Соединения на основе комплексов гиперразветвленных полимеров boltorn h, обладающие антикандидозной активностью, и способ их получения
Владельцы патента RU 2478106:
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) Федеральный Университет" (ФГАОУ ВПО КФУ) (RU)
Кутырева Марианна Петровна (RU)
Настоящее изобретение относится к соединениям на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H, которые могут быть использованы в качестве субстанций, основ, компонентов и других биологически активных веществ при изготовлении химиопрепаратов для лечения и профилактики грибковых заболеваний человека, в частности микозов Candida, а также к способу получения указанных соединений. Соединения на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H содержат от 10 до 14 группировок пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов. Данные соединения обладают антикандидозной активностью в отношении Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis и обеспечивают воздействие на систему протеиназ Candida и компоненты клеточной стенки. Способ получения указанных соединений заключается в синтезе соединений, содержащих от 10 до 14 групп пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов, с использованием последовательных реакций этерификации, замещения и присоединения. 2 н.п. ф-лы, 3 табл., 5 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к принципиально новым типам соединений на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H, которые могут быть использованы в качестве субстанций, основ, компонентов и других биологически активных веществ при изготовлении химиопрепаратов для лечения и профилактики грибковых заболеваний человека, в частности микозов Candida, и способам их получения.
В настоящее время достаточно ясно, что для ближайших десятилетий будет характерно возрастание числа больных с ослабленным иммунным статусом. В частности, иммунодефицит обусловлен возрастающими возможностями медицины - все более широким использованием цитостатиков (средства для снижения проницаемости клеточной мембраны) и иммунодепрессантов (ср-ва для подавления иммунитета организма). Грибковым инфекциям благоприятствуют инвазивные, хирургические, инструментальные вмешательства, обследование больных, внедрение в медицину новых материалов и покрытий для протезирования и т.п. Микозы являются основной причиной смертности пациентов в отделениях интенсивной терапии, особенно истощенных пациентов с ослабленным иммунитетом [1-3].
По данным медицинской статистики до 50% грибковых заболеваний связано с патогенной активностью дрожжеподобных грибов рода Candida, причем 95% кандидозов вызвано культурой Candida albicans. Высокая патогенная активность грибкового аллергена Candida albicans (далее С.alb.) непосредственно связана с количеством и многообразием функций вырабатываемых им секреторных аспарагиновых протеиназ (международное название - secretory aspartic proteinase, сокращение - SAP С.alb.) [4].
В литературе описаны результаты медицинских и биохимических исследований, которые неопровержимо доказывают влияние секреторных аспарагиновых протеаз Candida на развитие и активизацию заболеваний, таких как гастрит, стоматит, грибковые поражения слизистых и кожных покровов. Также наибольшее изучение способов влияния секреторных аспарагиновых протеаз получило в связи с исследованием прогрессирования вируса иммунодефицита человека [4-9].
К настоящему времени выделены секреторные аспарагиновые протеазы различных патогенных грибов рода Candida: Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida lusitaniae. Наибольшее разнообразие субстратной специфичности наблюдается для Candida albicans. Специфичность SAP Candida lusitaniae сопоставима со специфичностью Candida parapsilosis [9, 10].
Наибольший интерес с точки зрения патогенности и влияния на организм человека представляет система протеаз Candida albicans (С.alb.). Патогенный для человека вид дрожжей - С.alb. поражает наружные покровы и внутренние органы, вызывая глубокие микозы [11, 12]. Благоприятными условиями для проявления болезни является общее истощение организма или же искусственные дисбактериозы под действием неправильного применения антибиотиков. В работе Macdonald и Odds, опубликованной в 1980 г. [13] впервые представлены результаты исследований по выделению и характеризации протеазы С.alb. методом электрофореза в натрий додоцилсульфатполиакриламидном геле. Определена молекулярная масса фермента, которая составила 42 кДа (Дальтон - единица измерения молекулярной массы белков) и методом гель-фильтрации на сефакриле S-200 (мембрана для определения изоэлектрической точки) найдена изоэлектрическая точка при рН=4.0. Выделенный фермент оценивается как гликопротеид, содержащий аминокислотные остатки аспарагиновой кислоты. В качестве субстрата для выделения фермента использован человеческий сывороточный альбумин и гемоглобин.
Структура выделенной аспарагиновой протеазы С.alb. и данные по аминокислотной последовательности ее цепей расшифрованы автором работ [14, 15] и представлены на Фиг.1, 2 в Приложении. Активный центр секреторной аспарагиновой протеазы С.alb. характеризуется наличием двух активных участков по одному в каждом домене (линейная аминокислотная последовательность), специфичных к соединениям белковой и синтетической природы. Также в протеазе С.alb. присутствует один центр связывания ионов металлов, а именно аминокислотный остаток Asp-57.
В качестве ионногенной группировки во всех активных участка данного фермента присутствует аспарагиновая кислота, поэтому протеаза С.alb и называется секреторной аспарагиновой протеазой (SAP С.alb.).
Система аспарагиновых протеиназ С.alb. неразрывно связана с уровнем иммунитета и в настоящее время включает в себя десять изоферментов, обладающих различными функциями и определяющих локализацию и тяжесть кандидаинфекции [16, 17].
Исследования секреторной аспарагиновой протеиназы С.alb. (SAP) начаты медиками и биологами с 1980 года [4]. Вскоре после открытия SAP1, большинство выделенных ферментов аллергена С.alb. расшифрованы как внеклеточные аспарагиновые протеазы. С использованием свойств и структур первого полученного PCR-клонированием фермента SAP1 в качестве репера с 1992-2000 гг. выделены десять изоферментов аллергена С.alb., которые составили систему внеклеточных секреторных аспарагиновых протеаз С.alb. [13, 18-23] (см. Фиг.3). Структура некоторых протеиназ представлена в международной базе данных Protein Data Bank: SAP1 doi:10.2210/pdb2qzw/pdb, SAP2 doi:10.2210/pdb1zap/pdb, SAP3 doi:10.2210/pdb2h6s/pdb, SAP5 doi:10.2210/pdb2qzx/pdb. Все десять выделенных к настоящему времени белковых субстанций являются аспарагиновыми протеазами и обладают рядом SAP-специфичных характеристик а именно обладают катализируют гидролиз белковых субстратов гемоглабина, казеина в кислой области рН среды и т.д..
Установлена схема клеточной секреции системы протеаз С.alb. [24] (см. Фиг.4). Действие и выделение пробелка протеаз через секреторные мостики при их рН-оптимуме для проявления максимальной каталитической активности. С.alb. переводит пробелок в эндоплазматическую сеть, где сигнальный пептид продуцируется сигнальной пептидазой. Пропептид содержит в себе два действующих участка Lys-Arg, которые являются мишенью для протеаз Кех2 в аппарате Гольджи или для альтернативных активационных процессов. Пробелок специфически ориентируется на клеточной мембране, руководствуясь ферментативными свойствами содержащихся в нем системы протеаз С.alb. Выделившиеся протеазы транспортируются везикулами через клеточную мембрану в клеточную стенку и выделяются в межклеточное пространство. Индуцируемые SAP1-3 большей частью активны в диапазоне рН=2-5, в то время, как конститутивные SAP 4-6 активны при рН=3-7 и, таким образом, могут действовать в различных средах. Анализ механизма секреции SAP9 и SAP 10 предполагает, что обе протеазы являются гликосульфоспатидилинозитол-протеинами (GPI-протеины) и оседают на клеточной мембране или клеточной стенке [25]. Существует мнение, что Кех2 может быть ключевым регулятором протеазы SAP [26]. Зрелый фермент содержит определенную аминокислотную последовательность, характерную для всех аспарагиновых протеаз, неизменно включающую 2 аспартатных остатка на расстоянии водородных связей друг от друга в активном центре. Жестко зафиксированные в каждом из десяти изоферментов остатки цистеина (Cys 45 и Cys 56), вовлечены в поддержание третичной структуры SAP [27].
Присутствие системы протеаз наблюдается только для патогенного аллергена семейства Candida: С.alb. [28, 29] и отсутствие для других дрожжевых культур, привело к предположению, что эти протеазы могут быть вовлечены в процессинг заболевания. Даже единственный представитель системы - SAP2 достаточен для быстрого роста и активности аллергена С.alb. в среде, содержащей белок [30, 31]. На базовом уровне роль протеаз С.alb. сводиться к усвоению белков, для обеспечения клеток азотом. В то же время, активность SAP2 обеспечивает и возможность эффективного роста грибов в среде, содержащей сывороточный альбумин или другие белки, как источники азота. [27, 32]. Протеазы способствуют и участвуют в адгезии и инвазии, а, следовательно, в разрушении поверхностных клеточных структур и межклеточных субстанций, разрушении клеток и молекул, ослабляя сопротивление иммунной системы к "микробной атаке". Такая активность для SAP2 была показана in vitro [33]. Внутриклеточная поверхность и белки, такие как кератин, коллаген, ламинин, фибронектин и муцин активно разрушаются SAP2. Кроме того, белки иммуной системы, такие как лактоферрин, ингибитор протеаз α-макроглобин, респераторные ферменты макрофагов и подавляющее число иммуноглобулинов, включающая иммуноглобулин A (IgA), который обычно устойчив к действию большинства бактериальных протеаз, разрушаются при участии SAP. Протеазы С.alb. также действует на белковые протеолитические каскады с различными эффектами, которые не зависят от грибковой специфичности. Например, SAP2 может активировать каскады белков прекурсоров в процессе свертывания крови [34], инактивировать ингибитор цистеиновых протеаз цистатин А [35], и расщеплять белки везикулярного гомеостаза [36]. Такая деятельность проявляется в усилении циркулирующей или системной кандидоинфекции, что и было показано при опытах на мышах [37]. Кроме того, доказано, что протеаза активирует клеточный интеликин-1β, что указывает на их решающею роль в активации и поддержании воспалительных процессов на эпителиальных поверхностях in vivo [38].
Основной интерес представляют два типа протеиназ Candida взаимосвязанных друг с другом: индуцируемые SAP С.alb., проявляющие антигенные свойства и конститутивные SAP C.alb., обладающие преимущественно сорбционными функциями и являющиеся необходимыми для последующей секреции и функционирования протеиназ первой группы.
Однако вся система протеиназ С.alb. в современных источниках представлена только клиническими и биологическими показателями. Возможность мутации ДНК ферментов с последующим приспособлением к меняющемуся окружению и индивидуальным особенностям организма обозначают систему протеиназ С.alb. как одну из наиболее опасных и патогенно активных субстанций. Таким образом, подавление активности системы SAP С.alb., позволит эффективно подавлять активность культуры Candida albicans как при циркулирующих, так и при наиболее опасных системных микозах.
На сегодняшний день широко используются антикандидозные препараты нескольких групп: производные амидов и аллиламидов («Нитрофунгин»), имидазольные препаратами («Оксиконазол», «Миконазол», «Клотримазол») [39], и наиболее широко распространенными на сегодняшний день производными триазола («Дифлюкан», «Флюкостат», «Флуконазол» «Итраконазол») [40]. Механизм их действия заключается в угнетении биосинтеза эргостерола, являющегося компонентом клеточной стенки мембраны грибов. Недостатком всех трех групп является высокая токсичность [41, 42]. Несмотря на то, что триазолы имеют преимущество перед имидазолами вследствие лучшей фармакокинетики и меньшей токсичности, в последние годы среди разных видов Candida все чаще выявляется резистентность к азолам [43]. Особенно это характерно для С.albicans. Причинами резистентности являются снижение проницаемости клеточной мембраны, наличие в ней системы активного выброса, или же суперпродукция мишени цитохрома - P45014Dm. А эффективность их действия зависит от индивидуальной чувствительности организма к активным компонентам и иммунного статуса человека. Антибиотик «Амфотерицин В» и его модифицированные аналоги («Метамфоцин», липосомальный препарат «Амфотерицин В + липидные комплексы», «Фунгизон») обладающий наиболее мощным фунгицидным эффектом и медленным развитием к ним резистентности, но имеют ограничение в системном применении, обусловленное нефротоксичностью, возможными дисфункциями нервной системы, лихорадкой, миалгией или тромбофлебитом [44, 45]. Таким образом препарат имеет ограничение в применении по фактору токсичности.
В такой ситуации, когда уже имеющиеся противогрибковые агенты не подходят для лечения глубокого микоза, существует необходимость в разработке агентов, в основе которых лежит новый механизм действия на культуры патогенных грибов Candida, которые обладают низкой токсичностью и не вызывают резистентность(устойчивость) к препарату. Из уровня техники, относящегося к противогрибковым агентам, основанным на новом механизме действия известны противогрибковые реагенты на основе гетероциклических замещенных производных пиримидина (RU 2380365 С1 27.01.2010), 2-(1,2,4-триазол-1-илметил)-6-бензилиден-1б4-диоксапиро[4,5]деканов (RU 2326878 C1, 17.11.2006) обладающие следующими недостатками:
- токсичность;
- низкая биодоступность;
- в патентных документах отсутствуют данные о перекрестном взаимодействии соединений в наиболее распространенными видами Candida, а именно Candida tropicalis, Candida krusei, Candida par apilosis.
Часть фармакологических антикандидозных композиций основана на соединениях белковой природы. В публикации WO 01/76627 описана композиция для лечения микозов у человека, содержащая антитело, специфичное к консервативному эпитопу (часть макромолекулы, которая распознается иммунной системой (антителами, В-лимфоцитами, Т-лимфоцитами). стрессового белка грибов, hsp90, в комбинации с известными противогрибковыми средствами (амфотерицином В, флуконазолом вориконазолом итраконазолом). Указанное антитело (далее именуемое Mycograb (RTM)) распознает эпитоп, представленный пептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 1, которая является консервативной во многих видах грибов. Недостатком данной композиции является то что азольные препараты не проявляют синергетического эффекта по отношению к грибам рода Candida.
Наиболее близкими химическими соединениями к заявленному техническому решению являются соли и смеси на основе линейных полимеров:
- 9-оксоакридин-10-уксусной кислоты с 1-алкиламино-1-деоксиполиолами (RU 2297246 С1, 20.04.2007), обладающие антикандидозной активностью;
- противогрибковый препарат на основе 2-хлор-4-нитрофенолполиэтиленгликоля (ПЭГ 400) и 50%-ного этилового спирта (RU 2248202 С2, 26.09.2002);
При этом данные препараты и смеси возможно использовать только в составе мазей и кремов, вследствие высокой токсичности их составляющих, в том числе и нитрофенола. Кроме этого для указанных аналогов отсутствует информация о специфичности данных соединений к семейству культур Candida (см. выше).
К общему недостатку всех вышеназванных препаратов и субстанций можно отнести тот факт, что их действие направлено в основном на угнетение компонентов клеточной стенки грибов (эргостерол, ланостерол, и сквален) Candida albicans и не затрагивает его обширную ферментативную систему, обуславливающую уровень патогенности культуры Candida. В настоящее время в качестве ингибиторов аспарагиновой протеиназы C.albicans известны природные соединения ацетилпепстатин и пепстатин А и некоторые их синтетические аналоги IC50 и А70 450 - амин 2-[3-бензилl-4-n-(4-метилпиперазин-1-ил-карбонил)2-кетопиперазин-1-ил]-гексановой кислоты [12].
Однако данные ингибиторы имеют существенный недостаток - они угнетают активность всех протеолитических ферментов (ферменты катализирующие гидролиз белков), в том числе и жизненно необходимых для усвоения азота человеческим организмом, что может привести к ухудшению здоровья человека.
Таким образом, из известного уровня техники выявлены технические решения, описывающие соединения на основе линейных полимеров, проявляющиет антикандидозную активность, которые имеют ряд недостатков. Однако не выявлены технические решения, обеспечивающие реализацию поставленных задач. Таким образом, прототип не выявлен.
Заявляемое техническое решение заключается в: соединениях на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H, содержащих от 10 до 14 группировок пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов Со(II) и Cu(II), обладающих антикандидозной активностью в отношении Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis и обеспечивающие воздействие на систему протеиназ Candida и компоненты клеточной стенки; способе получения соединений на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H, обладающих антикандидозной активностью заключающийся в синтезе соединений, содержащих от 10 до 14 групп пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов, с использованием последовательных реакций этерификации, замещения и присоединения.
Задачей заявляемого технического решения является создание соединений на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H, обладающих антикандидозной активностью и способов их синтеза на основе заявленных составляющих, обладающих единовременно следующим комплексом свойств:
- принципиально новым механизмом действия на культуру Candida основанным на одновременном воздействии на систему протеиназ Candida и компоненты клеточной стенки - эргостерол, ланостерол, сквален;
- подавлением активности индуцируемых и конститутивных секреторных аспарагиновых протеиназ культуры Candida (SAP С.alb.);
- значительным увеличением мембранной проницаемости и биодоступности;
- угнетением биосинтеза компонентов клеточной стенки грибов культуры Candida, а именно эргостерола, ланостерола, сквалена;
- проявлением фунгицидных свойств по отношению преимущественно к четырем представителям семейства Candida, а именно Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis;
- значительным снижением общей токсичности препаратов.
Технический результат достигается тем, что получают соединения на основе комплексов гиперразветвленных нетоксичных полимеров Boltorn Н, содержащие группировки пропионовой и акриловой кислот и ионы металлов Со(II) и Cu(II), обладающие антикандидозной активностью в отношении Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis и обеспечивающие воздействие на систему протеиназ Candida и компоненты клеточной стенки.
Способ получения соединений на основе комплексов гиперразветвленных нетоксичных полимеров Boltorn Н, обладающих антикандидозной активностью заключается в синтезе соединений, содержащих от 10 до 14 групп пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов, с использованием последовательных реакций этерификации, замещения и присоединения.
Заявленное техническое решение поясняется следующими материалами:
на Фиг.1 приведена структура секреторной аспаргиновой протеазы Candida albicans: Лиганд -: А70, 
189 - молекул воды (для наглядности α-спиральные участки представлены в виде цилиндров. β-складки - в виде лент со стрелкой, указывающей направление цепи в складке от N-конца к С-концу);
на Фиг.2 приведена аминокислотная последовательность секреторной аспаргиновой протеазы: 
- активный центр, 
Протеин: 341 кислотный остаток - [: 6 колец, 23 цепей],
на Фиг.3 приведен состав системы протеаз Candida albicans;
на Фиг.4 приведена модель клеточной секреции систем протеаз Candida albicans:
в Таблице 1 приведена информация, характеризующая необходимое количество компонентов для синтеза химических соединений и технические требования к ним;
на Фиг.5 приведена принципиальная схема способа получения химического соединения С4, обладающего антикандидозной активностью, которая поясняется на примере синтеза соединений III-VI на основе гиперразветвленного полиэфирполиола Boltorn H, янтарного ангидрида, нитратов кобальта(II) и меди(II) и характеризуется последовательностью выполнения операций и соединениями общей химической формулы I, полученными в результате описанного способа;
в Таблице 2 приведена каталитическая активность индуцируемой SAP 2 С.alb. по отношению к гемоглобину в присутствии полученных соединений (CHb=126 мг/л, CSAP=2,0×10-6 моль/л,, рН=4,10);
в Таблице 3. приведены данные по фунгицидной активности и грибоустойчивости полученных соединений к некоторым штаммам Candida и даны пояснения к ним в отношении как фунгицидной активности так и их активности в отношении их способности к обрастанию грибами.
Для оценки данных характеристик использован диско-диффузионный метод: целлюлозные диски, пропитанные 10%-м раствором соединения, помещались в центр чашки Петри, содержащей культуру Candida в геле агар-агара. Фунгицидная активность оценена по площади зоны лизиса, образующейся вокруг диска, пропитанного контрольным соединеним.
Грибоустойчивость характеризуется параметром «Обрастание», показывающем степень обрастания диска, пропитанного контрольным соединением, культурой Candida.
В таблице представлены средние результаты не менее пяти параллельных измерений для каждого соединения.
Способ получения химических соединений С4 заключается в химическом синтезе посредством выполнения следующих операций, при этом для наглядности заявитель приводит описание способа посредством поясняющей блок-схемы приведенной на Фиг.5.
Соединение С1 химически модифицируется реакциями присоединения соединением С2. Полученное промежуточное С2' соединение используется для синтеза комплексных соединений с участием солей С3. Полученное в результате химического синтеза соединение С4 будет являться химическим соединением, обладающим антикандидозной активностью.
Способ получения химических соединений, обладающих антикандидозной активностью, поясняется на примере синтеза соединения С4 на основе гиперразветвленного полиэфирполиола Boltorn H20, янтарного и малеинового ангидридов кислот, нитратов кобальта(II) и меди(II) характеризуется последовательностью выполнения операций и соединениями, полученными в результате описанного способа общей химической формулы I:
где А - нетоксичные гиперразветвленный полиэфирполиол Boltorn H20 (Perstorp AB, Швеция),
R = C(O)CH2-CH2COO; С(O)СН=СНСОО;
М = Со, Cu;
Х = НО3 -, Cl-.
Заявленное техническое решение поясняется соединениями, полученными в результате химического синтеза соединений заключающегося в выполнении следующих стадий:
Стадия №1
1) Навеску исходного реагента А=Boltorn H20 нагреть до температуры 140°С и выдержать при нагревании в течении 30 минут. К нагретому раствору Boltorn H20 в безводном растворителе добавить функционализирующий реагент в мольном соотношении от 1:8 до 1:16. Смесь перемешивать при температуре 56.5°С-101°С в течение 16-36 часов. После охлаждения смесь обработать осадителем. Образовавшийся продукт отделить декантацией и освободить от растворителя вакуумированием.
В качестве растворителя можно использовать: ацетон, хлороформ, бензол, диоксан, метанол, диметилформамид, диметилсульфоксид.
В качестве функционализирующего реагента можно использовать: янтарный ангидрид, малеиновый ангидрид.
В качестве осадителя можно использовать: диэтиловый эфир, гексан, этиловый спирт, бензол.
Получены соединения поли-2-карбоксипропионоВоltorn H20 (I, II) указанные на фиг.5 в виде соединения С2', которые представляют собой вязкие аморфные вещества белого или светло-желтого цвета.
Спектральные характеристики и данные элементного анализа в виде массовой доли элементов в молекуле в процентах, значений частот колебаний характеристических групп в ИК спектрах и значений химических сдвигов в ЯМР спектрах приведены далее и подтверждают чистоту и индивидуальность полученных промежуточных соединений.
Стадия №2
2) К нагретому раствору, содержащему поли-2-карбоксипропионо Boltorn H20 (соединения I или II) в безводном ацетоне добавить NaHCO3. Смесь перемешивать при температуре 56,5°С в течение 10-12 часов. После охлаждения отфильтровать непрореагировавший NaHCO3. К фильтрату добавить навеску безводной соли М(NO3)2, где М = Со, Cu в мольном соотношении полимер: неорганическая соль 1:16. Смесь перемешивать при температуре 56,5°С в течение 12-16 часов. После охлаждения смесь промыть водно-ацетоновым раствором и обработать диэтиловым эфиром. Образовавшийся продукт отделить и высушить в вакууме. В результате реакции получены полиядерные комплексы: соединения III-VI.
Спектральные характеристики и данные элементного анализа в виде массовой доли элементов в молекуле в процентах, значений частот колебаний характеристических групп в ПК спектрах приведены ниже:
Полученные соединения III-VI подавляют каталитическую активность индуцируемой секреторной аспарагиновой протеиназы культуры Candida albicans (SAP С.alb.).
В Таблице 2 приведены значения каталитической активности индуцируемой протеиназы Candida albicans в присутствии соединений III-VI.
Фунгицидная активность и грибоустойчивость соединений IV-VI к некоторым штаммам Candida приведены в Таблице 3.
В таблице 3 приведены данные по фунгицидной активности и грибоустойчивости соединений IV-VI к некоторым штаммам Candida. Для оценки данных характеристик использован диско-диффузионный метод: целлюлозные диски пропитанные 10%-м раствором соединения помещались в центр чашки Петри, содержащей культуру Candida в геле агар-агара. Фунгицидная активность оценена по площади зоны лизиса, образующейся вокруг диска, пропитанного контрольным соединеним. Грибоустойчивость характеризуется параметром «Обрастание», показывающем степень обрастания диска, пропитанного контрольным соединением культурой Candida.
Соединение IV, кроме того, обладает фунгицидной активностью по отношению к плесневым грибам Aspergillus niger, Aspergillus fumigatus, Rhodotorula mucilaginosa (rubra).
Таким образом из таблиц 2 и 3 следует, что полученные соединения единовременно подавляют рост и активность действия на культур Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis и Candida krusei с одновременным угнетением каталитической активности индуцируемой протеиназы Candida albicans и компонентов клеточной стенки грибов Candida - эргостерола, ланостерола, сквалена, что является доказательством заявленных целей технического решения.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «новизна», предъявляемому к изобретениям, т.к. из уровня техники не выявлены технические решения, обладающие заявленной совокупностью признаков.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «изобретательский уровень», предъявляемому к изобретениям, т.к. заявленное технические решение не следует явным образом из уровня техники для специалиста в данной области техники.
Заявленное техническое решение соответствует критерию «промышленная применимость», так как оно может быть реализовано в народном хозяйстве с помощью стандартного оборудования и средств. Полученные соединения могут быть использованы в качестве активного вещества антикандидозных фармацевтических препаратов.
| Таблица 1 | |
| Составляющая | Свойства |
| БАЗОВАЯ СТРУКТУРА (С1) | Обладает высокой мембранной проницаемостью и низкой токсичностью. |
| ФУНКЦИОНАЛИЗИРУЮЩИЙ РЕАГЕНТ (С2) | Обладает свойством разрушения клеточной стенки гриба и лигандными свойствами |
| КОМПЛЕКСООБРАЗОВАТЕЛЬ (С3) | Является ингибитором активности протеиназ Candida |
При этом в качестве составляющих С1, С2, С3 могут быть использованы следующие вещества;
С1 - гиперразветвленный полиэфирполиол Boltorn H20, Н30, Н40 (Perstorp AB, Швеция),
С2 - ангидриды карбоновых кислот (янтарный, малеиновый ангидриды).
С3 - нитраты или хлориды цинка(II), кобальта(II), меди(II), никеля(II), марганца(II).
| Таблица 2 | ||||
| Каталитическая активность индуцируемой SAP С.alb. по отношению к гемоглобину в присутствии модуляторов III-VI (CHb=126 мг/л, CSAP=2,0×10-6 моль/л, рН=4,10) | ||||
| Концентрация соединения, моль/л | Каталитическая активность индуцируемой SAP Candida albicans, мг/л×мин | |||
| III | IV | V | VI | |
| 0 | 4.81 | |||
| 1×10-3 | 2.3 | 0 | 3.4 | 0.5 |
| 1×10-4 | 2.4 | 0 | 3.3 | 0.3 |
| 1×10-5 | 2.5 | 0 | 3.6 | 0.6 |
| 1×10-6 | 2.4 | 0 | 3.8 | 0.7 |
| 1×10-7 | 1.8 | 0 | 3.5 | 0.8 |
| 1×10-8 | 1.9 | 0 | 3.2 | 1.1 |
| 1×10-9 | 2.1 | 0 | 3.3 | 1.1 |
| 1×10-10 | 1.8 | 0.1 | 3.6 | 1.2 |
| 1×10-11 | 1.6 | 0.1 | 4.1 | 1.5 |
| 1×10-12 | 1.9 | 0.1 | 4.1 | 1.3 |
41. Климко Н.Н., Колбин А.С. Перспективы использования новых системных противогрибковых препаратов в педиатрии // Проблемы медицинской микологии. - 2005. - Т.7, №3. - С.3-11.
42. Климко Н.Н., Колбин А.С. Перспективы использования новых системных противогрибковых препаратов в педиатрии // Краткая Медицинская Энциклопедия. М.: "Советская Энциклопедия", издание второе, 1989.
43. Н.С.Багирова, Н.В.Дмитриева. Дрожжевые грибы: идентификация и резистентность к противогрибковым препаратам в онкогематологическом стационаре // Инфекции и антимикробная терапия. - 2001. - Т.3, N 6. - С.45-66.
44. Д.Л.Райд, П.К.Рубин, М.Р.Уолтерс. Клиническая фармакология и фармакотерапия. Издательство: Медицинская литература, 2009 г., 416 с.
45. Бронин Г.О., Тимаков A.M., Ковалева О.Л. Липидный комплекс амфотерицина В в лечении инвазивных микозов в гематологической практике // Вопросы гематологии, онкологии и иммунопатологии в педиатрии. - 2005. - Т.4, N 1. - С.69-76.
1. Соединения на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H, содержащие от 10 до 14 группировок пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов Со(II) и Cu(II), обладающие антикандидозной активностью в отношении Candida albicans, Candida krusei, Candida tropicalis, Candida parapsilosis и обеспечивающие воздействие на систему протеиназ Candida и компоненты клеточной стенки.
2. Способ получения соединений на основе комплексов гиперразветвленных полимеров Boltorn H по п.1, обладающих антикандидозной активностью, заключающийся в синтезе соединений, содержащих от 10 до 14 групп пропионовой или акриловой кислот и от 10 до 14 ионов металлов, с использованием последовательных реакций этерификации, замещения и присоединения.
