Ассоциированная вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных


 


Владельцы патента RU 2480237:

Открытое акционерное общество "Институт биотехнологий ветеринарной медицины" (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения ассоциированной вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных. Охарактеризованная вакцина содержит следующие компоненты при соотношениях мас.%:

- суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)×107 в 1 см3 физиологического раствора - 1,0-1,2;

- сапонин - 1,5-2,1;

- инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum «0-1» ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг %, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0%, предварительно суспендированной в гликолевом буфере с рН 8,4-8,6 - остальное.

Представленное изобретение позволяет получить высокоиммуногенный продукт, обеспечивающий формирование длительного и напряженного иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза. 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения ассоциированной вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.

Известна вакцина для профилактики некробактериоза рогатого скота, содержащая в равных объемных соотношениях инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из местных эпизоотических культур возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 1816348, МПК A61K 39/00, 1995).

Однако известная вакцина недостаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.

Известна вакцина против сибирской язвы животных, содержащая суспензию живых спор бескапсульного, авирулентного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ возбудителя сибирской язвы (ТУ 9388-004-00008064-99). Известна также инактивированная вакцина против некробактериоза животных, содержащая инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из производственного штамма "0-1" ВИЭВ возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 2109519, МПК A61K 39/02, A61K 39/114, 1998).

Существующие моновакцины применяют независимо друг от друга и не создают иммунитет у животных одновременно против сибирской язвы и некробактериоза. Использование этих вакцин в отдельности требует удвоенного количества трудозатрат и оказывает более сильное стрессовое состояние животных.

Известна ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе, и адъювант (Патент RU №2191599, 2002).

Однако известная ассоциированная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.

Задачей изобретения является повышение качества целевого продукта за счет получения высокоиммуногенной вакцины, обеспечивающей формирование более длительного и напряженного иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.

Технический результат изобретения достигается в ассоциированной вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, содержащей инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе, и адъювант тем, что инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин адсорбирован 12-15% гидроокисью алюминия в гликоколевом буфере с pH 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0%, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (5-5,2)×107 в 1 см3 физиологического раствора, а в качестве адъюванта содержит сапонин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)×107 в 1 см3
физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 1,5-2,1
Инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5-6 мг %, адсорбированный 12-15% гидроокисью алюминия в гликоколевом буфере с
pH 8,4-8,6, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0% остальное

Ассоциированную вакцину вводят однократно крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям и северным оленям внутрикожно при помощи безыгольного инъектора в объеме 0,2 см3.

Сапонин-глюкозид, обусловливающий специфические свойства так наз. мыльного корня. Химический состав его, по Рохледеру, C32H54O18; /Л.Физер, М.Физер. Органическая химия. Том II. М. Химия, 1970. - с.558/.

Предложена ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, создающая длительный иммунитет у привитых животных одновременно против двух заболеваний, при этом по иммуногенности она превосходит известную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза за счет использования не только в качестве адъюванта сапонина, а также найденного оптимального соотношения адсорбента лейкоцидин-экзотоксина - гидроокиси алюминия, взятой в определенных технологических условиях. Также уменьшение концентрации живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма в сотни раз по сравнению с известным техническим решением снижает реактогенность целевого продукта.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Ассоциированную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза готовят следующим образом.

Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин-экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее полученный антиген - лейкоцидин-экзотоксин сорбируют на 12% гидроокиси алюминия, взятой в конечной концентрации 1,8%, предварительно суспендированной в гликоколевом буфере с pH 8,4. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 97,5 г инактивированному формалином лейкоцидин-экзотоксину с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг%, адсорбированному 12% гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 1,8%, предварительно суспендированной в гликоколевом буфере с pH 8,4, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией 5,0×107 в 1 см3 физиологического раствора и 1,5 г сапонина, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией 5,0×107 в 1 см3
физиологического раствора 1,0
Сапонин 1,5
Инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 5,5 мг %, адсорбированный 12% гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 1,8%, предварительно
суспендированной в гликоколевом буфере pH 8,4 остальное

Вакцину тщательно перемешивают до получения однородной взвеси.

Пример 2. Ассоциированную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза готовят следующим образом.

Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин-экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,5%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 6,0 мг% с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее полученный антиген - лейкоцидин-экзотоксин сорбируют на 15% гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 2,0%, предварительно суспендированной в гликоколевом буфере с pH 8,6. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина.

К 96,7 г инактивированному формалином лейкоцидин-экзотоксину с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 6 мг%, адсорбированному 15% гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 2,0%, предварительно суспендированной в гликоколевом буфере с pH 8,6, добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией 5,2×107 в 1 см3 физиологического раствора и 2,1 г сапонина, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией (5-5,2)×107 в 1 см3
физиологического раствора 1,2
Сапонин 2,1
Инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин с м.м. 18-20 кДа из штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием белка 6 мг %, адсорбированный
15% гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 2,0%, предварительно суспендированной в
гликоколевом буфере с pH 8,6 остальное

Вакцину тщательно перемешивают до получения однородной взвеси.

Пример 3. Полученную по примерам 1 и 2, а также по прототипу, ассоциированную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела животным по 0,2 см3 (2 раза по 0,1 см3): морским свинкам, овцам и северным оленям.

Результаты испытания известной и предлагаемой ассоциированных вакцин против сибирской язвы и некробактериоза представлены в таблицах 1 и 2.

Таким образом, ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза обладает более высокой иммуногенной активностью, способной защитить животных одновременно от сибирской язвы и некробактериоза /продлевает срок иммунитета с одного года до 1,5 лет для профилактики сибирской язвы и с полгода до 1,5 лет - для профилактики некробактериоза/.

Таблица 1
Сравнительная характеристика показателей иммуногенности ассоциированных вакцин против сибирской язвы и некробактериоза через 1,5 года после вакцинации
Вакцина Вид животного Кол-во животных (голов) Результаты контрольного заражения сибирской язвой
голов % защиты
выжило пало
Состав 1* морские свинки 35 31 4 90
овцы 10 10 0 100
Состав 2** морские свинки 35 32 3 91
овцы 10 9 1 90
Прототип морские свинки 35 0 35 0
овцы 10 0 10 0
Примечание:
* - состав ассоциированной вакцины, полученный согласно примеру 1
** - состав ассоциированной вакцины, полученный согласно примеру 2
Таблица 2
Сравнительная характеристика показателей иммуногенности ассоциированных вакцин против сибирской язвы и некробактериоза через 1,5 года после вакцинации
Вакцина Вид животного Кол-во животных (голов) Результаты контрольного заражения некробактериозом
голов % защиты
Появление признаков болезни Отсутствие заболевания
Состав 1* олени 10 0 10 100
овцы 10 0 10 100
Состав 2** олени 10 0 10 100
овцы 10 0 10 100
Прототип олени 10 10 0 0
овцы 10 10 0 0
Примечание:
* - состав ассоциированной вакцины, полученный согласно примеру 1
** - состав ассоциированной вакцины, полученный согласно примеру 2

Ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobactcrium nccrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе, и адъювант, отличающаяся тем, что инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, адсорбированный 12-15%-ной гидроокисью алюминия, взятой в конечной концентрации 1,8-2,0%, предварительно суспендированной в гликоколевом буфере с рН 8,4-8,6, суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ используют с исходной концентрацией (5-5,2)·107 в 1 см3 физиологического раствора, а в качестве адъюванта содержит сапонин при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Суспензия живых спор сибиреязвенного вакцинного
штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией
(5-5,2)·107 в 1 см3 физиологического раствора 1,0-1,2
Сапонин 1,5-2,1
Инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин с м.м.
18-20 кДа из штамма Fusobacterium
necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием
белка 5,5-6 мг %, адсорбированный 12-15%
гидроокисью алюминия, взятой в конечной
концентрации 1,8-2,0%, предварительно
суснендированной в гликоколевом буфере с pH 8,4-8,6 Остальное



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к различным наборам. .

Изобретение относится к области медицины и касается комбинированных вакцин с низкой дозой конъюгата HIB. .
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии. .
Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии. .
Изобретение относится к технологии производства диагностического препарата, необходимого для здравоохранения и ветеринарии при оценке напряженности противосибиреязвенного иммунитета и диагностики инфекции у лиц, привлекаемых к работам с возбудителем сибирской язвы.
Изобретение относится к области медицины, в частности к микробиологии и иммунологии, и может быть использовано при разработке вакцины против мелиоидоза. .
Изобретение относится к медицине, в частности к микробиологии и иммунологии, и может быть использовано для иммунопрофилактики мелиоидоза. .
Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к биотехнологии и касается варианта белка субтилизина Bacillus amyloliguefaciens с заменой Y217L, содержащий Т-клеточный эпитоп, при этом указанный Т-клеточный эпитоп указанного варианта включает одну или несколько аминокислотных замен, выбранных из группы, состоящей из остатков, соответствующих положениям 76, 79 и 122, где указанный вариант субтилизина необязательно имеет замену в одном или нескольких из положений 3, 31, 40, 41, 46, 47, 48, 50, 76, 101, 104, 107, 111, 128, 147, 154, 181, 182, 183, 185, 206, 215, 216, 218, 238, 247, 248, 250, 254, 258, 262.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности производству вакцин. .
Изобретение относится к области биотехнологии. .

Изобретение относится к медицинской микробиологии. .
Изобретение касается вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способа ее получения. Представленная вакцина содержит инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, 1-10% инактивированной бактериальной массы из указанного штамма с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, глицерин и смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант. Способ получения вакцины включает культивирование штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирование его формалином, отделение бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделение из культуральной жидкости экзотоксина - лейкоцидина, его очистку и концентрирование ультрафильтрацией на полых волокнах, добавление суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ и сапонина, а также добавление 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, глицерина и смеси минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора. Представленные изобретения позволяют получить вакцину, обеспечивающую устойчивый иммунитет. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 7 пр., 1 табл.
Наверх