Комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы (варианты)

Изобретение относится к медицине и касается комплексного иммуномодулирующего средства для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы (варианты). Предложено комплексное средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде капсул и содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа, и/или бета, и/или гамма типов, ретинола пальмитат, цинка сульфат моногидрат, вспомогательное вещество - до 0,1 г. Предложено также комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде суппозиториев на гидрофильной основе и содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа, и/или бета, и/или гамма типов, ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные из числа альфа, бета, гамма каротинов, цинка сульфат моногидрат, а также вспомогательные вещества. Изобретение обеспечивает расширение возможности профилактики и коррекции иммунологических нарушений у здорового и больного человека. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 8 пр., 8 табл.

 

Комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы (варианты).

Изобретение относится к медицине и касается создания фармакологического средства, используемого для профилактики нарушений и регуляции иммунного ответа.

Антропогенное загрязнение окружающей среды, значимый дефицит витаминов и микроэлементов в питании, часто необоснованное применение антибактериальных средств, нарастание стресса в повседневной жизни, рост частоты патологического течения беременности и родов, значительная распространенность у женщин репродуктивного возраста хронических болезней и урогенитальных инфекций - все это составляет неполный перечень факторов, способных привести к транзиторным или устойчивым сдвигам в работе основных звеньев иммунной системы здорового и больного человека.

Традиционно для коррекции иммунитета применяют препараты, сходные по составу с естественными факторами защиты человека, а также экзогенные или химические вещества, существенно отличающиеся от иммунных факторов защиты человека. В настоящее время все три группы иммуномодуляторов такого рода представлены на фармацевтическом рынке.

Среди применяемых иммуномодуляторов практически не позиционируются препараты, содержащие комбинацию витамина А и цинка (Zn). Вместе с тем, существует большое количество многоцентровых слепых плацебо контролируемых исследований, свидетельствующих об их прямом и опосредованном положительном влиянии на факторы неспецифической защиты, клеточный, гуморальный иммунитет, в том числе - местный. Отмечается положительное влияние витамина А и цинка на физиологическую пролиферацию, регенерацию клеток слизистых оболочек и кожи, что рассматривается в качестве неспецифических факторов резистентности, в том числе противоинфекционной. Кроме того, цинк и витамин А относятся к мощным антиоксидантам, способным защищать клетки от разрушения на фоне повреждения или воспаления. Отмечается положительное влияние этих микронутриентов на репродуктивную функцию, зрительный анализатор, работу мозга, органов эндокринной системы. Цинк необходим для работы всех ферментных систем, что определяет его значимое влияние на все виды обмена, метилирование ДНК и многие другие жизненно важные процессы.

Известно средство, обладающее иммуномодулирующим, противомикробным, антиоксидантным и регенерирующим действием (Пат. РФ №2255760, кл. А61К 38/21, опубл. 10.07.2005 г.). В данном изобретении предложено лекарственное средство и варианты выполнения его в виде различных лекарственных форм для перорального, парентерального и наружного применения (таблетки, спреи, растворы, гели), для введения на слизистые оболочки (суппозитории) на основе природного и рекомбинантного интерферонов типа α, β, γ, лизоцима и эмоксипина.

Эмоксипин в данном средстве выполняет функцию антиоксиданта. Однако данные свойства эмоксипина проявляются преимущественно в условиях гипоксии.

Кроме того, недостатками данного изобретения является применение в гидрофильной основе для суппозиториев такого нестабильного компонента, как желатин, и консерванта хлоргексидин, что может снизить стабильность интерферона. В таблетированной форме этого средства для перорального применения содержится большое количество лактозы (0,3 г). Как известно, лактоза у многих пациентов вызывает нарушение пищеварения из-за сниженной активности или отсутствия соответствующего фермента - лактазы. При изготовлении препарата в форме таблетки возможна дестабилизация интерферона, поскольку при таблетировании под давлением происходит существенное повышение температуры.

Известно стабилизированное иммунокорригирующее лекарственное средство виферон-форте для лечения инфекционно-воспалительных заболеваний с высокой степенью биодоступности, созданное на основе интерферона человеческого рекомбинантного альфа, и/или бета, и/или гамма типов с антиоксидантным комплексом, включающим токоферола ацетат, аскорбиновую кислоту и их производные, а также содержащее вспомогательные вещества: стабилизаторы, буферные растворы, кислоты, пластификаторы, эмульгаторы, консерванты и основу. (Пат. Рф №2381812, кл. А61К 38/21, опубл. 20.02.2010).

Данное средство обладает антибактериальным, противовирусным свойствами и применяется в лечении инфекционно-воспалительных заболеваний урогенитального тракта, вирусного гепатита, другой инфекционной патологии.

В данном средстве специфическая активность интерферона существенно повышена в связи с присутствием антиоксидантов. Доказано, что иммунный ответ на инфекцию, как правило, сопровождается активацией свободно радикального окисления. Поэтому считают, что препараты иммуномулирующего действия, такие как интерфероны, целесообразно сочетать с антиоксидантами, подавляющими чрезмерное образование свободных радикалов.

В данном средстве прямым иммуномодулирующим действием обладает только ИФН-альфа-2b. Используемые в его составе антиоксиданты - витаминный комплекс альфа-токоферола ацетат, аскорбиновая кислота и их производные - не обладают свойством прямого влияния на звенья иммунной системы.

Их свойства направлены в основном на уменьшение содержания в организме продуктов перекисного окисления-свободных радикалов. Они оказывают опосредованное влияние на иммунную систему, что ограничивает возможность их применения для лечения и профилактики неблагоприятных исходов инфекционно-воспалительных заболеваний. Отсутствие специфического иммунотропного действия антиоксидантного комплекса на клетки иммунной системы существенно снижает способность препарата модулировать работу иммунной системы.

Кроме того, в данном средстве в качестве основы предложены различные жиры и масла, требующие специальной стабилизации с большим набором разнообразных веществ.

Недостатком вышеописанного средства является также введение в его состав консервантов, таких как хлоргексидин (дезинфицирующее средство), который не физиологичен для такой лекарственной формы, как суппозитории.

Задачей настоящего изобретения является:

во-первых, создание комплексного иммунотропного средства с широким спектром и способностью полимодального действия на разные звенья иммунной системы, полученного на основе интерферона человеческого рекомбинантного альфа, и/или бета, и/или гамма типов и антиоксидантов-иммуномодуляторов - ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные из числа альфа, бета, гамма каротинов и цинка сульфат моногидрата. Известно, что ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные из числа альфа, бета, гамма каротинов и цинка сульфат моногидрат обладают свойствами антиоксидантов и оказывают прямое влияние на все звенья иммунной системы. Это существенно расширяет спектр терапевтического действия препарата, в том числе обеспечивает возможность использования его для профилактики осложнений и рецидивов инфекционно-воспалительных заболеваний, особенно у лиц с дефицитными состояниями;

во-вторых, выбор вспомогательных веществ, которые выполняют активную функцию. Например, веществ, которые влияют на фармакологический эффект, обеспечивают стабильность интерферона, предотвращают его агрегацию;

в-третьих, подбор оптимальных сочетаний и соотношений химически и физиологически приемлемых для конкретной лекарственной формы вспомогательных веществ, необходимых для создания фармацевтических композиций в виде дозированного порошка в капсулах для приема через рот и лекарственной формы в виде суппозиториев для введения на слизистые оболочки ректально;

в-четвертых, обеспечение стабильности и высокой биодоступности активных субстанций на основе технологичности изготовления средства (лекарственные формы) с необходимыми фармацевтическими свойствами: однородность массы, сыпучесть, отсутствие слеживаемости, микробиологическая чистота и др.

Для решения поставленных задач предложены варианты комплексного иммуномодулирующего средства для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, выполненные в виде суппозиториев и капсул.

Вариант 1. Предложено комплексное средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде капсул и содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа, и/или бета, и/или гамма типов, ретинола пальмитат, цинка сульфат моногидрат, вспомогательное вещество - до 0,1 г

Интерферон человеческий рекомбинантный α, и/или β, и/или γ типов	250 тыс.-1,0 млн ME
Ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные
из числа альфа, бета, гамма каротинов	1,65-3,3 тыс ME
Цинка сульфат моногидрат	0,0075-0,015 г
Вспомогательные вещества	до 0,1 г

В данном комплексном средстве в качестве основы используют крахмал кукурузный, в качестве технологических добавок - гидроксипропилцеллюлозу, кремния диоксид коллоидный и магния стеарат, в количестве компонентов: крахмал кукурузный 0,075-0,085 г, гидроксипропилцеллюлозы 0,0015-0,0025 г, кремния диоксид коллоидного 0,0001-0,0005 г, магния стеарата 0,0005-0,001 г.

Вариант 2. Предложено комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде суппозиториев на гидрофильной основе и содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа, и/или бета, и/или гамма типов, ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные из числа альфа, бета, гамма каротинов, цинка сульфат моногидрат, а также вспомогательные вещества в граммах при следующих соотношениях компонентов:

Интерферон человеческий рекомбинантный α, и/или β, и/или γ типов	125 тыс.-1,0 млн ME
Ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные
из числа альфа, бета, гамма каротинов	1,1-3,3 тыс ME
Цинка сульфат моногидрат	0,005-0,015 г
Вспомогательные вещества	до 1,5 г

При этом в качестве основы суппозиториев используют полиэтиленоксид 1500 и полиэтиленоксид 400 в соотношении 10:1; в качестве стабилизатора - этилендиаминтетрауксусной кислоты натриевую соль и полисорбат 80 (твин 80) в количестве: этилендиаминтетрауксусной кислоты натриевая соль 0,0002-0,005 г; полисорбат 80 (твин 80) 0,02-0,04 г; полиэтиленоксид 1500 1,25-1,3 5 г; полиэтиленоксид 400 0,1-0,2 г; вода очищенная 0,002-0,003 г.

Витамин А, ретинола пальмитат или другие вещества, выбранные из группы альфа, бета, гамма каротинов помимо антиоксидантного действия обладают выраженными иммуномодолирующими свойствами и способны стимулировать выработку антител (гуморальный иммунитет). Кроме того, они гарантирует структурную целостность секреторного иммуноглобулина А (sIgA), который обеспечивает защиту слизистых оболочек от бактериальных, пищевых антигенов, препятствует проникновению чужеродных антигенов во внутреннюю среду организма. Доказано, что в условиях дефицита витамина А эти защитные процессы замедляются или не осуществляются.

Таким образом, в условиях дефицита витамина А не обеспечивается нормальный уровень местного иммунитета и его функционирование в норме и при заболеваниях.

Цинк обеспечивает работу всех ферментных систем, отмечается его способность влиять на метаболизм, метилирование ДНК и многие другие жизненно важные процессы обмена веществ, то есть обладает свойством оказывать полимодальное действие на иммунную систему.

Таким образом, интерферон, витамин А и сульфат цинка в комплексе помимо антиоксидантных свойств проявляют синергизм при воздействии на все звенья иммунной системы.

При разработке лекарственной формы в виде суппозиториев ректальных основной матрицей для интерферона выбраны гидрофильные полиэтиленоксиды, которые, благодаря полимерной длинноцепочечной структуре способны обеспечивать стабильность интерферона и необходимые адгезивно-тропные свойства к слизистой оболочке. Полисорбат 80 (твин 80) и динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты стабилизируют интерферон от агрегации, что важно для этого вида лекарственных препаратов.

Вспомогательные вещества, такие как гидроксипропилцеллюлоза, кремния диоксид коллоидный, магния стеарат, крахмал кукурузный, обеспечивают стабильность интерферона и технологичность изготовления твердой дозированной лекарственной формы в виде порошка в капсулах.

Конкретные примеры осуществления изобретения:

Пример 1.

Приготовление капсулы

В колбу с мешалкой загружают 30 г крахмала кукурузного и 1,46 г ретинола пальмитата, массу тщательно перемешивают, затем добавляют однородную смесь 41,62 г крахмала кукурузного и 13,36 г цинка сульфата, массу перемешивают.

В отдельной колбе готовят раствор из 35 мл спирта этилового и 1,8 г гидроксипропилцеллюлозы, массу тщательно перемешивают до получения раствора, к раствору приливают 1,0 мл (400 млн МЕ) интерферона альфа-2b, массу тщательно перемешивают, затем полученный раствор с интерфероном постепенно при перемешивании приливают к сухой смеси крахмала кукурузного с ретинола пальмитатом и цинка сульфатом. Равномерно увлажненную массу гранулируют, гранулы сушат при температуре не выше 30-35°С. К высушенным гранулам добавляют смесь из 0,24 г кремния диоксида коллоидного и 0,55 г магния стеарата, гранулы тщательно перемешивают. Полученный гранулированный порошок загружают в капсулы №3 по 0,1 г. Получают 800 капсул, содержащих в каждой капсуле интерферона альфа-2b рекомбинантного человеческого 500 тыс. МЕ, ретинола пальмитата 3,3 тыс. МЕ, цинка сульфата 0,015 г.

Полученные капсулы соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.1).

Пример 2.

Приготовление капсулы

В колбу с мешалкой загружают 0,5 мл (200 млн МЕ) интерферона альфа-2b; 0,073 г ретинола пальмитата; 7,5 г цинка сульфата, 0,075 г крахмала кукурузного и 1,5 г гидроксипропилцеллюлозы. Получают 800 капсул, содержащих в каждой капсуле интерферона альфа-2b рекомбинантного человеческого 250 тыс. МЕ, ретинола пальмитата 1,65 тыс.ME, цинка сульфата 0,0075 г.

Полученные капсулы соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.1).

Пример 3.

Приготовление капсулы

В колбу с мешалкой загружают 2 мл (800 млн ME) интерферона альфа-2b, 1,46 г ретинола пальмитата, 13,36 г цинка сульфата моногидрата, 0,075 г крахмала кукурузного и 2,5 г гидроксипропилцеллюлозы. Получают 800 капсул, содержащих в каждой капсуле интерферона альфа-2b рекомбинантного человеческого 1 млн ME, ретинола пальмитата 3,3 тыс. ME, цинка сульфата моногидрата 0,015 г.

Полученные капсулы соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.1).

Результаты анализа дозированной смеси в капсулах с интерфероном альфа-2b и ретинолом пальмитатом представлены в табл.1.

Таблица 1
Показатель	Норма	Пример 1	Пример 2	Пример 3
1. Описание содержимого капсул	Белый или почти белый порошок	Белый порошок	Белый порошок	Почти белый порошок
2. Количественное содержание интерферона альфа-2b		500 тыс. ME	250 тыс. ME	1 млн
3. Количественное содержание ретинола пальмитата		3, 3 тыс. ME	1,65 мг	3,3 тыс. ME
4. Растворение (высвобождение)	Не менее 75% за 30 минут	80%	83%	85%
5. Микробиологическая чистота	Соответствие требованиям ГФ XII изд.	Соответствие требованиям ГФХП изд.	Соответствие требованиям ГФ XII изд.	Соответствие требованиям ГФХП изд.
6. Стабильность	При 20°С	2 года	2 года	2 года

Пример 4.

Приготовление суппозиториев.

В гомогенизатор загружают 0,24 г ретинола пальмитата и 2,5 г твина 80, смесь тщательно растирают при 20°С до получения однородной массы. К массе прибавляют 15,5 г полиэтиленоксида 400 и перемешивают до однородного состояния, затем добавляют 0,02 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты и перемешивают до полного растворения, добавляют 1,5 г цинка сульфата моногидрата, тщательно гомогенизируют и нагревают до 48-50°С. К полученной гомогенной суспензии при перемешивании приливают 0,14 мл (50 млн МЕ) интерферона альфа-2b, 0,2 мл воды очищенной, массу тщательно перемешивают и приливают постепенно при тщательном перемешивании в 130 г расплава полиэтиленоксида 1500, массу тщательно перемешивают и быстро разливают в контурную ячейковую упаковку №5. Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 500 тыс. МЕ интерферона альфа-2b, 3,3 тыс. МЕ ретинола пальмитата, 0,015 г цинка сульфата моногидрата.

Полученные суппозитории по показателям качества соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.2).

Пример 5.

Приготовление суппозиториев

В гомогенизатор загружают 0,034 мл (12,5 млн МЕ) интерферона альфа-2b; 0,08 г ретинола пальмитата, 0,5 г цинка сульфата моногидрата; 0,02 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты; 2,0 г твина 80; 10 г полиэтиленоксида 400; 135 г полиэтиленоксида 1500 и 0,05 мл воды очищенной. Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 125 тыс. МЕ интерферона альфа-2b; 1,1 тыс. МЕ ретинола пальмитата; 0,005 г цинка сульфата моногидрата.

Полученные суппозитории по показателям качества соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.2).

Пример 6.

Приготовление суппозиториев

В гомогенизатор загружают 0,041 мл (15 млн МЕ) интерферона альфа-2b; 0,08 г ретинола пальмитата; 0,5 г цинка сульфата; 0,03 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты; 2,5 г твина 80; 15,2 г полиэтиленоксида 400; 130 г полиэтиленоксида 1500 и 0,03 мл воды очищенной. Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 150 тыс. МЕ интерферона альфа-2b, 1,1 тыс. МЕ ретинола пальмитата, 0,005 г цинка сульфата.

Полученные суппозитории по показателям качества соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.2).

Пример 7.

Приготовление суппозиториев

В гомогенизатор загружают 0,25 мл (100 млн МЕ) интерферона альфа-2b; 0,24 г ретинола пальмитата; 1,5 г цинка сульфата; 0,04 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты; 4,0 г твина 80; 20 г полиэтиленоксида 400; 125 г полиэтиленоксида 1500 и 0,3 мл воды очищенной. Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 1 млн МЕ интерферона альфа-2b, 3,3 тыс. МЕ ретинола пальмитата, 0,015 г цинка сульфата.

Полученные суппозитории по показателям качества соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд. (табл.2).

Пример 8.

Приготовление суппозиториев

В гомогенизатор загружают 0,25 мл (100 млн МЕ) интерферона альфа-2b; 0,24 г бета каротина; 0,75 г цинка сульфата; 0,04 г динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты; 4,0 г твина 80; 20 г полиэтиленоксида 400, 125 г полиэтиленоксида 1500 и 0,3 мл воды очищенной. Получают 100 суппозиториев массой 1,5 г, содержащих в каждом суппозитории 1 млн МЕ интерферона альфа-2b, 3,3 тыс. МЕ ретинола пальмитата, 7,5 мг цинка сульфата.

Полученные суппозитории по показателям качества соответствуют требованиям ГФ XI изд. и ГФ XII изд.

Результаты анализа дозированной смеси в суппозиториях ректальных с интерфероном альфа-2b и ретинолом пальмитатом предствлены в табл.2.

В соответствии с действующими требованиями проведены доклинические токсикологические исследования комплексного иммуномодулирующего средства. Программа доклинического токсикологического исследования включала изучение токсичности и переносимости препарата при однократном введении лабораторным животным, изучение токсичности его субстанции и готовой лекарственной формы в условиях хронического эксперимента на крысах и собаках. Кроме того, было проведено изучение потенциальных мутагенных, эмбриотоксических, тератогенных, аллергизирующих и иммунотоксических свойств препарата, а также исследовано его влияние на репродуктивную функцию.

В условиях хронического эксперимента при 3-месячном внутрижелудочном введении крысам субстанции препарата в дозах 0,03 и 0,06 г/кг и при 4-недельном назначении в желудок лекарственного препарата в готовой лекарственной форме (капсулы для приема внутрь по 0,1 г) в дозе 0,03 г/кг препарат хорошо переносится животными и не вызывает токсических повреждений внутренних органов, не оказывает местно раздражающего действия, что было подтверждено при патоморфологических исследованиях. Препарат не обладает мутагенностью в тесте Эймса и не вызывает увеличения числа хромосомных аббераций в клетках костного мозга и доминантных летальных мутаций у мышей.

Препарат не проявляет аллергизирующих, иммунотоксически, эмбриотоксических и тератогенных свойств, а также не влияет отрицательно на репродуктивную функцию животных.

Проведено исследование иммуномодулирующего действия нового комплексного иммуномодулирующего средства. Результаты исследования представлены в таблицах 3-8.

В опытах in vitro изучено действие препарата на клетки врожденного иммунитета, адаптивного иммунитета и цитокиновую сеть. Доказано, что препарат достоверно усиливает NK-активность (табл.3), повышает экспрессию молекул костимуляции миелоидными дендритными клетками-СД80, СД86 (табл.4, 5), дозозависимо подавляет ФГА-индуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов в широком диапазоне концентраций (1-1000 Ед/мл) - (табл.6), индуцирует выработку ФНО (табл.7), в эксперименте на экспериментальных животных - в дозе 50 мкг/мышь усиливает В-клеточный ответ (табл.8).

В концентрации 100 и 1000 Ед/мл (по интерферону-альфа) комплексного иммуномодулирующего средства достоверно повышает активность естественных киллеров (natural killer-NK).

Таблица 3
Число клеток-мишений К-562, убитых за 4 часа инкубации с мононуклеарными клетками (МНК) доноров, культивированными в течение 24 часов в присутствии препарата (%)
№ донора	Препарат (Ед/мл)
0	10	100	1000
1	29,5	31,6	26,0	38,6
2	47,4	57,9	65	61,4
3	70,8	68,7	81,9	83,7
4	46,5	55,3	65,4	72,0
5	49,2	61,0	73,8	65,2
М±σ	48,7±31,4	54,9±24,7	62,4±38,5**	64,2±29,4**
**p<0,01 по сравнению с киллерной активностью МНК, инкубированных без препарата (ANOVA, с поправкой Бонферрони).

Таблица 4
Поверхностная экспрессия CD80 дендритными клетками, культивированными 48 ч с указанными препаратами (средняя интенсивность флюоресценции в условных единицах)
№ донора	Без стимуляции	ЛПС	Препарат (Ед/мл)
10	100	1000
1	29	134	41	44	41
2	28	90	29	30	30
3	23	124	30	32	33
M±σ	27±3	116±23	33±7	35±8*	35±6
*p<0,05 при сравнении с экспрессией в отсутствие стимуляторов (ANOVA с поправкой Бонферрони).

Таблица 5
Поверхностная экспрессия CD86 дендритными клетками, культивированными 48 ч с указанными препаратами (средняя интенсивность флюоресценции в условных единицах)
№ донора	Без стимуляции	ЛПС	Препарат (Ед/мл)
10	100	1000
1	55	145	53	56	73
2	74	134	66	68	86
3	50	149	48	51	78
M±σ	60±13	143±8	56±9	58±9	79±7**
**p<0,01 при сравнении с экспрессией в отсутствие стимуляторов (ANOVA с поправкой Бонферрони).

Таблица 7
Уровни ФНО (пг/мл) в 24-часовых супернатантах МНК, культивированных без препаратов, с ЛПС (положительный контроль) и с указанными концентрациями препарата
№ донора	Без стимуляции	ЛПС	Препарат (Ед/мл)
10	100	1000
1	35	407	47	53	484
2	27	1011	108	154	1112
3	24	1376	17	15	58
4	5	371	8	11	700
5	31	468	82	81	124
6	28	279	24	39	47
7	19	1300	13	18	637
М±σ	21±12	816±480	37±39	48±50	426±377***
***р<0,001 при сравнении с продукцией ФНО в отсутствии стимуляторов (ANOVA с поправкой Бонферрони)

Таблица 8
Количество АОК в селезенках экспериментальных животных в зависимости от стимулятора
Обработка животных	АОК/селез (M±m)	АОК/10° ЯСК сел.(M±m)
Препарат	№ группы	мкг/мышь	Абсолютное кол-во	Индекс модуляции	Абсолютное кол-во	Индекс модуляции
Контроль (1%крахмал)	1	-	613±120	1,00±0,18	3,14±0,88	1,0±0,28
Препарат	2	10	664±103	1,08±0,17	3,18±0,4	1,01±0,16
	3	50	1066±219*	1,73±0,36*	5,29±1,02	1,66±0,33
4	100	344±97*	0,56±0,16	1,64±0,52	0,32±0,10*
Интерферон**	-	-	-	-	-	-
*р<0,05 по сравнению с контролем ****Belardelli F."Role of interferones and other cytokiness in the regulation of the immune response.//APMIS, 1995 Mar; 103(3):161-79); Э.Н.Симованьян, В.Б.Денисенко, А.М.Сарычев, А.В.Григорян. Хроническая инфекция вируса Эпштейна-Барр у детей: современные аспекты диагностики и лечения// Consilium Medicum (педиатрия).- 2006. - N2. - С.29-35; Ивашкин В.Т. Основные понятия и положения фундаментальной иммунологии. http://www.gastro.j.run./files/s1-12_1256462343 pdf.

В целом полученные результаты позволили сделать вывод о том, что предложенное средство является иммунотропным препаратом комплексного действия, которое влияет на клетки врожденного иммунитета (NK-клетки - естественные киллеры), на эффекторные клетки адаптивного иммунитета (Т - клетки), а также на вспомогательные клетки адаптивного иммунитета (ДК - дендритные клетки) и антителопродукцию.

Полученные результаты оценки специфических свойств нового комплексного препарата позволяют отнести его к препаратам с иммуномодулирующей активностью.

Таким образом, предложенное средство позволит существенно расширить возможности профилактики и коррекции иммунологических нарушений у здорового и больного человека.

1. Комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде суппозиториев на гидрофильной основе и содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа-, и/или бета-, и/или гамма-типов, ретинола пальмитат и/или вещества, выбранные из числа альфа-, бета-, гамма-каротинов, цинка сульфат моногидрат, и вспомогательные вещества:
основа и технологические добавки при содержании компонентов, г:

Интерферон человеческий рекомбинантный альфа-, и/или бета-,
и/или гамма-типов	125 тыс.-1,0 млн ME
Ретинола пальмитат и/или альфа-, бета-,
гамма-каротины	1,1-3,3 тыс. ME,
Цинка сульфат моногидрат	0,005-0,015
Вспомогательные вещества	до 1,5

2. Комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы по п.1, отличающееся тем, что в качестве основы использованы полиэтиленоксид 400 и полиэтиленоксид 1500 в соотношении 1:10.

3. Комплексное иммуномодулирующее средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы по п.1, отличающееся тем, что в качестве технологической добавки использована этилендиаминтетрауксусной кислоты динатриевая соль и полисорбат 80 (твин 80).

4. Комплексное средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы, характеризующееся тем, что оно выполнено в виде капсул и содержит интерферон человеческий рекомбинантный альфа-, и/или бета-, и/или гамма-типов, ретинола пальмитат и/или другие вещества, выбранные из группы альфа-, бета-, гамма-каротинов, цинка сульфат моногидрат, при содержании компонентов, г:

Интерферон человеческий рекомбинантный альфа-, и/или бета-,
и/или гамма-типов	250 тыс.-1,0 млн ME
Ретинола пальмитат и/или альфа-, бета-,
гамма-каротины	1,65-3,3 тыс. ME
Цинка сульфат моногидрат	0,0075-0,015
Вспомогательные вещества	до 0,1

5. Комплексное средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы по п.4, отличающееся тем, что в качестве основы используют крахмал кукурузный.

6. Комплексное средство для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы по п.4, отличающееся тем, что в качестве технологических добавок используют гидроксипропилцеллюлозу, кремния диоксид коллоидный, магния стеарат.