Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии



 


Владельцы патента RU 2484458:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина" (RU)

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии может быть применен в лабораториях для контроля качества продуктов животного происхождения, определения в кормовых культурах остаточных количеств имидаклоприда, а также осуществления прижизненной или посмертной диагностики токсикоза при случайных острых отравлениях животных. Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии состоит из отбора пробы, экстракции, фильтрации, дегидратации натрия сульфатом безводным, упаривания, введения растворенного сухого остатка в жидкостный хроматограф, обработки результатов анализа. При этом в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг. Экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток вносят в жидкостный хроматограф «Хромос - ЖХ 301» с детектором спектрофотометрическим UVV 104М, используют колонку Диасфер - 110С - 16 (150×4) мм с размером пор сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил - вода в соотношении 30:70. Техническим результатом изобретения является повышение чувствительности, избирательности метода и сокращение времени проведения анализа в 2 раза. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств инсектицида в органах и тканях животных при подозрении на отравление имидаклопридом, а также в продуктах животного происхождения.

Известен способ определения имидаклоприда в воде, включающий экстракцию имидаклоприда гексаном, с последующей переэкстракцией в дихлорметан, фильтрацию и дегидратацию безводным натрия сульфатом, упаривание и хроматографирование на жидкостном хроматографе с ультрафиолетовым детектором. [Методические указания по определению имидаклоприда в воде, почве, огурцах, томатах, сахарной свекле, картофеле, перце и баклажанах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. http://www.opengost.ru].

Недостатками данного способа являются его низкая чувствительность для проб биологического материала. Использование большой навески способствует образованию большого количества коэкстрактивных веществ, мешающих проведению анализа и требующих включения этапа очистки экстракта, что ведет к снижению чувствительности метода и увеличению времени для проведения анализа.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому способу является определение имидаклоприда в картофеле, огурцах, томатах и томатном соке, которое заключается в отборе проб массой 20-25 г, последующей двукратной экстракции 75%-ным водным раствором ацетона, фильтрации через бумажный фильтр «синяя лента» в колбу Бунзена, упаривании объединенного экстракта на ротационном испарителе до полного удаления ацетона, двукратной переэкстракции насыщенным водным раствором хлорида натрия и хлороформом, пропускании через слой безводного сульфата натрия, выпаривании экстракта досуха на вакуумном ротационном испарителе, после чего сухой остаток растворяют в ацетонитриле и переэкстрагируют в гексан дважды. Ацетонитрил упаривают на ротационном испарителе досуха и растворяют в метаноле и количественно с помощью микрошприца вводят в инжектор жидкостного хроматографа и хроматографируют при следующих условиях: жидкостный хроматограф с УФ-детектором. Длина волны УФ-детектора 270 нм. Стальная колонка (250×4,6 мм), с Интерсилом ODS-2. В качестве элюента используют подвижную фазу метанол-вода (40+60, об+об). Расход подвижной фазы 0,8 мл/мин. Время удерживания имидаклоприда 8,1 мин. Минимальное детектируемое количество имидаклоприда 10 нг. Линейный диапазон детектирования 10-100 нг.

Обработка результатов анализа. Количественное определение имидаклоприда в пробах растительных материалов вычисляют по формуле:

X = C × H 2 × V × 100 H 1 × P × R , где

X - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг;

C - концентрация стандартного раствора имидаклоприда, введенного в хроматограф, мкг/см3;

H1 - высота хроматографического пика стандарта имидаклоприда, мм;

H2 - высота хроматографического пика имидаклоприда в пробе, мм;

V - общий объем конечного раствора пробы, мл;

P - масса пробы, г;

R - среднее значение определения, найденное предварительно, %.

[Методические указания по определению имидаклоприда в картофеле, огурцах, томатах и томатном соке хроматографическими методами. Сборник №30: Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в пищевых продуктах, кормах и внешней среде. Киев, 2001. - С.80-87].

Недостатком данного метода определения имидаклоприда является его низкая чувствительность и избирательность для проб биологического материала, а также длительность проведения анализа.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является повышение чувствительности и избирательности способа, сокращение продолжительности проведения анализа.

Технический результат достигается тем, что способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, введение растворенного сухого остатка в хроматограф, обработку результатов анализа, в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток вносят в жидкостный хроматограф «Хромос - ЖХ 301» с детектором спетрофотометрическим UVV 104M, используют колонку Диасфер - 110С - 16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил - вода в соотношении 30:70.

Уменьшение массы пробы биологического объекта позволяет снизить количество коэкстрактивных веществ в экстракте, мешающих проведению анализа, что повышает чувствительность и избирательность метода.

Использование в качестве экстрагента ацетона связано с высокой растворимостью имидаклоприда в растворителе, быстрым испарением при выпаривании экстракта, которое проводят сразу после экстракции без этапа очистки. Очистка экстракта не требуется, так как ацетон хорошо растворяет остатки имидаклоприда и не смывает со дна колбы налет коэкстрактивных веществ, при этом потери имидаклоприда минимальны, что повышает чувствительность и избирательность метода, снижает его продолжительность.

Использование жидкостного хроматографа «Хромос - ЖХ 301» с детектором спетрофотометрическим UVV 104M и колонки Диасфер - 110С - 16 (150×4) мм с размером частиц сорбента 5 мкм, а также элюента, состоящего из смеси ацетонитрил - вода (30:70), позволяет получить острый, симметричный пик имидаклоприда, коэффициент ассиметрии которого близок к 1, а также сократить время удерживания его в колонке, что повышает чувствительность, избирательность метода и сокращает время проведения анализа в 2 раза.

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии осуществляют следующим образом. Берут, например, 100 мг органов или тканей, измельчают и экстрагируют 4 мл ацетона трижды по 15 минут. Экстракт фильтруют через воронку с бумажным фильтром «синяя лента», заполненным натрия сульфатом безводным, в грушевидную колбу для выпаривания и упаривают на ротационном испарителе при температуре водяной бани 40°С досуха. Сухой остаток растворяют в 1 мл ацетонитрила и 20 мкл вводят в жидкостный хроматограф «Хромос - ЖХ 301» с детектором спетрофотометрическим UVV 104M и программным обеспечением «Хромос». Рабочая длина волны 297 нм. Колонка Диасфер - 110C - 16 (150×4) мм с размером частиц сорбента 5 мкм. В качестве элюента используют подвижную фазу ацетонитрил - вода в соотношении 30:70. Скорость потока 1 мл/мин. Время удерживания имидаклоприда 2,937±0,298 мин. Объем вводимой пробы 20 мкл. Линейный диапазон детектирования 0,1-2,0 мкг/см3. Обработку результатов анализа проводят методом абсолютной градуировки, содержание имидаклоприда в биологических объектах (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

X = C × H 2 × V × 100 H 1 × P × R , где

X - содержание имидаклоприда в пробе, мг/кг;

C - концентрация стандартного раствора имидаклоприда, введенного в хроматограф, мкг/см3;

H1 - высота хроматографического пика стандарта имидаклоприда, мм;

H2 - высота хроматографического пика имидаклоприда в пробе, мм;

V - общий объем конечного раствора пробы, мл;

P - масса пробы, г;

R - среднее значение определения, найденное предварительно, %.

Метрологическая характеристика метода определения представлена таблице 1.

Таблица 1
Метрологическая характеристика метода определения имидаклоприда в биологических объектах(n=5, Р=0,95)
Анализируемая проба Предел количественного определения, мг/кг Среднее значение определения, % Стандартное отклонение S, % Доверительный интервал при α=0,05, %
Кровь 0,0002 98,2 0,84 97,16-99,24
Содержимое желудка 0,001 98,0 1,0 96,76-99,24
Почка 0,001 98,4 0,55 97,72-99,08
Легкое 0,001 98,6 0,55 97,92-99,28
Мышечная ткань 0,001 98,8 0,45 98,24-99,36

Анализ метрологических характеристик способа определения имидаклоприда в биологических объектах показывает высокую чувствительность и избирательность за счет уменьшения навески пробы и точного подбора экстрагента - ацетона. Исключение этапов очистки, колонки Диасфер - 110С - 16 (150×4) мм с размером частиц сорбента 5 мкм, а также подвижной фазы ацетонитрил - вода в соотношении 30:70 позволяет сократить продолжительность проведения анализа в два раза.

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии прост и экономичен в осуществлении.

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии может быть применен в лабораториях для контроля качества продуктов животного происхождения, определения в кормовых культурах остаточных количеств имидаклоприда, а также осуществления прижизненной или посмертной диагностики токсикоза при случайных острых отравлениях животных.

Предлагаемый способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии был апробирован в химико-токсикологическом отделе БУ ОО «Омская областная ветеринарная лаборатория».

Источники информации

1. Методические указания по определению имидаклоприда в воде, почве, огурцах, томатах, сахарной свекле, картофеле, перце и баклажанах методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. http://www.opengost.ru.

2. Методические указания по определению имидаклоприда в картофеле, огурцах, томатах и томатном соке хроматографическими методами. Сборник №30: Методические указания по определению микроколичеств пестицидов в пищевых продуктах, кормах и внешней среде. Киев, 2001. - С.80-87 (прототип).

Способ определения имидаклоприда в биологических объектах с использованием высокоэффективной жидкостной хроматографии, включающий отбор пробы, экстракцию, фильтрацию, дегидратацию натрия сульфатом безводным, упаривание, введение растворенного сухого остатка в хроматограф, обработку результатов анализа, отличающийся тем, что в качестве пробы берут навеску органов или тканей животных массой от 50 до 200 мг, экстракцию проводят ацетоном, растворенный сухой остаток вносят в жидкостный хроматограф «Хромос - ЖХ 301» с детектором спектрофотометрическим UVV 104М и колонкой Диасфер - 110С - 16 (150×4) мм, с размером частиц сорбента 5 мкм, в качестве элюента используют смесь ацетонитрил - вода в соотношении 30:70.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к ветеринарной токсикологии и санитарии, а именно к определению остаточных количеств имидаклоприда в органах или тканях животных при подозрении на отравление инсектицидом, а также продуктах животного происхождения.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. .
Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для идентификации природного красителя кармина в присутствии сульфоазокрасителей Е102, Е110, Е122, Е124 и Е129 при аналитическом контроле пищевых продуктов и фармацевтических препаратов.
Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть использовано для идентификации углеводов (глюкоза, лактоза, галактоза, фруктоза, тагатоза) при аналитическом контроле пищевых продуктов.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в медицинских, ветеринарных и других биологических исследованиях при хроматографическом определении транс-резвератрола в биологически активных добавках, а также в вине.

Изобретение относится к аналитической химии органических соединений и может быть применено для определения -токоферола (альфа-токоферола) в различных объектах растительного и животного происхождения.

Изобретение относится к экспресс-методам определения диспергирующе-стабилизирующих свойств и загрязненности работающих масел. .

Изобретение относится к области исследования материалов химическими способами, а именно путем хроматографии, и может найти применение при оценке качества антоциановых красителей, полученных безкислотным способом из растительного сырья, в фармацевтической, ликероводочной и других отраслях пищевой промышленности.

Изобретение относится к биологии, токсикологической и ветеринарной химии, а именно к способам определения N-(бензимидазолил-2)-O-метилкарбамата в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и ветеринарных лабораторий.

Способ и устройство могут использоваться в различных научных и практических областях медицины, биологии, химии, пищевой промышленности, охране окружающей среды и других отраслей народного хозяйства для анализа смесей органических и неорганических веществ методом тонкослойной хроматографии. Способ, при котором разделение пробы на отдельные компоненты происходит в капиллярной колонке с сорбентом под давлением восходящего потока жидкой подвижной фазы, расход которой регулируют изменением избыточного давления инертного газа на входе колонки. Устройство содержит капиллярную колонку, заполненную сорбентом, емкость с инертным газом под избыточным давлением, соединенную с выходом капиллярной колонки и с помощью регулируемого пневмосопротивления с линией сброса. Техническим результатом изобретения является повышение эффективности разделения и точности результатов анализа. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 1 табл.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (ТСХ) и может быть использовано в аналитической химии. Способ разделения исследуемой смеси методом тонкослойной хроматографии включает нанесение исследуемой смеси на разделяющую хроматографическую пластинку и последующее разделение компонентов исследуемой смеси подвижной фазой в сэндвич-камере, включающей разделяющую хроматографическую пластинку и сухую контрпластинку, которая не касается подвижной фазы. В качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, сорбционный слой которой характеризуется большей сорбционной емкостью по сравнению с разделяющей пластинкой. Этого достигают одним из двух способов: в качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, содержащую сорбент, идентичный сорбенту разделяющей пластинки и характеризующийся большей толщиной сорбционного слоя, или же в качестве контрпластинки используют хроматографическую пластинку, содержащую сорбент, отличный от сорбента разделяющей пластинки и характеризующийся большей удельной сорбционной емкостью. Техническим результатом изобретения является существенное увеличение величин подвижностей, эффективности разделения и других хроматографических характеристик. 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 5 пр., 1 ил.

Изобретение относится к тонкослойной хроматографии (TCX) и может быть использовано в аналитической химии и в физической химии. Сэндвич-камера с контрпластинкой для TCX содержит разделяющую хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке и контрпластинку - хроматографическую пластинку с адсорбционным слоем на подложке. Обе пластинки расположены параллельно, их адсорбционные слои обращены друг к другу. Для фиксации конструкции используют зажимы, скрепляющие пластинки. Расстояние между адсорбционными слоями разделяющей и контрпластинки - менее 0,3 мм, а разделяющая пластинка сдвинута относительно контрпластинки на 3-10 мм. Для регулирования расстояния между адсорбционными слоями используют ограничитель П-образной формы. Линейные части ограничителя могут быть изготовлены из кварцевых капилляров диаметром 0,1-0,3 мм. В качестве разделяющей пластинки и/или контрпластинки используют пластинки не только на стеклянной, но и на гибкой алюминиевой или полимерной подложке, расположенные на дополнительных стеклянных пластинках, размеры которых превышают с одной или с четырех сторон размеры используемых хроматографических пластинок на 10-40 мм. По крайней мере, одна из дополнительных пластинок имеет на одной из сторон выступы для обеспечения ограничения контакта между подвижной фазой и разделяющей пластинкой. Хроматографичсская контрпластинка и дополнительная пластинка могут иметь сквозные прорези для контроля движения подвижной фазы по разделяющей пластинке и разделения исследуемой смеси. Сквозные прорези представляют собой линейные прорези, ширина которых не превышает 3 мм или круговые прорези с диаметром не более 5 мм. Техническим результатом изобретения является существенное увеличение эффективности и других хроматографических характеристик разделения. 6 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Изобретение относится к области хроматографического анализа веществ и позволяет осуществить анализ органических веществ. Способ хроматографического анализа органических веществ включает растворение исследуемого органического вещества в летучем растворителе с получением раствора пробы, последующее нанесение капли раствора пробы на хроматографическую пластину со слоем сорбента, при этом в качестве растворителя выбирают вещество, не вступающее в химическое взаимодействие с пробой и сорбентом, последующий качественный и количественный анализ проявившихся колец. Причем качественный анализ осуществляют по отношению к эталонному веществу/группе веществ, наносимому на пластину в тех же условиях, что и исследуемая проба, а количественный анализ осуществляют по весу или площади кольца, соответствующего конкретному веществу/группе веществ. Техническим результатом является упрощение способа хроматографического анализа органических веществ, сокращение времени, необходимого для анализа. 2 ил.

Изобретение относится к области аналитической химии и предназначено для выделения монослоя вещества для целей последующего анализа свойств вещества. Способ выделения монослоя вещества включает нанесение жидкой пробы с растворенным в ней веществом на линию старта на хроматографическую пластину, содержащую слой сорбента. При этом на линию старта наносят несколько капель пробы вещества одинаковой концентрации, но разного количества, начиная с минимально возможного количества, пропускают через пластинку элюент для разделения. Затем осуществляют регистрацию на пластине выделенных пятен проб вещества и измеряют диаметр пятен пробы вещества на линии старта и высоту пика каждого пятна. Далее строят кривую зависимости высоты пика пятна от диаметра пятна на линии старта и фиксируют точки перелома кривой. Детектирование пятен пробы с монослоем вещества осуществляют по характеру кривой от первой минимальной пробы до пробы, соответствующей точке первого перелома кривой. Техническим результатом является обеспечение выделения монослоя исследуемого вещества, повышение точности хроматографического анализа вещества, повышение точности исследования свойств вещества, возможность прогнозирования применения вещества в различных областях промышленности. 4 ил.

Настоящее изобретение относится к области биохимии и описывает способ количественного определения классов липидов и подклассов фосфолипидов в биологических материалах, заключающийся в том, что методом тонкослойной хроматографии разделяют общие липиды на классы и фосфолипиды на подклассы, проявляют их на хроматограмме и количество определяют с использованием денситометрии, причем липиды, остающиеся на старте после разделения общих липидов на классы, сдвигают на 0,5 см выше, проявляют классы липидов и подклассы фосфолипидов на хроматограмме парами йода и рассчитывают площади пиков, соответствующие интенсивности окраски треков на хроматограмме с помощью денситометра, а количество общих фосфолипидов, других классов липидов и подклассов фосфолипидов определяют расчетным методом, выделяя линиями каждый трек отдельно и производят суммарный расчет площадей треков, берут эту цифру за 100% и определяют процент каждого класса липидов от общих липидов или каждого подкласса фосфолипидов от общих фосфолипидов, составляя пропорцию. Способ обеспечивает упрощение процедуры определения содержания классов липидов и подклассов фосфолипидов в липидных экстрактах биологических материалов и повышение точности полученных результатов. 1 пр., 4 ил.
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для обнаружения и количественного определения кодеина в различных объектах, в частности в лекарственных препаратах. Способ определения кодеина включает разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии с выделением хроматографической зоны кодеина реактивом Драгендорфа, при этом количественное определение кодеина проводят в области его проявленной зоны непосредственно в твердой фазе путем измерения коэффициента диффузного отражения при длине волны 520 нм. Изобретение обеспечивает сокращение времени обнаружения и количественного определения кодеина, уменьшение трудоемкости процесса, уменьшение вероятности потерь целевого компонента. 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к способам стандартизации лекарственных препаратов, биологически активных добавок, премиксов, лекарственного растительного сырья, растительных масел, масляных экстрактов, изделий пищевой, химической и косметологической отраслей промышленности по содержанию основных жирорастворимых витаминов и может быть использовано в фармацевтической, химической, косметологической и пищевой отраслях промышленности для определения подлинности и степени чистоты жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии в одно- и многокомпонентных препаратах. Способ определения жирорастворимых витаминов A, D2, E и β-каротина при совместном присутствии включает выделение жирорастворимых витаминов из субстанции экстракцией 96%-ным этанолом, отделение спиртового экстракта витаминов с помощью делительной воронки, последовательное хроматографирование с использованием силикагелевых пластинок марки «Sorbfil» ПТСХ-П-А на полимерной подложке при участии двух элюентов с различной величиной пробега, время насыщения камеры парами элюента - 20 мин, время элюирования - 55 мин; высушивание при температуре не менее 80°C пластин в термостате в течение 3-5 мин, обработку пластины проявителем - 5%-ным спиртовым раствором кислоты фосфорномолибденовой, согласно изобретению в качестве элюентов использованы гексан:хлороформ (19:1) и гексан:хлороформ (3:1), а детектирование хроматографической зоны β-каротина проводят до обработки пластины проявителем при дневном свете. Способ обеспечивает упрощение и ускорение процесса определения жирорастворимых витаминов. 10 ил., 3 пр.

Изобретение относится к способу определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной. Указанный способ предполагает определение в сиропе методом тонкослойной хроматографии доминирующего компонента цветков пижмы обыкновенной - флавоноида тилианина, который предварительно извлекают путем обработки сиропа равным количеством ацетона. Изобретение характеризуется упрощенной стадией пробоподготовки, а также улучшенной методикой определения подлинности сиропа пижмы обыкновенной и позволяет объективно оценивать качество данной лекарственной формы. 1 ил., 1 пр.
Наверх