Набор последовательностей для таргетинга экспрессии и контроля посттрансляционных модификаций рекомбинантного полипептида
Изобретение относится к биохимии и представляет собой пептид, который позволяет осуществлять удержание рекомбинантных полипептидов в эндоплазматическом ретикулуме растительных клеток. Изобретение относится также к нуклеиновой кислоте, кодирующей пептид, вектору, растительной клетке, содержащей вектор, а также к способу производства посттрансляционно модифицированного полипептида, включающему стадии трансфекции или трансформации клетки по меньшей мере одной нуклеиновой кислотой-вектором, рост трансфицированной клетки и сбор посттрансляционно модифицированного полипептида. Настоящее изобретение позволяет увеличивать выход рекомбинантного полипептида. 8 н. и 7 з.п. ф-лы, 31 ил., 3 табл, 4 пр.
Текст описания приведен в факсимильном виде.
1. Пептид, который позволяет осуществлять удержание рекомбинантных полипептидов в эндоплазматическом ретикулуме растительных клеток, имеющий последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO 1, SEQ ID NO 4 и SEQ ID NO 8.
2. Применение пептида по п.1 для получения рекомбинантного полипептида, представляющего собой фермент, антитело или его часть или белок-репортер.
3. Применение по п.2, отличающееся тем, что полипептид представляет собой фермент, причем указанный фермент выбран из группы, включающей гликозидазу, гликозилтрансферазы, протеазу, киназу, декарбоксилазу, эпимеразу, переносчик нуклеотид-сахар.
4. Нуклеиновая кислота, кодирующая пептид по п.1.
5. Вектор экспрессии, содержащий нуклеиновую кислоту по п.4.
6. Растительная клетка, осуществляющая продукцию рекомбинантного полипептида, содержащая по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту-вектор по п.5.
7. Растительная клетка по п.6, отличающаяся тем, что указанный рекомбинантный полипептид представляет собой гетерологичный полипептид.
8. Растение, осуществляющее продукцию рекомбинантного полипептида, содержащее по меньшей мере одну нуклеиновую кислоту-вектор по п.5.
9. Растение по п.8, отличающееся тем, что указанный рекомбинантный полипептид представляет собой гетерологичный полипептид.
10. Растение по п.8 или 9, выбранное из группы, состоящей из Alfalfa, Arabidospsis thaliana, Nicotiana tabacum, Glycine max, Lycopersicon esculentum, Solarium lycopersicum.
11. Способ получения посттрансляционно модифицированного полипептида, включающий следующие стадии:
- трансфекцию или трансформацию растительной клетки по меньшей мере одной нуклеиновой кислотой-вектором по п.5, причем указанный вектор кодирует пептид по п.1 и дополнительно содержит последовательность рекомбинантного полипептида, который представляет собой полипептид до посттрансляционной модификации,
- рост трансфицированной клетки; и
- сбор посттрансляционно модифицированного полипептида;
где посттрансляционная модификация пептида осуществляется на мембранах компартментов эндоплазматического ретикулума (ЭПР).
12. Способ по п.11, где полипептид продуцируется совместно с запасным белком.
13. Способ по п.11, где растительные клетки представляют собой клетки растения, выбранного из группы, включающей Medicago sativa, Arabidospsis thaliana, Nicotiana tabacum, Glycine max, Lycopersicon esculentum, Solanum lycopersicum.
14. Применение пептида по п.1 для осуществления специфического удержания рекомбинантного полипептида, слитого с указанным пептидом, в связанной с мембраной форме в ЭПР.
15. Применение по п.14, где рекомбинантный полипептид представляет собой мембранный белок, и пептид позволяет осуществлять заякоривание указанного мембранного белка в ЭПР.
