Способ оценки эффективности применения иммуномодулятора имунофана при экспериментальной холере



 


Владельцы патента RU 2481791:

Федеральное государственное учреждение здравоохранения "Ростовский-на-Дону ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательский противочумный институт" Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (RU)

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к изучению эффективности иммуномодулятора для профилактики и лечения холеры. До заражения кроликам весом 1,5-2,0 кг проводят 10 инъекций через день имунофана в дозе 0,2 мкг, разведенных в 0,3 мл новокаина. Затем животных выдерживают без пищи 24 часа. Далее проводят заражение введением в изолированную петлю тонкого кишечника вирулентного штамма холерного вибриона. Под эфирным наркозом извлекают петли тонкого кишечника, накладывают лигатуры, перевязывают одинаковые участки кишечника длиной 12 см с промежутками между ними 4-5 см. При этом в одну лигированную петлю вводят 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия для контроля, в другую опытную петлю - 109 клеток 24-часовой культуры Vibrio cholerae 5879. После этого брюшную стенку зашивают и через 18 часов животных забивают для последующего изучении и оценки эффективности применения имунофана. Оценку проводят по наличию в опытных перевязанных петлях тонкого кишечника энтеропатогенного эффекта, выраженность которого оценивают в крестах, и наличию холерогенного эффекта. Последний рассчитывают по формуле K=Vжп, где K - коэффициент растяжения петли, Vж - объем жидкости, Lп - длина петли. Если в опытных петлях энтеропатогенный эффект отсутствует и K<1,0, считают использование имунофана эффективным. Способ обеспечивает объективную оценку эффективности иммунофана при холере. 2 пр., 2 табл.

 

Предлагаемое изобретение относится к медицине, в частности к вопросу изучения эффективности применения иммуномодуляторов для профилактики и лечения особо опасных инфекций, а именно холеры.

В настоящее время существует проблема при лабораторных исследованиях особо опасных инфекций, таких как холера, точно имитировать болезнь на экспериментальных животных для определения их патогенеза и оценивать возможность применения иммунопрепаратов при этом заболевании.

Известен способ оценки эффективности применения иммуномодулятора тималина при острых гнойных хирургических заболеваниях (см. патент RU № 2147436, кл. A61K 35/26, AK 35/00, от 20.04.2000 г.), заключающийся в определении уровня лейкоцитов в крови больного, и при отсутствии его повышения относительно нормы расценивают состояние больного как вторичное иммунодефицитное и назначают тимолин, после лечения которым подсчитывают количество лейкоцитов в 1 мкл крови по определенной формуле, и если коэффициент эффективности лечения тималином (КЭ)>1,2, то лечение считают эффективным.

Однако этот известный метод не может использоваться при холере в связи с тем, что это заболевание относится к особо опасным кишечным инфекциям, поэтому требуется другой способ оценки эффективности применения иммуномодуляторов при этой инфекции.

Цель предлагаемого изобретения состоит в разработке способа, позволяющего оценить эффективность применения иммуномодулятора имунофана у инфицированных холерой экспериментальных животных по его влиянию на наличие энтеропатогенного и холерогенного эффектов в изолированной петле тонкого кишечника взрослых кроликов.

Поставленная цель достигается тем, что предвадительно перед заражением животных в изолированную петлю тонкого кишечника взрослых кроликов весом 1,5-2,0 кг вводят через день иммуномодулятор имунофан в дозе 0,2 мкг, разведенный в 0,3 мл новокаина в количестве 10 инъекций, затем животных выдерживают без пищи 24 часа, после этого под эфирным наркозом извлекают петли тонкого кишечника, накладывают лигатуры, перевязывают одинаковые участки кишечника длиной 12 см с промежутками между ними 4-5 см, при этом в одну лигированную петлю вводят 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия для контроля, в другую опытную петлю - 109 клеток 24-часовой культуры Vibrio cholerae 5879, после брюшную стенку зашивают и через 18 часов животных забивают для последующего изучения и оценки эффективности применения имунофана, которую проводят по наличию в опытных перевязанных петлях тонкого кишечника энтеропатогенного эффекта, выраженность которого оценивают в крестах, и наличию холерогенного эффекта, последний рассчитывают по формуле

где

K - коэффициент растяжения петли;

Vж - объем жидкости;

Lп - длина петли,

если в опытных петлях энтеропатогенный эффект отсутствует и K<1,0, считают использование имунофана эффективным.

Способ осуществляется следующим образом:

Взрослым кроликам весом 1,5-2 кг вводят иммуномодулятор имунофан в дозе 0,2 мкг, разведенного в 0,3 мл новокаина, через день в количестве 10 инъекций. Контрольные животные иммуномодулятор не получают. Животных после иммунотерапии и контрольных кроликов выдерживают без пищи 24 часа. Под эфирным наркозом делают разрез по средней линии живота и извлекают петли тонкого кишечника. На 60 см проксимальнее аппендикса накладывают лигатуры, перевязывая одинаковые участки кишечника длиной 12 см с промежутками между ними 4-5 см. В одну лигированную петлю вводят 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия (контрольная петля), в другую - 109 клеток 24-часовой культуры Vibriocholerae 5879, выращенной в пептонной воде и суспендированной в 1 мл пептонного раствора (опытная петля). После этого брюшную стенку зашивают. Спустя 16-18 часов животных забивают воздушной эмболией и вскрывают.

Об эффективности использования имунофана судят по наличию и выраженности энтеропатогенного и холерогенного эффектов.

Энтеропатогенный эффект оценивают по патологоанатомической картине в опытной перевязанной петле тонкого кишечник, а именно: наличию отека слизистой и подслизистой оболочек, кровоизлияний и некрозов покровного эпителия ворсин. Выраженность этого эффекта оценивают в крестах. Отсутствие подобных нарушений свидетельствует об эффективности использования иммуномодулятора имунофана.

Холерогенный эффект оценивают по коэффициенту растяжения опытной петли, рассчитываемого по формуле

где

K - коэффициент растяжения петли;

Vж - объем жидкости;

Lп - длина петли,

если K<1,0, то применение иммуномодулятора является эффективным.

Таким образом, об эффективности применения имунофана судят по отсутствию энтеропатогенного (нет отека слизистой и подслизистой оболочек, кровоизлияний и некрозов покровного эпителия ворсин) и холерогенного эффектов (K<1,0) в опытных изолированных петлях экспериментальных животных.

У животных, получавших имунофан, энтеропатогенный и холерогенный эффекты отсутствовали.

Пример 1. Влияние имунофана на энтеропатогенный эффект в тонком кишечнике взрослых кроликов, зараженных холерой.

Предварительно пяти взрослым кроликам весом 1,5-2 кг вводят иммуномодулятор имунофан в дозе 0,2 мкг, разведенного в 0,3 мл новокаина, через день в количестве 10 инъекций. Пять взрослых кроликов (контрольные животные) имунофан не получали. Животных после иммунотерапии и контрольных кроликов выдерживают без пищи 24 часа. Затем, используя модель изолированной петли тонкого кишечника взрослого кролика, проводят заражение животного по вышеописанной схеме 24-часовой культурой Vibrio cholerae 5879, выращенной в пептонной воде и суспендированной в 1 мл пептонного раствора. После этого брюшную стенку зашивают. Через 18 часов животных забивают воздушной эмболией и вскрывают.

Затем проводят оценку патологоанатомической картины в опытных перевязанных петлях тонкого кишечника животных из опытной и контрольной групп. У животных, не получавших имунофан, наблюдались ярко выраженные (+++ и ++++) отек слизистой и подслизистой оболочек, кровоизлияния и некроз покровного эпителия ворсин, что свидетельствовало о наличии энтеропатогенного эффекта. У кроликов, которым вводили иммуномодулятор имунофан, никаких патоморфологических изменений не выявлялось, то есть энтеропатогенный эффект отсутствовал.

Результаты влияния иммуномодулятора на выраженность энтеропатогенного эффекта при холере в изолированной петле тонкого кишечника взрослого кролика представлены в таблице 1.

Таким образом, отсутствие энтеропатогенного эффекта у инфицированных холерой экспериментальных животных, получавших иммунотерапию имунофаном, свидетельствует об эффективности применения этого иммуномодулятора при холере.

Пример 2. Влияние имунофана на выраженность холерогенного эффекта у взрослых кроликов, зараженных холерой.

Так же, как в примере 1, проводят иммунотерапию имунофаном у пяти взрослых кроликов. Пять кроликов (контрольные животные) имунофан не получали. Затем у опытных и контрольных животных после 24-часового голодания перевязывали петли тонкого кишечника вышеописанным способом. В одну лигированную петлю вводили 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия (контрольная петля), в другую (опытная петля) - 109 клеток 24-часовой культуры Vibriocholerae 5879, выращенной в пептонной воде и суспендированной в 1 мл пептонного раствора. Через 18 часов животных забивают воздушной эмболией и вскрывают.

О влиянии имунофана на холерогенный эффект судят по коэффициенту растяжения опытной петли (таблица 2). В группе контрольных животных в зараженной опытной петле наблюдался ярко выраженный холерогенный эффект (K>1,0), у опытных кроликов, получивших иммунотерапию, этот эффект отсутствовал (K<1).

Данные, представленные в таблице 2, свидетельствуют о том, что применение иммуномодулятора имунофана при холере является эффективным.

Использование предлагаемого изобретения позволяет оценить эффективность применения иммуномодуляторов, в частности имунофана, у экспериментальных животных, инфицированных холерой, используя для этого модель изолированной петли тонкого кишечника взрослых кроликов. Результаты, полученные при изучении эффективности иммуномодулятора имунофана с предложенного изобретения на экспериментальных животных, позволяют рекомендовать этот иммуномодулятор для профилактики и лечения холеры у людей.

Таблица 1
Животные Патоморфологические изменения (++++)
получавшие имунофан:
1 кролик (вес 1,5 кг) не выявлены
2 кролик (вес 1,7 кг) не выявлены
3 кролик (вес 2,0 кг) не выявлены
4 кролик (вес 1,95 кг) не выявлены
5 кролик (вес 1,65 кг) не выявлены
Контрольные (не получавшие мунофан):
1 кролик (вес 1,58 кг) ++++
2 кролик (вес 1,70 кг) ++++
3 кролик (вес 2,0 кг) +++
4 кролик (вес 1,85 кг) ++++
5 кролик (вес 1,60 кг) +++
Таблица 2
Животные Объем жидкости Длина петли Коэффициент растяжения петли (K)
получавшие имунофан:
1 кролик (вес 1,5 кг) 1,2 12,0 0,10
2 кролик (вес 1,7 кг) 1,0 11,9 0,08
3 кролик (вес 2,0 кг) 1,4 11,8 0,12
4 кролик (вес 1,95 кг) 1,2 12,0 0,10
5 кролик (вес 1,65 кг) 1,15 11,5 0,10
Контрольные (не
получавшие имунофан):
1 кролик (вес 1,58 кг) 10,9 10,0 1,10
2 кролик (вес 1,70 кг) 11,6 10,1 1,15
3 кролик (вес 2,0 кг) 12,0 9,8 1,22
4 кролик (вес 1,85 кг) 10,6 10,5 1,00
5 кролик (вес 1,60 кг) 11,2 11,3 1,00

Способ оценки эффективности применения иммуномодулятора имунофана при экспериментальной холере, включающий заражение животных в изолированную петлю тонкого кишечника взрослых кроликов вирулентным штаммом холерного вибриона, при этом до заражения холерой животным весом 1,5-2,0 кг вводят через день иммуномодулятор имунофан в дозе 0,2 мкг, разведенный в 0,3 мл новокаина, в количестве 10 инъекций, затем животных выдерживают без пищи 24 часа, после этого под эфирным наркозом извлекают петли тонкого кишечника, накладывают лигатуры, перевязывают одинаковые участки кишечника длинной 12 см с промежутками между ними 4-5 см, при этом в одну лигированную петлю вводят 1 мл 0,9% раствора хлорида натрия для контроля, в другую опытную петлю - 109 клеток 24-часовой культуры Vibrio cholerae 5879, после брюшную стенку зашивают и через 18 часов животных забивают для последующего изучения и оценки эффективности применения имунофана, которую проводят по наличию в опытных перевязанных петлях тонкого кишечника энтеропатогенного эффекта, выраженность которого оценивают в крестах, и наличию холерогенного эффекта, последний рассчитывают по формуле

где K - коэффициент растяжения петли;
Vж - объем жидкости;
Lп - длина петли,
если в опытных петлях энтеропатогенный эффект отсутствует и K<1,0, считают использование имунофана эффективным.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к моделированию постишемической почечной недостаточности. .

Изобретение относится к экспериментальной медицине, преимущественно к хирургии, патофизиологии, патанатомии, и может быть использовано при изучении морфогенеза постспленэктомического спленоза, а также при разработке новых методов аутотрансплантации селезеночной ткани, лечения гипоспленизма.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования бактериального кератита. .

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования возрастной макулярной дегенерации. .

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к моделированию остеопороза для изучения состояний, связанных с остеопорозом, и особенностей клинического течения травм, лечения травм у пациентов с этим заболеванием.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и касается разработки способов коррекции эндотелиальной дисфункции. .
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной гепатологии, фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемических и реперфузионных повреждений печени в эксперименте.

Изобретение относится к области экспериментальной физиологии и фармакологии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и патологической физиологии, и может быть использовано при изучении периферического гуморального механизма рвоты у мелких лабораторных животных (например, крысы).

Изобретение относится к соединению формулы (1) в которой Аr представляет собой группу формулы (Аr-1) или (Аr-2) в которой R1 представляет собой галоген, R2 представляет собой водород, R3 представляет собой водород, R4 представляет собой водород, алкил или алкенил, Х представляет собой атом азота или СН, R5 и R6 каждый представляет собой водород и h равно 1; l равно 1 или 2; m равно 1 или 2; n равно 0, 1 или 2; о равно целому числу от 0 до 3, при условии, что n и о не равны одновременно 0.

Изобретение относится к новому липидному соединению общей формулы (I), в которой n=0; R1 и R2 являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, С1 -С7алкильной группы, атома галогена и С1 -С7алкокси группы; Х представляет собой COR3 или CH2OR4, где R3 выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, С1-С 7алкокси и амино; и R4 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С7алкила или С1 -С7ацила, Y представляет собой С9-С 21алкен с одной или несколькими двойными связями в Е- или Z-конфигурации, при этом цепь Y является незамещенной и содержит двойную связь в -3 положении; при условии, что R1 и R2 не могут одновременно представлять собой атом водорода.
Изобретение относится к области медицины и фармакологии и представляет собой способ пробиотической коррекции постинтоксикационного психоза у больных синдромом зависимости от алкоголя, заключающийся в восстановлении функционирования печени за счет повышения детоксикационной и метаболической функций с применением БАД, содержащих пробиотические культуры бифидобактерии в дозе 106 КОЕ/г 3 раза в сутки и лактобактерии в дозе 108 КОЕ/г 3 раза в сутки в течение 5 дней.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и анестезиологии, и может быть использовано для анестезиологического пособия при оперативном лечении онкологических больных с сопутствующей сердечно-сосудистой недостаточностью.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу обеспечения сопротивляемости простудам и вирусу гриппа. .
Изобретение относится к медицине и предназначено для обезболивания при бужировании пищевода после ожога. .
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии и пульмонологии, и может быть использовано для улучшения течения послеоперационного периода у больных с вентральными грыжами.

Изобретение относится к области иммунологии. .

Изобретение относится к области иммунологии. .
Наверх