Способ производства молокосвертывающего ферментного препарата


 


Владельцы патента RU 2467068:

Государственное научное учреждение СИБИРСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ СЫРОДЕЛИЯ Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ СибНИИС Россельхозакадемии) (RU)

Проводят подготовку исходного сырья, его гомогенизацию, внесение экстрагента, который представляет собой подкисленный соляной кислотой до pH 1.5-2,0 водный раствор с добавлением 7,5-10,0% сульфата аммония и экстракцию. Отстаивают полученную смесь до разделения ее на жидкую фазу и осадок. Осуществляют выделение молокосвертывающего фермента и его последующую обработку. Изобретение позволяет сократить время получения ферментного препарата, повысить его удельную молокосвертывающую активность и чистоту, а также снизить его потери в условиях промышленного производства. 1 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к способам производства ферментных препаратов, главным образом из сырья животного происхождения, и может быть использовано на предприятиях по переработке животного сырья, например для приготовления применяемых в сыроделии молокосвертывающих ферментных препаратов.

Известен способ получения молокосвертывающего ферментного препарата (говяжьего пепсина), предусматривающий подготовку исходного сырья, его гомогенизацию, внесение экстрагента и экстракцию сырья с последующим осаждением фермента (см. Технологическая инструкция по производству пепсина пищевого говяжьего к ТУ 9219-560-00419779-2000, - 2001. - С.1-7, ОАО "Московский завод сычужного фермента"). При осуществлении данного способа в качестве экстрагента используют водный раствор HCl. Продукт получают удовлетворительного качества, однако даже при двойной экстракции водным раствором HCl развивается процесс автолиза (самопереваривания) ткани сычугов и образуется большое количество слизи, что приводит к существенным потерям фермента в условиях промышленного производства, поскольку при фильтрации часть его остается в проэкстрагированной слизистой массе и вместе с нею утилизируется.

Известен также способ производства молокосвертывающего ферментного препарата, предусматривающий подготовку исходного сырья, его гомогенизацию, внесение в гомогенизированное сырье экстрагента, экстракцию, отстаивание полученной смеси до разделения ее на жидкую фазу и осадок, выделение молокосвертывающего фермента и его последующую обработку (см. патент РФ №2392320, МПК7 C12N 9/00, заявлено 04.05.2008, опубликовано 20.06.2010).

Это техническое решение является наиболее близким к заявляемому по совокупности существенных признаков (прототип).

Согласно прототипу в проэкстрагированную массу вносят сульфат аммония. Это позволяет разделить ее на жидкую фазу с основной частью фермента и осадок, с последующим выделением фермента. Однако при осуществлении такого способа время получения готового экстракта остается значительным (должны быть последовательно выполнены сначала экстракция, потом внесение соли и отстаивание смеси). Кроме того, на этапе экстракции, до внесения сульфата аммония, уже произошел процесс автолиза и образовалась слизь, которая связала часть экстрагента с содержащимся в нем ферментом и перевела его в потери. По этой же причине утрачивается эффект увеличения удельной молокосвертывающей активности от внесения в экстрагент сульфата аммония и увеличивается время последующей фильтрации.

Техническим результатом настоящего изобретения является создание такого способа производства молокосвертывающего ферментного препарата, который позволил бы сократить время его получения в условиях промышленного производства, повысить его удельную молокосвертывающую активность и чистоту, а также снизить его потери.

Технический результат достигается тем, что в способе производства молокосвертывающего ферментного препарата, предусматривающем подготовку исходного сырья, его гомогенизацию, внесение в гомогенизированное сырье экстрагента, экстракцию, отстаивание полученной смеси до разделения ее на жидкую фазу и осадок, выделение молокосвертывающего фермента и его последующую обработку, согласно изобретению перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье в экстрагент вносят сульфат аммония в количестве 7,5-10%.

Внесение сульфата аммония в экстрагент в количестве 7,5-10% перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье приводит к тому, что процесс экстракции протекает одновременно с процессом флоккуляции (в данном случае - выпадение в осадок в виде плотных комочков) слизи без перевода части экстрагента с содержащимся в нем ферментом в отход, что увеличивает удельную молокосвертывающую активность экстракта, позволяет более эффективно отделять ферментсодержащий экстракт при последующей фильтрации (при этом время экстракции и фильтрации сокращается), объем фильтрата увеличивается, а потери фермента сводятся к минимуму.

Способ осуществляют следующим образом.

Подготовленное известным способом исходное сырье, например, слизистые оболочки желудков млекопитающих, например КРС, известным способом гомогенизируют. Затем в гомогенизированное сырье вносят экстрагент (подкисленный соляной кислотой до pH=2,0-2,5 водный раствор), в который предварительно, перед внесением его в гомогенизированное сырье, вносят 7,5-10% сульфата аммония. Под воздействием экстрагента с сульфатом аммония, образующаяся в ходе процесса слизь (продукт автолиза - самопереваривания ткани сычугов), флоккулирует (выпадает в осадок в виде плотных комочков), а механические примеси и высокомолекулярные балластные белки, выпадают в осадок. При указанном количестве сульфата аммония, фермент не осаждается, а остается в жидкой фазе.

Внесение в экстрагент сульфата аммония в концентрации менее 7,5% не приводит к полному осаждению слизи, механических примесей и балластных белков, а при концентрации соли более чем 10% приводит к выпадению в осадок части фермента и его потере.

После завершения экстракции смесь разделяют на экстракт и осадок, одним из известных способов (фильтрация, центрифугирование). Ферментсодержащий экстракт концентрируют методом ультрафильтрации до требуемого значения молокосвертывающей активности и проводят дальнейшую обработку до стадии товарной продукции (молокосвертывающего ферментного препарата). Осадок удаляется в отход.

Примеры реализации способа производства молокосвертывающего ферментного препарата.

Пример 1. Готовили гомогенизированное сырье из слизистых оболочек желудков млекопитающих. Параллельно с этим готовили экстрагент (подкисленный соляной кислотой до pH=2,0-2,5 водный раствор). Затем экстрагент вносили в подготовленное сырье при соотношении сырье:экстрагент = 1:5) (контрольный образец по прототипу).

По известным методикам смесь перемешивали, экстрагировали и определяли в полученных экстракционных смесях удельную молокосвертывающую активность, объем полученного экстракта, суммарный выход молокосвертывающей активности, оптическую плотность при длине волны 280 нм и относительную чистоту.

Пример 2. Готовили гомогенизированное сырье из слизистых оболочек желудков млекопитающих. Параллельно с этим готовили экстрагент (подкисленный соляной кислотой до pH=2,0-2,5 водный раствор). Перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье в экстрагент добавили 5% сульфата аммония (меньше заявляемых пределов). Затем экстрагент с добавленным сульфатом аммония вносили в подготовленное сырье.

По известным методикам смесь перемешивали, экстрагировали и определяли в полученных экстракционных смесях характеристики по примеру 1.

Пример 3. Готовили гомогенизированное сырье из слизистых оболочек желудков млекопитающих. Параллельно с этим готовили экстрагент (подкисленный соляной кислотой до pH=2,0-2,5 водный раствор). Перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье в экстрагент добавили 7,5% сульфата аммония (нижняя граница заявляемых пределов). Затем экстрагент с добавленным сульфатом аммония вносили в подготовленное сырье.

По известным методикам смесь перемешивали, экстрагировали и определяли в полученных экстракционных смесях характеристики по примеру 1.

Пример 4. Готовили гомогенизированное сырье из слизистых оболочек желудков млекопитающих. Параллельно с этим готовили экстрагент (подкисленный соляной кислотой до pH=2,0-2,5 водный раствор). Перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье в экстрагент добавили 10% сульфата аммония (верхняя граница заявляемых пределов). Затем экстрагент с добавленным сульфатом аммония вносили в подготовленное сырье.

По известным методикам смесь перемешивали, экстрагировали и определяли в полученных экстракционных смесях характеристики по примеру 1.

Пример 5. Готовили гомогенизированное сырье из слизистых оболочек желудков млекопитающих. Параллельно с этим готовили экстрагент (подкисленный соляной кислотой до pH=2,0-2,5 водный раствор). Перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье в экстрагент добавили 12,5% сульфата аммония (превышение верхней границы заявляемых пределов). Затем экстрагент с добавленным сульфатом аммония вносили в подготовленное сырье.

По известным методикам смесь перемешивали, экстрагировали и определяли в полученных экстракционных смесях характеристики по примеру 1.

Результаты по примерам 1-5 представлены в Таблице.

Таблица
№ примера и содержание (%) сульфата аммония в экстрагенте. Удельная молокосвертываю
щая активность (усл. ед./мл) экстракционных смесей
Объем полученного экстракта (мл) Оптическая плотность при длине волны 280 нм (D280) Относительная чистота, усл.ед./D280 (% по сравнению с контролем) Суммарный выход молокосвертывающей активности, усл.ед. (% выхода по сравнению с контролем)
№1 (0%) (контроль) 2112 1350 19,7 107,2 (100%) 2851200 (100%)
№2 (5%) 2206 1480 17,1 129,0 (120%) 3264880 (115%)
№3 (7,5%) 2416 1670 16,0 151,0 (141%) 4034720 (142%)
№4 (10%) 2538 1750 14,3 177,5 (166%) 4441500 (156%)
№5 (12,5%) 2079 1760 12,9 161,2 (150%) 3659040 (128%)

Результаты, представленные в Таблице, свидетельствуют о том, что внесение в экстрагент сульфата аммония в пределах 7,5%-10% позволяет получить экстракционную смесь с наибольшей удельной молокосвертывающей активностью; эффективно отделять экстракт и повысить суммарный выход фермента, по сравнению с контролем, на 42% и 56% соответственно, а также повысить чистоту фермента, по сравнению с контролем, на 41% и 66%, соответственно.

Таким образом, предлагаемый способ производства молокосвертывающего ферментного препарата позволяет сократить время на его получение, повысить его удельную молокосвертывающую активность и чистоту, а также снизить его потери в условиях промышленного производства.

Способ производства молокосвертывающего ферментного препарата, предусматривающий подготовку исходного сырья, его гомогенизацию, внесение в гомогенизированное сырье экстрагента, экстракцию, отстаивание полученной смеси до разделения ее на жидкую фазу и осадок, выделение молокосвертывающего фермента и его последующую обработку, отличающийся тем, что перед внесением экстрагента в гомогенизированное сырье в экстрагент вносят сульфат аммония в количестве 7,5-10%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению слитых с альбумином полипептидов фактора VII (FVII) и фактора VIIa (FVIIa), и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к производству сычужного фермента из сычугов телят, ягнят и козлят-молочников и может быть использовано в молочной промышленности при производстве молокосвертывающих ферментных препаратов, а также в ветеринарии, микробиологической промышленности и медицине.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению высокоочищенных высокоактивных препаратов ингибиторов, которые могут быть использованы в биохимии, медицине, фармакологии, патофизиологии, для терапии тромбоэмболических заболеваний, а также для исследовательских целей.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к выделению сериновых протеаз, содержащих GLA-остаток, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению полипептидов фактора VII, и может быть использовано в медицине. .
Изобретение относится к биохимии и может быть использовано в биотехнологии при получении генно-инженерных продуктов. .

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой олигопептид, способный блокировать инвазию и метастазирование раковых клеток, содержащий олигопептидную последовательность (приведена в заявке) или ее фрагмент, также представляет собой фармацевтическую композицию для предупреждения или лечения дегенеративных заболеваний, или патологических состояний, обусловленных разрушением внеклеточного матрикса (ЕСМ) металлопротеиназами матрикса (ММР), диагностическую композицию для выявления дегенеративных заболеваний или патологических состояний, обусловленных разрушением внеклеточного матрикса (ЕСМ) металлопротеиназами матрикса (ММР).

Группа изобретений относится к области медицины, в частности к лечению гемофилии. Конъюгаты фактора IX модифицированы для включения биосовместимого полимерного фрагмента. Конъюгаты фактора IX, по существу, свободны от загрязнения фактором IХа. Конъюгаты фактора IX имеют улучшенные фармакокинетические свойства, такие как увеличенное время полужизни. Группа изобретений позволяет снизить дозировку и частоту введения, а также снижает риск гемартроза, геморрагии, желудочно-кишечного кровотечения и меноррагии у млекопитающих с гемофилией В. 6 н. и 24 з.п. ф-лы, 4 ил., 9 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ экстрагирования говяжьего пепсина. Готовят кислотный экстракт слизистых оболочек сычугов КРС. Фермент экстрагируют одновременно с размораживанием замороженных блоков слизистых оболочек сычугов КРС однократно раствором соляной кислоты с pH 1,3-1,5 при медленном периодическом перемешивании. Экстракт отделяют от сырья и фильтруют под давлением 0,015-0,02 МПа. Преимуществом способа является упрощение и сокращение продолжительности технологического процесса и повышение качества получаемого фермента. 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ получения рекомбинантного ингибитора сериновых протеиназ из гепатопанкреаса камчатского краба, заключающийся в том, что из гепатопанкреаса камчатского краба Paralithodes camtchaticus выделяют РНК и осуществляют синтез кДНК ингибитора PC из суммарной РНК методом обратной транскрипции, которую амплифицируют методом полимеразной цепной реакции с праймерами, полученный ПЦР-продукт, содержащий ген ингибитора PC, кодирующий ингибитор PC c аминокислотной последовательностью, показанной на фиг. 2, клонируют в экспрессионный вектор, с последующей трансформацией в клетки E. coli, полученные при этом рекомбинантные штаммы E. coli культивируют в течение не более 20 час при 37°C, а полученную биомассу подвергают центрифугированию, отмывают от остатков среды, ресуспендируют в буфере лизиса и лизируют, выделяют тельца включения из полученной биомассы разрушением ультразвуком, лизат ресуспендируют в буфере промывки и снова осаждают тельца включения, полученные тельца включения растворяют в 8 М мочевине и повергают предварительной очистке на сорбенте с градиентной элюцией буфером, содержащем 8 М мочевину и 0,7 М NaCl, после чего проводят ренатурацию растворенного ингибитора, методом снижения концентрации денатуранта в буфере 20 мМ MES-NaOH pH 6.0 или 20 мМ MES-NaOH pH 6.0, 2 М NaCl, 0,05% PEG 6000 и последующую очистку препарата ионообменной хроматографией. Изобретение позволяет получить ингибитор сериновых протеиназ, обладающий улучшенными ингибиторными свойствами по отношению к коллагеназе, трипсину и субтилизину. 5 з.п. ф-лы, 8 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой полинуклеотидную молекулу с SEQ ID №4 или 6, кодирующую легкую цепь энтерокиназы. Изобретение относится также к дрожжевому экспрессионному конструкту, содержащему указанную последовательность, а также к дрожжевой клетке, трансформированной конструктом. Изобретение касается также способа продуцирования энтерокиназы с использованием такой клетки. Изобретение позволяет эффективно получать энтерокиназу. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 6 пр.

Настоящее изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ очистки коагуляционного фактора IX (FIX). Способ включает хроматографию с использованием мультимодальной смолы, при которой осуществляется контакт фракции, содержащей FIX, с мультимодальной смолой, промывка промывочным буфером для удаления примесей и элюирование FIX с мультимодальной смолы буфером, содержащим аргинин, с последующим сбором фракций, содержащих FIX, в очищенной или обогащенной форме. Предложенный способ дает возможность дальнейшего использования стадии очистки целевого белка, связанного с мультимодальной смолой, перед элюированием, а также возможность проведения элюирования в мягких условиях. Предложенный способ может быть использован в биохимии для очистки коагуляционного фактора IX. 15 з.п. ф-лы, 1 ил., 17 табл., 7 пр.
Наверх