Способ оценки тяжести преэклампсии

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки тяжести преэклампсии в акушерстве. Способ оценки степени тяжести преэклампсии включает анализ плазмы периферической венозной крови беременных, вынашивающих плод мужского пола, после 20 недель беременности определяют концентрацию плодной ДНК в плазме периферической венозной крови и при ее содержании менее 0,9 нг/мл прогнозируют неосложненное течение беременности, при концентрации плодного генетического материала от 1,8 до 2,6 нг/мл прогнозируют преэклампсию средней степени тяжести и при концентрации 2,6 нг/мл и выше - преэклампсию тяжелой степени. Использование заявленного способа позволяет повысить достоверность оценки степени тяжести преэклампсии у беременных по уровню степени нарушения процессов плацентации. 5 з.п. ф-лы, 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для определения степени тяжести преэклампсии у женщин, вынашивающих плод мужского пола.

Известен способ оценки тяжести преэклампсии с помощью изучения содержания тромбоцитов в венозной крови, когда по уровню тромбоцитопении судят о степени тяжести преэклампсии (Преэклампсия: руководство. / Под ред. акад. РАМН Г.Т.Сухих, проф. Л.Е.Мурашко. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. С.226-228).

Недостатком данного способа является низкая степень его достоверности из-за наличия многочисленных механизмов тромбоцитопении (аутоимунный, связанный с диссеминированным внутрисосудистым свертыванием крови, анемией, изменением объема циркулирующей крови и другими), в том числе и не характерных для беременности, а также отсутствие четкой зависимости между степенью тяжести преэклампсии и выраженностью тромбоцитопении.

Известен способ диагностики тяжелых форм гестоза путем определения уровня гомоцистеина в плазме венозной крови и при его увеличении более чем в 2,2 раза от нормы диагностируют развитие тяжелой формы гестоза (Патент РФ №2259568, МПК 7 G01N 33/48, 2005 (аналог)).

Известен способ оценки тяжести преэклампсии у беременных путем определения в сыворотке крови беременных женщин содержания циркулирующего иммунного комплекса основного белка миелина с иммуноглобулином класса G в сроки беременности после 20 недели и при его значениях менее 0,1 мкг/мл судят о неосложненной беременности, при уровне от 0,1 до 0,2 мкг/мл - о преэклампсии легкой степени, при уровне от 0,2 до 0,5 мкг/мл - о преэклампсии тяжелой степени. (Патент РФ №2250468, МПК 7 G01N 33/564, 2005 (аналог)).

Недостатком известных способов является низкая степень их достоверности из-за отсутствия прямой связи с процессами, происходящими только при беременности, такими как образование плаценты.

Наиболее близким к заявляемому является способ оценки тяжести преэклампсии, заключающийся в том, что проводят исследование гепаринизированной плазмы крови беременной, при этом в ней определяют активность лейкоцитарной эластазы и при ее значении 0,08-0,1 Ед/мл определяют гестоз легкой степени, при активности лейкоцитарной эластазы 0,02-0,07 Ед/мл определяют гестоз средней степени тяжести, при активности лейкоцитарной эластазы менее 0,02 - тяжелый гестоз (Патент РФ №2209438, МПК 7 G01N 33/68, 2003 (аналог)).

Недостатком известного способа является недостаточная степень его достоверности, связанная с тем, что изменение активности лейкоцитарной эластазы в плазме крови происходит при многочисленных заболеваниях, в том числе у небеременных. Так, повышение уровня/активности данного фермента в плазме крови наблюдается при атеросклерозе, артериальной гипертензии, бронхоэктатической болезни, хронических бронхообструктивных заболеваниях, муковисцидозе, сахарном диабете II типа.

При создании изобретения решалась задача повышения достоверности оценки степени тяжести преэклампсии у беременных, вынашивающих плод мужского пола.

Технический результат - повышение достоверности оценки степени тяжести преэклампсии у беременных, вынашивающих плод мужского пола, по уровню степени нарушения процессов плацентации.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе оценки степени тяжести преэклампсии путем анализа плазмы периферической венозной крови беременных, вынашивающих плод мужского пола, после 20 недель беременности, согласно изобретению определяют концентрацию плодной ДНК в плазме периферической венозной крови и при ее содержании менее 0,9 нг/мл прогнозируют неосложненное течение беременности, при концентрации плодного генетического материала от 1,8 до 2,6 нг/мл прогнозируют преэклампсию средней степени тяжести и при концентрации 2,6 нг/мл и выше - преэклампсию тяжелой степени.

При этом согласно изобретению забор крови из периферической вены производят в количестве 5 мл в пробирку, содержащую этилендиаминтетрауксусную кислоту в качестве антикоагулянта.

При этом согласно изобретению плазму крови получают центрифугированием.

При этом согласно изобретению выделение внеклеточной ДНК проводят из 1000 мкл плазмы крови методом сорбции на магнитных частицах с использованием набора «РеалБест экстракция 1000» (ЗАО «Вектор-Бест», РФ).

При этом согласно изобретению концентрацию плодной ДНК в крови матери определяют по скорости накопления продуктов копирования участка хромосомы Y, в котором находится ген SRY.

При этом согласно изобретению для определения концентрации внеклеточной плодной ДНК используют тест-систему «Quantifiler Y» («Applied Biosystems», США).

Способ осуществляется следующим образом.

У беременной, вынашивающей плод мужского пола, после 20 недель беременности из периферической вены производят забор крови в количестве 5 мл в пробирку, содержащую этилендиаминтетрауксусную кислоту в качестве антикоагулянта. Традиционным способом, в частности центрифугированием, отделяют плазму крови. Выделение внеклеточной ДНК проводят из 1000 мкл плазмы крови методом сорбции на магнитных частицах с использованием набора «РеалБест экстракция 1000» (ЗАО «Вектор-Бест», РФ). Извлечение сорбированной на магнитных частицах внеклеточной ДНК осуществляется в 40 мкл элюирующего раствора. Для определения концентрации внеклеточной плодной ДНК используется тест-система «Quantifiler Y» («Applied Biosystems», США), с помощью которой на основе технологии полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени оценивают скорость накопления продуктов выборочного копирования участка хромосомы Y, в котором находится ген SRY. В каждую реакцию вносят по 4 мкл раствора ДНК, что по содержанию генетического материала соответствует 100 мкл плазмы крови; полимеразную цепную реакцию проводят в смеси объемом 50 мкл. Выборочное копирование фрагмента гена SRY используют для того, чтобы дифференцированно определить уровень ДНК плода в крови матери, т.к. данный ген связан с хромосомой Y, специфичной только для мужского пола.

Для выяснения клинической значимости способа заявителями обследовано 88 беременных со сроками беременности в 20-24 недели, у которых развилась преэклампсия (основная группа) и 102 пациентки без последующего присоединения преэклампсии (контрольная группа). В группе пациенток с присоединившейся преэклампсией средний уровень плодной ДНК составил 2,3 нг/мл и колебался в пределах 1,8-2,6 нг/мл при преэклампсии средней тяжести; средний уровень данного показателя при тяжелой форме преэклампсии составил 2,9 нг/мл и колебался в пределах 2,6-4,0 нг/мл. В контрольной группе средний уровень плодной ДНК составил 0,51 нг/мл с колебаниями 0,3-0,9 нг/мл. Различия показателей в группах были статистически значимы (р<0,05). Таким образом, можно сказать, что в способе оценки степени тяжести преэклампсии путем анализа плазмы периферической венозной крови беременной, вынашивающей мужской плод, после 20 недель беременности определяют уровень степени нарушения процессов плацентации по концентрации плодного генетического материала в плазме периферической венозной крови беременной и при его количестве менее 0,9 нг/мл диагностируют неосложненное течение беременности, при концентрации плодного генетического материала от 1,8 до 2,6 нг/мл диагностируют преэклампсию средней степени тяжести и при концентрации 2,6 нг/мл и выше - преэклампсию тяжелой степени.

Примеры конкретного применения.

Пример 1.

Беременная П., 32 года. Беременность первая, страдала бесплодием в течение 10 лет. Беременность протекает без осложнений. В сроке беременности 20-21 неделя объективно: АД 110/70 - 120/80 мм рт.ст., отеки и белок в моче отсутствуют, прибавка массы тела 320 г за 1 неделю. Жалоб при осмотре не предъявляет. По данным ультразвукового исследования: размеры плода соответствуют 20-21 недели беременности. У беременной произведен забор периферической венозной крови в количестве 5 мл в пробирку, содержащую этилендиаминтетрауксусную кислоту в качестве антикоагулянта. Традиционным способом, в частности центрифугированием, отделили плазму крови. Выделение внеклеточной ДНК проводили из 1000 мкл плазмы крови методом сорбции на магнитных частицах с использованием набора «РеалБест экстракция 1000» (ЗАО «Вектор-Бест», РФ). Извлечение сорбированной на магнитных частицах внеклеточной ДНК осуществлялось в 40 мкл элюирующего раствора. Для определения концентрации внеклеточной плодной ДНК использовалась тест-система «Quantifiler Y» («Applied Biosystems», США), с помощью которой на основе технологии полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в режиме реального времени оценивают скорость накопления продуктов выборочного копирования участка хромосомы Y, в котором находится ген SRY.

Концентрация плодной ДНК составила 2,1 нг/мл, что позволило прогнозировать развитие преэклампсии средней тяжести. При обследовании в сроке 34-35 недель у беременной П. объективно: АД - 160/110 мм рт.ст., ночной диурез снижен на 100 мл, выраженные отеки, суточная протеинурия 3,0 г/л. Беременная П. помещена в стационар с диагнозом: беременность 34-35 недель. Преэклампсия средней степени тяжести. Проведено интенсивное лечение. Беременность удалось пролонгировать в течение трех дней, проведено программированное родоразрешение. Родился новорожденный с массой тела 2800 г, ростом 49 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов.

Пример 2.

Беременная С., 22 года. Беременность первая, страдает ожирением II степени. Беременность протекает без осложнений. В сроке 20-21 неделя объективно: АД 100/70-110/80 мм рт.ст., отеки и белок в моче отсутствуют, прибавка массы тела 280 г за 1 неделю. Жалоб при осмотре не предъявляет. По данным ультразвукового исследования: размеры плода соответствуют 20-21 недели беременности.

Так же, как это описано в примере 1, проведено исследование уровня концентрации плодной ДНК в плазме крови матери.

Концентрация плодной ДНК составила 3,3 нг/мл, что позволило прогнозировать развитие тяжелой преэклампсии. При обследовании в сроке 32-33 недели у беременной С. жалобы на головную боль, ухудшение зрения. Объективно: АД - 180/110 мм рт.ст., выраженные отеки, суточный диурез снижен до 300 мл, суточная протеинурия 5,2 г/л. Беременная С. помещена в стационар с диагнозом: беременность 32-33 недели. Тяжелая преэклампсия. Проведено интенсивное лечение и родоразрешение путем операции кесарево сечение в течение 12 часов. Родился новорожденный с массой тела 2230 г, ростом 48 см, оценкой по шкале Апгар 7-8 баллов.

Пример 3.

Беременная М., 26 лет. Беременность вторая. Первая беременность закончилась самопроизвольным выкидышем 2 года назад. При осмотре жалоб не предъявляет. Обследование в сроке беременности 22 недели показало: АД 110/70-120/80 мм рт.ст., белка в моче нет, прибавка массы тела 350 г в 1 неделю. По данным УЗИ: беременность 22 недели, состояние плода соответствует гестационному сроку.

Так же, как это описано в примере 1, проведено исследование уровня плодной ДНК в плазме крови матери. Концентрация плодной ДНК составила 0,52 нг/мл, что позволило исключить возможность развития преэклампсии. При последующем наблюдении за беременной М. признаков преэклампсии не отмечалось. Роды произошли в срок 39-40 недель беременности и закончились рождением доношенного новорожденного с массой тела 3620 г и оценкой по шкале Апгар 8-9 баллов.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет повысить достоверность оценки степени тяжести преэклампсии у беременных, вынашивающих плод мужского пола, по уровню степени нарушения процессов плацентации, т.е. прогнозировать степень тяжести преэклампсии у беременных до появления развернутой клинической картины этого осложнения беременности. Это связано со способностью используемого метода количественно оценивать процессы нарушения плацентации до реализации их в процессы усугубления артериальной гипертензии и нарушения функции почек с помощью использования показателя, уровень которого непосредственно отражает степень нарушения процессов плацентации, лежащих в основе развития преэклампсии, и не зависит от влияния сопутствующей патологии, так как при нарушении развития плаценты происходит выброс в материнский кровоток частей плацентарной ткани, содержащих ДНК плодного происхождения. Все это позволяет осуществлять прогнозирование преэклампсии, когда обычно используемые способы не позволяют своевременно и точно осуществить прогноз этого осложнения беременности.

Прогностическая ценность метода относительно развития тяжелой преэклампсии: чувствительность 85%, специфичность 68%. Диагностическая эффективность теста 12,04.

Прогностическая ценность метода относительно развития преэклампсии средней степени тяжести: чувствительность 80%, специфичность 62%. Диагностическая эффективность теста 6,54. Высокая достоверность заявленного способа оценки тяжести преэклампсии позволяет провести необходимые профилактические и лечебные мероприятия и своевременно скорректировать план ведения беременной женщины, что позволяет предотвратить развитие осложнений и нарушений развития плода.

1. Способ оценки степени тяжести преэклампсии путем анализа плазмы периферической венозной крови беременных, вынашивающих плод мужского пола, после 20 недель беременности, отличающийся тем, что определяют концентрацию плодного генетического материала в плазме периферической венозной крови и при его количестве менее 0,9 нг/мл прогнозируют неосложненное течение беременности, при концентрации плодного генетического материала от 1,8 до 2,6 нг/мл прогнозируют преэклампсию средней степени тяжести и при концентрации 2,6 нг/мл и выше - преэклампсию тяжелой степени.

2. Способ оценки степени тяжести преэклампсии по п.1, отличающийся тем, что забор крови из периферической вены производят в количестве 5 мл в пробирку, содержащую этилендиаминтетрауксусную кислоту в качестве антикоагулянта.

3. Способ оценки степени тяжести преэклампсии по п.1 или 2, отличающийся тем, что плазму крови получают центрифугированием.

4. Способ оценки степени тяжести преэклампсии по п.1, отличающийся тем, что выделение внеклеточной ДНК проводят из 1000 мкл плазмы крови методом сорбции на магнитных частицах с использованием набора «РеалБест экстракция 1000».

5. Способ оценки степени тяжести преэклампсии по п.1, отличающийся тем, что концентрацию плодной ДНК в крови матери определяют по скорости накопления продуктов копирования участка хромосомы Y, содержащего ген SRY.

6. Способ оценки степени тяжести преэклампсии по п.1, отличающийся тем, что для определения концентрации внеклеточной плодной ДНК используют тест-систему «Quantifiler Y».