Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты



Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты
Генетически кодируемые флюоресцентные кумариновые аминокислоты

 


Владельцы патента RU 2473690:

ЗЕ СКРИПС РЕСЕЧ ИНСТИТЬЮТ (US)

Настоящее изобретение относится к области биохимии, в частности к способам трансляции белка, и может быть использовано в различных тест-системах, предназначенных для детектирования соединений полипептидной природы. Предложена ортогональная пара, включающая тРНК (О-тРНК) и аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), в которой О-тРНК является супрессорной тРНК, распознающей амбер-кодон, а О-РС представляет собой мутантную форму тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus janaschii, предпочтительно аминоацилирующую указанную тРНК неприродной аминокислотой L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицином. Описана система трансляции, обеспечивающая введение в любое выбранное положение интересующего белка, синтезируемого в этой системе, неприродной аминокислоты L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицина, которая включает ортогональную пару по изобретению, названную неприродную аминокислоту и нуклеиновую кислоту, которая кодирует представляющий интерес белок и содержит в выбранном положении селекторный кодон, распознаваемый О-тРНК. 6 н. и 14 з.п. ф-лы, 9 ил., 5 пр.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Система трансляции, включающая
(a) первую неприродную аминокислоту, которая представляет собой неприродную аминокислоту L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицин;
(b) первую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), содержащую последовательность аминокислот, указанную в SEQ ID NO:2, или консервативный вариант указанной последовательности, при этом SEQ ID NO:2 или консервативный вариант указанной последовательности дополнительно содержит Glu в положении, соответствующем Tyr32; His в положении, соответствующем Leu65; Gly в положении, соответствующем His70; Tyr положении, соответствующем Phe108; His в положении, соответствующем Gln109; Gly в положении, соответствующем Asp158; и Gly положении, соответствующем Leu162; и
(c) первую ортогональную тРНК (О-тРНК), кодируемую последовательностью SEQ ID NO:1,
причем указанная первая О-РС предпочтительно аминоацилирует указанную первую О-тРНК указанной первой неприродной аминокислотой.

2. Система трансляции по п.1, отличающаяся тем, что указанная первая О-РС получена из аминоацил-тРНК-синтетазы Methanococcus jannaschii.

3. Система трансляции по п.1, отличающаяся тем, что указанная первая О-тРНК представляет собой супрессорную тРНК, распознающую амбер-кодон.

4. Система трансляции по п.1, которая дополнительно включает нуклеиновую кислоту, кодирующую представляющий интерес белок, причем указанная нуклеиновая кислота содержит, по меньшей мере, один селекторный кодон, который распознает указанная первая О-тРНК.

5. Система трансляции по п.4, дополнительно содержащая вторую О-РС и вторую О-тРНК, причем указанная вторая О-РС предпочтительно аминоацилирует вторую указанную О-тРНК второй неприродной аминокислотой, которая отлична от указанной первой неприродной аминокислоты, и указанная вторая О-тРНК распознает селекторный кодон, отличный от селекторного кодона, распознаваемого указанной первой О-тРНК.

6. Система трансляции по п.1, отличающаяся тем, что указанная первая О-РС и указанная первая О-тРНК указанной системы экспрессируются в клетке-хозяине, при этом указанная клетка-хозяин представляет собой клетку эубактерии.

7. Система трансляции по п.6, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку E.coli.

8. Система трансляции по п.6, отличающаяся тем, что указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-РС, и полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-тРНК.

9. Способ получения в системе трансляции белка, содержащего неприродную аминокислоту в выбранном положении, который включает:
(а) обеспечение системы трансляции, содержащей
(i) первую неприродную аминокислоту, которая представляет собой неприродную аминокислоту L-(7-гидроксикумарин-4-ил)-этилглицин,
(ii) первую ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС), содержащую последовательность аминокислот, соответствующую SEQ ID NO:2, или консервативный вариант указанной последовательности, при этом SEQ ID NO:2 или консервативный вариант указанной последовательности дополнительно содержит Glu в положении, соответствующем Tyr32; His в положении, соответствующем Leu65; Gly в положении, соответствующем His70; Tyr положении, соответствующем Phe108; His в положении, соответствующем Gln109; Gly в положении, соответствующем Asp158; и Gly положении, соответствующем Leu162;
(iii) первую ортогональную тРНК (О-тРНК), кодируемую последовательностью SEQ ID NO:1, и
(b) обеспечение нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный белок, причем указанная нуклеиновая кислота содержит, по меньшей мере, один селекторный кодон, распознаваемый указанной первой О-тРНК;
(c) обеспечение трансляции указанного белка;
(d) выделение указанного белка.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная О-РС получена из аминоацил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii, или тирозил-тРНК синтетазы Methanococcus jannaschii дикого типа.

11. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанное обеспечение системы трансляции включает обеспечение полинуклеотида, кодирующего указанную О-тРНК.

12. Способ по п.9, в котором указанный белок дополнительно содержит вторую неприродную аминокислоту, которая отлична от указанной первой неприродной аминокислоты, и указанная система трансляции дополнительно содержит вторую О-РС и вторую О-тРНК, причем указанная вторая О-РС предпочтительно аминоацилирует указанную вторую О-тРНК второй неприродной аминокислотой, которая отлична от указанной первой неприродной аминокислоты, и указанная вторая О-тРНК распознает селекторный кодон в нуклеиновой кислоте, который отличен от селекторного кодона, распознаваемого первой О-тРНК.

13. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанная первая О-РС и указанная первая О-тРНК указанной системы трансляции экспрессируются в клетке-хозяине, содержащей указанную нуклеиновую кислоту, кодирующую указанный белок, и при этом указанная клетка-хозяин представляет собой клетку эубактерии.

14. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин представляет собой клетку Е.coli.

15. Способ по п.13, отличающийся тем, что указанная клетка-хозяин содержит полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-РС, и полинуклеотид, кодирующий указанную первую О-тРНК.

16. Аминоацил-тРНК синтетаза, содержащая последовательность аминокислот, соответствующую SEQ ID NO:4, или консервативный вариант указанной последовательности.

17. Полинуклеотид, кодирующий ортогональную аминоацил-тРНК синтетазу (О-РС) по п.16.

18. Полинуклеотид по п.17, отличающийся тем, что указанный полинуклеотид содержит последовательность нуклеотидов, соответствующую SEQ ID NO:5.

19. Экспрессионный вектор, содержащий полинуклеотид по п.17.

20. Клетка-хозяин для получения белка, содержащего неприродную аминокислоту, содержащая вектор по п.19.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу получения и очистки рекомбинантного гормона роста человека (рГРЧ). .

Изобретение относится к использованию неочищенного глицерина в качестве источника углерода для роста клеток в культуре и производства белков в таких клеточных культурах.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к производству пробиотических бактериальных препаратов, и может быть использовано для лечения и профилактики туберкулеза у людей и животных.
Изобретение относится к получению и применению стафилококковой анатоксин-вакцины для профилактики и лечения болезней животных стафилококковой этиологии. .

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению слитых с альбумином полипептидов фактора VII (FVII) и фактора VIIa (FVIIa), и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной генетики. .

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в молекулярной диагностике, связанной с выявлением РНК-мишеней. .

Изобретение относится к биотехнологии, к способу получения жирных полиненасыщенных кислот в трансгенных растениях. .

Изобретение относится к области биохимии. .

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ измерения активности DGAT. .

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к области модификации гликозилирования белков. .

Изобретение относится к биотехнологии. .

Изобретение относится к биотехнологии и касается фермента транс-сиалидазы. .

Изобретение относится к области биомолекулярной фармакологии, биотехнологии и генетической инженерии и касается рекомбинантного гибридного полипептида и способа его получения.
Наверх