Способ выявления специфических антител к вирусу геморрагического энтерита индеек


 


Владельцы патента RU 2469321:

Государственное научное учреждение Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Россельхозакадемии (ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии) (RU)

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и эпизоотологии. Способ выявления специфических антител к вирусу геморрагического энтерита индеек заключается в исследовании биоматериала от птицы, в реакции непрямой гемагглютинации, где в качестве эритроцитарного диагностикума используют эритроциты кролика с осажденным на них антигеном вируса геморрагического энтерита индеек, а для регулировки скорости оседания эритроцитов используют гранулы декстрана размерами от 200 до 500 мкм. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии, эпизоотологии, а именно к способам выявления специфических антител [AT] к вирусу геморрагического энтерита индеек [ГЭИ].

Известен способ выявления специфических AT к ГЭИ в сыворотке крови птицы с использованием реакции иммуноферментного анализа [ИФА] (Domeruth, C.H., W.B. Gross and F.W.Pierson. Hemorrhagic enteritis of turkeys. A Laboratory Manual for the Isolation and Identification of Avian Pathogens. 3rd ed. H.G. Purchase et al. eds. Kendall/Hunt Publishing Co. Dubuque, IA. pp.82-84. 1989), который является аналогом предлагаемого способа. Однако данный тест не позволяет проводить обнаружение AT к ГЭИ без использования коммерческих тест-систем, связанных с видовой принадлежностью исследуемых образцов, а также требует использования технически сложного и дорогостоящего оборудования для регистрации результатов реакции.

Наиболее близким в техническом отношении и принятым за прототип является способ обнаружения AT к вирусу Ньюкаслской болезни птиц в сыворотке крови птицы с использованием реакции задержки гемагглютинации [РЗГА]. (Czifra G, M Nilsson, D.J.Alexander, R.Manvell, S.Kecskemeti, B.E.Engstrom. Detection of PMV-1 specific antibodies with a monoclonal antibody blocking enzyme-linked immunosorbent assay. Avian Pathol. 1996 Dec; 25(4): 691-703). Однако данный тест не позволяет выявлять AT к вирусу ГЭИ.

Задачей заявляемого решения является расширение арсенала диагностических методов для выявления специфических антител к вирусу ГЭИ. Поставленная задача решается тем, что предложен способ выявления специфических антител к вирусу геморрагического энтерита индеек в сыворотке крови или плазме крови птицы с использованием реакции непрямой гемагглютинации [РНГА], отличающийся тем, что при приготовлении эритроцитарного диагностикума для РНГА необходимо использовать эритроциты кролика, с осажденным на них антигеном вируса ГЭИ, а при постановке реакции - указанный эритроцитарный диагностикум, 96-луночные микропланшеты с V-образным дном и гранулы декстрана размерами от 200 до 500 мкм.

Способ осуществляют следующим образом.

Материалы и оборудование: вакцина против геморрагического энтерита индеек «Dindoral», фосфатно-солевой буфер [PBS] рН 7,2-7,4, 1М водный раствор аланина, забуференный 10% раствор формалина, центрифуга, шейкер.

Протокол получения диагностикума.

1. Отмыть эритроциты из 2 мл крови кролика PBS в соотношении 1:5 двукратно, центрифугируя суспензию при 2000 об/мин 1 минуту.

2. Ресуспендировать полученную эритроцитарную массу PBS до 12 мл.

3. Добавить к 12 мл суспензии 1,2 мл 10% формалина.

4. Инкубировать при 22-24°С, плавно перемешивая на шейкере 2 часа.

5. Осадить центрифугированием при 2000 об/мин в течение 1 минуты.

6. Ресуспендировать осадок PBS, доведя до объема 6 мл.

7. Добавить 100 мкл предварительно разведенной, в соответствии с инструкцией и осветленной центрифугированием при 10000 об/мин 2 минуты, вакцины против геморрагического энтерита «Dindoral».

8. Инкубировать при 22-24°С, плавно перемешивая на шейкере 1 час.

9. Добавить 600 мкл 1М раствора аланина.

10. Инкубировать при 22-24°С, плавно перемешивая на шейкере 10 мин.

11. Осадить центрифугированием при 2000 об/мин в течение 1 минуты.

12. Отмыть осадок PBS в соотношении 1:5 однократно, центрифугируя суспензию при 2000 об/мин 1 минуту.

13. Ресуспендировать осадок PBS, доведя объем до 40 мл.

Полученной суспензии эритроцитов достаточно для проведения исследования 400 проб. Срок хранения диагностикума при +4°С - 1 месяц.

Образцы для исследования: пробы сыворотки крови, плазмы крови.

РНГА проводят по следующему протоколу:

1. Подготовить гранулы декстрана размерами от 200 до 500 мкм (коммерческий препарат - Sefadex G25): ресуспендировать их в PBS 1:2; инкубировать для набухания при 22-24°С 2 часа. Использовать осадок гранул.

2. Приготовить серийные двукратные разведения исследуемых сывороток начиная с разведения 1:4 в микропланшетах с V-образным дном в объеме 100 мкл в PBS.

3. Внести в лунки 96-луночного микропланшета с V-образным дном по 50 мкл приготовленных по п.1 гранул Sefadex G25.

4. Внести в лунки микропланшета по 100 мкл эритроцитарного диагностикума.

5. Инкубировать при температуре 22-24°С до формирования зонтиков 2-5 часов, можно на ночь.

В случае положительной реакции в толще гранул сефадекса формируется зонтик, в случае отрицательной реакции эритроциты с иммобилизированным на них вирусным антигеном беспрепятственно просачиваются между гранулами и оседают на дне V-образных лунок в виде пуговки.

Для иллюстрации способа приведены примеры.

Пример 1

Результаты РНГА с сывороткой крови индейки разных возрастов. Отражена динамика прироста титров антител к вирусу ГЭИ у птицы с птицефабрики, неблагополучной по геморрагическому энтериту индеек.

Таблица 1
возраст Всего проб отр. 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256
1 дн. 12 8 2 2
6 дн. 12 2 4 4 1 1
10 дн. 12 4 6 2
13 дн. 12 6 4 2
18 дн. 12 2 2 2 2 4
19 дн. 12 2 2 4 2 2
25 дн. 12 2 2 6 2
57 дн. 12 12
122 дн. 12 12
Примечание: вакцинация живой вакциной против геморрагического энтерита индеек проводилась в возрасте 22 дней.

Как следует из таблицы, уровень антител к дате вакцинации (22 дня) не снижается за счет естественного распада трансовариальных антител, а растет. Таким образом, одной из ведущих проблем на стационарно неблагополучных по ГЭИ птицефабриках является наличие антител до вакцинации, что способно снизить эффективность вакцинации.

Пример 2

Титры антител в РНГА к вирусу ГЭИ на пике заболевания у реконвалесцентов.

Таблица 2
Титры антител к вирусу ГЭИ Возраст 19 дн. на пике падежа, кол-во проб Возраст 36 дн. на спаде падежа, кол-во проб
0 9
1:2
1:4
1:8 1 1
1:16
1:32 9
% реагирующих (за положительные принимаем 1:8 и выше) 10% 100%

Как следует из таблицы 2, защитными титрами антител в РНГА в очаге заболевания можно считать значение 1:32.

Способ выявления специфических антител к вирусу геморрагического энтерита индеек, включающий исследование биоматериала от птицы, отличающийся тем, что используют реакцию непрямой гемагглютинации, где в качестве эритроцитарного диагностикума используют эритроциты кролика с осажденным на них антигеном вируса геморрагического энтерита индеек, а для регулировки скорости оседания эритроцитов используют гранулы декстрана размерами от 200 до 500 мкм.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики качества жизни больных, страдающих генитальными инфекциями. .
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки минерализации субхондральной зоны эпифиза бедренной и большеберцовой костей при гонартрозе.

Изобретение относится к области медицины, а именно к инфектологии. .

Изобретение относится к области биофармакологии, биотехнологии, медицины и косметологии и может быть использовано в лечебно-профилактических учреждениях косметологического профиля.
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике в травматологии, и описывает неинвазивный способ оценки состояния водно-солевого обмена у пациентов с закрытыми переломами костей конечностей в ранний посттравматический период, включающий определение ионов натрия и калия, где концентрацию ионов натрия и калия определяют в смешанной слюне, которую собирают у пациентов с закрытыми переломами костей конечностей на третьи сутки после травмы, затем вычисляют соотношение концентрации ионов калия к концентрации ионов натрия, и если значение полученного коэффициента превышает 5 -оценивают как нарушения водно-солевого обмена, а если значение полученного коэффициента меньше 5 - у пациента нет нарушений водно-солевого обмена.
Изобретение относится к медицине и предназначено для выявления перед операцией больных, предрасположенных к развитию острого послеоперационного панкреатита после гастрэктомии с показаниями к спленэктомии.

Изобретение относится к области медицины, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики заболеваний кожи. .
Изобретение относится к ветеринарии и птицеводству. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к кардионеврологии, и может быть использовано для прогнозирования летального исхода в остром периоде ишемического инсульта у пациентов без угнетения сознания.

Изобретение относится к области медицины, а именно к гематологии

Изобретение относится к области медицины, в частности онкологии и молекулярной биологии, и касается способа диагностики рака мочевого пузыря (РМП) и набора для его осуществления
Изобретение относится к области медицины, гастроэнтерологии, а именно к способам оценки состояния слизистой оболочки желудка

Изобретение относится к области птицеводства
Изобретение относится к инфекционным болезням и предназначено для быстрой оценки степени активности хронического гепатита у больных хроническим гепатитом С
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для раннего индивидуального прогнозирования развития острой постинфарктной аневризмы сердца у больных с крупноочаговым инфарктом миокарда, ассоциированным с сахарным диабетом 2 типа
Изобретение относится к области биохимии
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, аллергологии и профпатологиии, и может быть использовано для ранней диагностики развития сенсибилизации на пух и перо птицы как у работников птицеводческой отрасли, так и у отдельных больных при установлении этиологического диагноза, а также при массовых обследованиях
Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано в травматологии и ортопедии
Наверх