Способ получения биологически активного препарата из скелетных мышц


 


Владельцы патента RU 2476234:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А. Илизарова" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активного препарата. Способ получения биологически активного препарата из скелетных мышц животных, включающий забор материала животного с удлиняемой конечности по методу Илизарова, очистку материала, растирание его с кварцевым песком в растворе КС1 до получения однородного гомогената, затем гомогенат центрифугируют, полученный надосадок фильтруют, замораживают, лиофильно высушивают, стерилизуют при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет получить препарат, который способен стимулировать ростовые и регенеративные процессы в тканях опорно-двигательного аппарата. 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к биотехнологии в сфере получения биологически активных средств, и может быть использовано в целях активации репаративных процессов при нарушении трофики и повреждений тканей опорно-двигательного аппарата.

Известны способы получения комплексов биологически активных веществ из различных тканей животных, когда с целью повышения выхода биологически активных продуктов используют органы и ткани животных, находящихся либо в стадии регенерации (Патент РФ №2041715), либо после физических воздействий (Патент РФ №2071335).

Однако в данных способах в качестве сырья не используются скелетные мышцы, хотя они более доступны в качестве объекта для выделения биологически активных веществ, а их масса по отношению к другим органам существенно больше.

В способе получения биологически активного карнозин-анзеринсодержащего комплекса, выделяемого из скелетных мышц (Патент РФ №2255758), обладающего антиоксидантной и иммуномодулирующей активностью, так же как и в двух выше указанных способах ничего не указано о биологически активных характеристиках препаратов по отношению к тканям опорно-двигательного аппарата (кость, мышца, нервы, сухожилия, сосуды).

Самым близким аналогом является способ получения супернатанта из скелетных мышц животных (Ерофеев С.А. и др. Биохимические исследования сыворотки крови и скелетных мышц при удлинении голени аппаратом Илизарова с темпом дистракции 3 мм в сутки в автоматическом режиме // Вестник новых медицинских технологий. 2005. Т.XII, №3-4. С.89-91). В данном способе в качестве сырья используют переднюю большеберцовую мышцу, взятую у собаки с удлиняемой конечности по методу Илизарова с режимом удлинения 1 мм в сутки за 4 приема, полученный материал растирают с кварцевым песком в 0,03М растворе KCl при 5-8°С до получения однородного гомогената, затем гомогенат центрифугируют в течение 10 минут при 14000g, полученный надосадок исследуют.

Задачей настоящего изобретения является разработка относительно простого способа получения из скелетных мышц композиции биологически активных веществ, обладающих биоактивными свойствами по отношению к тканям опорно-двигательного аппарата.

Указанная задача достигается тем, что делают забор материала животного с удлиняемой конечности по методу Илизарова, очищают, растирают его с кварцевым песком в 0,03 М растворе KCl - 1:9 соответственно в течение 5 минут, гомогенат центрифугируют в течение 11 минут, полученный надосадок фильтруют, замораживают при -70°С, лиофильно высушивают, стерилизуют.

Способ поясняют подробным описанием изготовления препарата и клиническими примерами его использования

Способ осуществляется следующим образом.

Переднюю большеберцовую мышцу (и/или длинный разгибатель пальцев), взятую у собаки с удлиняемой конечности на 14-е сутки удлинения по методу Илизарова с режимом удлинения 1 мм в сутки за 4 приема, сразу после забора очищают от остатков жировой и соединительной ткани. Далее материал отмывают от эритроцитов в 0,03М растворе KCl при 5-8°С, измельчают. Измельченную массу на холоду растирают с кварцевым песком в 0,03М растворе KCl при 5-8°С до получения однородного гомогената. Соотношение объемов ткань : экстрагирующий раствор (0,03М KCl) - 1:9. После 5 минут экстрагирования при 5-8°С гомогенат центрифугируют в течение 11 минут при 14000g. Полученный надосадок фильтруют через четыре слоя марли, замораживают при -70°С, лиофильно высушивают, стерилизуют.

Пример выполнения способа.

У экспериментального животного (собака №4590) проводили удлинение костей правой голени по методу Илизарова с режимом удлинения 1 мм в сутки за 4 приема. На 14-е сутки дистракции, после эвтаназии, у этого животного, с удлиняемой конечности была взята передняя большеберцовая мышца. Затем мышцу очистили от остатков жировой и соединительной ткани, отмыли от эритроцитов в 0,03М растворе KCl при 5-8°С, измельчили. Измельченную массу на холоду растерли с кварцевым песком в 0,03М растворе KCl (соотношение объемов ткань : экстрагирующий раствор - 1:9) до получения однородного гомогената. После 5 минут экстрагирования при 5-8°С гомогенат центрифугировали в течение 11 минут при 14000g. Полученный надосадок отфильтровали в пенициллиновые флаконы через четыре слоя марли. После замораживания при -70°С препарат лиофильно высушили, простерилизовали.

Оценка биологической активности препарата.

Пример 1. Полученный от животного №4590 препарат использовали для стимуляции репаративных процессов в тканях опорно-двигательного аппарата на модели удлинения костей голени с режимом удлинения 1,5 мм в сутки за 6 приемов. Препарат, из расчета 1 мг/кг массы тела, растворили в 5 мл физиологического раствора и вводили собаке №♂5035 на 10-е сутки удлинения внутримышечно по 1 мл в проксимальный и дистальный участок передней большеберцовой мышцы удлиняемого сегмента конечности и 1 мл в медиальную головку икроножной мышцы удлиняемого сегмента конечности. Для контроля, собаке №♂5069 на аналогичной модели, в аналогичные сроки, по той же схеме внутримышечно вводили аналогичный объем физиологического раствора.

Комплекс рентгенологических, физиологических, гистоморфологических и биохимических исследований обнаружил значительную активацию у животного №5035, относительно животного №5069, репаративных механизмов в тканях удлиняемого сегмента конечности. В частности, формирование полноценного костного регенерата у животного №5035 отмечалось на 19-е сутки фиксации, у №5069 - на 30-е. Кроме того, у собаки №5035 после введения препарата отмечалась заметная активация мио-, хондро-, остео- и ангиогенеза, уровень белка в скелетных мышцах удлиняемого сегмента был выше относительно животного №5069.

Пример 2. Полученный от животного №4590 препарат использовали для стимуляции процессов роста у крысят-отъемышей. Использовали 6 животных (самцы) из одного помета, из которых трем крысятам на 2-й, 4-й, 6-й неделе онтогенеза внутримышечно вводили 0,1 мл тестируемой композиции, приготовленной на физиологическом растворе из расчета 1 мг/кг массы тела. Трем другим крысятам в эти же сроки внутримышечно вводили 0,1 мл физиологического раствора. Средние значения прироста массы животных, которым вводили тестируемую композицию, были на 27,7% выше прироста массы тела животных, которым вводили физиологический раствор.

Предложенный способ прост в использовании и позволяет получать из доступного материала значительные количества биологический активных веществ, способных стимулировать ростковые и регенеративные процессы в тканях опорно-двигательного аппарата.

Способ получения биологически активного препарата из скелетных мышц животных, включающий забор материала животного с удлиняемой конечности по методу Илизарова, очистку материала, растирание его с кварцевым песком в 0,03М растворе КСl при 5-8°С до получения однородного гомогената, затем гомогенат центрифугируют при 14000g, отличающийся тем, что материал растирают с кварцевым песком при соотношении его в 0,03М растворе КСl - 1:9 соответственно в течение 5 мин, гомогенат центрифугируют в течение 11 мин, полученный надосадок фильтруют, замораживают при -70°С, лиофильно высушивают, стерилизуют.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии больных ревматоидным артритом с вторичным остеоартрозом. .

Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии, и может быть использовано для лечения больных с осложненной травмой шейного отдела позвоночника. .

Изобретение относится к новым инданильным производным и их фармацевтически приемлемым солям, обладающим активностью антагониста кальциевого рецептора. .

Изобретение относится к применению тапентадола для лечения боли в связи с остеоартрозом. .

Изобретение относится к соединениям формулы (I): где: A, J, R1, R4, X, Z представлены в п.1 формулы изобретения, а также к фармацевтической композиции, содержащей такие соединения, модулирующие активность депо-управляемых кальциевых (SOC) каналов.

Изобретение относится к соединениям формулы (I): где: A, J, R1, R4, X, Z представлены в п.1 формулы изобретения, а также к фармацевтической композиции, содержащей такие соединения, модулирующие активность депо-управляемых кальциевых (SOC) каналов.

Изобретение относится к соединениям бициклосульфонильной кислоты (BCSA) формулы: где: каждый из -RPW, -R PX, -RPY и -RPZ независимо представляет собой -Н или -RRS1; каждый -RRS1 независимо представляет собой -F, -Cl, -Br, -I, -RA1, -CF 3, -ОН, -OCF3 или -ORA1; при этом каждый RA1 независимо представляет собой С1-4 алкил, фенил или бензил; и дополнительно, две соседние группы -RRS1 могут вместе образовать -ОСН2О-, -ОСН2СН2О- или -ОСН2СН2 СН2О-; -RAK независимо представляет собой ковалентную связь, -(СН2)- или -(СН2) 2-; -RN независимо представляет собой -R NNN, или -LN-RNNN; остальные значения радикалов представлены в п.1 формулы изобретения, действующим как ингибиторы фермента, конвертирующего фактор некроза опухоли - (ТАСЕ).

Изобретение относится к новым производным гемина общей формулы (I) где R1 и R2 оба представляют собой ArgNH2, Arg(NO2)OMe, GlyNH2, SerNH2, SerOH, GlyOH, Glu(OH)OH, Glu(ArgNH2)ArgNH2, Glu(SerOMe)SerOMe, Glu(NHCH 2CH2OH)NHCH2CH2OH, Glu(SerNH 2)SerNH2, Glu(GlyNH2)GlyNH2 или Glu(GlyOMe)GlyOMe; Men+ представляет собой Fe 2+ или Fe3+; Hal- представляет собой F-, Cl-, Br- или I- , или его фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к области биохимии, а именно к биологически активным полипептидам, обладающим анальгетическим действием. .

Изобретение относится к области биохимии. .

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению иммуногенов из Neisseria meningitides, и может быть использовано в медицине. .
Изобретение относится к медицине и касается способа лечения хронического вирусного гепатита С, включающего оральное введение в организм липосомального препарата альфа-2 интерферона в виде «Реаферон-ЕС-Липинт» и липосомального препарата рибавирина в виде «Рибавирин-ЛИПИНТ», а также введение в организм инъекционной формы альфа-2 интерферона в виде «Реаферон-ЕС».

Изобретение относится к медицине и касается комплексного иммуномодулирующего средства для профилактики нарушений и регуляции работы иммунной системы (варианты). .
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано для лечения острых орхоэпидидимитов и их осложнений. .

Изобретение относится к новому токсину. .
Изобретение относится к области фармацевтики и медицины. .
Наверх