Способ оценки эффективности антибактериальной терапии chlamydophila pneumoniae и mycoplasma pneumoniae у детей раннего возраста, больных острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом

Авторы патента:

Григорьева Валентина Николаевна (RU)

G01N33/533 - с флуоресцентными метками

Владельцы патента RU 2486525:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Смоленская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии, и может быть использовано для оценки эффективности антибактериальной терапии С. pneumoniae и М. pneumoniae у детей раннего возраста, больных острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом. Для этого определяют субпопуляционный состав лимфоцитов и при снижении содержания CD71-лимфоцитов менее 3,92% и CDDR-лимфоцитов менее 28,55% через 3-4 недели после окончания лечения антибактериальную терапию считают эффективной. Использование данного способа позволяет быстро и объективно оценить состояние иммунной системы, что важно для установления необходимости дальнейшего лечения, выбора препарата и оценки эффективности антибактериальной терапии. 2 пр., 1 табл.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии.

Известен способ оценки эффективности антибактериальной терапии С.pneumoniae и М.pneumoniae методом иммуноферментного анализа, который основан на определении в сыворотке крови больных титров родоспецифичных IgG, IgM, IgA к белкам наружной мембраны бактерий. Метод позволяет определить стадию заболевания, обосновать необходимость антибактериального лечения и оценить его эффективность. По сравнению с микробиологическими методами, ИФА обладает преимуществом автоматизации, высокой пропускной способности, не требует применения высококвалифицированной экспертизы, что и является причиной его широкого использования для эпидемиологической оценки распространенности респираторного хламидиоза и микоплазмоза (Кротов С.А., Кротова В.А., Юрьев С.Ю. Хламидиозы: эпидемиология, характеристика возбудителя, методы лабораторной диагностики, лечение генитального хламидиоза - Кольцово, ЗАО «Вектор-Бест» - 2000 - 36 с.).

К недостаткам метода относятся: относительно невысокая специфичность анализа, отсутствие у больных с гипогаммаглобулинемией антител в диагностическом уровне или наличие диагностического уровня антител в течение длительного времени (до 4-6 мес.) у некоторых больных после окончания курса антибактериальной терапии. Кроме того, этиотропное лечение внутриклеточных инфекций не всегда приводит к полной эрадикации возбудителя из организма. Также доступные специфические методики выявления возбудителей могут давать ложноположительные и ложноотрицательные результаты обследования. Поэтому в настоящее время очень сложно практическому врачу оценить динамику сочетания уровня антител и клинического состояния больного: остается подчас нерешенным вопрос: «Продолжать или нет антибактериальную терапию?» Таким образом, на сегодняшний день отсутствуют критерии, учитывающие состояние иммунной системы при внутриклеточных инфекциях, роль которых в патогенезе заболевания велика. Поэтому разработка ранних иммунологических критериев эффективности антибактериальной терапии внутриклеточных инфекций является актуальной.

Задачей изобретения явилось более раннее определение излеченности детей раннего возраста, перенесших острые респираторные заболевания с бронхообструктивным синдромом на фоне хламидийной и микоплазменной инфекций.

Сущность изобретения состоит в том, что в периферической крови больных острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом на фоне инфицированности Chlamydophila pneumoniae и Mycoplasma pneumoniae определяют методом непрямой иммунофлюоресценции субпопуляционный состав лимфоцитов и при снижении содержания маркеров ранней активации Т-лимфоцитов CD71⁺-лимфоцитов до 3,92% и менее и CDDR⁺-лимфоцитов до 28,55% и менее через 3-4 недели после окончания лечения антибактериальную терапию, направленную на эрадикацию возбудителя, следует считать эффективной.

Способ осуществляется следующим образом: из пробы (4-5 мл) гепаринизированной крови, взятой натощак у детей, больных острыми респираторными инфекциями с бронхообструктивным синдромом, до антибактериальной терапии и через 3-4 недели после ее окончания выделяли лимфоциты на градиенте фиколл-верографина, затем 1-0,1 млн лимфоцитов в объеме 50 мкл вносили в лунки 96-луночного круглодонного планшета. К клеткам добавляли 5 мкл тестируемых моноклональных антител (CD71⁺, CDDR) и инкубировали 30-45 мин при +4°С. Затем добавляли 150 мкл раствора Хенкса и центрифугировали 5 мин при 200 g. После удаления супернатанта вносили 50 мкл раствора Хенкса, клетки суспендировали, добавляли 150 мкл раствора Хенкса и центрифугировали 5 мин при 200 g. К осадку отмытых клеток добавляли 50 мкл F(ab~)₂-фрагментов овечьих антител к Ig мыши, меченных ФИТЦ и разведенных 1:100 (для разведения использовали раствор Хенкса, содержащий 0,5% желатины и 0,1% азида натрия). Клетки суспендировали и инкубировали 30 мин при +4°С, затем клетки 2 раза отмывали, как указано выше. Окрашенные клетки анализировали с помощью люминесцентного микроскопа. Клетки суспендировали, переносили на предметное стекло, накрывали покровным стеклом, и препарат просматривали под иммерсией с увеличением (х3; объектив х90). Количество антигенпозитивных клеток определяли как % флюоресцирующих клеток при просматривании 200 лимфоцитов за вычетом % флюоресцирующих клеток, наблюдаемых в препарате отрицательного контроля. В качестве отрицательного контроля использовали препараты, подготовленные аналогичным образом, но без обработки моноклональными антителами.

До лечения содержание CD71⁺-лимфоцитов у детей, больных ОРЗ с БОС на фоне инфицированности С.pneumoniae и М.pneumoniae, составляло 5,70±0,25%, a CDDR-лимфоцитов - 31,45±1,06%, а через 3-4 недели после антибактериальной терапии, направленной на эрадикацию С.pneumoniae и М.pneumoniae, содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов снижалось и составляло 3,92% и менее и 28,55% и менее соответственно, p<0,05, что позволило считать проведенную терапию эффективной.

Поэтому иммунологические критерии оценки эффективности антибактериальной терапии хламидийной и микоплазменной инфекций являются более доступными и достоверными, позволяющими оценить результаты терапии уже через 3-4 недели от последнего приема антибактериального препарата.

Пример 1. Больная К., 1 г. 10 мес. Мать обратилась с жалобами на повышение температуры тела до 37,7°C, частый, сухой кашель, затрудненное носовое дыхание, одышку в покое, с затрудненным выдохом. Больна в течение 2 дней. Из анамнеза известно, что в возрасте 5 мес. у ребенка отмечался эпизод острого респираторного заболевания с бронхообструктивным синдромом. Этиотроппную терапию не получала. При объективном исследовании выявляется одышка экспираторного характера без участия в акте дыхания вспомогательной мускулатуры, перкуторно-коробочный оттенок перкуторного звука, при аускультации - на фоне жесткого дыхания, сухие «свистящие» хрипы над всей поверхностью легких. В общем анализе крови отмечается незначительный нейтрофильный лейкоцитоз, нормальные показатели СОЭ. В иммунограмме - повышение содержания общего IgE в сыворотке крови до 241,2 МЕ/мл. Содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов составило 5,7% и 31,4% соответственно. Также выявлено содержание IgM в титре 1:200 (положительный) и IgG в титре 1:20 (сильноположительный) к С.pneumoniae. Больная получала антибактериальную терапию сумамедом в возрастной дозе (в первые сутки 10 мг/кг однократно, во 2-5 сутки - 5 мг/кг в сутки также однократно) в течение 5 дней. Отмечалась положительная клиническая динамика: улучшение общего самочувствия, купирование симптомом интоксикации, нормализация температуры тела, исчезновение респираторного синдрома, одышки и сухих хрипов в легких. Через 3 недели при контрольном обследовании было выявлено содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов 3,3% и 26,4% соответственно, при сохранении уровня антител IgG к С.pneumoniae 1:10 (положительный), IgM сомнительный. Повторно курс антибактериальной терапии не проводился. При повторном обследовании через 2 месяца (через 3 месяца после окончания заболевания) содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов 3,21% и 26,2% соответственно, при отсутствии антител к С.pneumoniae и М.pneumoniae.

Пример 2. Больная А., 2 г., 8 мес. Мать обратилась с жалобами на повышение температуры тела до 38,4°C, сухой кашель, одышку в покое, с затрудненным выдохом. Больна первые сутки. В анамнезе с 7 мес. возраста отмечалось 3 эпизода острого респираторного заболевания с бронхообструктивным синдромом. Обследования и этиотропная терапия не проводились. При объективном исследовании выявляется одышка экспираторного характера с участием в акте дыхания вспомогательной мускулатуры, перкуторно-коробочный оттенок перкуторного звука, при аускультации - жесткое дыхание, обилие сухих «свистящих» хрипов над всей поверхностью легких. В общем анализе крови отмечается нейтрофильный лейкоцитоз, нормальные показатели СОЭ. В иммунограмме - повышение содержания общего IgE в сыворотке крови до 244,9 МЕ/мл. Содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов составило 5,5% и 30,8% соответственно. IgG в титре 1:10 (положительный), IgM в титре 1:200 (положительный) к С.pneumoniae; антитела к М.pneumoniae не определялись. Больная получала антибактериальную терапию сумамедом в возрастной дозе (в первые сутки 10 мг/кг однократно, во 2-5 сутки - 5 мг/кг в сутки также однократно) в течение 5 дней. Отмечалась положительная клиническая динамика: купированы симптомы интоксикации, респираторный и бронхообструктивный синдром. Через 4 недели при контрольном обследовании было выявлено содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов 3,4% и 25,1% соответственно, при отсутствии антител к С.pneumoniae и М.pneumoniae.

Всего указанным способом обследовано 152 ребенка раннего возраста (от 1 до 3-х лет) с острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом. Из них у 77 была выявлена С.pneumoniae, у 6 - М. pneumoniae, у 17 выявлена ассоциация С.pneumoniae и М.pneumoniae. После лечения у всех детей нормализовались показатели иммунной системы при различном уровне антител к внутриклеточным возбудителям (см. табл., где представлена динамика изменения содержания CD71 и CDDR-лимфоцитов в периферической крови детей раннего возраста, больных острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом после эффективной антибактериальной терапии).

В норме содержание CD71⁺- и CDDR-лимфоцитов составляет 26,52±1,01% и 3,43±0,24% соответственно.

Предлагаемый способ прост и информативен. Он позволяет быстро и объективно в течение 2,5 часов после взятия крови оценить состояние иммунной системы при хламидийной инфекции (С.pneumoniae) и микоплазменной инфекции (М.pneumoniae), ассоциированной с острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом. Это важно для установления необходимости дальнейшего лечения, выбора препарата и оценки эффективности антибактеральной терапии.

Обследуемые дети	CD71⁺ (M±m; min; max), %	CDDR⁺ (M±m; min; max), %
До лечения (n=100) дети с ОРЗ и БОС, инфицированные С.pneumoniae и М.pneumoniae	5,70±0,25* (5,18-6,23)	31,45±1,06* (29,33-33,57)
После лечения (n=100) дети с ОРЗ и БОС, инфицированные С.pneumoniae и М.pneumoniae	3,43±0,24 (2,95-3,92)	26,52±1,01 (24,48-28,55)
Группа сравнения (n=52) дети с ОРЗ и БОС через 1 мес. после выписки	4,14±0,23 (3,57-4,67)	26,41±1,17 (24,07-28,76)
Примечание: * - различия в группах до и после лечения достоверны p<0,05

Способ оценки эффективности антибактериальной терапии С. pneumoniae и М. pneumoniae у детей раннего возраста, больных острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом путем иммунологического анализа периферической крови, отличающийся тем, что определяют методом непрямой иммунофлюоресценции субпопуляционый состав лимфоцитов и при содержании CD71⁺-лимфоцитов менее 3,92% и CDDR⁺-лимфоцитов менее 28,55% через 3-4 недели после окончания лечения антибактериальную терапию, направленную на эрадикацию возбудителя, считают эффективной.

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно - к областям диагностической медицинской микробиологии, медицинской биохимии, прикладной иммунохимии и разработки диагностических тест-систем, касается разработки нового способа для высокочувствительного определения белка летального фактора сибирской язвы (LF) в инфицированных образцах биологического происхождения и окружающей среде.

Способ диагностики гнойно-септических заболеваний у новорожденных детей // 2484479

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики гнойно-септических заболеваний у новорожденных детей. .

Способ прогнозирования замедленной консолидации костной ткани при внеочаговом остеосинтезе // 2480767

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для прогнозирования замедленной консолидации костной ткани при внеочаговом остеосинтезе.

Способ иммунофлуоресцентного определения протективного антигена возбудителя сибирской язвы // 2478970

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, конкретно к областям диагностической медицинской микробиологии, прикладной иммунохимии и разработки диагностических тест-систем для иммунофлуоресцентного определения протективного антигена (ПА) возбудителя сибирской язвы в образцах биологического происхождения.

Активирующий люминесценцию белка гидридный комплекс // 2475493

Изобретение относится к области биосенсорики и может быть использовано для изучения белков методом люминесценции. .

Анализ иммунодетекции комплекса mycobacterium tuberculosis // 2473095

Способ прогнозирования течения аденовирусного кератоконъюнктивита // 2470591

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии. .

Способ определения специфического клеточного иммунного ответа к антигенам вируса кори и краснухи // 2464571

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения специфического клеточного иммунного ответа. .

Антитела и пептидные антигены для получения антител, имеющих селективную специфичность связывания с биологически активным интактным паратиреоидным гормоном (птг(ртн))1-84 // 2460737

Изобретение относится к иммунологии. .

Способ диагностики нарушений компенсации обмена веществ и прогнозирования риска развития осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа с помощью оценки апоптоза лимфоцитов // 2452965

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и может быть использовано для диагностики нарушений компенсации обмена веществ и прогнозирования риска развития осложнений у больных сахарным диабетом 2 типа (СД 2 типа).

Способ прогнозирования эффективности интерферонотерапии хронических гепатитов с у детей // 2486526

Изобретение относится к медицине, а именно к детской гастроэнтерологии, и может быть использовано для прогноза эффективности интерферонотерапии гепатита С

Способ прогнозирования раннего рецидива у больных гемобластозами после аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток // 2498312

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано у больных гемобластозами для прогноза развития рецидива заболевания после проведения аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток (АТСКК). Для этого определяют относительное содержание CD4+FOXP3+Т-клеток в периферической крови больных гемобластозами после проведения АТСКК в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл. При увеличении количества CD4+FOXP3+T-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде. Использование данного способа позволяет выделить больных гемобластозами в группу высокого риска развития раннего рецидива основного заболевания после АТСКК и при необходимости проводить дополнительные курсы лучевой и/или химиотерапии с целью повышения эффективности АТСКК. 4 пр.

Способ прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью // 2504787

Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью у впервые выявленных больных туберкулезом легких (ТБ). Для этого до назначения противотуберкулезной химиотерапии в крови пациента определяют количество CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов. Вычисляют значения линейных классификационных функций по уравнениям: d1=-14,0015-0,0626×x1+0,5181×x2+2,4285×x3+0,2255×x4 и d2=-22,6954-0,1710×x1+0,6689×x2+3,1202×x3+0,3229×x4, где x1, x2, x3, x4 - количество субпопуляций CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов, соответственно. При d1<d2 прогнозируют туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя. Использование данного способа позволяет прогнозировать вариант течения ТБ с вероятностью 83,3% и позволяет применять меры коррекции лечебного воздействия. 5 ил., 2 табл., 2 пр.

Способ определения протеолитической модификации клеточных рецепторов на модели выделенных лимфоцитов периферической крови // 2510026

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии, и может быть использовано для определения протеолитической модификации клеточных рецепторов на модели выделенных лимфоцитов периферической крови. Для этого проводят инкубацию выделенных лимфоцитов в присутствии фермента в инкубационной среде с последующей отмывкой клеток от фермента. Окрашивают моноклональными антителами, содержащими флуоресцентную метку, к соответствующим поверхностным детерминантам клеточных рецепторов и сравнивают с контролем, где клетки инкубируются в среде без содержания ферментов или в присутствии ингибиторов протеолитических ферментов. Экспрессию рецепторов на лимфоцитах определяют методом проточной цитометрии. Использование данного способа позволяет определять чувствительные к протеолизу рецепторы и количественно оценить активность ферментов и их ингибиторов. 3 пр., 1 табл.

Способ количественного определения фиксированного вируса бешенства штамма "москва 3253" // 2511440

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа количественного определения фиксированного вируса бешенства штамма «Москва 3253». Способ предусматривает обеззараживание и выделение РНК из вируссодержащего материала, постановку реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме «реального времени» с использованием специфичных праймеров RV5-5'-GTTGGGCACTGAAACTGCTA-3', RV6-5'-GAATCTCCGGGTTCAAGAGT-3' и зонда RV7-5'-ROX-AATCCTCCTTGAACTCCATGCGACAGA-BHQ2. Количественную оценку вируса определяют на основании регистрации сигнала флуоресценции исследуемого образца и сравнения его с сигналом флуоресценции ПЦР-стандартов, содержащих различные количества ДНК-мишеней. Предложенный способ позволяет определить количественное содержание вируса в рабическом антигене органо-тканевого и культурального происхождения. Использование изобретения способствует стандартизации этапа приготовления рабического антигена в производстве гетерологичного антирабического иммуноглобулина. 2 табл., 3 ил., 2 пр.

Способ количественного определения клеток-предшественников (cd34+) в кроветворной ткани // 2513511

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для количественного определения клеток-предшественников в кроветворной ткани. Для этого проводят окраску клеточного субстрата одновременно моноклональными антителами к антигену CD34 и нуклеотропным (ядерным) красителем Syto16, при этом подсчет клеток-предшественников (CD34+) осуществляют в пределах Syto16+ клеток. Использование данного способа позволяет количественно учесть всю популяцию CD34+CD45 клеток в пределах ядросодержащих Syto16+ без предварительного ограничения области анализа на основании экспрессии антигена CD45 и избежать занижения процента CD34+ клеток-предшественников. 1 пр., 2 ил.

Способ дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных беспигментных новообразований кожи // 2518350

Изобретение относится к медицине. При осуществлении способа через 3 ч после перорального введения препарата «Аласенс» в дозе 15 мг/кг массы тела получают трехканальное RGB флуоресцентное изображение зоны интереса. Оценивают долю участия красного канала в изображении опухоли. Оценивают значение Rcut=(R/(R+G+B))·100%, где Rcut - доля участия красного канала в изображении здоровой кожи, R, G и В - яркости красного, зеленого и синего каналов изображения здоровой кожи. Из полученного трехканального RGB флуоресцентного изображения формируют изображение в оттенках серого I(x,y). Для каждой точки изображения I(x,y) вычисляют отношение , где R(x,y), G(x,y), В(x,y) - яркости красного, зеленого и синего каналов RGB флуоресцентного изображения с координатами x, y. Выполняют действие I(x,y)=0 для точек, в которых значение меньше 10%. При отображении опухоли на полученном результирующем изображении I(x,y) диагностируется злокачественная опухоль, а при исчезновении опухоли - доброкачественная. Способ позволяет повысить информационную способность за счет более точного отображения границ недоброкачественной опухоли. 1 прим.

Способ прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом // 2521372

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом. Для этого проводят определение содержания CD16+ нейтрофилов в костном мозге больного. При содержании CD16+ нейтрофилов в костном мозге менее 50% прогнозируют развитие инфекционного синдрома с клиническими проявлениями. Использования данного способа позволяет прогнозировать развитие инфекционного синдрома при манифестации острого лейкоза до проведения химиотерапии. 2 пр.

Способ прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом с с генотипом 1b // 2522500

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и может использоваться для прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом C с генотипом 1b. Для этого определяют относительные количества содержания субпопуляций лимфоцитов крови и рассчитывают прогностический показатель, при этом подсчет процента субпопуляций лимфоцитов осуществляют методом проточной цитофлуориметрии. При значении показателя ПП<350 прогнозируют достижение быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию ХГС, при значении показателя ПП>350 прогнозируют отсутствие быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию хронического гепатита C с генотипом вируса 1b. Использование данного способа позволяет получить точный прогноз быстрого вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом C с генотипом вируса 1b на противовирусную терапию 2 пр., 1 ил.

Комплексный способ определения циркулирующих опухолевых клеток в крови больных раком молочной железы // 2522923

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.