 у якуток.

Поставленную задачу решают за счет того, что амплификацию специфичности гена адипонектина - ADIPOQ определяют методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и при выявлении генотипа *T/*T и аллеля *T полиморфного варианта 45 G/T - ADIPOQ прогнозируют риск развития диабетической ретинопатии.

Способ осуществляют следующим образом

Кровь для выделения ДНК собирают из локтевой вены пациента в специальный вакутейнер с консервантом EDTA. Собранную кровь замораживают в специальном контейнере при температуре - 20°С и ниже.

ДНК экстрагируют из лейкоцитов с помощью системы очистки (Promega, Madison, WI). В работе использовали полиморфный маркер гена адипонектина, участвующий в метаболизме липидов и углеводов: ADPIQ (вариант 45G/T). Гаплотип rs2241766 гена ADIPOQ анализирован с помощью аллельной дифференциации Tagman универсальной средой ПЦР (по AmpErase UNG). Все реакции проводились на системе ABI7300 с использованием программы SDS 1.2 (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Фрагменты ПНР денатурировали при температуре 95°С в течение 5 минут с последующей ренатурацией понижением температуры до 25°С на протяжении 45 минут. Идентификация аллелей выполнена с использованием системы Wave Nuclear Acid Fragment Analysis System (Transgenomic, Omaha, NE). Результаты соответствовали прямым данным секвенирования.

Статистическая обработка материалов. Статистический анализ данных проведен с использованием пакета Statistica 8.0 и SAS 7.0. При сравнении качественных данных использован критерий Пирсона χ2 и точный критерий Фишера. Критическое значение уровня значимости принималось равным 5%. Относительный риск заболевания по каждому аллелю вычисляли как соотношение шансов (odds ratio - OR) с расчетом доверительных интервалов (OR'). При OR=1 ассоциации нет, OR>1 - положительная ассоциация заболевания с аллелем и генотипом и OR<1 - отрицательная ассоциация.

Офтальмологическое обследование пациентов включало стандартные методы определения визометрии, офтальмотонуса, биомикроскопии, офтальмоскопии с применением универсальной линзы Гольдмана в условиях медикаментозного мидриаза при отсутствии противопоказаний.

Учитывая особые этические моменты, связанные с охраной права личности, осмотры и забор биологического материала проводились с заполнением специальных медицинских карт при добровольном согласии на участие в клиническом исследовании взрослого пациента или родителя несовершеннолетнего больного. Форма указанной медицинской карты одобрена Комитетом по этике при Якутском научном центре СО РАН РФ (Протокол №5 от 21.06.2006 г.).

Нами обследованы коренные жители, принадлежащие к этнической группе якутов, проживающие в 5 районах (Амгинский, Усть-Алданский, Таттинский, Чурапчинский, Мегино-Кангаласский) Республики Саха (Якутия).

В ходе работы исследованы 238 образцов ДНК этнических якутов обеих гендерных групп. Группу исследования составили 78 больных ДР (Классификация E.Kohner, M.Porta, 1990) при СД типа 2, в возрасте свыше 40 лет. Контрольная группа состояла из 160 добровольных доноров, той же этнической группы, без клинических и лабораторных признаков сахарного диабета, не родственных между собой и не имеющих отягощенный семейный анамнез по сахарному диабету. Сравнительная клинико-социальная характеристика исследуемых пациентов в обеих группах представлена в таблице 1.

Таблица 1
Сравнительная социально-клиническая характеристика исследуемых пациентов в этнической группе якутов
Характеристика исследуемых пациентов в этнической группе якутов Группа больных ДР при СД 2 типа Контрольная группа
1 2 3
Возраст 54.7±10.9 57.0±14.7
Пол (М/Ж в %) 31.5/68.5 42.6/57.4
Индекс массы тела 27.5±3.76 25.2±2.87
Гликемия (ммоль/л) 11.7±4.81 4.8±0.75
Артериальное давление (систолическое) (ммHg) 151±24 140±14
Артериальное давление (диастолическое) (ммHg) 92±11 88±8

Из таблицы 1 видно, что пациенты обеих групп не имели особых статистических различий по полу и возрасту. Основной составляющей обеих групп были женщины в возрасте старше 50 лет. Среди пациентов исследуемой группы отмечается повышенный индекс массы тела, уровня гликемии артериального давления.

В результате офтальмологического исследования пациентов установлено, что длительность развития ДР варьировала в диапазоне от 1 года до 20 лет. ДР развилась в 62.8% случаев после установления СД типа 2 в течение первых 5 лет. Впервые выявленная ДР, преимущественно 1 и 2 стадии, установлена нами при сроке СД типа 2 на момент исследования и продолжительности основного заболевания до 1 года в 30% случаев.

Данный факт подтверждает тяжесть диабетических микроангиопатий органа зрения, обусловливающих раннюю слепоту и слабовидение пациентов в первые годы заболевания. В результате молекулярно-генетического исследования отмечено, что эмпирическое распределение частот генотипов полиморфного варианта 45 G/T гена адипонектина в популяции якутов соответствует теоретически ожидаемому равновесию Харди-Вайнберга (χ2=0.066, P=0.999).

Среди мужчин с ДР и здоровых лиц достоверные статистические различия по полиморфному варианту 45 G/T гена адипонектина (ADIPOQ) не выявлены. Оценка распределения частот генотипов и аллелей полиморфного варианта 45 G/T гена адипонектина (ADIPOQ) обнаружила статистически значимые различия между женщинами, больными ДР, и женщинами контрольной группы (табл.2).

Из табл.2 видно, что с наибольшей частотой в группе женщин, больных ДР, чем у женщин в контрольной группе, встречаются генотип *T/*T (82.35% против 64.15%, Р=0.047) и аллель *T (90.2% против 79.25%, Р=0.617). Относительный риск (OR) генотипа *T*T составил 2.61 (CIOR=1.05-5.38) и аллеля *T составил 2.41 (CIOR=1.05-5.38). Частоты других генотипов и аллелей достоверно не различаются.

Предлагаемый способ позволяет при выявлении генотипа *T/*T и аллеля *T полиморфного варианта 45 G/T (ADIPOQ) гена адипонектина у якуток прогнозировать риск развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2.

Выявленные генотип *T/*Т и аллель *T полиморфного варианта 45 G/T (ADIPOQ) гена адипонектина являются маркерами повышенного риска диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 для женщин данного этноса. Полученные результаты будут способствовать своевременному прогнозированию и/или выявлению группы риска по диабетической ретинопатии среди якуток и помогут определить тактику ведения пациента с предрасположенностью к диабетической ретинопатии с использованием индивидуального комплекса профилактических и лечебных мероприятий.

Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якуток, включающий выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, отличающийся тем, что амплификацию специфичности гена адипонектина - ADIPOQ определяют методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и при выявлении генотипа *Т/*Т и аллеля *Т полиморфного варианта 45 G/T - ADIPOQ прогнозируют риск развития диабетической ретинопатии.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к экстремальной медицине, медицине катастроф, хирургии и терапии, и может быть использовано для прогнозирования исходов лечения пострадавших с глубокими отморожениями конечностей.
Изобретение относится к медицине, конкретно к дерматологии, и касается способа диагностики атопического дерматита у детей. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматовенерологии. .
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматовенерологии, и касается способа определения резистентности больных распространенными хроническими дерматозами (псориазом, атопическим дерматитом, вульгарной или акантолитической пузырчаткой) к проводимой терапии.

Изобретение относится к области медицинской диагностики, может быть использовано для прогнозирования нарушения маточно-плодово-плацентарного кровотока. .
Изобретение относится к практической медицине, а именно клинико-лабораторной диагностике, и касается способа прогнозирования развития бронхолегочных осложнений при шейно-спинальной травме.
Изобретение относится к медицине, конкретно к диагностике в кардиологии, и касается способа прогнозирования риска возникновения гипертонической болезни у мужчин. .
Изобретение относится к медицине и описывает способ диагностики переходноклеточного рака мочевого пузыря, который основан на обнаружении FISH-методом генетических изменений в клетках уротелия, характерных для РМП, а именно увеличение количества перицентромерных сигналов 3, 7 и 17-й хромосом и/или отсутствие сигнала по локусу 9р21, выявляемых ДНК-зондами «UroVysion».
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и касается способа прогнозирования рисков рецидива неразвивающейся беременности (НБ) у супружеских пар на основании результатов генотипирования.

Изобретение относится к медицине, а именно к молекулярно-генетической диагностике в онкологии, и касается способа прогнозирования развития профессиональных злокачественных новообразований кожи у работников производства стекловолокна.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу гомогенной детекции со сниженным разбросом данных по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в молекулярной диагностике, связанной с выявлением РНК-мишеней. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к набору олигодезоксирибонуклеотидных праймеров и флуоресцентно-меченного зонда для идентификации РНК энтеровирусов.
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для выявления и дифференциальной диагностики манифестной и асимтпомной форм уретрита, обусловленного условно-патогенными микроорганизмами, у мужчин репродуктивного возраста.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в медицине при определении наследственной предрасположенности к развитию заболеваний, ассоциированных с носительством полиморфных вариантов гена тиоредоксинредуктазы-1.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и может быть использовано в медицине при определении наследственной предрасположенности к развитию заболеваний, ассоциированных с носительством полиморфных вариантов гена пероксиредоксина-1.
Изобретение относится к области медицинской диагностики, а именно к кардиологии и медицинской генетике. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу диагностики биоматериалов на наличие в них агробактерий. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к зонду для детекции и набору (варианты) для детекции целевой нуклеиновой кислоты, спейсеру, подходящему для присоединения к специфической к мишени последовательности зонда и способу детекции любого взаимодействия между заявленным зондом и целевой нуклеиновой кислотой
Наверх