Способ определения концентрации аскорбиновой кислоты



Способ определения концентрации аскорбиновой кислоты

 


Владельцы патента RU 2486509:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Воронежский государственный технический университет" (RU)

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к области фармации, и описывает способ определения концентрации или содержания аскорбиновой кислоты в жидких лекарственных формах, включающий подготовку доз анализируемого и стандартного образцов, причем в кювету хемилюминометра последовательно вносят 0,6 мл Na-фосфатного буфера (0,05 моль/л, pH 8,3), 0,1 мл раствора тетраметилендиамин (0,05 моль/л) в натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (0,2 ммоль/л), 0,1 мл исследуемого образца и 0,2 мл раствора рибофлавина (0,034 ммоль/л), в контрольную пробу вносят такой же объем дистиллированной воды, далее реакцию инициируют облучением лампы видимого света (100 Вт) на расстоянии 20 см в течение 60 с, за 10 с до истечения времени облучения вносят 0,1 мл раствора люминола (0,25 ммоль/л), после облучения кюветное отделение перемещают в рабочее положение перед фотокатодом фотоэлектронного умножителя (≈1 с) биохемилюминометра и регистрируют вспышку ХЛ, и концентрацию аскорбиновой кислоты в смеси или ее содержание рассчитывают в тех единицах, в каких он выписан в прописи, по формуле. Способ характеризуется оптимальной экспрессностью (малые объемы проб, быстрота регистрации (1 мин), простота подготовки образцов к исследованию) и высокой воспроизводимостью и точностью. 4 пр., 1 табл., 1 ил.

 

Изобретение относится к аналитической химии, к области фармации и может быть использовано для количественного определения аскорбиновой кислоты в лекарственных препаратах.

Для количественного определения аскорбиновой кислоты применяют титриметрические методы: алкалиметрию, основанную на кислотных свойствах аскорбиновой кислоты, и методы йодатометрии, йодометрии и йодхлорметрии, основанные на выраженных восстановительных свойствах аскорбиновой кислоты /Фармацевтическая химия: учеб. пособие / Под ред. А.П.Арзамасцева. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. - 640/.

Недостатками известных способов является то, что при количественном определении аскорбиновой кислоты в жидких лекарственных формах следует учитывать наличие стабилизаторов, которые будут реагировать с титрантом.

Известен способ определения содержания аскорбиновой кислоты с использованием биосенсора на основе кожуры кабачка и кислородного электрода /Будников Г.К. Биосенсоры как новый тип аналитических устройств // Соровский образовательный журнал. - 1996. - №12. - С.26-32/. Недостатком способа является низкая селективность определения.

Наиболее близким по технической сущности и достигаемому результату к заявляемому решению является способ дифференциальной фотоколориметрии, основанный на измерении светопоглощения анализируемого раствора относительно раствора сравнения, содержащего определенное количество стандартного образца аскорбиновой кислоты /Большая медицинская энциклопедия / Главный ред. Б.В.Петровский. - М.: Сов. Энцикл., 1975. - Т.2. - С.266/. Недостатками способа является фотоколориметрирование только гомогенных систем.

Задачей настоящего изобретения является разработка способа, позволяющего с высокой точностью и воспроизводимостью оценивать содержание аскорбиновой кислоты в фармацевтических препаратах. Способ должен быть простым в применении и не слишком дорогим.

Поставленная задача решается тем, что определение концентрации аскорбиновой кислоты проводят по ингибированию фотоиндуцированной хемилюминесценции (ХЛ), опосредованной реакцией люминола с супероксидными анион-радикалами, образующимися в системе тетрамителендиамин-рибофлавин, в присутствии образцов, содержащих аскорбиновую кислоту. Витамин С конкурирует с люминолом за супероксидные анион-радикалы, что приводит к снижению интенсивности ХЛ.

Данный способ осуществляется следующим образом.

В кювету хемилюминометра последовательно вносят 0,6 мл Na-фосфатного буфера (0,05 моль/л, pH 8,3), 0,1 мл раствора тетрамителендиамин (0,05 моль/л) в натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (0,2 ммоль/л), 0,1 мл исследуемого образца и 0,2 мл раствора рибофлавина (0,034 ммоль/л). В контрольную пробу вносят такой же объем дистиллированной воды. Реакцию инициируют облучением лампы видимого света (100 Вт) на расстоянии 20 см в течение 60 с. За 10 с до истечения времени облучения вносят 0,1 мл раствора люминола (0,25 ммоль/л). После облучения кюветное отделение перемещают в рабочее положение перед фотокатодом фотоэлектронного умножителя (≈1 с) биохемилюминометра и регистрируют вспышку ХЛ.

Концентрацию аскорбиновой кислоты в смеси или ее содержание рассчитывают в тех единицах, в каких она выписана в прописи, по формуле

C x = ( I к I и с с л ) а 0 W P ( I к I с т ) а V a

где Iиссл - интенсивность ХЛ в опытной кювете, содержащей исследуемый образец, мВ; Iст - интенсивность ХЛ в опытной кювете, содержащей рабочий стандартный образец (РСО), мВ; Iк - интенсивность ХЛ в контрольной кювете (вместо анализируемого и стандартного образцов вносят такой же объем дистиллированной воды), мВ; а0 - навеска аскорбиновой кислоты для РСО, г; а - навеска (объем) лекарственного препарата, взятой для определения. Г (мл); W - объем колбы, в которой проводили разведение, мл; P - средняя масса (объем) лекарственной формы, г (мл); если Р=100, то получаем Сх в процентах, если за Р принимаем средний вес (объем) лекарственной формы, то Сх - масса (г) витамина в одной лекарственной форме; Va - объем разведения, взятый для определения, мл.

Выбор pH Na-фосфатного буфера обусловлен тем, что при слабощелочных значениях pH реакция взаимодействия витамина С с супероксидными анион-радикалами протекает эффективней. На рисунке показаны значения интенсивности ХЛ при окислении люминола до (1 и 3) и после (2 и 4) внесения раствора аскорбиновой кислоты в концентрации 130 мг/л при pH 6,8 (а) и 8,3 (б).

Предложенный способ применим к исследуемым объектам в жидком состоянии. Твердые вещества перед анализом переводят в жидкие формы. Диапазон концентраций аскорбиновой кислоты в исследуемом образце от 4 до 130 мг/л; зависимость интенсивности ХЛ реакционной смеси от концентрации аскорбиновой кислоты в указанном диапазоне его концентраций подчиняется линейному уравнению.

Способ определения содержания аскорбиновой кислоты поясняется следующими примерами.

Пример 1

0,3 г (точная навеска) растертых таблеток лекарственного препарата "Стрепсилс с Витамином С" (таблетка массой 2,6 г содержит 100 мг аскорбиновой кислоты, 1,2 мг 2,4-дихлорбензилового спирта, 0,6 мг амилметакрезола) помещают в мерную колбу на 100 мл, доводят водой очищенной до метки и перемешивают. 100 мкл исследуемого образца вносят в реакционную смесь в кювету хемилюминометра и регистрируют интенсивность ХЛ (как описано выше). Параллельно проводят опыт с рабочим стандартным образцом (РСО) аскорбиновой кислоты (100 мл содержит 0,013 г аскорбиновой кислоты). В качестве раствора сравнения применяют воду.

Содержание аскорбиновой кислоты в одной таблетке лекарственного препарата в г (X) вычисляют по формуле

X ( г / т а б л . ) = ( I к I и с с л ) а 0 P ( I к I с т ) а

где Iиссл, Iст - интенсивность ХЛ в опытной кювете, содержащей исследуемый и стандартный образцы соответственно, мВ; Iк - интенсивность ХЛ в контрольной кювете (вместо анализируемого и стандартного образцов вносят такой же объем дистиллированной воды), мВ; а и а0 - навеска порошка таблеток и РСО соответственно, г; Р - средняя масса таблетки, г.

X ( г / т а б л . ) = ( 27,5 3,9 ) 0,013 2,6 ( 27,5 1,5 ) 0,3 = 0,102   г

Пример 2

0,05 г (точная навеска) гранул лекарственного препарата "Кальций СЕ-ДИКО" (Аскорбиновая кислота + Кальция карбонат + Колекальциферол; однодозовый пакетик с шипучими быстрорастворимыми гранулами для приготовления суспензии содержит витамина С 180 мг, ионизированного кальция 500 мг (эквивалент 1275 мг кальция карбонат), холекальциферола (витамина D3) 400 ME; в пакетиках по 3,9 г) помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят водой очищенной до метки и перемешивают. Проводят определение содержания аскорбиновой кислоты в лекарственном препарате как описано выше.

Содержание аскорбиновой кислоты в однодозовом пакетике с гранулами лекарственного препарата рассчитывают в г (X):

X ( г / п а к е т и к ) = ( 27,5 8,4 ) 0,013 3,9 25 ( 27,5 1,5 ) 0,05 100 = 0,186   г

Пример 3

К 1 мл лекарственного препарата "Аскорбиновая кислота" (5% раствор аскорбиновой кислоты для инъекций в ампулах по 1 мл) добавляют 4 мл воды очищенной и перемешивают. 100 мкл исследуемого образца используют для определения концентрации аскорбиновой кислоты (как описано выше).

Концентрацию аскорбиновой кислоты рассчитывают в процентах (С%):

C % = ( 27,5 7,9 ) 0,013 5 100 ( 27,5 1,5 ) 1 = 4,9 %

Пример 4

К 0,1 мл лекарственного препарата "Цитовир-3" (сироп для детей во флаконах по 50 мл; состав на 50 мл: аскорбиновая кислота 0,6 г, α-глутамил-триптофан в форме натриевой соли 0,0075 г, бендазол 0,0625 г, сахароза 40,00 г, вода очищенная до 50,00 мл;) добавляют воды очищенной до 10 мл и перемешивают. 100 мкл исследуемого образца используют для определения содержания аскорбиновой кислоты (как описано выше).

Содержание аскорбиновой кислоты во флаконе рассчитывают в г (X):

Х ( г / ф л а к о н ) = ( 27,5 3,1 ) 0,013 50 10 ( 27,5 1,5 ) 0,1 100 = 0,61   г

Изобретение иллюстрируется примерами, представленными в таблице.

Таким образом, предлагаемый способ определения содержания аскорбиновой кислоты в препаратах по сравнению с прототипом характеризуется оптимальной экспрессностью (малые объемы проб, быстрота регистрации (1 мин), простота подготовки образцов к исследованию) и высокой чувствительностью; благодаря небольшой толщине слоя реакционной смеси (1 см) при облучении и при регистрации вспышки ХЛ способ позволяет проводить определение содержания аскорбиновой кислоты в сложных системах, что невозможно при использовании фотоколориметрического метода.

Таблица
Способ определения аскорбиновой кислоты
Название лекарственного препарата Форма выпуска, состав Iк, мВ Iст, мВ Iиссл, мВ Расчет содержания аскорбиновой кислоты
Стрепсилс с Витамином С таблетки по 2,6 г: 100 мг аскорбиновой кислоты, 1,2 мг 2,4-дихлорбензилового спирта, 0,6 мг амил-метакрезола 27,5 1,5 3,9 X ( г / т а б л . ) = ( 27,5 3,9 ) 0,013 2,6 ( 27,5 1,5 ) 0,3 = 0,102   г
Кальций СЕДИКО однодозовые пакетики с гранулами по 3,9 г: витамин С 180 мг, ионизированного кальция 500 мг (эквивалент 1275 мг кальция карбонат), холекальциферола 400 ME 27,5 1,5 8,4 X ( г / п а к е т и к ) = ( 27,5 8,4 ) 0,013 3,9 25 ( 27,5 1,5 ) 0,05 100 = 0,186   г
Аскорбиновая кислота ампулы по 1 мл: 5% раствор аскорбиновой кислоты 27,5 1,5 7,9 C % = ( 27,5 7,9 ) 0,013 5 100 ( 27,5 1,5 ) 1 = 4,9 %
Цитовир-3 сироп во флаконах по 50 мл: аскорбиновая кислота 0,6 г, α-глутамил-триптофан в форме натриевой соли 0,0075 г, бендазол 0,0625 г, сахароза 40,00 г, вода очищенная до 50,00 мл 27,5 1,5 3,1 Х ( г / ф л а к о н ) = ( 27,5 3,1 ) 0,013 50 10 ( 27,5 1,5 ) 0,1 100 = 0,61   г

Способ определения концентрации или содержания аскорбиновой кислоты в жидких лекарственных формах, включающий, подготовку доз анализируемого и стандартного образцов, отличающийся тем, что в кювету хемилюминометра последовательно вносят 0,6 мл Na-фосфатного буфера (0,05 моль/л, pH 8,3), 0,1 мл раствора тетраметилендиамин (0,05 моль/л) в натриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты (0,2 ммоль/л), 0,1 мл исследуемого образца и 0,2 мл раствора рибофлавина (0,034 ммоль/л), в контрольную пробу вносят такой же объем дистиллированной воды, далее реакцию инициируют облучением лампы видимого света (100 Вт) на расстоянии 20 см в течение 60 с, за 10 с до истечения времени облучения вносят 0,1 мл раствора люминола (0,25 ммоль/л), после облучения кюветное отделение перемещают в рабочее положение перед фотокатодом фотоэлектронного умножителя (≈1 с) биохемилюминометре и регистрируют вспышку ХЛ, и концентрацию аскорбиновой кислоты в смеси или ее содержание рассчитывают в тех единицах, в каких он выписан в прописи, по формуле:
C x = ( I к I и с с л ) а 0 W P ( I к I с т ) а V a ,
где Iиссл - интенсивность ХЛ в опытной кювете, содержащей исследуемый образец, мВ; Iст - интенсивность ХЛ в опытной кювете, содержащей рабочий стандартный образец (РСО), мВ; Iк - интенсивность ХЛ в контрольной кювете (вместо анализируемого и стандартного образцов вносят такой же объем дистиллированной воды), мВ; a0 - навеска аскорбиновой кислоты для РСО, г; a - навеска (объем) лекарственного препарата, взятой для определения, Г (мл); W - объем колбы, в которой проводили разведение, мл; P - средняя масса (объем) лекарственной формы, г (мл); если Р=100, то получают Сх в процентах, если за Р принимают средний вес (объем) лекарственной формы, то Сх - масса (г) витамина в одной лекарственной форме; Va - объем разведения, взятый для определения, мл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам обнаружения биологически активного соединения - лизина, в сложных смесях. .

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтическому анализу лекарственного растительного сырья, и описывает способ количественного определения полисахаридов в траве видов рода фиалка, включающий измельчение сырья, водную экстракцию полисахаридного комплекса при нагревании, внесение реагента, фильтрацию и определение содержания полисахаридов по формуле, отличающийся тем, что в качестве растительного сырья используют траву фиалки одноцветковой, водную экстракцию проводят в течение 1 часа при соотношении сырье:экстрагент, как 1:50, экстракт фильтруют и к фильтрату, в соотношении 1:1, добавляют 8%-ную хлористоводородную кислоту, выдерживают в течение 2-х часов на кипящей водяной бане, после чего охлаждают и нейтрализуют до pH=6,5-7,0, затем добавляют 1%-ный раствор пикриновой кислоты и 20%-ный раствор карбоната натрия, взятые в соотношении 1:3, полученную смесь выдерживают на водяной бане в течение 30 минут, после чего фильтруют и фильтрат спектрофотометрируют в кювете с толщиной поглощающего слоя 1 см при длине волны =460±2 нм, а определение количественного содержания полисахаридов проводят в пересчете на глюкозу по формуле.

Изобретение относится к химическим способам анализа, в частности к определению производных нитрофурана, пиразола, изоникотиновой кислоты, тиоаминокислот в лекарственных формах.

Изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания озона в озонированной перфторуглеродной эмульсии путем фотометрического измерения количества йода, выделяющегося в результате воздействия озона озонированной эмульсии на раствор йодистого калия с крахмалом, где перед проведением определения предварительно готовят реакционный раствор, содержащий йодистый калий и крахмал, из которого приготовляются подготовительный анализируемый и подготовительные калибровочные растворы, содержащие одинаковое количество йодистого калия и крахмала; к подготовительному анализируемому раствору приливается определенный объем озонированного перфторана, а к подготовительным калибровочным растворам последовательно добавляются такой же объем неозонированного перфторана и титрованный раствор йода в йодистом калии в количестве, необходимом для построения калибровочного графика; приготовленные растворы оставляют стоять в защищенном от света месте при температуре 20°С; растворы фотометрируют на фотоколориметре или спектрофотометре на длине волны 610 нм, следя за ходом изменения оптической плотности во времени до момента совпадения хода кривых калибровочных и исследуемого растворов; строят калибровочный график и вычисляют содержание озона в анализируемой эмульсии.
Изобретение относится к хроматографическому анализу различных химических соединений и может быть использовано в медицине, биологии, экологии и, в особенности, при допинговом контроле.

Изобретение относится к медицине и описывает способ получения тест-объекта для оценки цитотоксичности лекарственных средств, включающий использование роговицы эмбриональных цыплят и клеточной технологии, причем выделяют роговицу эмбрионов цыплят 7-14 дней гестации, которую измельчают и замораживают в парах жидкого азота до -180°С, при оценке цитотоксичности лекарственных средств замороженный материал подвергают медленной разморозке, переносят в центрифужную пробирку и трехкратно отмывают в растворе NaCl 0,9%, а затем измельчают клеточные элементы до получения гомогенной клеточной суспензии, осаждают строму в центрифуге, надосадок, содержащий клетки роговицы, переносят в стерильную пробирку и вновь осаждают клетки, супернатант удаляют, а к осадку, содержащему роговичные клетки, добавляют 1 мл раствора NaCl 0,9% и ресуспендируют, в полученной суспензии считают цитоз и определяют жизнеспособность клеток по окрашиванию их ДНК-флуорохромами на проточном цитофлюориметре, затем раствором NaCl 0,9% суспензию клеток роговицы доводят до концентрации 5,0·105 клеток в 1 мл и переносят в культуральные флаконы и добавляют исследуемые препараты, для контроля в один из флаконов добавляют NaCl 0,9%, дальнейшую инкубацию проводят в культуральных флаконах в СO2 инкубаторе в течение суток, далее суспензии клеток переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют для осаждения клеток и отбирают по 1 мл суспензии каждого опыта для исследования цитотоксичности по окрашиванию клеток ДНК-флуорохромами, цитотоксичность исследуемых веществ оценивают на проточном цитофлюориметре.

Изобретение относится к аналитической химии применительно к экспресс-анализу лекарственных препаратов, преимущественно для обнаружения и количественного определения активнодействующего вещества.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано в контрольно-аналитических, клинических лабораториях для определения концентрации цефалоспориновых антибиотиков.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к исследованию рецептору, сопряженному с G-белком, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для фотоэлектроколориметрического определения сульфаниламидных препаратов - стрептоцида, сульфадимезина, этазола, сульфалена, фталазола, сульфатиазола, сульфадиметоксина, сульфамонометоксина в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях
Изобретение относится к медицине, в частности к фармакогнозии и фармации, конкретно к способу определения содержания кальция в жидких экстрактах из растительного сырья

Изобретение относится к области медицины и описывает способ определения содержания воды в таблеточной массе при промышленном производстве таблеток путем кулонометрического титрования, где в основе лежит взаимодействие воды, содержащейся в исследуемом образце, с кулонометрическим титрантом - электрогенерированным йодом, который образуется при электролизе органического или неорганического йодида (например, СН3I или KI), входящего в состав фонового электролита при постоянной силе тока 50 мА в течение времени, определяемого биопотенциометрически по достижению конечной точки титрования, содержание воды (X, г) в аликвоте исследуемого образца рассчитывается по формуле, и параллельно проводят определение воды в растворителе и по известным формулам рассчитывают содержание воды в таблеточной массе
Изобретение относится к области аналитической химии и биохимической клинической лабораторной диагностики и может быть использовано для определения содержания аскорбиновой кислоты в растворах, растительном и животном материале

Изобретение относится к аналитической химии и фармацевтике и может быть использовано для извлечения пуриновых алкалоидов из водных сред с целью их последующего определения

Изобретение относится к фармацевтическому анализу и может быть использовано для количественного определения лекарственных веществ - производных бигуанидов: глибутида, метформина, прогуанила ГХ, пиклоксидина и хлоргексидина в субстанциях в центральных заводских лабораториях, в контрольно-аналитических лабораториях, в биохимических лабораториях клиник и судебно-химических лабораториях

Изобретение относится к области биологии, медицины, ветеринарии и может быть использовано для проведения исследования биологической активности веществ в биологии, медицине и ветеринарии

Настоящее изобретение относится к биологии и медицине и описывает способ отбора анальгетических средств, который позволяет осуществлять поиск биологически активных веществ с анальгетическим действием в рядах NH-замещенных антраниловых кислот (1), ариламидов NH-замещенных антраниловых кислот (2), ариламидов N-ацил-N-алкенил(алкил)антраниловых кислот (3), амидов и гидразидов NH-ацил(галоген)антраниловых кислот (4), имеющих общий фрагмент: карбонил, фенильный радикал и вторичная или третичная аминогруппы, у которых определяют параметры электронной структуры молекул соединений и выбирают дескрипторы: энергия Хартри-Фока (ЕHF), полная тепловая энергия (EТЕРМ), заряды на атомах азота (qN), углерода (qC) и кислорода (qO), затем с помощью трехпараметровых уравнений рассчитывают анальгетическую активность (ААрасч.) и отбирают соединения, у которых теоретически рассчитанная АА равна или превосходит таковую препарата сравнения, выбранные соединения синтезируют и подтверждают расчетные данные экспериментально на лабораторных животных (ААэксп.). Способ экономически выгоден, так как позволяет проводить экспериментальные скрининговые исследования на животных не на всем объеме синтезированных веществ, а только тех, АА которых равна или превосходит аналог по действию. 9 табл., 3 пр.

Группа изобретений относится к соединениям - модификаторам хемосенсорных рецепторов и их лигандов, имеющим структурную формулу (IIIb), их подвидам и конкретным соединениям, съедобным композициям, содержащим модификаторы хемосенсорных рецепторов и их лигандов, имеющие структурную формулу (IIIb), их подвиды и конкретные соединения, а также к способам применения вышеуказанных соединений для улучшения сладкого вкуса съедобных композиций. Соединения данной группы изобретений обеспечивают возможность получения и улучшения сладкого вкуса. 6 н. и 18 з.п. ф-лы, 19 ил., 44 табл., 813 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу специфического отбора высокоаффинных молекул ДНК (ДНК-аптамеров) к рекомбинантному белку-мишени. Указанный способ включает синтез единой полипептидной цепи рекомбинантного белка, содержащего в своем составе фрагмент глютатион-S-трансферазы, целевой белок-мишень, пептидную последовательность, расщепляемую летальным фактором B. anthracis, и пептид, биотинилирующийся in vivo под действием фермента биотин-лигазы E.coli, связывание полученного рекомбинантного полипептида с библиотекой олигонуклеотидов и иммобилизацию белка на парамагнитных частицах, несущих глютатион, промывку парамагнитных частиц с иммобилизованным полипептидом от несвязавшихся олигонуклеотидов в потоке жидкости, отщепление белка-мишени со связанными ДНК-аптамерами с поверхности парамагнитных частиц летальным фактором B. anthracis, выделение и амплификацию аффинной к рекомбинантному белку-мишени последовательности ДНК в полимеразной цепной реакции и получение набора одноцепочечных ДНК-аптамеров, специфичных к белку-мишени. Изобретение позволяет эффективно получать высокоаффинные специфичные ДНК-аптамеры к рекомбинантным белкам-мишеням. 4 ил., 4 пр.
Наверх