Способ количественного определения рутина методом тонкослойной хроматографии



Способ количественного определения рутина методом тонкослойной хроматографии
Способ количественного определения рутина методом тонкослойной хроматографии
Способ количественного определения рутина методом тонкослойной хроматографии
Способ количественного определения рутина методом тонкослойной хроматографии

 


Владельцы патента RU 2469316:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный университет" (ГОУ ВПО ВГУ) (RU)

Изобретение относится к области фармацевтической, пищевой и химической отраслей промышленности и может быть использовано для контроля качества пищевых продуктов, косметических средств и биологически активных добавок к пище по содержанию рутина (витамина Р). Способ количественного определения рутина включает растворение анализируемого образца препарата при нагревании в этаноле с последующим хроматографированием с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil», элюент - этилацетат-ледяная уксусная кислота-вода (7,5:1,5:1,5); проявитель - 5% спиртовый раствор NaOH, после проявления хроматографических зон пластины сканируют с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO и полученные изображения обрабатывают компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer», а содержание рутина в анализируемом образце (с, %) рассчитывают по формулам

, где S - значение площади хроматографической зоны на хроматограмме, вычисленное с помощью компьютерной программы «Sorbfil Videodensitometer». Техническим результатом изобретения является экспрессность, доступность, достаточная чувствительность, селективность. 4 ил.

 

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, лекарственного растительного сырья, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию рутина - основного биологически активного вещества группы флавоноидов.

Способ позволяет проводить определение подлинности, степени чистоты и количественного содержания субстанции рутина и стандартизировать лекарственные препараты, лекарственное растительное сырье, изделия пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию рутина и отличается достаточной чувствительностью (5·10-7 г), экономичностью, доступностью и экспрессностью.

Известны способы идентификации рутина в субстанции, одно- и многокомпонентных лекарственных формах, лекарственном растительном сырье, премиксах, биологически активных добавках, культурах микроорганизмов с помощью цветных реакций (Биологически активные вещества лекарственных растений / Георгиевский В.П., Комисаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. - Новосиб.: Наука, 1990. - 333 с.; ВФС 42-2577-95. Таблетки «Аскорутин»; Государственная фармакопея СССР. - М.: Медицина. - 10-е изд., 1968. - сс.599-600).

Нашли широкое применение также спектральные методы анализа, такие как фотоэлектроколориметрия, прямая и дифференциальная спектрофотометрия, основанные на измерении оптической плотности исследуемых растворов после добавления каких-либо цветореагентов, образующие с рутином окрашенные комплексы (цитратно-боратный реактив, хлориды алюминия и железа (III), реактив Циннода, диазореактив, растворы аммиака и др.) (Андреева В.Ю., Калинкина Г.И. Разработка методики количественного определения флавоноидов в манжетке обыкновенной. Химия растит. сырья. - 2000. - №1. - сс.85-88; Бекетов Е.В., Абрамов А.А., Нестерова О.В., Кондрашев С. В. Идентификация и количественная оценка флавоноидов в плодах черемухи обыкновенной. Вести. Моск. Ун-та. Сер.2. Химия. - 2005. - Т. 46. - №4. - сс.259-262; Блинова М.П., Теслов Л.С. Разработка метода количественной оценки содержания флавоноидов в траве бубенчика широколистного. Сборник научных трудов «Фармация из века в век». Часть III. Анализ и стандартизация лекарственных средств. - СПб: Изд-во СПХФА, 2008. - сс.6-8).

Недостатками указанных способов являются: громоздкость и длительность определений, нестабильность окрашенных продуктов цветных реакций, недостаточная чувствительность и селективность, невозможность определения рутина в присутствии других представителей группы флавоноидов.

Для идентификации и количественного определения флавоноидов, в том числе рутина, также широко применяется метод ВЭЖХ (Высочина Г.И., Шалдаева Т.М., Коцупий О.В., Храмова Е.П. Флавоноиды Мари белой (Chenopodium album L.), произрастающей в сибири. - Химия растительного сырья, 2009. - №4. - сс.107-112; Кошечкина А.С. Разработка методов анализа флавонов как индикаторных компонентов лекарственного растительного сырья, Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва - 2007. - 25 с.; Птицын А.В. Технология выделения флавоноидов винограда Vitis vinifera сорта «Изабелла» для косметики и изучение их свойств, Автореф. на соиск. уч. ст. канд. хим. н. Москва 2007. - 26 с.). Недостатком которого является нехватка квалифицированных кадров, дорогостоящего оборудования и стандартных образцов.

Известно использование тонкослойной хроматографии (ТСХ) для изучения флавоноидного состава ромашки аптечной (Кочергина Н.В. Изучение флавоноидного состава аллопатических и гомеопатических препаратов ромашки аптечной методом тонкослойной хроматографии // VIII конгресс молодых ученых и специалистов «Науки о человеке». - Томск, 2007. - сс.228-229), бадана толстолистного (Федосеева Л.М., Тимохин Е.В. Изучение флавоноидов красных листьев бадана толстолистного, произрастающего на Алтае, Химия растит. сырья. - 1999. - №4. - сс.81-84), календулы лекарственной (Шарова О.В., Куркин В.А. Флавоноиды цветков календулы лекарственной, Химия растит, сырья. - 2007. - №1. - сс.65-68).

ТСХ, обладая всеми преимуществами хроматографических методов - экспрессностью, доступностью, достаточной чувствительносттю, селективностью и простоте выполнения анализа, находит широкое применение.

В научной фармацевтической и медицинской литературе способов, позволяющих идентифицировать и количественно определять рутин методом ТСХ, авторами не выявлено.

Задача изобретения - разработка способа определения подлинности, степени чистоты и количественного содержания субстанции рутина, разделения сложных смесей рутина с другими биологически активными веществами и стандартизации лекарственных препаратов, лекарственного растительного сырья, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленностей по содержанию рутина методом ТСХ.

Технический результат заключается в возможности количественного определения содержания субстанции рутина в лекарственных препаратах, лекарственном растительном сырье с достаточной чувствительностью.

Технический результат достигается тем, что способ количественного определения рутина включает растворение анализируемого образца препарата при нагревании в этаноле с последующим хроматографированием с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» 5×10 см с полимерной подложкой ПТСХ-П-А-УФ, элюент - этилацетат-ледяная уксусная кислота-вода (7,5:1,5:1,5), время насыщения камеры парами элюента 20 мин; время элюирования 35 мин; проявитель - 5% спиртовый раствор NaOH, время выдерживания пластинки в термостате при tº≥80ºС 3-5 мин, сразу же после проявления хроматографических зон пластины сканируют с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO и полученные изображения обрабатывают компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer», а содержание рутина в анализируемом образце (с, %) рассчитывают по формулам

где S - значение площади хроматографической зоны на хроматограмме, вычисленное с помощью компьютерной программы «Sorbfil Videodensitometer».

На фиг.1 изображена калибровочная хроматограмма с серией стандартных растворов рутина (с=0,05-2%):1 0,05%; 2 0,1%; 3 0,25%; 4 0,5%; 5 0,75%; 6 1%; 7 1,5%; 8 2%; фиг.2 - аналоговая кривая раствора рутина; фиг.3 - градуировочный график для определения содержания рутина в области концентраций 0,05-0,5%; фиг.4 - градуировочный график для определения содержания рутина в области концентраций 0,5-2,0%.

Навеску исследуемого препарата растворяют при нагревании в этаноле с последующим хроматографированием с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» 5х10 см с полимерной подложкой ПТСХ-П-А-УФ; элюент - этилацетат-ледяная уксусная кислота-вода (7,5:1,5:1,5); проявитель - 5% спиртовый раствор NaOH; оптимальный объем пробы - 3 мкл спиртового раствора с содержанием рутина 2 мг/мл; время насыщения камеры парами элюента 20 мин; время элюирования 35 мин; время выдерживания пластинки в термостате при tº≥80ºС 3-5 минут. Сразу же после проявления хроматографических зон пластины сканируют с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO, а полученные изображения (фиг.1) обрабатывают компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer». В результате получают треки в координатах Rf - интенсивность (фиг.2).

Данная методика позволяет не только получать на хроматограммах четкие зоны рутина округлой формы с оптимальным значением величины Rf, но и проводить разделение сложных смесей рутина с другими биологически активными веществами.

Установлена линейная зависимость между содержанием рутина и интенсивностью окраски хроматографической зоны в диапазоне концентраций рутина 0,05-0,5% и 0,5-2,0%. По полученным результатам были построены градуировочные графики, иллюстрирующие эту зависимость (фиг.3 и 4).

Наличие точки перегиба объясняется снижением коэффициента инструментальной чувствительности определения («а» в уравнении у=ax+b) с увеличением концентрации. Поэтому ошибка в определении концентрации рутина будет уменьшаться с увеличением «а», следовательно, применение градуировочного графика для определения содержания рутина в области низких концентраций, где а=995,12 (фиг.3), приводит к более точным результатам по сравнению с результатами, полученными по графику, представленному на фиг.4, где а=274,68. Наличие в регрессионном уравнении коэффициентов b, отличных от нуля и равных 43,571 и 345,68, говорит о постоянной систематической ошибке, обусловленной влиянием яркости фона пластины на оценку яркости окрашенной хроматографической зоны при обработке хроматограммы компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer».

Таким образом, содержание рутина в анализируемом образце (с, %) можно рассчитать по формулам 1 и 2:

где S - значение площади хроматографической зоны на хроматограмме, вычисленное с помощью компьютерной программы «Sorbfil Videodensitometer».

Пример 1. Навеску измельченных плодов шиповника рода Rosa массой 5 г помещали в мерную колбу на 100 мл и растворяли при нагревании в этаноле. Смесь отфильтровывали, 3 мкл полученного спиртового извлечения наносили на хроматографическую пластину марки «Sorbfil» 5×10 см с полимерной подложкой ПТСХ-П-А-УФ. Пластину помещали в хроматографическую камеру, заполненную элюентом: этилацетат - ледяная уксусная кислота - вода (7,5:1,5:1,5). Через 35 мин пластину вынимали, высушивали и обрабатывали 5% спиртовым раствором NaOH. Визуализированные хроматографические зоны сканировали с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO, а полученные изображения обрабатывали компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer». По формуле (2) рассчитывали содержание рутина в образце. Содержание рутина в плодах шиповника составило 1,7%.

Пример 2. Навеску измельченных листьев березы массой 1 г помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили до метки дистиллированной водой и отфильтровывали. 10 мл полученного водного извлечения переносили в мерную колбу на 100 мл и доводили до метки этанолом. 3 мкл спиртового раствора наносили на хроматографическую пластину марки «Sorbfil» 5×10 см с полимерной подложкой ПТСХ-П-А-УФ. Пластину помещали в хроматографическую камеру, заполненную элюентом: этилацетат - ледяная уксусная кислота - вода (7,5:1,5:1,5). Через 35 минут пластину вынимали, высушивали и обрабатывали 5% спиртовым раствором NaOH. Визуализированные хроматографические зоны сканировали с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO, а полученные изображения обрабатывали компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometer». По формуле (2) рассчитывали содержание рутина в образце. Содержание рутина в листьях березы составило 1,2%.

Способ количественного определения рутина включает растворение анализируемого образца препарата при нагревании в этаноле с последующим хроматографированием с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» 5×10 см с полимерной подложкой ПТСХ-П-А-УФ, элюент - этилацетат-ледяная уксусная кислота-вода (7,5:1,5:1,5), время насыщения камеры парами элюента - 20 мин; время элюирования - 35 мин; проявитель - 5%-ный спиртовый раствор NaOH, время выдерживания пластинки в термостате при t≥80°С - 3-5 мин, сразу же после проявления хроматографических зон пластины сканируют с помощью планшетного сканера EPSON PERFECTION 2480 PHOTO и полученные изображения обрабатывают компьютерной программой «Sorbfil Videodensitometen», а содержание рутина в анализируемом образце (с, %) рассчитывают по формулам:

,
где S - значение площади хроматографической зоны на хроматограмме, вычисленное с помощью компьютерной программы «Sorbfll Videodensitometer».



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области аналитической химии. .
Изобретение относится к аналитической химии. .

Изобретение относится к аналитической химии, в частности к изготовлению пластин для тонкослойной хроматографии (ТСХ). .

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для анализа веществ методом тонкослойной хроматографии. .

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в тонкослойной хроматографии и электрофорезе. .

Изобретение относится к способу получения тонкослойных хиральных пластин для планарной хроматографии стереоизомеров и их рацемических смесей, который включает нековалентное связывание гликопептидного антибиотика эремомицина с кремнезёмным адсорбентом с силикагелевым связующим методом импрегнирования в щелочном водном растворе при рН 8,0÷10,0 при комнатной температуре в одну стадию. 1 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 пр.

Изобретение относится к способу получения хиральной планарной пластины для тонкослойной хроматографии и может быть использовано для анализа оптически активных соединений. Сущность изобретения состоит в том, что разработан новый тип кремнеземных планарных пластин со связующим для разделения изомеров оптически активных соединений, который в качестве хирального селектора содержит макроциклический гликопептидный антибиотик эремомицин. Разработан способ иммобилизации эремомицина методом поверхностной сборки, который заключается в том, что вначале кремнезем с неорганическим связующим в водном буферном растворе обрабатывают γ-глицидоксипропилтриалкоксисиланом, а затем в щелочном водном растворе к кремнезему и неорганическому связующему (золь кремневой кислоты), модифицированным эпоксигруппами, прививается макроциклический гликопептидный антибиотик эремомицин. Техническим результатом является получение высокоэффективных хиральных планарных пластин для тонкослойной хроматографии с высоким значением энантиоселективности. 3 табл., 1 ил.
Наверх