Способ лечения эндометрита у коров
Владельцы патента RU 2475253:
Министерство сельского хозяйства Российской Федерации Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Вятская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО ВГСХА) (RU)
Изобретение относится к области ветеринарии. Внутриматочно инфузируют 100,0 мл озонированной эмульсии, состоящей из равных частей рыбьего жира и настоя семени льна с интервалом 48 часов до клинического выздоровления. Способ прост и высокоэффективен при лечении эндометрита у коров. 9 табл., 1 пр.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарному акушерству, и может быть использовано для лечения эндометрита у коров.
Известны способы, методы и схемы [1, 2] терапии эндометрита: этиотропная, патогенетическая, симптоматическая, физио-, грязе-, тканетерапия и другие. Основу комплексного лечения животных с воспалительными процессами в репродуктивных органах составляют противомикробные препараты. В качестве противомикробных средств используют антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны и другие антисептические средства.
К недостаткам их применения следует отнести высокую стоимость, недостаточно высокую эффективность по причине узкой направленности по отношению к микроорганизмам, негативное влияние на показатели неспецифической резистентности организма и на морфофункциональное состояние слизистой оболочки матки, а на фоне иммунодефицитного состояния макроорганизма они могут являться причиной рецидивов и бактерионосительства, возникновения в природе высокоустойчивых штаммов микроорганизмов и воспалений микозной этиологии. Установлено, что при любом способе введения антибиотики, сульфаниламиды и нитрофураны способны аккумулироваться в организме животных и длительный период времени сохраняться в продуктах животноводства. Антибиотики и сульфаниламиды, попадая в организм животного и человека, могут вызывать аллергию, анафилаксию, изменения количественного и качественного состава бактериальной микрофлоры и другие нежелательные явления.
Известен способ [2] этиотропной терапии коров, больных эндометритом, который основан на внутриматочном введении эмульсии йодвисмутсульфамида в дозе 50-100 мл.
Недостатком данного способа лечения является, прежде всего, его дефицит на рынке, высокая стоимость, недостаточная терапевтическая эффективность, необходимость браковки молока в процессе курса лечения и в течение 2 суток после исчезновения клинических признаков болезни.
Сущность предлагаемого способа заключается в том, что для лечения эндометрита у коров предлагается общий, сходный с прототипом признак - этиотропная терапия. По отношению к прототипу отличительным признаком является: использование озонированной эмульсии. Готовят эмульсию из равных частей рыбьего жира и настоя семени льна (полученного путем настаивания в течение 30 минут семян льна в кипяченой воде при соотношении 1:30). Озонирование эмульсии проводится с использованием озонатора при концентрации озона на выходе прибора 20 мг/л в течение пяти часов, которая в дальнейшем используется для лечения эндометрита у коров путем внутриматочных введений.
Провели ряд токсикологических исследований с использованием озонированной эмульсии. Для определения острой токсичности озонированную эмульсию разводили стерильным физиологическим раствором с шагом 2. Каждое разведение гомогенизировали до получения однородной масляной эмульсии и вводили внутрибрюшинно белым мышам.
Максимальная из введенных доз при этом составляла 0,5 мл, что превышало более 20 лечебных доз. Объем терапевтической дозы рассчитывался исходя из планируемой лечебной дозы для коров (50 мл) с учетом коэффициентов отношения массы и площади поверхности тела животных.
После введения данного средства за животными наблюдали в течение 7 суток, регистрируя их гибель, а также другие проявления интоксикации (изменение поведенческих, температурных реакций, снижение массы тела).
Белым мышам контрольной группы внутрибрюшинно вводили физиологический раствор в объеме по 0,5 мл.
Через 24 часа и 7 суток от момента введения эмульсии и физраствора натрия хлорида часть животных из каждой группы усыпляли эфирным наркозом для оценки патологоанатомической и гистологической картины. С этой же целью подвергались вскрытию все павшие в ходе опыта животные.
В течение срока наблюдения у отдельных животных, составляющих опытную группу, которым препарат вводился в максимальных дозах, регистрировались случаи отказа от пищи, снижения двигательной активности, взъерошивание шерсти. Результаты эксперимента обобщены в таблице 1.
| Таблица 1 | |||||
| Проявления острого токсического действия озонированной эмульсии | |||||
| Кол-во введенной эмульсии, лечебных доз | Кол-во животных в группе | Кол-во животных с проявлениями токсического действия | Кол-во погибших животных | ||
| снижение массы | изменение температуры | изменение поведенческих реакций | |||
| 12 | 6 | 0 | 0 | 3 | 2 |
| 6 | 6 | 0 | 0 | 1 | 0 |
| 3 | 6 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 1,5 | 6 | 0 | 0 | 0 | 0 |
| 0,75 | 6 | 0 | 0 | 0 | 0 |
Величина ЛД50 при внутрибрюшинном введении составила 0,562 мл, что превышает расчетную терапевтическую дозу более чем в 20 раз.
При вскрытии павших в ходе опыта животных отмечены явления перераспределения крови с ее депонированием в паренхиматозных органах разной степени выраженности. Слизистые оболочки были гиперемированы, с многочисленными точечными кровоизлияниями. Имелись видимые кровоизлияния в мозг и внутренние органы. В полостях небольшое количество экссудата с примесью форменных элементов крови.
Вскрытие животных опытной и контрольной групп, усыпленных в контрольные сроки, не выявило у них патологии внутренних органов.
Для гистологического исследования у животных отбирали кусочки мозга, почек, надпочечников, сердца, печени и легких, фиксировали 10%-ным раствором формальдегида и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином. При изучении секционного материала от погибших животных зарегистрированы многочисленные точечные кровоизлияния внутренних органов, дезорганизация кардиомиоцитов, дистрофические изменения в корковом и мозговом слое надпочечников. Признаков воспаления не обнаруживали.
Для определения хронической токсичности озонированную эмульсию вводили внутрибрюшинно двум группам белых мышей в количестве, соответственно, одной (0,02 мл) и двух (0,04 мл) лечебных доз, взятых в объеме 0,5 мл. Препарат вводился пятикратно с интервалом между инъекциями одни сутки. Животным контрольной группы в те же сроки в объеме 0,5 мл внутрибрюшинно вводился физиологический раствор.
Наблюдение за лабораторными животными осуществляли в течение всего срока введения препаратов, а также на протяжении 7 суток от момента последней инъекции, регистрируя при этом возможные проявления интоксикации. Через 24 часа и 7 суток от момента последнего введения данных растворов часть животных усыпляли хлороформом для оценки патоморфологической картины.
В течение срока наблюдения гибели животных, а также других патологических проявлений не было зарегистрировано. При вскрытии животных отмечалось однообразие макроскопической картины: полости без экссудата, серозные покровы обычной окраски, внутренние органы без особенностей, обычного размера, цвета и консистенции. Признаков дистрофии, воспаления и гемодинамических нарушений не выявлено. Гистологическое исследование секционного материала также не выявило патологических изменений внутренних органов.
Для оценки местного действия озонированную эмульсию вводили группе белых мышей внутримышечно пятикратно, с интервалом в одни сутки. Объем эмульсии для однократного введения составлял 0,02 мл (одна лечебная доза). Контрольной группе животных в таком же объеме и в те же сроки вводили физиологический раствор натрия хлорида.
Наблюдение за животными осуществляли в течение всего срока эксперимента, а также на протяжении 7 суток от момента последней инъекции. О наличии местного повреждающего действия судили на основании данных ежедневного осмотра места введения, а также по результатам гистологического исследования мышечной ткани животных, усыпленных хлороформом через 24 часа после последней инъекции и по окончании срока наблюдения.
За время наблюдения признаков местного воспалительного и раздражающего действия препарата не было выявлено.
Определение гиперчувствительности немедленного типа проводили методом воспроизведения анафилаксии у морских свинок. Для этого животных предварительно сенсибилизировали путем трехкратного введения озонированной эмульсии с интервалом между инъекциями одни сутки. Первая сенсибилизирующая инъекция проводилась подкожно, две последующие - внутримышечно. Количество эмульсии для однократного введения составляло 0,12 мл (расчетная лечебная доза для морской свинки). Через две недели после заключительной сенсибилизирующей инъекции животным внутрибрюшинно вводили разрешающую дозу эмульсии (0,25 мл), после чего за ними наблюдали в течение 30 минут. Тяжесть шока оценивали по следующей шкале:
А - взъерошивание шерсти, почесывание лапами морды;
Б - периодическое чихание, понижение температуры;
В - спастический кашлевой синдром, падение на бок;
Г - резкое нарушение дыхания, судороги, гибель в течение 5…7 минут;
Д - реакция отсутствует.
Индекс синдрома в группе вычисляли по формуле Вейгла
Животным группы отрицательного контроля вместо предварительных сенсибилизирующих инъекций по такой же схеме вводился физиологический раствор.
В качестве положительного контроля использовались животные, подготовленные к шоку сенсибилизацией нормальной лошадиной сывороткой, введенной подкожно двукратно, в количестве 0,1 мл за две недели до разрешающей внутрисердечной инъекции этого препарата в количестве 0,2 мл. Результаты эксперимента обобщены в таблице 2.
| Таблица 2 | ||||||||
| Проявления анафилаксии у морских свинок | ||||||||
| № п/п | Наименование групп | Количество животных в группе | Количество животных с проявлениями анафилаксии | Индекс синдрома в группе | ||||
| А | Б | В | Г | Д | ||||
| 1 | Опытная | 15 | 0 | 0 | 0 | 0 | 15 | 0 |
| 2 | Положительный контроль | 10 | 1 | 4 | 3 | 2 | 0 | 2,6 |
| 3 | Отрицательный контроль | 10 | 0 | 0 | 0 | 0 | 10 | 0 |
Представленные в таблице 2 данные показывают, что озонированная эмульсия не оказывает анафилактогенного действия на морских свинок.
Гиперчувствительность замедленного типа характеризовали по изменению массы конечности животных.
Для этого белых мышей сенсибилизировали внутрибрюшинно двукратно, с интервалом в одни сутки одной лечебной дозой озонированной эмульсии (0,02 мл). Спустя 5 суток после заключительной сенсибилизирующей инъекции в подушечку одной задней лапы вводили 0,05 мл озонированной эмульсии, другой - такой же объем физиологического раствора. Через сутки животных усыпляли хлороформом, задние лапы ампутировали по уровню пяточного сустава и проводили их взвешивание. По разнице массы лап оценивали уровень воспалительной реакции (отека). Индекс отека рассчитывали по формуле
Во - масса опытной лапы;
Вк - масса контрольной лапы.
В качестве контроля в данном эксперименте были использованы животные, которым вместо предварительных сенсибилизирующих инъекций в те же сроки и в тех же объемах вводился физиологический раствор. Результаты эксперимента представлены в таблице 3.
| Таблица 3 | |||
| Проявления гиперчувствительности замедленного типа у белых мышей | |||
| Препарат для сенсибилизирующей инъекции | Средняя масса опытной лапы, мг | Средняя масса контрольной лапы, мг | Индекс отека в группе, % |
| Озонированная эмульсия | 145,4 | 142,7 | 1,89 |
| Физиологический раствор | 148,6 | 145,8 | 1,92 |
Как видно из представленных цифровых данных в таблице 3, индекс отека в обеих группах практически одинаков, что свидетельствует о том, что озонированная эмульсия не вызывает реакций гиперчувствительности замедленного типа.
Таким образом, в рекомендуемых дозах озонированная эмульсия не токсична для животных, не вызывает проявления реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типа.
Провели изучение антимикробной активности озонированной эмульсии на различные коцентрации микроорганизмов (золотистого стафилококка и кишечной палочки). Для этого использовали 3 ряда стерильных пробирок по 10 штук, где один ряд служил контролем, а два - были опытные. В каждую пробирку вносили по 4,5 мл физиологического раствора. Затем в первой пробирке опытного ряда по стандарту мутности получали исходные концентрации исследуемых микроорганизмов в 109. Затем после тщательного перемешивания переносили новой мерной пипеткой по 0,5 мл из одной пробирки в другую, из последней пробирки 0,5 мл выливали. При этом получали ряд серийных разведений от 109 до 101. В 1-й опытный ряд добавляли 0,5 мл озонированной эмульсии, во 2-й опытный - неозонированную эмульсию, а в контрольный - 0.5 мл физиологического раствора. Полученную смесь оставляли на 30 минут при комнатной температуре при постоянном встряхивании. По истечении указанного времени по 0,1 мл содержимого пробирок высевали на соответствующую плотную питательную среду и инкубировали в термостате при температуре 37°С в течение 72 часов. Через каждые 24 часа путем прямого подсчета колоний, выросших на плотной питательной среде из экспериментальных и контрольных серий, проводили оценку антимикробной активности. Данные опытов отображены в таблицах 4,5.
| Таблица 4 | |||||||||
| Антимикробная активность озонированной эмульсии в отношении Е. coli | |||||||||
| Показатель | Время | 109 | 108 | 107 | 106 | 105 | 104 | 103 | 102 |
| Физ. раствор | 24 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | БКМИК | 151 | 19 | - |
| 48 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | БКМИК | 151 | 19 | - | |
| 72 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | БКМИК | 151 | 19 | 3 | |
| Не озонированная эмульсия | 24 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 1012 | 132 | 16 | - |
| 48 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 1012 | 132 | 16 | - | |
| 72 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 1012 | 132 | 16 | - | |
| Озонированная эмульсия | 24 ч | РОСТ ОТСУТСТВУЕТ | |||||||
| 48 ч | |||||||||
| 72 ч |
| Таблица 5 | |||||||||
| Антимикробная активность озонированной эмульсии в отношении St. aureus | |||||||||
| Показатель | Время | 109 | 108 | 107 | 106 | 105 | 104 | 103 | 102 |
| Физ. раствор | 24 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 764 | 68 | 1 |
| 48 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 776 | 71 | 3 | |
| 72 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 776 | 71 | 3 | |
| Не озонированная эмульсия | 24 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 964 | 284 | 46 | - |
| 48 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 964 | 284 | 46 | - | |
| 72 ч | СПЛР | СПЛР | СПЛР | БКМИК | 964 | 284 | 46 | - | |
| Озонированная эмульсия | 24 ч | РОСТ ОТСУТСТВУЕТ | |||||||
| 48 ч | |||||||||
| 72 ч |
Из анализа цифрового материала таблиц 4 и 5 можно сделать заключение о том, что озонированная эмульсия при данном режиме барботажа озонокислородной смесью обладает выраженными антимикробными свойствами в отношении музейных штаммов как Е. coli, так и St. aureus. Отличительным признаком является полное отсутствие роста колоний в экспериментальных сериях по сравнению с контрольными.
Изучили лечебную эффективность внутриматочного введения озонированной эмульсии при послеродовом остром гнойно-катаральном эндометрите у коров после нормального отела. Результаты эксперимента представлены в таблице 6.
| Таблица 6 | ||||
| Сравнительная терапевтическая эффективность применения озонированной эмульсии и 10%-ной суспензии фуразолидона на рыбьем жире при остром послеродовом эндометрите, развившемся после нормального отела у коров (n=21) | ||||
| Показатель | Кратность введения | Лечебная эффективность, % | Коэффициент оплодотворения | Кол-во дней от выздоровления до стельности |
| Озонированная эмульсия | 7,1±0,3 | 90,5 | 1,8±0,02 | 52,0±4,1 |
| 10%-ная суспензия фуразолидона на рыбьем жире | 9,7±0,8 | 80,9 | 2,1±0,01 | 78,5±9,2 |
Из цифрового материала таблицы 6 видно, что применение озонированной эмульсии внутриматочно коровам, больным послеродовым острым эндометритом, на 9,6% оказалось эффективнее в сравнении с 10%-ной суспензией фуразолидона. Кроме того, кратность введения озонированной эмульсии в среднем на 2,6 раза была меньше в сравнении с аналогом. Применение озонированной эмульсии с лечебной целью обусловило и более высокие показатели воспроизводства у подопытных коров (был ниже на 0,3 коэффициент оплодотворения и на 26,5 дней короче период бесплодия).
У животных, лечившихся озонированной эмульсией, провели исследование сыворотки крови (таблица 7).
| Таблица 7 | |||
| Динамика биохимических показателей крови у коров, переболевших острым эндометритом, возникшим после нормального отёла, на фоне лечения их озонированной эмульсией (n=8) | |||
| Показатель | В день заболевания | После выздоровления | Через 10 дней после выздоровления |
| Общий белок, г/л | 68,7±4,97 | 68,1±2,92 | 66,8±4,79 |
| Общие иммуноглобулины, г/л | 13,2±2,26 | 18,8±0,93 | 17,3±1,83 |
| ЦИК С3, Ед.Оп | 12,2±1,25 | 11,4±1,26 | 13,3±1,68 |
| ЦИК С4, Ед.Оп | 24,0±2,3 | 25,3±2,1 | 27,1±1,3 |
| С4:С3 | 1,9±0,1 | 2,2±0,2 | 2,0±0,2 |
| Альбумины, % | 44,3±3,2 | 37,6±2,9 | 44,5±3,2 |
| α - глобулины,% | 10,6±2,0 | 13,3±1,9 | 9,7±1,1 |
| β - глобулины, % | 16,7±2,5 | 20,1±2,1 | 21,5±2,3 |
| γ - глобулины, % | 28,4±0,7 | 29,0±2,4 | 24,3±1,5 |
Материалы таблицы 7 показывают, что процесс клинического выздоровления коров на фоне применения озонированной эмульсии сопровождался активизацией антителогенеза с последовательным синтезом специфичных иммуноглобулинов и образованием циркулирующих иммунных комплексов крупных размеров.
Провели эксперимент по изучению сравнительной лечебной эффективности озонированной эмульсии и препарата Метролек-М при послеродовом остром эндометрите, который развивался после оперативного отделения последа у коров (таблица 8).
| Таблица 8 | ||||
| Сравнительная терапевтическая эффективность применения озонированной эмульсии и Метролек-М при остром послеродовом эндометрите, развившимся после оперативного отделения последа у коров (n=10) | ||||
| Показатель | Кратность введения | Лечебная эффективность,% | Коэффициент оплодотворения | Кол-во дней от выздоровления до стельности |
| Озонированная эмульсия | 8,5±0,6 | 80 | 2,0±0,03 | 62,7±4,1 |
| Метролек-М | 10,7±1,1 | 60 | 2,2±0,05 | 75,0±3,2 |
Из цифровых данных таблицы 8 видно, что применение озонированной эмульсии оказалось на 20% выше, чем использование Метролек-М. Следует отметить также то, что озонированная эмульсия обусловливает сокращение срока лечения и бесплодия животных, на 0,2 снижает коэффициент их оплодотворения.
У коров, лечившихся озонированной эмульсией, происследовали сыворотку крови (таблица 9).
| Таблица 9 | |||
| Динамика биохимических показателей крови у коров, переболевших острым эндометритом, возникшим после оперативного отделения последа, на фоне лечения их озонированной эмульсией (n=5) | |||
| Показатель | В день заболевания | После выздоровления | Через 10 дней после выздоровления |
| Общий белок, г/л | 65,3±7,9 | 61,7±3,0 | 64,4±3,3 |
| Общие иммуноглобулины, г/л | 14,3±2,4 | 18,5±1,8 | 14,1±2,7 |
| ЦИК С3, Ед.Оп. | 19,7±3,0 | 18,68±1,1 | 13,9±3,2 |
| ЦИК С4, Ед.Оп. | 31,3±5,6 | 28,1±3,7 | 31,6±2,9 |
| С4:С3 | 1,5±0,07 | 1,2±0,04 | 2,5±0,02 |
| Альбумины, % | 49,0±2,8 | 39,0±5,1 | 42,4±3,5 |
| α - глобулины % | 5,6±1,6 | 9,9±2,1 | 8,5±1,4 |
| β - глобулины % | 11,6±1,6 | 21,2±1,8 | 20,7±2,9 |
| γ - глобулины % | 33,8±2,1 | 29,9±3,7 | 28,4±1,5 |
Анализ результатов гематологических исследований (табл.9) показал то, что в процессе эксперимента клиническое выздоровление коров сопровождалось снижением общего белка по причине активных процессов синтеза специфических антител, участвующих в опсонизации и элиминации антигенов, что подтверждается высоким уровнем в крови циркулирующих иммунных тел крупных размеров.
Следовательно, наиболее высокой эффективностью при лечении коров, больных послеродовым острым гнойно-катаральным эндометритом, который возникает у коров как после нормальных, так и патологических родов, обладает внутриматочное введение озонированной эмульсии.
Литература
1. Гавриш В.Г. Внутривенный способ терапии эндометритов у коров / В.Г.Гавриш, Ю.Е.Андрюхин // Незаразные болезни животных: Матер, междунар. науч. конф., посвящ. 70-летию образования зооинженерного факультета. - Казань, 2000. - С.3-4.
2. Григорьева Т.Е. Лечение и профилактика эндометритов у коров. М.: Росагропромиздат, 1988. - С.22. - прототип.
3. Патент на изобретение РФ №2311790. МПК A23D 9/04 (2006.01). Способ получения озонированной эмульсии / Платонов В.А., Клабукова Е.Р., Конопельцев И.Г., Троегубов Д.А.: заявители и патентообладатели: ГОУ ВПО «Кировская ГМА» Росздрава и ФГОУ ВПО «Вятская ГСХА Опубл. 10.12. 2007. Бюл. №34.
Способ лечения эндометрита у коров, включающий внутриматочное введение антимикробного средства, отличающийся тем, что в качестве антимикробного средства внутриматочно инфузируют 100,0 мл озонированной эмульсии, состоящей из равных частей рыбьего жира и настоя семени льна, с интервалом 48 ч до клинического выздоровления.
