Фармацевтические композиции конъюгатов соматостатин-дофамин

Авторы патента:

ЧЖАН Цзюньдун (US)

ДОНГ Чжен Ксин (US)

A61K38/31 - соматостатины

Владельцы патента RU 2464039:

ИПСЕН ФАРМА С.А.С. (FR)

Изобретение относится к области медицины, в частности к фармацевтической композиции, содержащей конъюгат соматостатин-дофамин, который сохраняет активность как соматостатина, так и дофамина in vivo. Конкретно настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Суs-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:1), в которой конъюгат соматостатин-дофамин осаждается in vivo при физиологическом рН с образованием осадка in situ, который медленно диссоциирует и высвобождается в жидкость организма и кровоток. Настоящее изобретение может дополнительно содержать органический компонент, такой как диметилацетамид (DMA) или полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 400 (PEG400). Изобретение обеспечивает снижение побочных эффектов. 9 з.п. ф-лы, 1 пр., 7 табл., 5 ил.

Предпосылки изобретения

Настоящее изобретение относится к усовершенствованиям в композициях, содержащих конъюгат соматостатин-дофамин, который in vivo сохраняет активность как соматостатина, так и дофамина, способам получения таких композиций и способам применения таких композиций для лечения млекопитающих. Конкретно настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:1), в которой конъюгат соматостатин-дофамин осаждается in vivo при физиологическом pH с образованием осадка in situ, который медленно растворяется и высвобождается в жидкость организма и систему кровотока. Настоящее изобретение может дополнительно содержать органический компонент, такой как диметилацетамид (DMA) или полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 400 (PEG400).

Дофамин представляет собой катехоламиновый нейромедиатор, который вовлечен в патогенез как болезни Паркинсона, так и шизофрении. Показано, что дофамин и родственные молекулы ингибируют рост некоторых видов злокачественных опухолей у мышей, и эта активность, по отдельности, связана с ингибированием пролиферации опухолевых клеток, стимулированием иммунитета к опухоли, а также влиянием на метаболизм меланина в злокачественных меланомах. Недавние исследования показали наличие рецепторов дофамина D2 на эндотелиальных клетках. Недавно описано, что дофамин в нетоксических концентрациях сильно и избирательно ингибирует сосудистую проницаемость и ангиогенную активность VPF/VEGF.

Соматостатин (SS), тетрадекапептид, как показано, обладает сильным ингибиторным действием на различные секреторные процессы в тканях, таких как гипофиз, поджелудочная железа и желудочно-кишечный тракт. В центральной нервной системе SS также действует в качестве нейромодулятора. Эти биологические эффекты SS, по природе все ингибиторные, осуществляются через группы рецепторов, связанных с белком G, из которых описано пять различных подтипов (SSTR-1-SSTR-5). Эти пять подтипов обладают схожими аффинностями к эндогенным лигандам SS, но различаются по распределению в различных тканях. Соматостатин связывается с пятью различными подтипами рецепторов (SSTR) с относительно высокой и равной аффинностью для каждого подтипа.

Существует доказательство, что SS регулирует клеточную пролиферацию, подавляя клеточный рост посредством подтипов SSTR-1, -2, -3, -4 и -5 и/или индуцируя апоптоз через подтип SSTR-3. Показано, что SS и различные аналоги ингибируют нормальную и неопластическую клеточную пролиферацию in vitro и in vivo посредством специфических рецепторов SS (SSTR) и, возможно, посредством различных пострецепторных действий. Кроме того, существует доказательство, что в нормальных и неопластических тканях человека экспрессируются различные подтипы SSTR, предоставляющие в тканях различные аффинности к разным аналогам SS и переменный клинический ответ на их терапевтические действия.

Связывание с различными типами подтипов рецепторов соматостатина ассоциируют с лечением различных состояний и/или заболеваний. Например, ингибирование гормона роста связано с рецептором соматостатина 2 типа («SSTR-2»), тогда как ингибирование инсулина связано с рецептором соматостатина 5 типа («SSTR-5»). Активирование 2 и 5 типов связано с супрессией гормона роста и более конкретно с аденомами, секретирующими гормон роста (акромегалия), и аденомами, секретирующими тиреотропный гормон (TSH). Активирование рецептора 5 типа, но не 2 типа, связано с лечением аденом, секретирующих пролактин. Другие показания, связанные с активацией подтипов рецепторов соматостатина, включают ингибирование инсулина и/или глюкагона для лечения сахарного диабета, ангиопатии, пролиферативной ретинопатии, феномена «утренней зари» и нефропатии; ингибирование секреции кислоты в желудочном соке для лечения пептических язв, тонкокишечного-кожного и панкреато-кожного свища, синдрома раздраженного толстого кишечника, демпинг-синдрома, синдрома «водянистой» диареи, диареи, сопутствующей СПИД, диареи, вызванной химиотерапией, острого или хронического панкреатита и опухолей, секретирующих гастроинтестинальный гормон; лечение злокачественной опухоли, такой как гепатома; ингибирование ангиогенеза; лечения воспалительных нарушений, таких как артрит; ретинопатия; хроническое отторжение аллотрансплантата; ангиопластика; предотвращение кровотечения сосуда трансплантата и желудочно-кишечного кровотечения. Предпочтительно аналог соматостатина является селективным для определенного подтипа или подтипов рецепторов соматостатина, ответственных за желаемую биологическую реакцию, для снижения взаимодействия с другими подтипами рецепторов, которое может привести к нежелаемым побочным эффектам или потере эффективности.

Соматостатин и его рецепторы (от SSTR-1 до SSTR-5) экспрессируются в нормальных парафолликулярных C клетках и в медуллярной тиреоидной карциноме (MTC). MTC представляет собой опухоль, происходящую из парафолликулярных C клеток, которые продуцируют кальцитонин (CT), соматостатин и некоторые другие пептиды. Недавно показано, что SS и SSTR экспрессируются в MTC человека, и было показано, что SS и аналоги SS индуцируют снижение уровней CT в плазме и обеспечивают симптоматическое улучшение у пациентов с MTC. Другое недавнее исследование показало, что SS и аналоги SS, конкретно SSTR-1 и SSTR-2, могут ингибировать пролиферацию опухолевых клеток, что предполагает, что определенные подтипы SSTR могут функционировать в регуляции роста клеток в MTC. Разработка и описание аналогов подтипов SSTR, которые избирательно действуют на рост клеток MTC, являются полезными для клинического и терапевтического применения.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей конъюгат дофамин-соматостатин. Особенно предпочтительным является следующий конъюгат дофамин-соматостатин, который в дальнейшем называют как «Пример 1»: Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:1) или его фармацевтически приемлемая соль, где состав указанной композиции обеспечивает высококачественное производство, введение, фармакокинетические и фармакодинамические свойства, а также уменьшенные отрицательные побочные эффекты. Структура молекулы примера 1 представляет собой:

В предпочтительных признаках изобретение обеспечивает фармацевтическую композицию, в которой конъюгат дофамин-соматостатин осаждается in vivo при физиологическом pH с образованием осадка in situ, который медленно растворяется и высвобождается в жидкость организма и кровоток. Изобретение можно суммировать в следующих пунктах с (1) вплоть до (38), ниже, а также в пунктах формулы изобретения. Таким образом:

(1) В одном из аспектов настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции из чистого водного раствора или геля или полутвердого материала, включающей конъюгат соматостатин-дофамин или его фармацевтически приемлемую соль, в которой конъюгат соматостатин-дофамин образует осадок после подкожного или внутримышечного введения субъекту.

(2) Фармацевтическая композиция по пункту (1), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин представляет собой пример 1, т.е. Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:1).

(3) Фармацевтическая композиция по пункту (2), дополнительно содержащая органический компонент.

(4) Фармацевтическая композиция

(5) Фармацевтическая композиция по пункту (3), где указанный органический компонент увеличивает растворимость конъюгата соматостатин-дофамин в водном растворе или снижает вязкость геля или полутвердого материала.

(6) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой органический полимер.

(7) Фармацевтическая композиция по пункту (5), где указанный органический полимер представляет собой полиэтиленгликоль (PEG).

(8) Фармацевтическая композиция по пункту (6), где указанный PEG выбран из группы, состоящей из PEG300, PEG400 и PEG1750.

(9) Фармацевтическая композиция по пункту (8), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в 20% водном растворе PEG400 в концентрации приблизительно 30% (мас./об.).

(10) Фармацевтическая композиция по пункту (8), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в 5% водном растворе DMA в концентрации приблизительно 200 мг/мл.

(11) Фармацевтическая композиция по пункту (8), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в 5% водном растворе PEG400 в концентрации приблизительно 200 мг/мл.

(12) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов (1)-(3), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в воде в диапазоне концентрации приблизительно 15-30% (мас./об.).

(13) Фармацевтическая композиция по пункту (12), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в воде до концентрации приблизительно 15% (мас./об.).

(14) Фармацевтическая композиция по пункту (12), где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в воде до концентрации приблизительно 30% (мас./об.).

(15) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой органический растворитель.

(16) Фармацевтическая композиция по пункту (15), где указанный органический растворитель представляет собой амид.

(17) Фармацевтическая композиция по пункту (16), где указанный амид представляет собой диметилацетамид (DMA).

(18) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой спирт.

(19) Фармацевтическая композиция по пункту (18), где указанный спирт выбран из группы, состоящей из этанола, пропанола и пропиленгликоля.

(20) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой сахар.

(21) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой циклодекстрин.

(22) Фармацевтическая композиция по пункту (21), где указанный циклодекстрин выбран из группы, состоящей из гидроксипропил-циклодекстрина и простого сульфобутилового эфира-циклодекстрина.

(23) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой фосфолипид.

(24) Фармацевтическая композиция по пункту (23), где указанный фосфолипид выбран из группы, состоящей из гидрогенизированного фосфатидилхолина бобов сои, дистеароил-фосфатидилглицерина, 1-димиристоил-фосфатидилхолина и 1- димиристоил-фосфатидилглицерина.

(25) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой водорастворимый органический растворитель.

(26) Фармацевтическая композиция по пункту (25), где указанный водорастворимый органический растворитель выбран из группы, состоящей из PEG300, этанола, пропиленгликоля, глицерина, N-метил-2-пирролидона, диметилацетамида и диметилсульфоксида.

(27) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой неионное поверхностно-активное средство.

(28) Фармацевтическая композиция по пункту (27), где указанное неионное поверхностно-активное средство выбрано из группы, состоящей из Кремофора EL, Кремофора RH 40, Кремофора RH 60, d-токоферол полиэтиленгликоль 1000 сукцината, полисорбата 20, полисорбата 80, сорбитан моноолеата, полоксамера 407, Лабрафила M-1944CS, Лабрафила M-2125CS, Лабразола, Gellucire 44/14, Софтигена 767 и моно- и ди- сложных эфиров жирных кислот и PEG300, PEG400 или PEG1750.

(29) Фармацевтическая композиция по пункту (4), где указанный органический компонент представляет собой сложный эфир.

(30) Фармацевтическая композиция по пункту (29), где указанный сложный эфир представляет собой сложный полигликолевый эфир.

(31) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (30), где конъюгат соматостатин-дофамин находится в водном растворе с pH между 1,0 и 10,5, предпочтительно между 3 и 8 и более предпочтительно между 5 и 6.

(32) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (31), где конъюгат соматостатин-дофамин находится в концентрации приблизительно от 0,0001 до 500 мг/мл, предпочтительно приблизительно от 0,1 до 300 мг/мл.

(33) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (32), дополнительно содержащая консервант.

(34) Фармацевтическая композиция по пункту (33), где указанный консервант выбран из группы, состоящей из м-крезола, фенола, бензилового спирта и метил парабена.

(35) Фармацевтическая композиция по пункту (34), где указанный консервант присутствует в концентрации от 0,01 до 100 мг/мл.

(36) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (35), дополнительно содержащая изотоническое средство.

(37) Фармацевтическая композиция по пункту (36), где указанное изотоническое средство присутствует в концентрации от 0,01 до 100 мг/мл.

(38) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (37), дополнительно содержащая стабилизатор.

(39) Фармацевтическая композиция по пункту (38), где указанный стабилизатор выбран из группы, состоящей из имидазола, аргинина и гистидина.

(40) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (39), дополнительно включающая поверхностно-активное вещество.

(41) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (40), дополнительно включающая хелатирующее средство.

(42) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (41), дополнительно включающая буфер.

(43) Фармацевтическая композиция по пункту (42), где указанный буфер выбран из группы, состоящей из Tris, аммоний ацетата, ацетата натрия, глицина, аспарагиновой кислоты и Bis-Tris.

(44) Фармацевтическая композиция по любому из пунктов от (1) до (43), дополнительно включающая двухвалентный металл.

(45) Фармацевтическая композиция по пункту (44), где указанный двухвалентный металл представляет собой цинк.

Хотя предпочтительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к примеру 1, в виде конъюгата соматостатин-дофамин, который in vivo сохраняет активность как соматостатина, так и дофамина, настоящее изобретение никоим образом не ограничено примером 1. Конъюгаты соматостатин-дофамин настоящего изобретения относятся, например, ко всем тем конъюгатам соматостатин-дофамин, которые in vivo сохраняют активность как соматостатина, так и дофамина, как описанные в номерах предварительных международных публикаций заявителя, опубликованных как WO 2004/091490 и WO 02/100888. Эти публикации включены в настоящий документ в качестве ссылки в той же самой степени, как если бы описание каждой отдельной публикации было конкретно представлено в настоящем документе.

Для создания фармацевтических композиций по настоящему изобретению из этих публикаций также можно преимущественно использовать следующие конъгаты соматостатин-дофамин:

Пример 2: Dop2-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:2)

Пример 3: Dop2-DPhe-цикло[Cys-3ITyr(Dop2)-DTrp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:3)

Пример 4: Dop2-DPhe-Doc-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:4)

Пример 5: Dop2-DPhe-Doc-DPhe-цикло[Cys-3ITyr(Dop2)-DTrp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:5)

Пример 6: Dop3-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:6)

Пример 7: Dop4-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:7)

Пример 8: Dop2-Doc-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:8)

Пример 9: Dop2-Lys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:9)

Пример 10: Dop2-Lys(Dop2)-DTyr-DTyr-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:10)

Пример 11: Ac-Lys(Dop2)-DTyr-DTyr-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:11)

Пример 12: Dop2-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:12)

Пример 13: Dop2-DLys(Dop2)-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:13)

Пример 14: Ac-DLys(Dop2)-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:14)

Пример 15: Dop2-Lys(Dop2)-DPhe-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:15)

Пример 16: Dop2-Lys(Dop2)-DTyr-DTyr-цикло[Cys-3ITyr-DTrp-Lys-Thr-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:16)

Пример 17: Dop2-Lys(Dop2)-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:17)

Пример 18: Dop5-Lys(Dop5)-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:18)

Пример 19: Dop5-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:19)

Пример 20: Dop6-DPhe-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:20)

Пример 21: Dop2-Tyr-цикло[DDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe] (SEQ ED NO:21)

Пример 22: Dop2-Lys(Dop2)-DTyr-Tyr-цикло[DDab-Arg-Phe-Phe-DTrp-Lys-Thr-Phe] (SEQ ID NO:22)

Пример 23: (SEQ ID NO:23)

Пример 24: (SEQ ID NO:24)

Пример 25: (SEQ ID NO:25)

Пример 26: (SEQ ID NO:26)

Пример 27: (SEQ ID NO:27)

Пример 28: (SEQ ID NO:28)

Пример 29: (SEQ ID NO:29)

Пример 30: (SEQ ID NO:30)

Пример 31: (SEQ ID NO:31)

Пример 32: (SEQ ID NO:32)

Пример 33: (SEQ ID NO:33)

Пример 34: (SEQ ID NO:34)

Пример 35: (SEQ ID NO:35)

Пример 36: (SEQ ID NO:36)

Пример 37: (SEQ ID NO:37)

Пример 38: (SEQ ID NO:38)

Пример 39: (SEQ ID NO:39)

Пример 40: (SEQ ID NO:40)

Пример 41: (SEQ ID NO:41)

Пример 42: (SEQ ID NO:42)

Краткое описание фигур

На фигуре 1 изображены профили в плазме в течение всего времени (средние значения), полученные после однократного подкожного введения крысам линии Sprague Dawley из расчета 20 мг/кг массы тела следующих двух составов примера 1:

- 200 мг/мл примера 1 в 5% водном растворе DMA и

- 200 мг/мл примера 1 в 5% водном растворе PEG400.

На фигуре 2 отображен рассчитанный процент примера 1, оставшегося в участке введения у крыс Sprague Dawley после однократного подкожного введения двух тестируемых составов, показанных на фигуре 1.

На фигурах 3A и 3B изображены профили в плазме в течение всего времени (средние значения), на нормальной и логарифмической шкале, соответственно, полученные после однократного подкожного введения крысам Sprague Dawley из расчета 1,8 мг/кг массы тела следующего состава примера 1:

- 30% (мас./об.) примера 1, растворенного в 20% водном растворе PEG400.

На фигурах 4A и 4B представлены профили в плазме в течение всего времени (средние значения), на нормальной и логарифмической шкале, соответственно, полученные после однократного подкожного введения крысам Sprague Dawley из расчета 1,8 мг/кг масса тела следующего состава примера 1:

- 15% (мас./об.) примера 1 в воде.

На фигурах 5A и 5B представлены профили в плазме в течение всего времени (средние значения), на нормальной и логарифмической шкале, соответственно, полученные после однократного подкожного введения крысам Sprague Dawley из расчета 1,8 мг/кг масса тела следующего состава примера 1:

- 30% (мас./об.) примера 1 в воде.

Подробное описание изобретения

Посредством «Dop2» обозначает соединение, обладающее структурой:

Посредством «Dop3» обозначает соединение, обладающее структурой:

Посредством «Dop4» обозначает соединение, обладающее структурой:

Посредством «Dop5» обозначает соединение, обладающее структурой:

Посредством «Dop6» обозначает соединение, обладающее структурой:

Lys(Dop2) обладает структурой:

Dop2-Lys(Dop2) обладает структурой:

Lys(Dop5) обладает структурой:

Dop5-Lys(Dop5) обладает структурой:

Термин «приблизительно», как используется в настоящем документе по отношению к параметрам и количествам, обозначает, что параметр или количество находятся в пределах ±5% от установленного параметра или количества.

Посредством «Aepa» обозначает 4-(2-аминоэтил)-1-карбоксиметилпиперазин, представленный структурой:

«Abu» обозначает α-аминомасляную кислоту.

«Ac» обозначает ацетил.

«БСА» обозначает бычий сывороточный альбумин.

«Cys» или «C» обозначает цистеин.

«Dab» обозначает 2,4-диаминомасляную кислоту.

«DCM» обозначает дихлорметан.

«DIC» обозначает N,N-диизопропилкарбодиимид.

«DIEA» обозначает диизопропилэтиламин.

«DMF» обозначает N,N-диметилформамид.

«DMA» обозначает диметилацетамид.

«Fmoc» обозначает флуоренилметоксикарбонил.

«ВЭЖХ» обозначает высокоэффективную жидкостную хроматографию.

«Lys» или «K» обозначает лизин.

«NMP» обозначает N-метилпирролидон.

«PBS» обозначает фосфатно-солевой буфер, pH 7,4.

«PEG» обозначает полиэтиленгликоль.

«PEG300» обозначает полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 300.

«PEG400» обозначает полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 400.

«PEG1750» обозначает полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 1750.

«Thr» или «T» обозначает треонин.

«Trp» или «W» обозначает триптофан.

«Tyr» или «Y» обозначает тирозин.

«tBu» обозначает трет-бутил.

«TIS» обозначает триизопропилсилан.

«TFA» обозначает трифторуксусную кислоту.

«Val» или «V» обозначает валин.

«Агонист рецептора соматостатина» обозначает соединение, которое обладает высокой аффинностью связывания (например, Ki менее чем 100 нМ, или предпочтительно менее чем 10 нМ, или более предпочтительно менее чем 1 нМ) с рецептором соматостатина (например, как определено посредством анализа рецепторного связывания, описанного ниже), таким, как любой из различных подтипов: например, SSTR-1, SSTR-2, SSTR-3, SSTR-4 и SSTR-5, и которое вызывает эффект, подобный соматостатину; например, в анализе ингибирования внутриклеточной продукции цАМФ.

«Селективный агонист соматостатина» обозначает агониста соматостатиновых рецепторов, который для одного подтипа соматостатинового рецептора обладает аффинностью связывания (т.е. низкой Ki) более высокой, чем для любого другого подтипа соматостатинового рецептора, такого как, например, селективный агонист соматостатинового рецептора SSTR-2.

«Агонист рецепторов дофамина» обозначает соединение, которое обладает высокой аффинностью связывания (например, Ki менее чем 100 нМ или предпочтительно менее чем 10 нМ, или более предпочтительно менее чем 1 нМ) с рецептором дофамина (например, как определено посредством анализа рецепторного связывания, описанного ниже), таким как любой из различных подтипов: например, рецепторами D1, D2, D3, D4 и D5.

- Синтез примера 1. т.е. Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH ₂ (SEQ ID NO:1)

Пример 1, т.е. Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ (SEQ ID NO:1), синтезировали автоматически на синтезаторе пептидов ACT 396 (Advanced ChemTech, Louisville, KY, U.S.A.), используя химию Fmoc. Использовали смолу Rink амид 4-метилбензгидриламин (MBHA) (Novabiochem., San Diego, CA, USA) с замещением 0,66 ммоль/г (sub: 0,66 ммоль/г, 76 мг, масштаб 50 моль). Используемые аминокислоты Fmoc представляют собой Fmoc-DLys (Dde)-OH, Fmoc-Cys(Trt)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-DTrp(Boc)-OH, Fmoc-Lys(Boc)-OH, Fmoc-Abu-OH и Fmoc-Thr(tBu)-OH, которые приобретали у Novabiochem (San Diego, CA, USA). Синтез выполняли в масштабе 50 мкмоль. Для каждого цикла реакции синтезатор пептидов ACT 396 программировали для осуществления: (1) промывки NMP, два раза; (2) удаления защитной группы Fmoc 20% пиперидином в NMP в течение 1×5 мин и 1×25 мин; (3) промывка NMP, два раза; и (4) двойного связывания 4-кратным избытком аминокислоты, защищенной Fmoc (0,20 ммоль), HOBt (0,2 ммоль) и DIC (0,2 ммоль) в DMF в течение 1 часа за связывание. Смолу связывали последовательно в соответствии с последовательностью.

После сборки пептидной цепи удаляли группу Fmoc и смолу целиком и полностью промывали NMP и DCM. Смолу переносили в сосуд для проведения реакции, на аппарат для встряхивания и обрабатывали 2% гидразином в DMF в течение 2×30 минут для удаления защитной группы Dde в боковой цепи DLys. После полной промывки DMF, MeOH и DCM, смолу встряхивали в течение ночи с раствором Dop2-OH (54 мг, 3,0 экв.), бром-трис-пирролидино-фосфоний гексафторфосфата (PyBrop, 82 мг, 3,4 экв), 1-гидрокси-7-азабензотриазола (HOAT, 0,4 мг, 3,0 экв), пентафторфенола (18,4 мг, 4 экв), DMAP (0,25 мл 0,1 M в DMF, 1,0 экв) и DIEA (53 л, 4 экв).

После полной промывки DMF, MeOH и DCM смолу обрабатывали смесью TFA (4,75 мл), H₂0 (0,4 мл) и TIS (0,425 мл) в течение 2 часов. Смолу удаляли посредством фильтрации. Фильтрат выливали в 70 мл простого эфира. Сформировавшийся осадок фильтровали и тщательно промывали простым эфиром. Этот неочищенный продукт растворяли в 5 мл водного раствора уксусной кислоты (вода/уксусная кислота=1:1). Затем раствор разводили 50 мл H₂O и 20 мл ацетонитрила, к которому добавляли йод в метаноле до тех пор, пока раствор не становился устойчиво желтым. Раствор медленно встряхивали в течение 1 часа и реакцию останавливали добавлением водного раствора Na₂S₂О₃. Неочищенный продукт подвергали очистке посредством препаративной хроматографии с обращенной фазой ВЭЖХ, используя колонку C18 Dynamax-100A⁰ (4×43 см, Varian, Walnut Creek, CA, USA). Колонку элюировали линейным градиентом от 90% A и 10% B до 60% A и 40% B в час, где A представлял собой 0,1% TFA в воде и B представлял собой 0,1% TFA в ацетонитриле. Фракции, содержащие основной компонент, объединяли, основываясь на ультрафиолетовом поглощении, и подвергали лиофилизированию. Чистота, исходя из анализа аналитической ВЭЖХ, представляла собой 99,99%. Анализ масс-спектрометрия с ионизацией распылением в электрическом поле (ES-MS) показал молекулярную массу в 1693,60 (в соответствии с расчетной молекулярной массой 1694,23).

Другие представленные конъюгаты соматостатин-дофамина синтезировали, в основном, согласно способу, описанному для синтеза примера 1. Физические характеристики для проиллюстрированных конъгатов соматостатин-дофамина даны в таблице 1.

ТАБЛИЦА 1
Номер образца	Предполагаемая Мол.масса	Мол. масса (ES-MS)	Чистота (ВЭЖХ)
1	1694,23	1693,60	99,99%
2	1512,66	1512,67	89,00%
3	1853,15	1853,70	94,90%
4	1804,99	1804,60	90,90%
5	2145,48	2145,90	95,40%
6	1509,86	1512,20	95,00%
7	1469,79	1469,70	84,00%
8	1517,90	1517,70	99,99%
9	1694,23	1693,60	91,70%
10	2020,58	2020,90	93,90%
11	1722,12	1721,20	98,50%
12	1514,63	1514,50	99,99%
13	1983,29	1982,60	95,70%
14	1684,84	1684,50	91,60%
15	1983,29	1983,10	99,99%
16	2162,47	2162,40	99,99%
17	1841,40	1840,80	96,70%
18	1518,77	1518,40	99,99%
19	1211,43	1211,30	99,99%
20	1370,66	1370,58	92,00%
21	1616,99	1616,80	95,00%
22	2248,83	2248,40	98,00%
23	1517,90	1517,70	99,99%
24	1541,97	N/A	97,80%
25	1681,89	N/A	97,20%
26	1512,66	1512,67	89,00%
27	1370,66	1370,58	92,00%
28	1990,49	N/A	99,00%
29	N/A	N/A	N/A
30	1344,69	1343,80	98,20%
31	1372,74	1371,50	95,00%
32	1821,26	N/A	96,80%
33	1652,03	1651,90	97,90%
34	1797,19	1796,10	99,20%
35	1680,09	N/A	97,40%
36	1711,19	N/A	99,90%
37	1851,11	N/A	99,00%
38	1513,91	N/A	98,30%
39	1823,06	N/A	85,70%
40	1489,84	1489,70	98,90%
41	1956,34	1956,37	96,40%
42	1635,00	1634,70	97,00%
N/A - не определяли

- Специфичность соматостатиновых рецепторов и анализ селективности

Специфичность и селективность аналогов соматостатина, использованных для синтеза химер соматостатин-дофамин, определяли посредством анализа радиолигандного связывания, на клетках CHO-K1, стабильно трансфицированных каждым из подтипов SSTR, как указано ниже. Аналоги соматостатина также описывают в публикации патентной заявки США No. 02210006790. Полные кодирующие последовательности геномных фрагментов генов SSTR 1 (например, инвентарный номер M81829 в GenBank), SSTR 2 (например, инвентарный номер M81830 в GenBank), SSTR 3 (например, инвентарный номер L07062 в GenBank) и SSTR 4 (например, инвентарный номер AL049651 в GenBank) и клон кДНК для SSTR 5 (например, инвентарный номер D16827 в GenBank) субклонировали в экспрессирующий вектор pCMV млекопитающих (Life Technologies, Milano, Italy). Другие последовательности SSTR известны специалистам в данной области. Клональные клеточные линии, стабильно экспрессирующие SSTR 1-5, получали посредством трансфекции в клетки CHO-K1 (ATCC, Manassas, VA, USA), используя способ соосаждения с фосфатом кальция (Davis L, et al., 1994 In: Basic methods in Molecular Biology, 2nd edition, Appleton & Lange, Norwalk, CT, USA: 611-646). В качестве селективного маркера включали плазмиду pRSV-neo (ATCC). Клональные клеточные линии подвергали селекции в среде RPMI 1640, содержащей 0,5 мг/мл G418 (Life Technologies, Milano, Italy), колонии в форме кольца клонировали и наращивали в культуре.

Мембраны для анализа рецепторного связывания in vitro получали посредством гомогенизации в ледяном 50 мМ Tris-HCl клеток CHO-K1, экспрессирующих подтипы SSTR и двойного центрифугирования при 39000 g (10 мин), с промежуточным ресуспендированием в свежем буфере. Полученные в результате осадки ресуспендировали, для анализа, в 10 мМ Tris-HCl.

Для анализа SSTR 1, 3, 4 и 5, аликвоты препаратов мембран инкубировали 90 минут при 25°C с 0,05 нМ [¹²⁵I-Tyr11]SS-14 в 50 мМ HEPES (pH 7,4), содержащем 10 мг/мл БСА, 5 мМ MgCl₂, 200 KIU/мл Trasylol, 0,02 мг/мл бацитрацина и 0,02 мг/мл фенилметилсульфонилфторида. Конечный анализируемый объем составлял 0,3 мл.

Для анализа SSTR 2, 0,05 нМ [¹²⁵I]MK-678 использовали в качестве радиолиганда, и время инкубации составляло 90 минут при 25°C. Инкубацию останавливали быстрой фильтрацией через фильтры из стеклянного микроволокна GF/C (Whatman Co.) (предварительно погруженные в 0,3% полиэтиленимин), используя установку для фильтрации BRANDEL. Каждую пробирку и фильтр три раза промывали ледяным буфером, аликвотами по 5 мл. Специфичное связывание определяли как общее связывание радиолиганда минус радиолиганд, связанный в присутствии 1000 нМ SS-14 для SSTR 1, 3, 4 и 5 или 1000 нМ MK-678 для SSTR2.

- Специфичность рецепторов дофамина и анализ селективности

Специфичность и селективность дофамин-2 рецептора для аналогов дофамина, используемых для синтеза химер соматостатин-дофамин, можно определять посредством анализа радиолигандного связывания, как указано ниже.

Неочищенные мембраны получали посредством гомогенизации замороженного полосатого тела крыс (Zivic Laboratories, Pittsburgh, PA, USA) в 20 мл ледяного 50 мМ Tris-HCl клеточным дезинтегратором Brinkman Polytron (установка 6, 15 с). Для получения конечного объема 40 мл добавляли буфер и гомогенат центрифугировали в роторе Sorval SS-34 при 39000 g в течение 10 минут при 0-4°C. Супернатант, полученный в результате, сливали и не использовали. Осадок регомогенизировали в ледяном буфере, инкубировали предварительно при 37°C в течение 10 мин, растворяли и центрифугировали, как и ранее. Осадок, полученный в результате, ресуспендировали в буфере и помещали в лед для анализа рецепторного связывания.

Для анализа аликвоты промытых препаратов мембран и тестируемые соединения инкубировали в течение 15 минут (37°C) с 0,25 нМ [³HI]спиперон (16,5 Ci/ммоль, New England Nuclear, Boston, MA, USA) в 50 мМ Tris-HCl, 120 мМ NaCl, 5 мМ KCl, 2 мМ CaCl₂, 1 мМ MgCl₂. Конечный анализируемый объем составлял 1,0 мл. Инкубацию останавливали быстрой фильтрацией через фильтры из стеклянного микроволокна GF/B, используя установку для фильтрации BRANDEL. Затем каждую пробирку и фильтр три раза промывали ледяным буфером, аликвотами по 5 мл. Специфичное связывание определяли как общее связывание радиолиганда минус связывание в присутствии 1000 нМ (+)бутакламола.

Для представленных в качестве примера конъюгатов соматостатин-дофамин измеряли константы ингибирования (Ki) для пяти соматостатиновых рецепторов человека (hSSTR1-hSSTR5) и для рецептора дофамин-2 (hUTII и hDA2), используя описанные способы анализа, как следует ниже:

ТАБЛИЦА 2
Номер образца	hsst1 Ki(нМ)	hsst2 Ki(нМ)	hsst3 Ki(нМ)	hsst4 Ki(нМ)	hsst5 Ki(нМ)	hUTII Ki(нМ)	hDA2 Ki(нМ)
1	843,00	0,03	160,00	1000,00	41,51	508,50	15,85
2	730,64	0,40	135,00	1000,00	7,02	53,19	34,05
3	1000,00	0,37	235,00	1000,00	13,65	73,50	16,71
4	1000,00	0,84	397,00	1000,00	21,17	83,72	29,56
5	1000,00	1,65	1054,00	1000,00	27,56	104,74	15,48
6	509,00	0,51	798,00	1000,00	56,46	676,74	64,97
7	345,00	0,19	267,00	1000,00	28,58	695,33	192,96
8	1548,00	0,11	126,00	1000,00	24,46	166,77	86,03
9	273,00	0,54	536,00	1000,00	99,52	634,50	8,30
10	549,00	0,15	324,00	1000,00	26,54	177,20	8,22
11	437,00	0,04	162,00	1000,00	8,91	64,41	119,12
12	602,00	0,06	51,50	1000,00	4,10	676,00	25,21
13	907,00	0,12	196,00	1000,00	10,71	961,00	15,17
14	1338,00	0,07	70,30	1000,00	2,68	1509,50	44,33
15	N/A	1,21	196,00	1000,00	6,29	300,50	18,34
16	N/A	0,16	76,40	1000,00	7,43	549,39	8,56
17	N/A	0,18	106,00	1000,00	54,04	495,93	17,58

18	N/A	0,36	167,00	1000,00	31,99	1000,00	3000,00
19	N/A	0,41	146,00	1000,00	19,70	2250,58	3000,00
20	N/A	0,02	140,00	1000,00	22,77	1278,70	95,15
21	N/A	N/A	N/A	N/A	0,00	1061,00	N/A
22	N/A	N/A	N/A	N/A	0,00	2483,00	N/A
23	1548,00	0,11	126,00	1000,00	24,46	166,77	86,03
24	1000,00	0,37	154,40	1000,00	24,16	1511,00	142,82
25	1000,00	1,09	423,00	1000,00	14,30	233,33	345,00
26	730,64	0,40	135,00	1000,00	7,02	53,19	34,05
27	N/A	0,02	140,00	1000,00	22,77	1278,70	95,15
28	660,71	0,11	156,00	1000,00	5,13	564,30	506,33
29	N/A	0,14	N/A	N/A	N/A	N/A	226,50
30	688,90	0,15	49,51	1000,00	15,72	619,39	23,74
31	690,67	0,10	84,60	1000,00	22,65	497,50	25,47
32	N/A	0,22	45,57	1000,00	13,78	266,50	136,18
33	N/A	0,20	65,11	1000,00	9,82	37,68	205,50
34	N/A	0,23	48,45	1000,00	8,60	211,00	114,42
35	N/A	0,27	109,26	1000,00	13,64	134,00	55,83
36	N/A	1,67	145,06	1000,00	53,48	3085,15	328,00
37	N/A	1,26	373,55	1000,00	10,11	420,52	126,50
38	N/A	0,35	61,85	1000,00	28,06	1190,32	411,00
39	N/A	0,42	136,30	1000	5,45	241,41	310,00
40	1000,00	0,32	70,32	1000,00	16,99	222,69	255,00
41	415,53	0,70	165,13	1000,00	6,93	26,97	217,00
42	1000,00	0,34	120,05	1000,00	20,63	509,98	277,67

- Ингибирование продукции внутриклеточного цАМФ

Подтипы соматостатиновых (sst) и дофаминовых (D₂) рецепторов одновременно экспрессируются в различных нейроэндокринных опухолях и могут демонстрировать функциональный синергизм. Новые химерные молекулы соматостатин-дофамин, как описано в настоящем документе, такие как в примере 1, которые связываются с обоими подтипами рецепторов, в некоторых предшествующих преклинических исследованиях проявили свойства суперагонистов. Это может происходить как вследствие индукции гетеродимеризации их целевых рецепторов на плазматической мембране, так и вследствие усиленной активации индивидуальных рецепторов этих соединений.

В этом анализе в клетках HEK-293 использовали анализ на основе репортерного гена люциферазы, связанного с цАМФ-чувствительным элементом, где указанные клетки HEK-293 временно трансфицировали кДНК D₂ и/или sst₂. В клетках, трансфицированных только D₂, значение ингибирования IC₅₀цАМФ примером 1 составляло 0,02 нМ. В клетках, трансфицированных только sst₂, значение ингибирования IC₅₀цАМФ примером 1 составляло 0,04 нМ. В клетках, трансфицированных одновременно sst₂ и D₂, значение ингибирования IC₅₀цАМФ примером 1 составляло 0,02 нМ.

Можно прийти к заключению, что в этой клеточной модели Пример 1 опосредует большинство ее сильнодействующих эффектов посредством высокоаффинного связывания и активации рецепторов D₂. Лучшая активация рецепторов D2 в сочетании с высокой эффективностью активации рецепторов sst2 могли объяснить суперагонистические действия, которые наблюдались у этого соединения в нескольких преклинических исследованиях.

- Определение растворимости примера 1 в различных концентрациях DMA и PEG400

Соединение, которое можно преимущественно использовать для осуществления изобретения, можно тестировать для определения его растворимости при различных концентрациях DMA и PEG400, используя следующий способ.

Используемые растворители представляют собой:

5%, 10%, 20%, 30%, 40% DMA, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% PEG400 в воде и

5%, 10%, 20%, 30%, 40% DMA, 5%, 10%, 20%, 30%, 40% PEG400 в PBS.

Пример 1 добавляли приблизительно до 1 мг, увеличивая объемы растворителей или буферов, указанных выше. Когда достигают объема, способствующего растворению, концентрацию рассчитывают по массе/объему. Если пример 1 не являлся растворимым, раствор центрифугировали и супернатант анализировали посредством ВЭЖХ для определения концентрации. Установленную концентрацию рассматривали как растворимость примера 1 в этом растворителе или буфере.

Измеряли pH растворов. Они составляли приблизительно pH 7. Никакого дополнительного уточнения не проводили.

Растворимость примера 1 в воде и PBS была очень разной. Пример 1 является намного более растворимым в растворителях на основе воды, чем в растворителях на основе PBS. Таким образом, в этом исследовании использовали растворители как на основе воды, так и на основе PBS. Результаты приведены в таблицах, представленных ниже.

ТАБЛИЦА 3
Водный pH 7	Растворимость (мг/мл)
0% DMA	0,86*
5% DMA	>100
10% DMA	>100
20% DMA	>100
30% DMA	>100
40% DMA	>100
5% PEG400	>50
10% PEG400	>50
20% PEG400	>50
30% PEG400	>50
40% PEG400	>50
* посредством ВЭЖХ

ТАБЛИЦА 4
PBS pH 7	Растворимость (мг/мл)
0% DMA	0,04*
5% DMA	0,13*
10% DMA	0,48*
20% DMA	0,78*
30% DMA	4,20*
40% DMA	>50
5% PEG400	0,05*
10% PEG400	0,33*
20% PEG400	0,75*
30% PEG400	2,98*
40% PEG400	3,50*
* посредством ВЭЖХ

- Фармакокинетические исследования составов примера 1

Пять различных составов примера 1 («Составы 1-5») получали, используя следующие способы:

(1) Пример 1 растворяли в 5% водном растворе DMA из расчета концентрации 200 мг/мл.

(2) Пример 1 растворяли в 5% водном растворе PEG400 из расчета концентрации 200 мг/мл.

(3) Пример 1 растворяли в 20% водном растворе PEG400 из расчета концентрации 30% (мас./об.).

(4) Пример 1 растворяли в воде из расчета концентрации 15% (мас./об.).

(5) Пример 1 растворяли в воде из расчета концентрации 30% (мас./об.).

- Дозировка и сбор образцов крови

В случае составов (1) и (2) крысам Sprague Dawley подкожно, определенными дозами, из расчета 20 мг на кг массы тела вводили эти составы примера 1. Образцы крови собирали через 1, 2, 4, 8, 24 часа и на 2, 3, 4, 7 сутки. Плазму отделяли от крови посредством центрифугирования и хранили при -80°C. Также получали ткани из участка введения, гомогенизировали 5× метанолом и хранили при -80°C.

В случае составов (3), (4) и (5) крысам Sprague Dawley подкожно, определенными дозами, из расчета 1,8 мг на кг массы тела вводили эти составы примера 1. Образцы крови собирали через 5, 10, 15, 30 минут, 1, 2, 4, 8 часов и на 1, 2, 3, 4, 7, 14, 21, 28, 35, 42 сутки. Плазму отделяли от крови посредством центрифугирования и хранили при -80°C. Также получали ткани из участка введения, гомогенизировали 5× метанолом и хранили при -80°C.

- Подготовка проб

Плазму (200 мкл) подкисляли 10 мкл муравьиной кислоты и осаждали 600 мкл ацетонитрила. Супернатант собирали посредством центрифугирования и концентрировали до сухого состояния под вакуумом. Осадки растворяли в 150 мкл 30% ацетонитрила в воде и центрифугировали. 50 мкл супернатанта инъецировали для анализа LC-MS/MS.

Метанольный экстракт из тканей (10 мкл) растворяли в 1 мл 30% ацетонитрила в воде и 50 мкл инъецировали для анализа LC-MS/MS.

- Анализ LC-MS/MS

Анализ LC-MS/MS проводили с системой масс-спектрометра API4000, оборудованного датчиком Turbo Ionspray. Способ определения молекулярного иона MRM использовали с ионной парой 565,6 и 159,1.

Разделение посредством ВЭЖХ осуществляли на 3 мкл колонке Luna C8(2) 2×30 мм с пробегом от 10% B до 90% B в течение 10 минут со скоростью потока 0,30 мл/минуту. Буфер A представляет собой 1% муравьиную кислоту в воде и буфер B представляет собой 1% муравьиную кислоту в ацетонитриле.

LOQ составлял 0,2 нг/мл.

- Результаты и краткое изложение

- Составы (1) и (2)

Концентрации примера 1 в плазме рассчитывали по его стандартной калибровочной кривой. 1,5 мг/мл примера 1 (из расчета 20 мг/кг 300 г крысы, в 4 мл метанольного экстракта) принимали за 100% для вычисления процента того, что осталось в участках введения.

ТАБЛИЦА 5 Концентрации примера 1 в плазме и проценты оставшегося в участках введения примера 1, дозированного составами (1) и (2)
Время, ч	Концентрация в плазме (нг/мл) примера 1, дозированного составом 1	Концентрация в плазме (нг/мл) примера 1, дозированного составом 2	% оставшегося в участке введения примера 1, дозированного составом 1	% оставшегося в участке введения примера 1, дозированного составом 12
1	1,7	0,4	не отбирали	не отбирали
2	4,8	4,4	не отбирали	не отбирали
4	6,1	2,5	не отбирали	не отбирали
8	4,7	3,5	не отбирали	не отбирали
24	2,6	4,2	102	13,8
48	1,9	1,6	67,5	69
72	2,3	0,5	18,1	56,8
96	1,8	0,4	37,6	7,4
168	0,2	0,3	58,8	78,9

Графики зависимости фармакокинетических профилей составов (1) и (2) от всего периода времени показаны на фиг.1.

Профиль накопления в ткани в участке введения примера 1, дозированного составами (1) и (2), показан на фиг.2.

ТАБЛИЦА 6 Концентрации в плазме примера 1, дозированного составами (3), (4) и (5)
Время	Концентрация в плазме (нг/мл) примера 1, дозированного составом 3	Концентрация в плазме (нг/мл) примера 1, дозированного составом 4	Концентрация в плазме (нг/мл) примера 1, дозированного составом 5
5 мин	2,73	0,10	10,43
10 мин	1,88	2,33	1,05
15 мин	3,32	0,16	12,10
30 мин	2,29	0,29	1,49
1 час	6,54	2,40	1,59
2 час	2,53	0,64	1,77
4 час	12,50	4,76	2,77
8 час	9,31	2,11	2,71
1 сутки	3,94	2,54	13,75
2 сутки	6,81	0,43	4,06
3 сутки	2,86	1,95	1,28
4 сутки	3,56	0,62	1,62
7 сутки	4,64	5,68	0,34
14 сутки	3,87	0,10	0,62
21 сутки	0,40	1,05	0,36
28 сутки	нет пика	1,46	4,13
35 сутки	1,69	0,93	3,26

Графики зависимости фармакокинетических профилей состава (3) показаны на нормальной шкале на фиг.3A и на логарифмической шкале на фиг.3B.

Графики зависимости фармакокинетических профилей состава (4) показаны на нормальной шкале на фиг.4A и на логарифмической шкале на фиг.4B.

Графики зависимости фармакокинетических профилей состава (5) показаны на нормальной шкале на фиг.5A и на логарифмической шкале на фиг.5B.

ТАБЛИЦА 7 Параметры PK
	Пример 1, дозированный составом 1	Пример 1, дозированный составом 2	Пример 1, дозированный составом 3	Пример 1, дозированный составом 4	Пример 1, дозированный составом 5
T_max, ч	4,0	2,0	4	4	4
C_max, нг/мл	6,1	4,4	12,5	4,76	2,77
AUC, нг-ч/мл	332	231	2213	1374	1695

Результаты показывают, что составы примера 1 по настоящему изобретению, как описано в настоящем документе, предусматривают составы с приемлемым замедленным высвобождением со сниженной начальной концентрацией в плазме, что может снижать или исключать нежелательные побочные эффекты. Данные также показывают, что после подкожной инъекции жидкость организма способна разбавить органическое содержимое составов (1), (2) и (3) и приводить к быстрому осаждению примера 1.

Дополнительные варианты осуществления настоящего изобретения будут очевидны из предшествующего описания и предназначены для включения в изобретение как полностью описанные в настоящем документе и определенные в пунктах формулы изобретения, представленной ниже.

1. Фармацевтическая композиция прозрачного водного раствора, или геля, или полутвердого материала для активации рецепторов допамина и соматостатина, содержащая конъюгат соматостатин-дофамин согласно следующей структурной формуле
Dop2-DLys(Dop2)-цикло[Cys-Tyr-DTrp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂;
(SEQ ID NO: 1) или его фармацевтически приемлемую соль, в которой конъюгат соматостатин-дофамин образует осадок после подкожного или внутримышечного введения субъекту, причем фармацевтическая композиция дополнительно содержит органический компонент, который увеличивает растворимость конъюгата соматостатин-дофамин в водном растворе или снижает вязкость геля или полутвердого материала, где конъюгат соматостатин-дофамин находится в водном растворе с рН между 3 и 8 и органический компонент выбирают из группы, состоящей из органического полимера, органического растворителя, спирта, сахара, циклодекстрина фосфолипида, водорастворимого органического растворителя, неионогенного поверхностно-активного вещества и сложного эфира.

2. Фармацевтическая композиция по п.1, где указанный органический полимер представляет собой PEG; указанный органический растворитель представляет собой амид; указанный спирт выбирают из группы, состоящей из этанола, пропанола и пропиленгликоля; указанный циклодекстрин выбирают из группы, состоящей из гидроксипропил-циклодекстрина и простого сульфобутилового эфира-циклодекстрина;
указанный фосфолипид выбирают из группы, состоящей из гидрогенизированного фосфатидилхолина бобов сои, дистеароил-фосфатидилглицерина, 1-димиристоил-фосфатидилхолина и 1-димиристоил-фосфатидилглицерина; указанный водорастворимый органический растворитель выбирают из группы, состоящей из PEG300, этанола, пропиленгликоля, глицерина, N-метил-2-пирролидона, диметилацетамида и диметилсульфоксида; указанное неионное поверхностно-активное вещество выбирают из группы, состоящей из Кремофора EL, Кремофора RH 40, Кремофора RH 60, d-токоферол полиэтиленгликоль 1000 сукцината, полисорбата 20, полисорбата 80, сорбитан моноолеата, полоксамера 407, Лабрафила M-1944CS, Лабрафила M-2125CS, Лабразола, Gellucire 44/14, Софтигена 767 и моно- и ди-сложных эфиров жирных кислот и PEG300, PEG400 или PEG1750; и указанный сложный эфир представляет собой сложный полигликолевый эфир.

3. Фармацевтическая композиция по п.2, где указанный PEG выбран из группы, состоящей из PEG300, PEG400 и PEG1750.

4. Фармацевтическая композиция по п.2, где указанный амид является диметилацетамидом.

5. Фармацевтическая композиция по п.3 или 4, где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в 20%-ном водном растворе PEG400 в концентрации приблизительно 30% (мас./об.); или указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в 5%-ном водном растворе DMA в концентрации приблизительно 200 мг/мл.

6. Фармацевтическая композиция по п.1, где указанный конъюгат соматостатин-дофамин растворяют в воде в диапазоне концентрации приблизительно 15-30% (мас./об.).

7. Фармацевтическая композиция по п.1, где конъюгат соматостатин-дофамин находится в водном растворе с рН между 5 и 6.

8. Фармацевтическая композиция по п.1, где конъюгат соматостатин-дофамин находится в концентрации от приблизительно 0,0001 до 500 мг/мл, предпочтительно от приблизительно 0,1 до 300 мг/мл.

9. Фармацевтическая композиция по п.1, дополнительно содержащая консервант, изотоническое средство, стабилизатор, поверхностно-активное вещество, хелатирующее средство, буфер и/или двухвалентный металл.

10. Фармацевтическая композиция по п.9, где указанный консервант выбран из группы, состоящей из м-крезола, фенола, бензилового спирта и метил парабена, и присутствует в концентрации от 0,01 мг/мл до 100 мг/мл; где указанное изотоническое средство присутствует в концентрации от 0,01 мг/мл до 100 мг/мл; указанный стабилизатор выбран из группы, состоящей из имидазола, аргинина и гистидина; указанный буфер выбран из группы, состоящей из Tris, аммоний ацетата, ацетата натрия, глицина, аспарагиновой кислоты и Bis-Tris; и указанный двухвалентный ион представляет собой цинк.

Октапептид для получения радиофармацевтических средств, радиофармацевтическое средство на его основе и способ диагностики опухолей, экспрессирующих соматостатиновые рецепторы // 2457215

Изобретение относится к октапептидам формулы (I), где Х и Y - H или хелатирующая группа, в частности ДОТА, ковалентно связанная с - или -аминогруппами N-концевого лизина, являющимися производными октреотида, а также радиофармацевтическим средствам на его основе, используемым при диагностике опухолей.

Комбинация аналогов соматостатина с различной селективностью в отношении подтипов рецепторов соматостатина человека // 2451520

Изобретение относится к области фармакологии и представляет собой комбинацию для снижения гипергликемии, включающую, по крайней мере, два различных аналога соматостатина (SRIF), в которой один аналог SRIF является октреотидом, а другой аналог SRIF - пазиреотидом, и в которой активные ингредиенты присутствуют в каждом случае в свободной форме или в форме фармацевтически приемлемой соли и необязательно в смеси, по крайней мере, с одним фармацевтически приемлемым носителем, для совместного, раздельного или последовательного применения.

Способ и средство для профилактики острого послеоперационного панкреатита у больных раком желудка // 2442600

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и анестезиологии-реаниматологии, и может быть использовано для профилактики острого послеоперационного панкреатита у больных раком желудка и кардиоэзофагеальной зоны.

Способ регулирования фолликулярного резерва яичника, способ лечения отклонений в росте покоящихся фолликулов у женщин, средство стимуляции развития фолликулов и средство определения влияния соединений на ускорение или замедление роста фолликулов при проведении токсикологических испытаний (варианты) // 2418604

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается применения соматостатина или одного из его агонистических аналогов для производства лекарственного средства для регуляции фолликулярного резерва яичника и, в частности, для уменьшения истощения фолликулярного резерва яичника с течением времени у женщин, у которых не наступила менопауза, или к применению антагонистического аналога соматостатина для производства лекарственного средства для ускорения начала роста покоящихся фолликулов у женщин, у которых не наступила менопауза.

Депо-форма аналога соматостатина и способ ее получения // 2411031

Изобретение относится к депо-форме, включающей в качестве активного компонента аналог соматостатина, биологически разлагающийся полимер, где полимером является линейный или разветвленный сополимер лактида с гликолидом, диалкиловый эфир полиэтиленгликоля, фармацевтически приемлемый органический растворитель, а также к способу получения депо-формы.

Микрочастицы, содержащие аналоги соматостатина // 2404749

Изобретение относится к фармакологии и медицине. .

Фармацевтическая композиция, содержащая октреотидные микрочастицы // 2404748

Изобретение относится к фармацевтической области, в частности к фармацевтическим композициям, представленным в виде микрочастиц-депо. .

Способ выбора тактики послеоперационного лечения медуллярного рака щитовидной железы // 2403914

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для выбора тактики послеоперационного лечения медуллярного рака щитовидной железы.

Способ получения микросфер с длительным высвобождением, имеющих улучшенную дисперсность и проходимость через иглу шприца // 2403017

Изобретение относится к способу получения микросфер с длительным высвобождением, содержащих поддающийся биологическому разложению полимер в качестве носителя и лекарственное средство, и к нагруженным лекарственным средством микросферам, полученным указанным способом.

Композиции с замедленным высвобождением, включающие октреотид и два или более сополимера полилактида и гликолида // 2464972

Изобретение относится к медицине и касается композиции с замедленным высвобождением, включающей в качестве активного ингредиента октреотид или его фармацевтически приемлемую соль и два или более различных сополимера полилактида и гликолида (PLGA), причем указанные PLGA присутствуют в виде смеси полимеров и по крайней мере два PLGA являются линейными

Конъюгаты дисоразолов, фармацевтическая композиция на их основе, названные конъюгаты для изготовления лекарственного средства, набор и способ их получения // 2473562

Изобретение относится к конъюгатам дисоразолов и их производных с молекулами, связывающими клетки, такими как пептиды и белки, а также к новым дисоразоловым производным и способам их получения

Лечение нейроэндокринных опухолей // 2487711

Инъекционный препарат для повышения спермопродукции у производителей сельскохозяйственных животных и петухов и способ его применения // 2493873

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к использованию химерного соматостатинсодержащего белка для повышения воспроизводительных качеств самцов сельскохозяйственных животных и петухов, и может быть использовано в ветеринарии. Инъекционный препарат используют в виде суспензии химерного белка с водонерастворимой ферментативно неактивной хлорамфениколацетилтрансферазой без 10 С-терминальных аминокислот, аминокислотным спейсером (Sp)n, где n=1, 2, 4, 8, и соматостатином-14 с последовательностью аминокислот AGCFWKTFTSC в рафинированном растительном масле с добавлением пчелиного воска, из расчета 250-1000 мг указанного химерного белка на 100 мл рафинированного растительного масла, включающего 0,9-1,1 мас.% пчелиного воска. Инъекционный препарат применяют петухам или сельскохозяйственным животным по достижении физиологической зрелости из расчета 50-200 мкг белка на 1 кг живой массы тела. Изобретение позволяет повысить спермопродукцию: увеличить объем эякулята и снизить брак спермы по биологическим показателям у производителей сельскохозяйственных животных и петухов путем использования препарата для инъекций с низкой реактогенностью адъюванта. 2 н.п. ф-лы, 13 табл.

Слитый белок дефектная хлорамфеникол ацетилтрансфераза (сат)-соматостатин и его применения // 2501565

Группа изобретений раскрывает химерные полипептиды, иммуногенные композиции на их основе, а также способы повышения продукции молока и постного мяса, включающие вакцинацию указанными пептидами. Химерные полипептиды обладают иммуногенностью соматостатина и включают аминокислотную последовательность соматостатина-14, связанную с существенно неактивным и укороченным полипептидом хлорамфеникол ацетилтрансферазы, где соматостатин-14 является связанным с неактивной хлорамфеникол ацетилтрансферазой с помощью спейсера. Данные пептиды обладают улучшенной иммуногенностью, что позволяет применять их в меньших дозах при лечении коров и сельскохозяйственных животных. 8 н. и 3 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.

Фармацевтические композиции // 2504360

Описывается инъецируемый формирующийся in situ депо-состав, включающий рассасывающийся полимер, полиэтиленгликоль с молекулярной массой 450<Mw<650 Да и с концевыми группами, выбранными из метокси и этокси, который характеризуется температурой затвердевания между 8° и 20°С, фармацевтически активное вещество и, необязательно, вспомогательное вещество. Фармацевтически активное вещество выбрано из небольших органических молекул, пептидов, полипептидов, белков, углеводов, олигонуклеотидов, ДНК и РНК. Предпочтительно активное вещество является аналогом соматостатина. Предпочтительно используется полиэтиленгликоль диметиловый эфир с молекулярной массой 500 Да. Композиции по изобретению стабильны при хранении, инъецируются без затруднений, характеризуются низким гемолитическим и токсическим потенциалом. 5 н. и 14 з.п. ф-лы, 8 ил., 2 табл., 8 пр.

Доставка октреотида из сухих лекарственных форм // 2518745

Изобретение относится к медицине и применяется для лечения лиц, страдающих гормональными заболеваниями. Описаны способ и устройство для доставки октреотида пациентам, включающие имплантирование композиции с контролируемым высвобождением для доставки октреотида, причем композиция не требует гидратирования перед имплантацией и при этом композиция необязательно содержит разделительное вещество. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 11 пр., 7 табл., 17 ил.

Имплантат октреотида, содержащий высвобождающее вещество // 2521291

Группа изобретений относится к области фармации и медицины и касается композиции, способа и набора, которые дают возможность осуществления контролируемого высвобождения октреотида, например октреотида ацетата, у субъекта. Композиция содержит препарат, содержащий октреотид, в основном заключенный в гидрофильный полимер, выбранный из полимеров на основе полиуретана и полимеров на основе метакрилата, эффективная для обеспечения высвобождения октреотида со скоростью от 30 мкг до 800 мкг в день в течение шести месяцев in vivo, в которой гидрофильный полимер, но не препарат, дополнительно содержит высвобождающее вещество с молекулярным весом, по меньшей мере, около 1000 Дальтон, в котором препарат содержит от 40 до 120 мг октреотида и высвобождающее вещество выбирают из группы, состоящей из Brij 35 (полиоксиэтиленлауриловый эфир), полиоксиэтилен(20)сорбитантриолеата, Твина 20, Твина 80, витамина E TPGS и их смеси из любых двух или более. Способ уменьшения уровней GH или уровней IGF-1 и/или лечения болезни, чувствительной к октреотиду, включающий подкожную имплантацию, по меньшей мере, одного сухого имплантируемого устройства, включающего заявленный препарат. Набор, включающий заявленную композицию для контролируемого высвобождения октреотида. Группа изобретений обеспечивает терапевтически эффективное количество октреотида в течение длительного периода времени при лечении гормональных нарушений. 3 н. и 22 з.п. ф-лы, 11 пр.,7 табл.,21 ил.

Пептидные лиганды соматостатиновых рецепторов // 2525468

Изобретение относится к пептидным производным общей формулы (I), их стереоизомерам, их смесям и/или их фармацевтически приемлемым солям, к способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим их, и к применению их для лечения, предупреждения и/или диагностики тех состояний, расстройств и/патологий, при которых экспрессируются соматостатиновые рецепторы sstr1, sstr2, sstr3, sstr4 и/или sstr5. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 5 табл., 33 пр.

Циклический октапептид, радиофармацевтическое средство на его основе и способ применения радиофармацевтического средства для получения лекарственных (фармацевтических) средств для лечения новообразований, экспрессирующих соматостатиновые рецепторы // 2528414

Изобретение относится к радиофармацевтическому средству формулы (Iа) или (Iв), представляющему собой комплекс циклического октапептида, содержащего хелатирующую группу, с радионуклидами 111In, 90Y, 177Lu. Радиофармацевтическое средство может быть использовано для получения лекарственных средств для радионуклидной терапии новообразований, экспрессирующих соматостатиновые рецепторы. 2 н.п. ф-лы, 1 ил., 2 табл., 6 пр. Х= хелатирующий агент.