Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якутов


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2465598:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Красноярский государственный медицинский университет имени профессора В.Ф. Войно-Ясенецкого Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и касается способа прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якутов. Выделяют ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови и методом полимеразной цепной реакции выявляют -572 G/C полиморфизм гена интерлейкина-6 (IL-6). При выявлении аллеля *G прогнозируют риск развития диабетической ретинопатии. Способ обеспечивает выявление группы риска по диабетической ретинопатии при сахарном диабете 2 типа у якутов для дальнейшего определения тактики профилактических и лечебных мероприятий. 2 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине и может быть использовано в офтальмологии, а также в эндокринологии, медицинской генетике, общественном здоровье и здравоохранении, медико-социальной экспертизе, генной инженерии, генотерапии для прогнозирования развития и профилактики диабетической ретинопатии (ДР) при сахарном диабете типа 2 (СД типа 2) у якутов.

Известен способ прогнозирования возникновения и развития диабетической ретинопатии у больных инсулинзависимым сахарным диабетом (Заявка 2003122404/15, G01N 33/68, БИПМ №6, 27.02.2005 г.), который позволяет прогнозировать возникновение и прогрессирование диабетической ретинопатии у больных инсулинзависимым сахарным диабетом при проведении иммунологического исследования сыворотки крови путем определения содержания интерлейкина-1β при наличии его в концентрации 50 пкг/мл и выше. Возникновение диабетической ретинопатии при отсутствии клинических явных изменений на глазном дне прогнозируют при концентрации интерлейкина-1β 700 пкг/мл и более.

Известен способ прогнозирования клинической манифестации диабетической ретинопатии у больных сахарным диабетом 2 типа (Патент 2292549, G01N 33/487, БИПМ №3, 27.01.2007 г.), который позволяет исследовать индуцированную хемолюминесценцию слезной жидкости и световую чувствительность макулы с помощью фотостресс-теста. При значениях индуцированной хемолюминесценции слезной жидкости от 0,031-0,043 отн. ед. и показателях световой чувствительности макулы от 56 до 75 секунд прогнозируют высокий риск клинической манифестации диабетической ретинопатии на ранней стадии.

Известен способ прогнозирования развития диабетической ретинопатии (Заявка 2005112169/15, G01N 33/48, БИПМ №30, 27.10.2006 г.), который включает определение нитритов в крови, а в слезной жидкости - холестерин, СОД и каталазу, по этим показателям составляют карту, по которой определяют стадии развития ДР.

Известен способ диагностики диабетической ретинопатии (Патент 2071059, G01N 33/68, БИ №36, 27.12.1996 г.), который позволяет диагностировать диабетическую ретинопатию при определении в сыворотке крови повышенного уровня тироксинсвязывающего гормона в 1,5 и более раз.

Известен способ прогнозирования развития диабетической ретинопатии (Патент 2124727, G01N 33/53, A61F 9/00, БИ №1, 10.01.1999 г.), который обеспечивает возможность прогнозирования перехода непролиферативной стадии диабетической ретинопатии в пролиферативную путем иммунологического исследования слезной жидкости и определения концентрации иммуноглобулина А при его значениях не менее 0,20 г/л.

Однако все перечисленные выше способы не позволяют в полном объеме определять специфические и генетические признаки диабетической ретинопатии непосредственно у больных сахарным диабетом типа 2, в частности в зависимости от этнической принадлежности обследуемых пациентов, а именно у якутов.

Известен способ диагностики риска развития у субъекта атеросклероза или диабетической ретинопатии (Заявка 2001130755/14, C12Q 1/68, БИПМ №24, 27.08.2003 г.), включающий определение у диабетика наличия полиморфизма на участке сигнального пептида препро-NPY человека. Полиморфизм заключается в замене лейцина на пролин в 7-м положении на участке сигнального пептида препро-NPY человека и является индикатором повышенного риска развития диабетической ретинопатии и атеросклероза.

Данный способ диагностики разработан на основе изучения генетической предрасположенности к ДР при сахарном диабете независимо от его типа в гетерогенной популяционной среде и поэтому неприемлем для медико-генетического консультирования по ДР при СД типа 2 в других регионах, в частности в Республике Саха (Якутия). Это обусловлено тем, что генетическая предрасположенность к ДР при СД типа 2, как и к другим многофакторным заболеваниям, формируется в зависимости от особенностей популяционно-генетической структуры этноса, к которому относится этническая группа якутов.

Задача предлагаемого способа - прогнозирование риска развития ДР при СД типа 2 у якутов.

Поставленную задачу решают за счет того, что амплификацию специфичности гена интерлейкина-6 - IL-6 определяют методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и при выявлении аллеля *G полиморфного варианта -572 G/C IL-6 прогнозируют риск развития диабетической ретинопатии.

Способ осуществляют следующим образом.

Кровь для выделения ДНК собирают из локтевой вены пациента в специальный вакутейнер с консервантом EDTA. Собранную кровь замораживают в специальном контейнере при температуре -20°C и ниже.

ДНК экстрагируют из лейкоцитов с помощью системы очистки (Promega, Madison, WI).

В работе использовали полиморфный маркер гена адипонектина, участвующий в воспалительных процессах: IL-6 (вариант -572 G/C).

Гаплотип rs 1800796 гена IL-6 анализирован с помощью аллельной дифференциации Tagman универсальной средой ПЦР (no AmpErase UNG). Все реакции проводились на системе ABI7300 с использованием программы SDS 1.2 (Applied Biosystems, Foster City, CA).

Фрагменты ПЦР денатурировали при температуре 95°C в течение 5 минут с последующей ренатурацией понижением температуры до 25°C на протяжении 45 минут. Идентификация аллелей выполнена с использованием системы Wave Nuclear Acid Fragment Analysis System (Transgenomic, Omaha, NE). Результаты соответствовали прямым данным секвенирования.

Статистическая обработка материалов. Статистический анализ данных проведен с использованием пакета Statistica 8.0 и SAS 7.0. При сравнении качественных данных использован критерий Пирсона χ2 и точный критерий Фишера. Критическое значение уровня значимости принималось равным 5%. Относительный риск заболевания по каждому аллелю вычисляли как соотношение шансов (odds ratio - OR) с расчетом доверительных интервалов (OR'). При OR=1 ассоциации нет, OR>1 - положительная ассоциация заболевания с аллелем и генотипом и OR<1 - отрицательная ассоциация.

Офтальмологическое обследование пациентов включало стандартные методы определения визометрии, офтальмотонуса, биомикроскопии, офтальмоскопии с применением универсальной линзы Гольдмана в условиях медикаментозного мидриаза при отсутствии противопоказаний.

Учитывая особые этические моменты, связанные с охраной права личности, осмотры и забор биологического материала проводились с заполнением специальных медицинских карт при добровольном согласии на участие в клиническом исследовании взрослого пациента или родителя несовершеннолетнего больного. Форма указанной медицинской карты одобрена Комитетом по этике при Якутском научном центре СО РАН РФ (Протокол №5 от 21.06.2006 г.).

Авторами обследованы коренные жители, принадлежащие к этнической группе якутов, проживающие в 5 районах (Амгинский, Усть-Алданский, Таттинский, Чурапчинский, Мегино-Кангаласский) Республики Саха (Якутия).

В ходе работы исследованы 238 образцов ДНК этнических якутов обеих гендерных групп. Группу исследования составили 78 больных ДР (Классификация E.Kohner, M.Porta, 1990) при СД типа 2, в возрасте свыше 40 лет. Контрольная группа состояла из 160 добровольных доноров той же этнической группы, без клинических и лабораторных признаков сахарного диабета, не родственных между собой и не имеющих отягощенного семейного анамнеза по сахарному диабету. Сравнительная клинико-социальная характеристика исследуемых пациентов в обеих группах представлена в таблице 1.

Таблица 1
Сравнительная социально-клиническая характеристика исследуемых пациентов в этнической группе якутов
Характеристика исследуемых пациентов в этнической группе якутов Группа больных ДР при СД 2 типа Контрольная группа
1 2 3
Возраст 54.7±10.9 57.0±14.7
Пол (М/Ж в %) 31.5/68.5 42.6/57.4
Индекс массы тела 27.5±3.76 25.2±2.87
Гликемия (ммоль/л) 11.7±4.81 4.8±0.75
Артериальное давление (систолическое) (ммHg) 151±24 140±14
Артериальное давление (диастолическое) (ммHg) 92±11 88±8

Из таблицы 1 видно, что пациенты обеих групп не имели особых статистических различий по полу и возрасту. Основной составляющей обеих групп были женщины в возрасте старше 50 лет. Среди пациентов исследуемой группы отмечается повышенный индекс массы тела, уровня гликемии и артериального давления.

В результате офтальмологического исследования пациентов установлено, что длительность развития ДР варьировала в диапазоне от 1 года до 20 лет. ДР развилась в 62.8% случаев после установления СД типа 2 в течение первых 5 лет. Впервые выявленная ДР, преимущественно 1 и 2 стадии, установлена авторами при сроке СД типа 2 на момент исследования и продолжительности основного заболевания до 1 года в 30% случаев.

Данный факт подтверждает тяжесть диабетических микроангиопатий органа зрения, обусловливающих раннюю слепоту и слабовидение пациентов в первые годы заболевания.

В результате молекулярно-генетического исследования отмечено, что эмпирическое распределение частот генотипов полиморфного варианта -572 G/C гена интерлейкина-6 в популяции якутов соответствует теоретически ожидаемому равновесию Харди-Вайнберга (χ2=0.037, Р=0.999).

Оценка распределения частот генотипов и аллелей полиморфного варианта -572 G/C гена интерлейкина-6 (IL-6) обнаружила статистически значимые различия между больными ДР и контрольной группой (таблица 2).

Таблица 2
Анализ ассоциаций полиморфного варианта -572 G/C гена интерлейкина-6 (IL-6) с диабетической ретинопатией у якутов
Контроль Больные ДР P OR CIOR
n pi±sp (%) CI n pi±sp (%) CI
Генотипы
1 2 3 4 5 6 7 8
*С/*С 67 42.95±3.96 25 30.86±5.13 0.092 - -
35.06-51.11 21.07-42.11
*C/*G 65 41.67±3.95 36 44.44±5.52 0.681 - -
33.84-49.82 33.4-55.91
*G/*G 24 15.38±2.89 20 24.69±4.79 0.112 - -
10.11-22.02 15.78-35.53
Аллели
199 63.78±2.72 86 53.09±3.92 0.029 0.64 0.44-0.94
58.18-69.12 45.1-60.96
*G 113 36.22±2.72 76 46.91±3.92 1.56 1.06-2.29
30.88-41.82 39.04-54.9
1 2 3 4 5 6 7 8
Примечание к таблице 2:
n - количество наблюдений, pi - частота генотипа (аллеля); Sp - ошибка pi; Р - вероятность; OR (odds ratio) - показатель соотношения шансов; CI (confidence interval) - 95% доверительный интервал.

Из таблицы 2 видно, что с наибольшей частотой в группе больных ДР, чем в контрольной группе, встречается аллель *G (46.91% против 36.22%, Р=0.029). Относительный риск (OR) составил 1.56 (CIOR=1.06-2.29). Частоты других генотипов и аллелей достоверно не различаются.

Предлагаемый способ позволяет при выявлении аллеля *G полиморфного варианта -572 G/C гена интерлейкина-6 (IL-6) у якутов прогнозировать риск развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2.

Выявленный аллель *G полиморфного варианта -572 G/C гена интерлейкина-6 (IL-6) является маркером повышенного риска диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 для данного этноса.

Полученные результаты будут способствовать своевременному прогнозированию и/или выявлению группы риска по диабетической ретинопатии среди якутов и помогут определить тактику ведения пациента с предрасположенностью к диабетической ретинопатии с использованием индивидуального комплекса профилактических и лечебных мероприятий.

Способ прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якутов, включающий выделение ДНК из лимфоцитов периферической венозной крови, отличающийся тем, что амплификацию специфичности гена интерлейкина-6 - IL-6 определяют методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК и при выявлении аллеля *G полиморфного варианта -572 G/C гена интерлейкина-6 - IL-6 прогнозируют риск развития диабетической ретинопатии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и касается определения вероятности развития рака желудка. .
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии. .
Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, лабораторной диагностике, иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования течения панкреонекроза.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу выделения минералов соединительной ткани человека методом низкотемпературного озоления ткани. .

Изобретение относится к медицине и касается устройства для разделения плазмы крови и красных кровяных телец, где разделительные средства (1) включают сжимающее приспособление (20) для продавливания по меньшей мере части крови через фильтр (26), в котором предусмотрены по меньшей мере первый сборный отсек (27) для сбора отделенной кровяной плазмы и по меньшей мере один реагент, который размещен в первом сборном отсеке (27) или может быть введен в него для реакции с субстанциями или организмами, присутствующими в плазме крови.
Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования постгипоксической кардиопатии у новорожденных от матерей с врожденными пороками сердца.
Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования течения раннего периода постнатальной адаптации у доношенных детей, перенесших асфиксию при рождении.
Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лабораторного способа прогнозирования течения экземы с сопутствующей патологией гастродуоденальной зоны.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и описывает способ прогнозирования возникновения ретрохориальных гематом у беременных, страдающих недифференцированной дисплазией соединительной ткани, с угрожающим выкидышем малых сроков без клинической картины отслойки плодного яйца, включающий определение магния в эритроцитах, где при полученных значениях магния в эритроцитах ниже 1,65 ммоль/л у данного контингента беременных прогнозируют возникновение ретрохориальной гематомы.

Изобретение относится к области молекулярной биологии. .

Изобретение относится к биотехнологии, молекулярно-генетической диагностике фитопатогенов леса. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу обнаружения нуклеотидной последовательности в геномном образце. .

Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной биологии. .

Изобретение относится к области медицины, в частности онкологии и молекулярной биологии, и касается способа диагностики рака мочевого пузыря (РМП) и набора для его осуществления.
Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования интенсивности и резистентности болевого синдрома после операции видеолапароскопической холецистэктомии у больных хроническим калькулезным холециститом.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к зонду для детекции и набору (варианты) для детекции целевой нуклеиновой кислоты, спейсеру, подходящему для присоединения к специфической к мишени последовательности зонда и способу детекции любого взаимодействия между заявленным зондом и целевой нуклеиновой кислотой.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и касается способа прогнозирования риска развития диабетической ретинопатии при сахарном диабете типа 2 у якуток.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу гомогенной детекции со сниженным разбросом данных по меньшей мере одного продукта одноцепочечной амплификации.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования сроков развития профессиональных аллергических дерматозов при воздействии на организм факторов раздражающего и сенсибилизирующего действия
Наверх