Лактилаты для предупреждения и лечения инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных

Авторы патента:

 


Владельцы патента RU 2484818:

ПУРАК Биокем БВ (NL)

Группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для предупреждения и лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями, а также для увеличения роста животных, улучшения усваиваемости аминокислот, для улучшения отношения прироста массы и для лечения некротического энтерита. Используют соединение, выбранное из лактилата формулы 1, формула 1: R2-СОО-[-СН(СН3)-СОО]n-R1, или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II), гликолилата формулы 2, формула 2: R2-COO-[-CH2-COO]n-R1, или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II), эфира молочной кислоты формулы 3, формула 3: НО-СН(СН3)-СОО-R2, и/или эфира гликолевой кислоты формулы 4, формула 4: HO-CH2-COO-R2, где в приведенных выше формулах R1 выбран из Н, n обозначает целое число со значением 1-10 и R2 обозначает С1-С35алкильную или алкенильную цепь, которая может быть разветвленной или неразветвленной. Также заявлено применение указанного соединения для изготовления композиций. Использование заявленной группы изобретений эффективно для предупреждения и лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями, а также для увеличения роста животных, улучшения усваиваемости аминокислот, для улучшения отношения прироста массы и для лечения некротического энтерита. 16 н. и 13 з.п. ф-лы, 7 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к способу предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, к указанным композициям для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, к применению указанных композиций для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, и к питательной композиции для животных, содержащей указанное соединение в количестве, эффективном для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-синий или фиолетовый цвет путем окрашивания по методу Грама, в основном, благодаря большому количеству пептидогликана в их клеточной стенке. Среди грамположительных бактерий находятся патогенные бактерии Enterococcus, Clostridium, Listeria, Staphylococcus, различных видов Bacillus и Streptococcus. Хотя некоторые из этих организмов, главным образом, относятся к загрязнителям пищевых продуктов, другие могут вызвать заболевания у животных.

Например, Clostridia являются причиной возникновения ряда очень разнообразных заболеваний кишечника у животных. Поскольку они являются почти повсеместно распространенными бактериями, легко обнаруживаемыми в почве, пыли, фекалиях и пище, крайне трудно поддерживать животных свободными от Clostridia. Заболевания кишечника, связанные с Clostridium, могут быть достаточно тяжелыми. Например, Clostridia вовлечены в возникновение некротического энтерита у кур. У крупного рогатого скота энтерит, связанный с Clostridia, может принимать форму "синдрома внезапной смерти", который на практике может привести к гибели за ночь некоторого количества крупного рогатого скота. Также у других животных заболевания, связанные с Clostridia, могут причинить серьезный вред.

Известно введение животным антибиотиков для их защиты от кишечной инфекции. Также известно включение таких антибиотиков в питание животных. Однако существует все возрастающее сопротивление применению антибиотиков в корме для животных, и в настоящее время во многих странах введен закон, который запрещает применение антибиотиков в корме животных. Кроме того, антибиотики приходится вводить в очень строго контролируемых количествах.

Соответственно, существует необходимость в способе и композиции корма для животных без антибиотиков, которые помогут лечить или предупреждать кишечные инфекции, вызванные грамположительными бактериями у животных, в частности у млекопитающих, включая жвачных (например, крупный рогатый скот, овец, коз, оленей) и моногастричных (например, свиней, лошадей, кроликов); у птиц (например, домашней птицы, индюка, фазана, перепелки); у рыб, включая морских рыб (например, лосося, палтуса, тунца), пресноводных рыб (например, форели, карпа, тилапии); моллюсков (например, устрицы, мидий, двустворчатого моллюска, улитки) и ракообразных (например, краба, омара, креветки). Настоящее изобретение может также найти применение у человека и у пушных зверей, таких как норка, горностай, соболь и лисы.

Более того, может быть желательно подавить определенные виды грамположительных бактерий в кишечнике с целью увеличить рост животных. Считают, что это может представлять интерес для видов Lactobacillus. Настоящее изобретение также представляет интерес для данной области применения.

В настоящем изобретении предложен способ и композиция корма для животных для лечения или предупреждения кишечных инфекций, вызываемых грамположительными бактериями у животных. В соответствии с настоящим изобретением применяют антибактериальное соединение, выбранное из лактилата в соответствии с формулой 1,

формула 1: R2-COO-[-CH(СН3)-СОО]n-R1,

или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II),

гликолилата формулы 2,

формула 2: R2-COO-[-CH2-COO]n-R1,

или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II),

эфира молочной кислоты формулы 3,

формула 3: НО-СН(СН3)-СОО-R2,

и/или эфира гликолевой кислоты формулы 4,

формула 4: HO-CH2-COO-R2,

где в приведенных выше формулах R1 выбран из Н, n обозначает целое число со значением от 1 до 10 и R2 обозначает С1-С35алкильную или алкенильную цепь, которая может быть разветвленной или неразветвленной,

для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями.

Настоящее изобретение относится к предупреждению или лечению кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных. Изобретение особенно привлекательно для применения против кишечных инфекций анаэробными или факультативно-анаэробными бактериями, даже более конкретно анаэробными бактериями. В пределах группы анаэробных бактерий особенно желательно иметь способ предупреждения или лечения кишечных инфекций спорообразующими бактериями, поскольку эти организмы трудно контролировать. Изобретение представляет особый интерес для предупреждения и лечения кишечных инфекций Clostridia.

В одном воплощении настоящее изобретение относится к предупреждению или лечению кишечных инфекций, вызванных Clostridium, в частности Clostridium perfringens у домашней птицы, в частности у кур.

В другом воплощении настоящее изобретение относится к предупреждению или лечению кишечных инфекций, вызванных Clostridium, в частности одной или более чем одной из Clostridium tetanii, novyi (тип В) septicum, chauvii, sordelii, hemolyticum, difficile, botulinum, у крупного рогатого скота.

В следующем воплощении настоящее изобретение относится к уменьшению кишечного роста видов Lactobacillus.

Отмечено, что WO 2004/107877 описывает антимикробную композицию, содержащую смесь молочной кислоты или ее производного и неорганической кислоты. Композиция описана как антимикробная в целом. Указано применение против Salmonella и Escherichia coli. Несмотря на то что лактилаты упомянуты как возможные производные молочной кислоты, их применение дополнительно не освещено. В этом источнике информации не содержится ничего, что указывает на особую эффективность, которая обнаружена при применении лактилатов против грамположительных бактерий у животных, или предполагает ее.

Далее отмечено, что GB 115480 описывает применение ацилированных альфа-гидроксикарбоновых кислот против бактерий и грибов, например плесневых грибов, милдью и дрожжей. Показано, что это соединение можно применять для внутреннего или наружного применения у человека или других животных, но это ни разу не объяснено. В этом источнике информации не содержится ничего, что указывает на особую эффективность, которая обнаружена при применении лактилатов против грамположительных бактерий у животных, или предполагает ее.

В настоящем изобретении можно применять антибактериальное соединение, выбранное из одного или более чем одного лактилата в соответствии с формулой 1 или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II), гликолилата формулы 2 или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II), эфира молочной кислоты формулы 3 и/или эфира гликолевой кислоты формулы 4.

Применение лактилата формулы 1 или его соли, как было показано, является предпочтительным.

В предпочтительном воплощении настоящего изобретения R2 представляет собой алкильную или алкенильную цепь с 6-20 атомами углерода. Более конкретно R2 представляет собой алкильную или алкенильную цепь с 6-18 атомами углерода. В данном воплощении подходящие заместители включают группы с 6 атомами углерода (капроновые), 8 атомами углерода (каприловые), 10 атомами углерода (каприновая кислота), 12 атомами углерода (лаурил), 14 атомами углерода (миристил), 16 атомами углерода (цетил, пальмитил), 18 атомами углерода (стеарил). Можно также применять смеси двух или более чем двух соединений. В тех случаях когда используют соль, может быть особенно предпочтительным использование соли Na, К, Са или Mg.

Значение для n предпочтительно находится в интервале от 1 до 5. Более конкретно n имеет значение 1, 2 или 3.

Особенно предпочтительно использование лауроиллактилата, миристоиллактилата и их натриевых солей. В одном воплощении используют смесь, содержащую 5-95 масс.% лауроиллактилата и 95-5 масс.% миристоиллактилата или натриевой соли (солей) этих соединений, более конкретно используют смесь, содержащую 25-75 масс.%, более конкретно 40-60 масс.% лауроиллактилата и 75-25 масс.%, более конкретно 40-60 масс.% миристоиллактилата или натриевой соли (солей) этих соединений.

В одном воплощении настоящего изобретения антибактериальное соединение, в частности лактилаты или их соли, используют в комбинации с одним или более чем одним кокцидиостатическим компонентом. Это представляет особый интерес в отношении домашней птицы в течение периода подавления иммунитета, который представляет собой период в жизни цыпленка, где иммунная система, которая защищает животное в яйце, разрушена, а иммунная система самого животного не полностью развита. Для цыплят этот период составляет период между 10 и 20 сутками жизни животного. Особый интерес представляет повышение сопротивляемости цыпленка к кишечным Clostridium инфекциям. Более конкретно, считают, что у цыплят некротическому энтериту, вызванному Clostridium, часто предшествует инфекция Eimeria. Считают, что Eimeria повреждает стенку кишечника, что делает ее менее устойчивой к инфекции Clostridium. Применение комбинации лактилата с одним или более чем одним кокцидиостатическим компонентом, следовательно, обеспечит повышенную сопротивляемость цыплят против некротического энтерита.

Подходящие кокцидиостатические компоненты известны в данной области техники, как и количества, в которых их следует давать. Подходящие компоненты включают мадурамицин, diclrzil, наразин, никарбазин, монензин, робенидин, лазалоцид, галофугинон, наразин, салиномицин, декоквинат и семдурамицин.

Композицию можно вводить животным в виде компонента традиционной композиции корма для животных. В контексте данного изобретения термин "корм для животных" включает твердый корм и жидкий корм, такой как питьевая вода. Следовательно, композицию можно вводить животному в виде твердого или жидкого компонента традиционной композиции корма для животных или в их питьевой воде. Композицию можно также вводить животному отдельным этапом, независимо от снабжения традиционной композицией корма для животных.

В одном воплощении изобретения антибактериальное соединение, в частности лактилат или его соль, присоединено к носителю. Это обеспечивает удобный путь получить антимикробную композицию в твердой порошкообразной форме. Подходящие носители выбраны из материала растительного волокна, растительных углеводов, таких как целлюлоза, и минеральных носителей, таких как кремнезем, крахмал, гипс и известь. В другом воплощении антимикробное соединение добавляют в смесь с растительным маслом, например с кукурузным маслом, соевым маслом или оливковым маслом. Антимикробное соединение может также находиться в форме таблетки или другого формованного тела, известного для обеспечения животных фармацевтическими компонентами.

Количество антимикробного соединения, в частности лактилата, вводимого животному, является таким, что оно эффективно для лечения или предупреждения кишечных инфекций, вызываемых грамположительными бактериями у животного, которому вводят соединение. Такое количество, соответственно, находится в интервале от 0,0001 до 5% на основе суммарной массы каждой порции корма животного. В предпочтительном воплощении количество может находиться в интервале от 0,001 до 2% относительно суммарной массы каждой порции корма животного. Было обнаружено, что по сравнению с применением молочной кислоты, как описано в WO 2004/107877, может быть возможным применение более низких концентраций эффективного компонента. Наряду с тем, что в Примерах WO 2004/107877 применяют 1,2 масс.% молочной кислоты, применение, например, лактилатов в соответствии с настоящим изобретением дает возможность применения уменьшенного количества активного компонента. Соответственно, в одном воплощении настоящего изобретения количество может находиться в интервале от 0,001 до 1 масс.%, более конкретно от 0,001 до 0,5 масс.% относительно суммарной массы каждой порции корма животного. Определение необходимого количества находится в пределах компетенции специалиста в данной области техники.

Если желательно, количество может быть выше, чем требуется для того, чтобы соединение было эффективным в лечении или предупреждении инфекций, вызванных грамположительными бактериями, таких как связанный с Clostridia энтерит у животного. Это может быть в том случае, если соединение также действует для стимуляции роста, улучшения корма для получения нужной пропорции и/или улучшает усваиваемость аминокислот, вводимых в кормах для животных.

Как упомянуто выше, антибактериальное соединение можно вводить животным в виде компонента традиционной композиции корма для животных. Общепринятая композиция корма для животных может содержать пшеницу, крахмал, мясную и костную муку, маис, муку подсолнечника, кукурузу, зерновые, ячмень, соевую муку, тапиоку, цитрусовую пульпу, бобовые, свекловичную пульпу и т.д. В соответствии с настоящим изобретением обеспечение животного антибактериальным соединением для лечения или предупреждения кишечных инфекций грамположительными бактериями вообще не будет объединено с обеспечением антибиотиками.

В WO 2004/107877 молочную кислоту или производное молочной кислоты применяют в комбинации с неорганической кислотой, выбранной из кислот, содержащих азот, серу и фосфор. Показано, что неорганическая кислота, как считают, снижает рН в химусе во время суммарного прохождения в организме животного, повышая посредством этого количество присутствующей недиссоциированной молочной кислоты, которая разрушает наружную мембрану патогенов.

Напротив, настоящее изобретение не основано на присутствии недиссоциированной молочной кислоты. Поэтому настоящее изобретение не требует присутствия неорганической кислоты для снижения рН в химусе. Соответственно, настоящее изобретение также относится к применению антибактериальных соединений, как описано выше, в частности лактилатов в соответствии с формулой 1, в предупреждении или лечении кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями, где такое применение не сопровождается применением неорганической кислоты, выбранной из кислот, содержащих азот, серу и фосфор, для повышения присутствия недиссоциированной молочной кислоты.

Далее изобретение проиллюстрировано приведенными ниже примерами, которые показывают изобретательские качества данного изобретения без ограничения изобретения ими или посредством их.

Пример 1: Эффективность смеси лауроиллактилата натрия и миристоиллактилата натрия против некротического энтерита у кур

Эффективность смеси лауроиллактилата натрия и миристоиллактилата натрия против некротического энтерита у кур оценена компанией Schothorst Feed Research в экспериментальной модели инфекции С.perfringens, разработанной ею, в которой инфекция кокцидиоза используется в качестве предварительного инициатора для колонизации С.perfringens тонкого кишечника и индукции некротического энтерита. Инфекцию кокцидиоза инициируют патогенной Eimeria maxima и на пике инфекции кокцидиоза птицам делают прививку штаммом С.perfringens, патогенность которого для бройлерных цыплят доказана. Инфекция кокцидиоза, вызванная Е. maxima (приводящая в результате к повреждениям в среднем сегменте тонкого кишечника) с последующей инфекцией Clostridium приводит в результате к высоко воспроизводимой модели и простому и точному пути оценки повреждений, обусловленных некротическим энтеритом, поскольку повреждения, вызванные Е.maxima и Clostridium, легко отличить, поскольку повреждения обоих патогенов не встречаются в одном и том же сегменте кишечника.

Эксперименты проводят в сотрудничестве со Службой Охраны Животных (GD).

Эксперимент состоял из одной обработки и двух контрольных обработок. Все обработки состояли из шести повторов клеток с 19 цыплятами на клетку. Обработки приведены в таблице 1.

Таблица 1
Описание принципов обработки и рациона
Обр. Сутки 9 Сутки 14, 15 и 16 Снабжение добавкой Примечание
Прививочный материал
1 Физиологический раствор Печеночный бульон - Контроль
2 Eimeria maxima С.perfringens2 - Контроль/Эксперимент
3 Eimeria maxima С.perfringens испытуемая смесь (0,3% смесь 50 масс.% лауроиллактилата натрия и 50 масс.% миристоиллактилата) Эксперимент
1) 10000 спорулированных ооцист Eimeria maxima в 1 мл
2) 1×108 КОЕ С.perfringens в 1 мл

Животные, содержание и методы

Суточных бройлерных цыплят-петушков Ross 308 поставляла фирма Probroed & Sloot B.V., Нидерланды. На сутки 0 бройлеров привозили в лабораторный виварий Службы охраны животных (Deventer, the Netherlands) и содержали в метаболических (digestibility) клетках после индивидуального взвешивания. На основании системы весовых классов по 19 птиц были помещены в 30 Schothorst метаболических клеток с подстилкой, с получением сходного среднего веса на клетку. Цыплят содержали в этих клетках до окончания эксперимента на сутки 20. На сутки 9, если не наблюдалось смертности, число цыплят стандартизировали до 17 и снова измеряли массу птицы. Сначала удаляли птиц с явными визуальными отклонениями, а затем птиц удаляли случайным образом, чтобы уменьшить число до 17. Режим освещения и температуры на протяжении всего периода эксперимента был следующим: 22 часа света, затем 2 часа темноты в первый период от суток 0 до 9, а затем 18 часов света и 6 часов темноты на протяжении остального периода эксперимента. Температуру окружающей среды постепенно снижали с 32°С в начале до 25°С в конце эксперимента.

Корм поставлялся в свободном доступе от суток 0 и далее за исключением 5 часов перед прививками (сутки 9, 14, 15 и 16) и вскрытиями (сутки 15, 16 и сутки 20). Вода находилась в свободном доступе на протяжении всего эксперимента.

Композиция корма

Бройлеры получали стартовый рацион на основе пшеничной/соевой муки от суток прибытия до суток 9. От суток 9 и далее скармливали ростовой рацион на основе пшеницы/ячменя до окончания эксперимента (сутки 20). Ростовой рацион скармливали в виде муки в связи с необходимостью гомогенного смешивания в контрольных продуктах после приготовления корма. Рационы не содержали никаких кокцидиостатиков или антимикробных пищевых добавок, иных, чем испытуемый продукт. Состав питательных веществ в экспериментальных рационах соответствовал датским стандартам для удовлетворения потребности бройлеров в питательных веществах (CVB, 2006).

Прививочный материал

На сутки 9 бройлерам делали прививку 1 мл либо стерильного физиологического раствора, либо Е.maxima (10000 спорулированных ооцист/цыпленок в 1 мл) после 5 часов лишения корма. Начиная с суток 14 и далее бройлеров прививали либо 1 мл печеночного бульона (DIFCO), либо С.perfringens один раз в сутки, повторяя в течение трех суток, после 5 часов лишения корма. Подробный обзор различных обработок приведен в таблице 1.

Патогенный штамм С.perfringens был получен от Службы Охраны Животных в Девентере, Нидерланды (примерно 108 КОЕ в 1 мл). Этот штамм выращивали на агаре с овечьей кровью, и культура была типирована CIDC (Центральный институт борьбы с болезнями животных в Лелистаде) как С.perfringens, продуцирующий токсины типа α и β2. Каждые сутки использовали свежеприготовленный прививочный материал.

Оценка повреждений

Clostridium perfringens: Большие и микроскопические повреждения обычно встречаются в тонком кишечнике, в частности в проксимальном сайте. Использовали приведенный ниже способ оценки:

0: повреждений нет

1: 1-5 небольших повреждений (пятна диаметром менее 1 мм)

2: более чем 5 небольших повреждений (пятна диаметром менее 1 мм) или 1-5 повреждений большего размера (пятна диаметром 1-2 мм);

3: более чем 5 повреждений большего размера (диаметром 1-2 мм) или эрозивные зоны;

4: мертвые птицы с посмертным положительным диагнозом некротического энтерита.

Всех птиц оценивали "слепым методом", то есть человек, оценивающий птиц на наличие повреждений, не знал об обработке птиц.

Измерения

Во время эксперимента измеряли следующие параметры:

- индивидуальная масса тела на сутки прибытия и средние на клетку на сутки 9 и сутки 20 эксперимента;

- масса тела птиц перед вскрытием;

- потребление пищи на клетку в периоды от суток 0 до 9 и ежесуточное потребление пищи в возрасте от 9 до 20 суток;

- повреждения, обусловленные кокцидиозом, и повреждения, обусловленные некротическим энтеритом, в слизистой оболочке тонкого кишечника у 24 птиц на обработку на сутки 15, сутки 16 и сутки 20 эксперимента (всего 72 птицы на обработку);

- смертность на клетку в возрасте от 0 до 20 суток.

Ежесуточно записывали все рутинные действия исследования, нарушения здоровья и смертность (с ее наиболее вероятной причиной).

Статистические анализы

Необработанные данные анализировали на выбросы. Значительные выбросы исключали из статистического анализа. Встречаемость повреждений НЭ (некротический энтерит) (% пораженных птиц) анализировали с помощью точного критерия Фишера, тогда как измерения тяжести повреждений и ежесуточного потребления пищи анализировали с помощью анализа варианс (ANOVA), используя статистическое программное обеспечение Genstat. Средние для обработки сравнивали путем наименьшей значимой разности (LSD). Р не более 0,05 считали статистически значимым, тогда как Р в интервале от более 0,05 до не более 0,10 считали тенденцией, близкой к значимой.

Результаты и обсуждение

Встречаемость и тяжесть повреждений

Оценка повреждений на сутки 15 (1 сутки после инфекции)

В таблице 2 приведен как процент положительно оцененных птиц (птиц с повреждениями НЭ), так и средний балл повреждения у всех положительно оцененных птиц. Поскольку средний балл повреждения всех исследованных птиц, как пораженных, так и не пораженных, дает более репрезентативную картину для популяции, статистические анализы проводили по этим результатам (см. пятую колонку таблицы 2). Тяжесть повреждений как у положительно, так и отрицательно оцененных птиц показана на шкале от 0 до 4 (см. раздел "оценка повреждений").

Таблица 2
Птицы, у которых наблюдали НЭ (%), и средняя тяжесть повреждений, оцениваемая на сутки 15 (1 сутки после инфекции)
Группа Обработка Дозировка Птицы, положительные по НЭ (%) Тяжесть повреждений Тяжесть повреждений (птицы, положит. по НЭ)1
1 Отрицательный контроль - 0a 0,0а 0,0
2 Положительный контроль - 16аб 0,5б 3,0
3 Испытуемая смесь 0,3% 17аб 0,4б 2,5
а,бЗначения без общего верхнего индекса в колонке различаются значимо (Р не более 0,05).
1) Тяжесть повреждений у птиц, оцененных положительно на НЭ.

Наблюдали значимый эффект обработки на встречаемость НЭ. Как ожидали, самую низкую встречаемость наблюдали при неинфекционной контрольной обработке, но результаты были сравнимы с результатами обработок с добавлением испытуемой смеси и инфекционного контроля без добавок.

На основании ANOVA был сделан вывод, что существует значимый эффект обработки на тяжесть некротических повреждений на сутки 15 (Р менее 0,001). По тяжести повреждений было очевидно, что повреждения были более тяжелыми при инфекционных обработках как без добавок, так и с добавкой, чем при неинфекционной контрольной обработке, где при последней не было положительно оцененных птиц. Среди инфекционных обработок статистически значимых различий не наблюдали.

Оценка повреждений на сутки 16 (2 суток после инфекции)

В таблице 3 процент положительно оцененных птиц и средний балл повреждений птиц приведены на сутки 16.

Таблица 3
Птицы, у которых наблюдали НЭ (%), и средняя тяжесть повреждений, оцениваемая на сутки 16 (2 сутки после инфекции)
Группа Обработка Дозировка Птицы, положительные по НЭ (%) Тяжесть повреждений Тяжесть повреждений (положит. птицы)1)
1 Отрицательный контроль - 0a 0,0а 0,0
2 Положительный контроль - 68б 2,1в 3,2
3 Испытуемая смесь 0,3% 41б 1,1б 2,7
а,бЗначения без общего верхнего индекса в колонке различаются значимо (Р не более 0,05).

Из сравнения результатов встречаемости НЭ и тяжести повреждений на сутки 16 с результатами суток 15 ясно, что тяжесть инфекции была выше 2 суток после инфекции. Хотя снова наблюдали статистически значимый эффект обработки на встречаемость НЭ, очевидно, что это является следствием различия между неинфекционной контрольной обработкой и инфекционными обработками, которое соответствовало ожидаемому, тогда как среди инфекционных обработок значимого различия не наблюдали.

Четкое отличие можно вывести в отношении тяжести повреждений на 2 сутки после инфекции. Обработка с добавлением испытуемой смеси приводила в результате к явному уменьшению тяжести повреждений по сравнению с инфекционным контролем без добавок, хотя средние баллы тяжести повреждений были все же выше, чем в неинфекционном контроле.

Оценка повреждений на сутки 20 (6 суток после инфекции)

На сутки 20 значимых различий между обработками не наблюдали. При всех обработках птицы выздоравливали от НЭ, по меньшей мере на основании макроскопического исследования, при 0% встречаемости и, очевидно, 0,0 для тяжести повреждений.

Смертность

Смертность является одним из параметров для измерения тяжести инфекции Clostridium в стаде. В данном эксперименте смертность сравнивали среди обработок. Смертность составила 14,6% при инфекционной контрольной обработке (обработка 2) и 0% в неинфекционном контроле. Добавление испытуемой смеси приводило в результате к снижению смертности (5,1%).

Параметры продуктивности

Помимо оценки повреждений, в период испытания измеряли параметры продуктивности, такие как масса тела и суточное потребление пищи.

Масса тела суточных бройлеров при всех обработках составляла примерно 47 грамм. Поскольку обработки от суток 0 до 9 были сходными, в этот период различий в приросте массы тела и потреблении пищи не наблюдали.

В период инфекции от суток 9 до 20 оба параметра продуктивности подверглись значимому влиянию индивидуальных обработок. Прирост массы тела был самым высоким в неинфекционном контроле, как ожидали, тогда как бройлеры при инфекционных обработках без добавок показали самый низкий прирост массы тела. Это привело к снижению конечной массы на 30% на сутки 20 (523 г в сравнении с 749 г). Инфекционная обработка с добавками привела в результате к значительно более высокому потреблению пищи и приросту массы тела по сравнению с инфекционным контролем без добавок. Снижение продуктивности могло быть уменьшено на 10%, показывая потерю конечной массы примерно на 20% по сравнению с неинфицированной контрольной группой (примерно 583 г в сравнении с 749 г). Был сделан вывод, что испытуемая смесь значительно повышала продуктивность во время субклинической инфекции Clostridium.

Пример 2: Тесты in vitro лактилатов против Clostridium

Жидкие культуры Clostridium perfringens ATCC 13124 выращивали в пробирках с завинчивающимися крышками (100×16 мм), содержащих 10 мл бульона с сердечно-мозговой вытяжкой (Oxoid CM225, Basingstoke, United Kingdom) в течение 24 часов при 30°С. Бульон с сердечно-мозговой вытяжкой готовили с варьирующими количествами лактилатов. рН сред доводили до 6,0 с помощью 9М серной кислоты, используя рН-метр Handylab рН 12, оборудованный датчиком Blueline 16 рН (микро) (№285129163). Все среды стерилизовали фильтрованием, используя 0,45 мкм целлюлозоацетатные фильтры (Minisart syringefilter, стерильные и апирогенные, №16555, Sartorius, Gottingen, Germany) (9). 300 мкл каждой среды переносили на панель стерильного 100-луночного сотового планшета Bioscreen honeycombe (Thermo electron Oy, Vantaa, Finland). Планшеты с заполненными лунками хранили при -30°С до дальнейшего использования.

В лунки планшетов вносили по 3 мкл культуры, используя стерильный диспенсер для многократного дозирования Hamilton (Hamilton, Bonaduz, Switserland). Скорость роста тестируемых организмов определяли при 30°С системой культивирования Bioscreen С (Оу Growth Curves AB Ltd, Helsinki, Finland). Чтобы обеспечить условия с низким содержанием кислорода, Bioscreen помещали внутрь анаэробного бокса, оборудованного датчиком кислорода М-12 типа (In Vivo2 400 hypoxia workstation, Biotrace International Plc, Bridgend, United Kingdom). Давление кислорода регулировали при 0% кислорода, используя модуль газового смесителя Ruskinn (Biotrace International Plc). Система Bioscreen С кинетически измеряет проявление мутности путем вертикальной фотометрии одновременно в количестве лунок вплоть до 200. Оптическую плотность культур автоматически измеряли при фиксированных интервалах времени при 420-580 нм, используя широкополосный фильтр.

В таблице 4 показаны значения МИК (минимальная ингибирующая концентрация) для различных лактилатов, тестируемых на Clostridium perfringens ATCC 13124 в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой. В скобках приведено число повторов. МИК обозначает минимальную ингибирующую концентрацию, которая представляет собой самую низкую концентрацию, где увеличение поглощения культуры не превышает порогового значения, которое было определено как среднее увеличение значения поглощения в пустых контролях плюс трехкратное стандартное отклонение. Оказалось, что даже при очень низкой концентрации лактилаты способны подавлять рост Clostridium perfringens.

Таблица 4
Значения МИК для различных лактилатов
Лактилаты Значения МИК
С8 лактилат 0,05% (2х)
С10 лактилат 0,04% (2х)
С12 лактилат 0,002% (2х)
С14 лактилат 0,001% (2х)
С16 лактилат 0,002% (2х)
С18:1 лактилат 0,02% (2х)
Смесь 1:1 С10/С12 лактилата 0,002% (3х)
Смесь 1:1 С12/С14 лактилата 0,001% (3х)

Пример 3: Исследования зависимости доза-ответ и исследования действия смеси лауроиллактилата натрия и миристоиллактилата натрия по предупреждению некротического энтерита у кур

Аналогично Примеру 1 было исследовано влияние дозы соединения. Кроме того, было исследовано применение смеси на цыплятах, которые не были предварительно инфицированы Eimeria и Clostridium.

Проведенные обработки суммированы в таблице 5.

Таблица 5
Описание обработок
Обработка Описание
1 Неинфекционная
2 Неинфекционная + 0,3% испытуемой смеси
3 Инфекционная1)
4 Инфекционная + 0,6% испытуемой смеси
5 Инфекционная + 0,3% испытуемой смеси
6 Инфекционная + 0,3% испытуемой смеси (диоксид кремния)
7 Инфекционная + 0,15% испытуемой смеси
8 Инфекционная + 0,075% испытуемой смеси
9 Инфекционная + 0,038% испытуемой смеси
10 Инфекционная + 0,019% испытуемой смеси
11 Инфекционная + 0,010% испытуемой смеси
12 Инфекционная + 0,005% испытуемой смеси
Испытуемая смесь была составлена из 50 масс.% лауроиллактилата натрия и 50 масс.% миристоиллактилата.

Результаты можно суммировать следующим образом. В данном эксперименте последовательная инфекция Е.maxima и С.perfringens приводила к заболеваемости некротическим энтеритом в 56% случаев и средней оценке повреждения 1,6 в течение первых двух суток после инфекции. Добавление в рацион птиц испытуемой смеси уменьшало число инфицированных птиц, и наблюдали эффект доза-ответ, показывающий самую высокую эффективность при 0,6% и 0,3% обработках. Тяжесть повреждений значительно уменьшалась вследствие добавления испытуемой смеси, и эффект доза-ответ по этому параметру также в значительной степени присутствовал. Повреждения были менее тяжелыми при обработках самыми высокими дозами испытуемой смеси. Добавление испытуемой смеси в чистой форме приводило к несколько лучшему ответу, чем добавление испытуемой смеси посредством носителя диоксида кремния. Добавление испытуемой смеси в количестве 0,6% приводило к значительному снижению смертности (4,6%), и она не была значительно выше, чем при неинфекционной контрольной обработке. Результаты с 0,3% испытуемой смеси подтвердили результаты, наблюдаемые при оценке повреждений.

В отношении продуктивности наблюдали эффект, когда сравнивали здоровых птиц в условиях добавления и без добавления испытуемой смеси друг с другом. Обеспечение испытуемой смесью вело к повышению массы тела в стартовой фазе и в ростовой фазе. Обеспечение инфицированных птиц высокими дозами испытуемой смеси приводило в результате к тому, что птицы имели конечную массу (сутки 37), сходную с массой птиц, которые вообще не были инфицированы.

Можно сделать вывод, что испытуемая смесь, особенно в дозе 0,3 масс.% или выше, эффективна при предупреждении развития некротического энтерита у бройлеров на основании пониженной заболеваемости и менее тяжелых повреждений.

Пример 4: Исследование активности лауроилгликолата натрия против грамположительных бактерий in vitro

1. Материалы и методы

1.1. Бактериальные культуры и условия культивирования

Штаммы, используемые в этом эксперименте:

Микроорганизм Штамм Происхождение
Clostridium perfringens NCTC 10240 Курица
Clostridium sporogenes NCTC 13020 Типовой штамм
Enterococcus faecalis DSM 20478 Типовой штамм
Lactobacillus acidophilus DSM 20079 Типовой штамм, среда человек/животное
Listeria monocytogenes
Staphylococcus aureus
NRRL В-33028
ATCC 6538P
Домашняя птица

Все культуры, кроме Clostridium perfringens и C.sporogenes, выращивали в пробирках с навинчивающимися крышками (100×16 мм), содержащих 10 мл бульона с сердечно-мозговой вытяжкой (Oxoid, Basingstoke, UK). Культуры Clostridium переносили в пробирки с навинчивающимися крышками, содержащими 10 мл среды мяса, прошедшего тепловую обработку (Cooked Meat medium, Oxoid). Все культуры инкубировали 24 ч при 30°С без перемешивания.

1.2. Тестируемые соединения

Готовили исходный раствор лауроилгликолата натрия в деминерализованной воде и рН доводили до 6,8 с помощью NaOH.

1.3. Исследования роста Bioscreen

Готовили бульон с сердечно мозговой вытяжкой с увеличивающимся содержанием тестируемого соединения. Готовили две различные серии концентраций: серию низких концентраций (low range) от 0 до 0,0045% с 10 шагами по 0,005% и серию высоких концентраций (high range) от 0 до 0,09% с 10 шагами по 0,01%. Среды готовили в количестве 10 мл и стерилизовали путем фильтрации (целлюлозно-нитратные мембраны Sartorius с диаметром пор 0,45 мкм). 200 мкл каждой среды переносили на панель стерильных 100-луночных планшетов Bioscreen honeycomb (Oy Growth Curves Ab Ltd, Helsinki, Finland). Планшеты с заполненными лунками замораживали при -20°С, герметично упаковывали в полиэтиленовые пакеты и хранили при -20°С до последующего использования.

1.4. Исследования роста Bioscreen

Луночные планшеты быстро размораживали и инокулировали 3 мкл культуры, которая росла в течение ночи в бульоне с сердечно-мозговой вытяжкой или среде мяса, прошедшего тепловую обработку. Скорости роста определяли с помощью Bioscreen С (Oy Growth Curves Ab Ltd, Helsinki, Finland), которые кинетически измеряли развитие помутнения путем вертикальной фотометрии. Планшеты инкубировали в течение 72 ч при 30°С, оптическую плотность культур измеряли каждые 15 минут при 420-580 нм с использованием широкополосного фильтра. Две культуры Clostridium растили при анаэробных условиях, что выполняли путем помещения Bioscreen внутрь анаэробной камеры Invivo2 hypoxia (Ruskin Technology Ltd/Ruskin Life Sciences Ltd, Bridgend, UK), оборудованной газовым смесителем Ruskin gasMixer Q(N2). Уровень кислорода устанавливали на 0,1%. Луночные планшеты Bioscreen предварительно уравновешивали азотом путем помещения их на ночь в анаэробные условия. Луночные планшеты инокулировали внутри камеры 3 мкл активно растущей культуры Clostridium.

2. Результаты и обсуждение

В таблице 1 представлены величины МИК (минимальная ингибирующая концентрация, то есть наиболее низкая концентрация, способная минимизировать рост бактерий в специфических условиях) после 72 ч при 30°С.

Таблица 1: Величины МИК лауроилгликолата натрия после 72 ч при 30°С (наиболее высокие из двух повторов).

Микроорганизм По Граму МИК (%)
Clostridium perfringens Положительный 0,01
Clostridium sporogenes Положительный 0,01
Enterococcus faecalis Положительный 0,09
Lactobacillus acidophilus Положительный 0,002
Listeria monocytogenes Положительный 0,01
Staphylococcus aureus Положительный 0,01

Как видно из таблицы 1, лауроилгликолат натрия демонстрирует значительную активность против различных штаммов грамположительных бактерий.

Примеры питательной композиции для животных

Питательная композиция приготовлена в соответствии с нидерландскими страндартами для удовлетворения потребности бройлеров в питательных веществах (CVB, 2006). Лауриллактилат натрия добавляли в количестве 0,5% от общей массы питательной композиции.

Питательная композиция приготовлена в соответствии с нидерландскими страндартами для удовлетворения потребности бройлеров в питательных веществах (CVB, 2006). Лаурилгликолилат натрия добавляли в количестве 0,5% от общей массы питательной композиции.

Питательная композиция приготовлена в соответствии с нидерландскими страндартами для удовлетворения потребности бройлеров в питательных веществах (CVB, 2006). Лауриллактат добавляли в количестве 0,5% от общей массы питательной композиции.

Питательная композиция приготовлена в соответствии с нидерландскими страндартами для удовлетворения потребности бройлеров в питательных веществах (CVB, 2006). Лаурилгликолат добавляли в количестве 0,5% от общей массы питательной композиции.

1. Применение для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, антибактериального соединения, выбранного из лактилата формулы 1,
формула 1: R2-СОО-[-СН(СН3)-СОО]n-R1,
или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II),
гликолилата формулы 2,
формула 2: R2-COO-[-CH2-COO]n-R1,
или его соли Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II),
эфира молочной кислоты формулы 3,
формула 3: НО-СН(СН3)-СОО-R2,
и/или эфира гликолевой кислоты формулы 4,
формула 4: HO-CH2-COO-R2,
где в приведенных выше формулах R1 выбран из Н, n обозначает целое число со значением 1-10, и R2 обозначает С1-С35алкильную или алкенильную цепь, которая может быть разветвленной или неразветвленной.

2. Применение по п.1, где антибактериальное соединение представляет собой лактилат формулы 1 или его соль Na, К, Са, Mg, Fe(II), Zn, NH4 или Cu(II).

3. Применение по п.1, где R2 представляет собой С6-С18алкильную или алкенильную цепь.

4. Применение по п.1, где n равен 1, 2 или 3.

5. Антибактериальное соединение по любому из пп.1-4 для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных.

6. Соединение по п.5, где грамположительная бактерия относится к роду Clostridia.

7. Соединение по п.5, где животное выбрано из крупного рогатого скота или домашней птицы.

8. Применение антимикробного соединения по любому из пп.1-4 для изготовления композиции для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных.

9. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая антимикробное соединение по любому из пп.1-4.

10. Питательная композиция для животных по п.9, где грамположительная бактерия относится к роду Clostridia.

11. Питательная композиция для животных по п.9, где животное выбрано из крупного рогатого скота или домашней птицы.

12. Способ предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, включающий кормление животного эффективным количеством антимикробного соединения по любому из пп.1-4.

13. Способ по п.12, где грамположительная бактерия относится к роду Clostridia.

14. Способ по п.12, где животное выбрано из крупного рогатого скота или домашней птицы.

15. Применение по любому из пп.1-4 или 8, где грамположительная бактерия относится к роду Clostridia.

16. Применение по любому из пп.1-4 или 8, где животное выбрано из крупного рогатого скота или домашней птицы.

17. Способ увеличения роста животного, включающий кормление животного эффективным количеством антимикробного соединения по любому из пп.1-4.

18. Способ по п.17, где рост животного увеличивают путем подавления грамположительных бактерий в кишечнике посредством кормления животного эффективным количеством антимикробного соединения по любому из пп.1-4.

19. Способ по п.18, где рост животного увеличивают путем подавления видов Lactobacillus в кишечнике посредством кормления животного эффективным количеством антимикробного соединения по любому из пп.1-4.

20. Применение антимикробного соединения по любому из пп.1-4 против некротического энтерита.

21. Применение антимикробного соединения по любому из пп.1-4 для улучшения отношения прироста массы к потреблению корма.

22. Применение антимикробного соединения по любому из пп.1-4 для улучшения усваиваемости аминокислот, вводимых в кормах для животных, при условии, что это соединение не представляет собой соединение формулы 1, где n равен 1.

23. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение по любому из пп.1-4 в комбинации с одним или более чем одним компонентом, выбранным из пшеницы, крахмала, мясной и костной муки, маиса, муки подсолнечника, кукурузы, зерновых, ячменя, соевой муки, тапиоки, цитрусовой пульпы, бобовых и свекловичной пульпы.

24. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение по любому из пп.1-4 в комбинации с кокцидиостатическим компонентом.

25. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение по любому из пп.1-4, где соединение присутствует на носителе.

26. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение по любому из пп.1-4, где соединение добавляют в смеси с растительным маслом.

27. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение по любому из пп.1-4, где соединение присутствует в количестве от 0,001 до 1 мас.%, более конкретно от 0,001 до 0,5 мас.% относительно суммарной массы каждой порции корма животного.

28. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение по любому из пп.1-4, в отсутствие неорганической кислоты, выбранной из кислот, содержащих азот, серу и фосфор, для повышения содержания недиссоциированной молочной кислоты.

29. Питательная композиция для животных для предупреждения или лечения кишечных инфекций, вызванных грамположительными бактериями у животных, содержащая соединение формулы 1 по любому из пп.1-4, где соединение выбрано из одного или более чем одного из лауроиллактилата, миристоиллактилата, цетиллактилата, пальмитиллактилата и их натриевых солей.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к способу получения бета-лактамных антибиотиков в виде гелей полимерных комплексов с ионами серебра, включающему приготовление растворов натриевых солей антибиотиков концентрации 0,1÷1,0 моль/л, раствора нитрата серебра концентрации 0,1÷1,0 моль/л, смешивание, соблюдая соотношение антибиотик: серебро не менее 1 и не более 9, полученных растворов при температуре 10÷40°С с образованием дисперсии белого цвета, выдерживание дисперсии без перемешивания до ее обесцвечивания с образованием бесцветных прозрачных гелей, отличающемуся тем, что в качестве антибиотика используются производные оксациллина, растворы натриевых солей антибиотика содержат 50-90 объемных процентов воды и 10-50 объемных процентов органического растворителя.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и вирусологии. .

Изобретение относится к тиопроизводному пиридина, представленному общей формулой (I), или к его фармакологически приемлемой соли: где R1 и R2, соответственно, представляют атом водорода; R3 и R 4, соответственно, представляют атом водорода или С 1-8алкиловую группу; Х представляет -О- или -S-; Y представляет С1-12алкиловую группу, которая может быть замещена заместителем, выбранным из группы, состоящей из гидроксильной группы, C1-8алкоксигруппы или -(R5-O) n-R6 (где R5 представляет С1-5 алкиленовую группу, R6 представляет С1-8 -алкиловую группу, которая может быть замещена атомом галогена, и n означает целое число от 1 до 2) и Z представляет атом водорода.
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения герпетического стоматита у ВИЧ-инфицированных больных. .
Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для лечения герпетического стоматита у ВИЧ-инфицированных больных. .

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии и предназначено для лечения заболеваний, вызванных вирусом герпеса. .

Изобретение относится к области медицины и фармацевтики и касается ингибиторов роста Mycobacterium tuberculosis, представляющих собой (+) и (-)-энантиомеры производных усниновой кислоты, содержащих тиазольный цикл.

Изобретение относится к комбинации, по меньшей мере, двух описанных здесь пролекарств. .

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, эндокринологии, и может быть использовано для коррекции дисбиоза влагалища при метаболическом синдроме. .

Изобретение относится к новому липидному соединению общей формулы (I), в которой n=0; R1 и R2 являются одинаковыми или различными и могут быть выбраны из группы заместителей, состоящей из атома водорода, С1 -С7алкильной группы, атома галогена и С1 -С7алкокси группы; Х представляет собой COR3 или CH2OR4, где R3 выбран из группы, состоящей из водорода, гидрокси, С1-С 7алкокси и амино; и R4 выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С7алкила или С1 -С7ацила, Y представляет собой С9-С 21алкен с одной или несколькими двойными связями в Е- или Z-конфигурации, при этом цепь Y является незамещенной и содержит двойную связь в -3 положении; при условии, что R1 и R2 не могут одновременно представлять собой атом водорода.

Изобретение относится к пищевой и фармацевтической промышленности. .

Изобретение относится к композициям, обладающим активностью по улучшению пониженной дневной активности и/или депрессивных симптомов. .
Изобретение относится к косметической промышленности и представляет собой композицию для получения косметических эмульсий типа «масло в воде» или «вода в масле», которая включает одно или несколько масел растительного происхождения, один или несколько полиолов, неполные сложные эфиры полиолов и сложные эфиры алифатических спиртов и жирных кислот, входящих в состав масла, используемого в данной композиции, в виде триглицеридов.

Изобретение относится к лекарственному препарату для лечения венозных мальформаций, вводимому с помощью инъекций. .

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), где X является карбоновой кислотой, карбоксилатом, карбоксильным ангидридом, диглицеридом, триглицеридом, фосфолипидом, или карбоксамидом, или к их любой фармацевтически приемлемой соли.

Изобретение относится к соединению, представленному формулой (II-А), или к его фармацевтически приемлемой соли: [в которой символы имеют следующие значения: R 10-R12: одинаковые или различные, обозначают, каждый, галоген, низший алкил, галоген-низший алкил, -OR 0, -O-галоген-низший алкил или -CN, R13: R 0, галоген, галоген-низший алкил, -OR0, -O-галоген-низший алкил или -CN, кольцо В: бензольное кольцо или 5-6-членное гетероароматическое кольцо, содержащее 1-2 гетероатома, выбранных из О, S и N, R 14: R0, галоген или -OR0, R0 : одинаковые или различные, обозначают, каждый, Н или низший алкил, Y1: простая связь, низший алкилен, низший алкенилен или -O-низший алкилен-, и Z1: -CO2R 0 или -СO-NH-SO2-низший алкил].

Изобретение относится к новым соединениям - производным бензохинонов формулы (I): где каждый R1 и R2 представляет собой O-С(O)фенил; где фенил замещен 1 заместителем, выбранным из галоида, нитро, C1-С6алкила или С1-С6алкокси, и к их фармацевтически приемлемым солям.

Изобретение относится к кормопроизводству, в частности получению кормовых добавок, нормализующих обмен веществ и повышающих неспецифическую резистентность организма у животных.
Наверх