Новый класс терапевтических белковых молекул

Изобретение относится к области биохимии. Представлен белок, включающий каталитический фрагмент сиалидазы и обладающий сиалидазной активностью, который выбран из белка, последовательность которого включает аминокислоты 274-666, или 274-681, или 290-666, или 290-681 SEQ ID NO:12, или включает аминокислотную последовательность SEQ ID NO:14, приведенные в настоящем описании. Описан слитый белок, включающий указанный выше белок и якорный домен. Также имеются сведения о молекулах нуклеиновых кислот, кодирующих указанные белки, экспрессирующих векторах, содержащих указанные нуклеиновые кислоты, и фармацевтических композициях, содержащих указанные белок или слитый белок. Предложен способ лечения или предупреждения вирусной инфекции, вызванной вирусом гриппа или парагриппа, включающий применение терапевтически эффективного количества указанной композиции к эпителиальным клеткам субъекта. Изобретение позволяет расширить арсенал средств против инфекции, вызванной вирусом гриппа или парагриппа. 10 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 табл., 13 ил., 17 пр.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Белок, включающий каталитический домен сиалидазы и обладающий сиалидазной активностью, который выбран из:
(1) белка, последовательность которого включает аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO:14, и не включает аминокислотные остатки, простирающиеся от аминокислоты 1 до аминокислоты 273 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12;
(2) белка, последовательность которого включает аминокислотную последовательность, которая начинается с аминокислоты 274 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и заканчивается на аминокислоте 666 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и не включает аминокислотные остатки с 1 до 273 и с 667 до 901 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12;
(3) белка, последовательность которого включает аминокислотную последовательность, которая начинается с аминокислоты 274 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и заканчивается на аминокислоте 681 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и не включает аминокислотные остатки с 1 до 273 и с 682 до 901 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12;
(4) белка, последовательность которого включает аминокислотную последовательность, которая начинается с аминокислоты 290 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и заканчивается на аминокислоте 666 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и не включает аминокислотные остатки с 1 до 289 и с 667 до 901 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12; и
(5) белка, последовательность которого включает аминокислотную последовательность, которая начинается с аминокислоты 290 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и заканчивается на аминокислоте 681 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12, и не включает аминокислотные остатки с 1 до 289 и с 682 до 901 последовательности аминокислот, приведенной в SEQ ID NO:12.

2. Молекула нуклеиновой кислоты, представленная нуклеотидной последовательностью, кодирующей белок каталитического домена сиалидазы по п.1.

3. Экспрессирующий вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.2.

4. Слитый белок, обладающий сиалидазной активностью и включающий фрагмент сиалидазы, включающий каталитический домен сиалидазы, и якорный домен, где указанный белок выбран из следующих белков:
а) белок, где
указанный фрагмент сиалидазы включает последовательность аминокислот, которая простирается от аминокислоты 274 до аминокислоты 666 из SEQ ID NO:12 включительно, и не включает последовательность, которая состоит из последовательности, простирающейся от аминокислоты 1 до аминокислоты 273 и от аминокислоты 667 до аминокислоты 901 из SEQ ID NO:12; и
указанный якорный домен представляет собой гликозаминогликан (GAG)-связывающий домен человеческого амфирегулина, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7;
б) белок, где
указанный фрагмент сиалидазы включает последовательность аминокислот, которая простирается от аминокислоты 274 до аминокислоты 681 из SEQ ID NO:12 включительно, и не включает последовательность, которая состоит из последовательности, простирающейся от аминокислоты 1 до аминокислоты 273 и от аминокислоты 682 до аминокислоты 901 из SEQ ID NO:12; и
указанный якорный домен представляет собой гликозаминогликан (GAG)-связывающий домен человеческого амфирегулина, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7;
в) белок, где
указанный фрагмент сиалидазы включает последовательность аминокислот, которая простирается от аминокислоты 290 до аминокислоты 666 из SEQ ID NO:12 включительно, и не включает последовательность, которая состоит из последовательности, простирающейся от аминокислоты 1 до аминокислоты 289 и от аминокислоты 667 до аминокислоты 901 из SEQ ID NO:12; и указанный якорный домен представляет собой гликозаминогликан (GAG)-связывающий домен человеческого амфирегулина, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7;
г) белок, где
указанный фрагмент сиалидазы включает последовательность аминокислот, которая простирается от аминокислоты 290 до аминокислоты 681 из SEQ ID NO:12 включительно, и не включает последовательность, которая состоит из последовательности, простирающейся от аминокислоты 1 до аминокислоты 289 и от аминокислоты 682 до аминокислоты 901 из SEQ ID NO:12; и
указанный якорный домен представляет собой гликозаминогликан (GAG)-связывающий домен человеческого амфирегулина, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7; и
д) белок, где
указанный фрагмент сиалидазы включает последовательность аминокислот, которая простирается от аминокислоты 274 до аминокислоты 667 из SEQ ID NO:12 включительно, и не включает последовательность, которая состоит из последовательности, простирающейся от аминокислоты 1 до аминокислоты 273 и от аминокислоты 668 до аминокислоты 901 из SEQ ID NO:12; и указанный якорный домен представляет собой гликозаминогликан (GAG)-связывающий домен человеческого амфирегулина, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:7;
и белок дополнительно включает пептидный линкер.

5. Слитый белок по п.4, последовательность которого включает последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:21.

6. Слитый белок по п.4, последовательность которого включает последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:23.

7. Слитый белок по п.4, последовательность которого включает последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:25.

8. Слитый белок по п.4, последовательность которого включает последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:27.

9. Слитый белок по п.4, последовательность которого включает последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:35.

10. Слитый белок по п.4, последовательность которого включает последовательность аминокислот, приведенную в SEQ ID NO:37.

11. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок по любому из пп.4-10.

12. Экспрессирующий вектор, включающий молекулу нуклеиновой кислоты по п.11.

13. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая слитый белок, обладающий сиалидазной активностью и включающий фрагмент сиалидазы, включающий каталитический домен сиалидазы, где последовательность молекулы нуклеиновой кислоты включает последовательность нуклеотидов, выбранную из последовательностей, приведенных в SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28 и SEQ ID NO:36.

14. Фармацевтическая композиция для лечения гриппа или парагриппа и обладающая сиалидазной активностью, содержащая белок по п.1 в эффективном количестве.

15. Фармацевтическая композиция для лечения гриппа или парагриппа и обладающая сиалидазной активностью, содержащая слитый белок по любому из пп.4-10 в эффективном количестве.

16. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, приготовленная в виде спрея.

17. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, приготовленная в виде ингаляционного средства.

18. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, приготовленная в виде раствора для инъекции.

19. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, приготовленная в виде раствора для глазных капель.

20. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, приготовленная в виде крема, бальзама, геля или мази.

21. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, приготовленная в виде пилюли, таблетки, пастилки, суспензии или раствора для перорального введения.

22. Способ лечения или предупреждения вирусной инфекции, вызванной вирусом гриппа или парагриппа, включающий:
применение терапевтически эффективного количества композиции по любому из пп.14-21 к эпителиальным клеткам субъекта.

23. Способ по п.22, где указанное применение осуществляют путем использования назального спрея.

24. Способ по п.22, где указанное применение осуществляют путем использования ингалятора.

25. Способ по п.22, где указанное применение осуществляют от одного до четырех раз в сутки.