Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие


 


Владельцы патента RU 2484480:

Шахнович Елена Александровна (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, фармакологии, биологии, и может быть использовано для тестирования биологически активных веществ с учетом групповой принадлежности крови. Сущность изобретения заключается в том, что в способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие, основанном на взятии цельной крови, стабилизации ее антикоагулянтом, к образцам цельной крови O(I)-AB(IV) групп добавляют биологически активное вещество, инкубируют в течение 3-5 минут, вносят стандартные моноклональные анти-А и анти-В антитела и спустя 3-5 минут по бальной шкале определяют интенсивность агглютинации, соответствующую группе крови. 3 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к биохимии, фармакологии, биологии, и может быть использовано для тестирования биологически активных веществ с учетом групповой принадлежности крови.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату является способ изучения агглютинации эритроцитов, который включает в себя взятие цельной крови, стабилизацию ее антикоагулянтом, добавление антител (антигликофориновые антитела, синтетический ВИЧ-пептид, химерные антитела к гликофорину/Д-димеру, дигоксин-гликофориновые антитела), перемешивание и спустя 3 минуты оценку агглютинации визуально или с помощью ИФА (Hillyard et al. Erythrocyte agglutination assay. Patent Number 5.086.002).

Недостатком известного способа, принятого за прототип, является проведение суммарной оценки агглютинации всех антигенов, расположенных на мембране эритроцита, не учитывая групповую принадлежность крови и индивидуальную группоспецифическую чувствительность.

Техническим результатом, на достижение которого направлено создание данного изобретения, является повышение качества оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие.

Поставленный технический результат достигается тем, что в способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие, основанном на взятии цельной крови, стабилизации ее антикоагулянтом, добавлении в нее антител, перемешивании и спустя 3 минуты проведении оценки агглютинации визуально, в способе к образцам цельной крови О(I)-AB(IV) групп добавляют биологически активное вещество, инкубируют в течение 3-5 минут, затем вносят стандартные моноклональные анти-А и анти-В антитела и спустя 3-5 минут по бальной шкале определяют интенсивность агглютинации, соответствующую группе крови.

Биологически активными веществами, используемыми в «Способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие», могут быть гормоны, метаболиты, высшие жирные кислоты, витамины, флаволигнаны, лекарственные препараты.

В качестве биологически активного вещества используют пировиноградную кислоту.

В таблице 1 приведены данные оценки степени агглютинации в образцах цельной крови О(I)-AB(IV) групп, такие как значение агглютинации, числовое значение агглютинации и описание агглютинации.

Таблица 1
Данные оценки степени агглютинации в образцах групп крови О(I)-AB(IV)
Значение агглютинации Числовое значение агглютинации Описание
4+ 12 pt Клеточный осадок образует один комок, осадок виден макроскопически
3+ 10 pt Клеточный осадок представлен несколькими крупными комками, виден макроскопически
2+ 8 pt Клеточный осадок представлен множеством мелких комочков, виден макроскопически
1+ 5 pt Клеточный осадок представлен мельчайшими зернистыми комочками, макроскопически слабо заметен
(+) или w (слабая) 3 pt Клеточный осадок представлен мельчайшими гранулами, видимыми только под микроскопом
- 0 pt Отрицательный результат - все клетки свободно и равномерно распределены

В таблице 2 приведены данные о влиянии биологически активного вещества, в качестве которого использовалась пировиноградная кислота, на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов А(II) и B(III) групп крови.

Таблица 2
Влияние пировиноградной кислоты на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов А(II) и В(III) групп крови
Контрольные образцы Антиген А А (II) Антиген В В (III)
Время, (с) Агглютинация Время, (с) Агглютинация Время, (с) Агглютинация
М 6 4+ 7 4+ 6,4 4+
Me 6 4+ 7 4+ 6 4+
Δ% +16 +6
SE 0 0 0,81 0 0,51 0

В условиях in vitro у эритроцитов А(II) группы крови при добавлении пировиноградной кислоты, время начала агглютинации увеличилось на 16% по сравнению с контролем (7±0,81), а у В(III) группы крови увеличилось на 6%, то есть пировиноградная кислота слабее влияет на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов B(III) группы крови с анти-В антителами (6,4±0,51). Степень агглютинации как в контрольных образцах, так и в опытных образцах - максимальная 4+.

В таблице 3 приведены данные о влиянии биологически активного вещества, в качестве которого использовалась пировиноградная кислота, на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов AB(IV) группы крови.

Таблица 3
Влияние пировиноградной кислоты на антиген-антительное взаимодействие эритроцитов AB(IV) группы крови
Контрольные образцы Антиген А
AB(IV)
Антиген В
AB(IV)
Время (сек.) Агглютинация Время (сек.) Агглютинация Время (сек.) Агглютинация
М 6 4+ 7,4 3,6+ 7,4 3,6+
Me 6 4+ 7 4+ 7 4+
Δ% +23 +23
SE 0 0 0,51 0,51 0,51 0,51

При оценке агглютинации антигенов А и В эритроцитов AB(IV) группы крови время агглютинации в среднем возросло на 23% (7,4±0,51), а степень агглютинации слабее, чем в контрольных образцах и составляет 3,6+. Таким образом, пировиноградная кислота влияет на антиген-антительное взаимодействие, увеличивая время связывания антигенов и антител и образования их комплексов.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявляемого изобретения, позволили установить, что заявителем не обнаружен аналог, характеризующийся признаками, тождественными (идентичными) всем существенным признакам заявляемого изобретения.

Определение из перечня выявленных аналогов прототипа позволило выявить совокупность существенных по отношению к усматриваемому техническому результату отличительных признаков в заявляемом «Способе оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие», изложенных в формуле изобретения. Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «новизна».

Для проверки соответствия заявляемого изобретения условию «изобретательсткий уровень» заявитель провел дополнительный поиск известных решений, чтобы выявить признаки, совпадающие с отличительными от прототипа признаками заявляемого изобретения.

Результаты поиска показали, что заявляемое техническое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, определенного заявителем, и не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками заявляемого «Способа оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» на достижение технического результата.

Следовательно, заявляемое изобретение соответствует критерию «изобретательский уровень».

Критерий изобретения «промышленная применимость» подтверждается тем, что предлагаемый «Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие» может быть использован в биохимии, фармакологии, биологии, для тестирования биологически активных веществ с учетом принадлежности к различным группам крови.

Способ оценки действия биологически активных веществ на антиген-антительное взаимодействие, основанный на взятии цельной крови, стабилизации ее антикоагулянтом, добавлении антител, перемешивании и спустя 3 мин проведении оценки агглютинации визуально, отличающийся тем, что к образцам цельной крови O(I)-AB(IV) групп добавляют биологически активное вещество, инкубируют в течение 3-5 мин, вносят стандартные моноклональные анти-А и анти-В антитела и спустя 3-5 мин по балльной шкале определяют интенсивность агглютинации, соответствующую группе крови.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к нейрохирургии и нейротравматологии, и может быть использовано для определения прогноза ранних исходов лечения у больных со среднетяжелой и тяжелой черепно-мозговой травмой.
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, и касается способа прогнозирования возникновения рака легкого у больных хронической обструктивной болезнью легких.

Изобретение относится к области диагностики, токсикологии и биотехнологии, в частности к получению тест-систем для определения остаточных количеств авермектинов в продуктах животного происхождения с помощью иммуноферментного анализа ИФА, и может быть использовано для детекции соединений авермектинового семейства в биологических жидкостях и тканях животных, санитарно-гигиенической оценки пищевых продуктов и продовольственного сырья.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано в 3 триместре беременности для прогнозирования эффективности лечения гестоза тяжелой степени.
Изобретение относится к медицине, в частности к травматологии. .

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии и к внутренним болезням. .

Изобретение относится к области иммунологии, а именно к иммуноферментному анализу, конкретнее к способу детекции форм фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) c размером более чем 110 аминокислот в биологическом образце. Способ включает следующие стадии: контактирования и инкубации биологического образца с реагентом захвата, иммобилизованным на твердой подложке, где реагент захвата содержит моноклональное антитело, которое распознает и специфично связывается с остатками, в количестве более чем 110, из VEGF человека; отделение биологического образца от иммобилизованных реагентов захвата; контактирование иммобилизованного молекулярного комплекса реагента захвата-мишени с детектируемым антителом, которое связывается с доменами VEGF, ответственными за связывание с рецептором KDR и/или FLT1, или которое связывается с эпитопом в VEGF1-110; измерение уровня VEGF110+, связанного с реагентами захвата, с использованием средства детекции для детектируемого антитела. Набор реагентов иммуноанализа для детекции форм VEGF110+ в биологическом образце. Антитело 5С3, получаемое из гибридомы 5С3.1.1 с депозитарным номером PTA-7737, при этом указанное антитело 5С3 связывает формы VEGF110+, включая VEGF121+. Гибридома 5С3.1.1, депонированная в АТСС с депозитным номером PTA-7737, для получения моноклонального антитела 5С3. Использование заявленного изобретения позволяет повысить точность детектирования изоформ VEGF, которые не должны включать изоформу VEGF110 и при этом должны обязательно включать изоформу VEGF121. 4 н. и 21 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроорганизмов к антибиотикам и факта присутствия бактериальных биопленок на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический дигуанозинмонофосфат, с пороговой чувствительностью 50 пг/мл, включающий: 1) выделение фосфодиэстеразы-мишени из лизированных бактериальных клеток; 2) связывание фосфодиэстеразы биотинилированными антителами, специфичными к некаталитическим доменам фосфодиэстеразы; 3) аффинную очистку комплексов, сформированных фосфодиэстеразой-мишенью и биотинилированным антителом при помощи парамагнитных частиц, содержащих нейтравидин или его аналоги, связывающие биотин; 4) взаимодействие комплексов фосфодиэстераза/биотинилированное антитело, иммобилизованных на парамагнитных частицах, с комплексами, содержащими с-di-GMP в форме G-квадруплексов с интеркалированным красителем, сопровождающееся падением интенсивности флуоресценции по мере разрушения комплексов интеркалирующего красителя c-di-GMP; 5) измерение падения флуоресценции при гидролизе c-di-GMP и разрушении комплекса c-di-GMP с интеркалирующим красителем с последующим количественным определением активности фосфодиэстеразы на основании калибровочных кривых, построенных с использованием известных количеств рекомбинантного фермента фосфодиэстеразы, идентичного исследуемой мишени; 6) выявление повышенного уровня фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемого тестируемыми антибиотикоустойчивыми бактериальными штаммами, способными к формированию биопленок, по сравнению с уровнем фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемым для контрольных штаммов бактерий того же вида, не обладающих антибиотикоустойчивостью и способностью к формированию биопленок. Способ позволяет определить неспецифическую устойчивость патогенных микроорганизмов к антибиотикам и установить факт присутствия бактериальных биопленок. 4 ил., 5 пр.

Группа изобретений относится к медицине и касается способа определения в образце индивидуума белка нейтрофильного происхождения липокалина, связанного с желатиназой (NGAL), для определения острого повреждения почек у индивидуума, где преобладающее количество мономерной и/или гетеродимерной форм белка NGAL, по сравнению с димерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из почек индивидуума и что у индивидуума наблюдается острое повреждение почек, тогда как равное или преобладающее количество димерной формы белка NGAL, по сравнению с мономерной или гетеродимерной формой белка NGAL, указывает, что белок NGAL происходит из нейтрофилов индивидуума и что указанный индивидуум не имеет острого повреждения почек; набора для определения в образце относительных количеств мономерной, димерной и гетеродимерной форм NGAL; применения набора в указанном способе. Группа изобретений обеспечивает установление более точного диагноза и таким образом способствует лучшему направленному лечению. 3 н. и 14 з.п. ф-лы, 2 пр., 10 ил., 1 табл.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для качественной экспресс-диагностики злокачественных новообразований костей верхней и нижней челюстей по содержанию биомаркеров в плазме крови и в ротовой жидкости пациента. Венозную кровь и ротовую жидкость забирают у пациента в любой последовательности. В качестве биомаркера в ротовой жидкости используют раково-эмбриональный антиген/carcino-embryonal antigen (РЭА/СЕА). В качестве биомаркера в плазме крови используют нейронспецифическую енолазу/neuron-specific enolase. При содержании в ротовой жидкости РЭА/СЕА в количестве 196,8-318,4 нг/мл и содержании в плазме нейронспецифической енолазы/neuron-specific enolase в количестве 26,3-34,2 нг/мл диагностируют саркому челюсти. При содержании в ротовой жидкости РЭА/СЕА в количестве 1228,2-1762 нг/мл и содержании в плазме нейронспецифической енолазы/neuron-specific enolase в количестве 38,67-57,67 нг/мл диагностируют плоскоклеточный рак челюсти. По полученным результатам прогнозируют тактику лечения пациента. Предлагаемое изобретение обеспечивает высокочувствительный и точный способ дифференциальной диагностики злокачественных новообразований костей верхней и нижней челюстей пациента в день его обращения. 1 з.п. ф-лы, 6 пр.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ экспресс-диагностики острых кишечных инфекций (ОКИ), включающий выявление маркеров-индикаторов этиологии ОКИ, с использованием иммунологического лабораторного исследования, отличается тем, что этиологию ОКИ устанавливают у детей ранней возрастной категории, предпочтительно у новорожденных, при этом определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-10 и наличие хронической фетоплацентарной недостаточности (ХФПН), после чего рассчитывают вероятность (Р) бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о бактериальной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует об отсутствии бактериальной этиологии ОКИ, и необходимости проведения второго этапа диагностики, на котором определяют концентрацию в копрофильтрате цитокина - интерлейкина IL-4, выявляют срок прикладывания к груди, а также вид вскармливания, при этом рассчитывают вероятность (Р) вирусной либо вирусно-бактериальной этиологии ОКИ, причем значение Р больше 50% свидетельствует о вирусной этиологии ОКИ, а меньше 50% свидетельствует о вирусно-бактериальной ОКИ. Изобретение обеспечивает повышение точности выявления этиологии острой кишечной инфекции и упрощение процедуры диагностирования. 2 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к детской неврологии. Способ включает выявление клинических признаков заболевания, определение в периферической крови ребенка уровня эритроцитов с микроядрами. Новым в способе определения степени тяжести заболевания у детей с ДЦП является то, что оценку клинических признаков заболевания проводят по шкале моторики Ривермид, а затем с помощью иммуноферментного анализа определяют количественное содержание фактора некроза опухоли (TNF-α) в слюнной жидкости у детей, больных детским церебральным параличом, сопоставляют с клиническими признаками и при значении эритроцитов с микроядрами 0,55±0,14% и повышении уровня TNF-α слюнной жидкости до 13,23±5,2 пг/мл устанавливают среднюю степень тяжести заболевания, а при значениях эритроцитов с микроядрами 1,27±0,87% и выше, и уровне TNF-α слюнной жидкости 25,41±5,42 пг/мл и выше - тяжелую степень заболевания. Изобретение позволяет получить простой, неинвазивный, доступный в использовании экспресс-способ определения степени тяжести заболевания и назначить своевременное лечение. 5 ил., 8 табл.

Изобретение относится к иммунологическим методам анализа и может быть использовано для массового скрининга врожденных заболеваний у новорожденных. Для этого в лунке микропланшета иммобилизуют первые иммуноспецифические компоненты к тиротропину, иммунореактивному трипсину, тироксину и 17α-ОН-прогестерону в виде дискретных микрообластей, размещают в лунке бумажный диск образца сухой крови, экстрагируют детектируемые маркеры из сухого пятна крови путем добавления в лунку буфера, содержащего даназол и 8-анилинонафталин-1-сульфоновую кислоту и антитела к 17α-ОН-прогестерону, которые связывают с экстрагируемым 17α-ОН-прогестероном для одновременного образования иммунного комплекса с антивидовыми антителами в соответствующей микрообласти, затем добавляют в лунку микропланшета реакционный раствор вторых иммуноспецифических компонентов, содержащий смесь биотинилированных антител к тиротропину, иммунореактивному трипсину и тироксину и конъюгат 17α-ОН-прогестерон-белок-биотин для получения иммунных меченных биотином комплексов в дискретных микрообластях, удаляют бумажный диск сухого образца крови, добавляют конъюгат стрептавидина с Pt-копропорфирином для образования фосфоресцирующих биотин-стрептавидиновых комплексов в микрообластях на дне лунки микропланшета и детектируют эмиссию фосфоресценции метки, последовательно сканируя дискретные микрообласти сфокусированным лазерным пучком. Использование данного способа позволяет специфически и количественно детектировать биомаркеры в образце сухого пятна капиллярной крови новорожденных, что позволяет одновременно диагностировать три врожденные патологии новорожденных. 9 з.п. ф-лы, 7 ил., 10 табл.
Наверх