Композиция реагентов для постановки ксантиноксидазной реакции

Изобретение относится к химическим композициям реагентов. В состав композиции входят: калий фосфорнокислый двузамещенный и соляная кислота - в качестве компонентов буферной смеси, вода, субстрат или сочетание субстратов, выбранных из группы - птеридины, альдегиды, цистеин, а также дополнительно содержится акриловый, олефиновый или силоксановый полиэфирный гетерополимер. Композиция применяется в клинической лабораторной диагностике и биохимии для проведения ксантиноксидазной реакции. Техническими результатами изобретения являются упрощение постановки реакции, снижение токсичности композиции и возможность ее серийного производства. 1 пр.

 

Изобретение относится к медицинской биохимии, аналитической химии, а именно к созданию реагентов, для проведения и определения активности ферментативной реакции в клинической лабораторной диагностике.

Ксантиноксидаза (КФ: 1.17.3.2) - фермент, катализирующий превращение гипоксантина в ксантин и далее в мочевую кислоту, а также окисление ряда птеридинов, альдегидов и имидазолов (Мецлер Д., 1976). Активное изучение ксантиноксидазы началось в связи с открытием ее супероксидобразующей, канцерогенной и апопто генной активностей. Кроме того, показано, что ксантиноксидаза является главной системой генерирования активных форм кислорода в живых организмах (Маеда X., 1998). В последнее десятилетие определение активности ксантиноксидазы все чаще используется с диагностической целью при различных патологических состояниях.

Известен способ определения активности ксантиноксидазы в сыворотке крови у детей (Полиорганная мембранная патология. Ред. Ю.Е.Вельтищев и др. М 1991; С.165-167) в котором используется композиция реагентов включающая: раствор карбоната натрия, раствор ЭДТА и раствор нитротетразолиевый синий (красящий раствор)и воду.

В пробирку последовательно добавляют 2,6 мл раствора карбоната натрия, 0,1 мл раствора ЭДТА и 0,2 мл раствора нитротетразолиевого синего. В опытную пробирку добавляют 0,1 мл ксантина. Сыворотку (предварительно прогретую в термостате) добавляют в реакционную смесь непосредственно перед измерением, которое осуществляют в течение 1 мин на спектрофотометре при длине волны 560 нм. Разница между исследуемой и контрольной пробой является показателем активности ксантиноксидазы.

Недостатком известной смеси реагентов является невозможность использования в виде готовой смеси; поскольку используемые реагенты нестабильны, смесь требуюет приготовления непосредственно перед применением.

Наиболее близким к заявленному техническому решению является известный и широко применяемый набор реагентов, используемый для определения активности ксантиноксидазы в методе S.Hashimoto (Shigebumi Hashimoto «A new spectrophotometric Assay Method of Xantineoxidase in Grude Homodenate» Analytical biochemistry, 1974, 62, с.426-435), содержащий фосфатный буфер (pH 7.4, 150 µмоль), 0,6 мМ оксонат калия, ксантин (0.2 µмоль), трихлоруксусную кислоту (20%).

Недостатками известного набора реагентов являются:

- сложность постановки реакции с использованием известного набора реагентов, поскольку их необходимо использовать в несколько этапов;

- высокая токсичность, поскольку трихлоруксусная кислота является токсичным веществом, поэтому она не может быть включена в реагентную смесь изначально, поскольку изучаемый фермент будет ингибирован;

- ограниченные возможности использования, поскольку для последующего анализа необходимо использовать дорогостоящее оборудование (УФ-спектрофотометр), вследствие чего известный реагент невозможно использовать в условиях стандартно оснащенной клинико-диагностической лаборатории;

- невозможность серийного производства.

Техническим результатом изобретения являются:

- упрощение применения при постановке реакции;

- снижение токсичности;

- расширение возможности использования в условиях стандартно оснащенной клинико-диагностической лаборатории;

- возможность серийного производства.

Технический результат достигается тем, что композиция реагентов для постановки ксантиноксидазной реакции, содержит калий фосфорнокислый двузамещенный, соляную кислоту, воду, субстрат (сочетание субстратов) выбранных из группы - птеридины, альдегиды, цистеин, а также дополнительно содержит полиэфирный гетерополимер выбран из группы - акриловый, олефиновый, силоксановый, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-4
Кислота соляная 0,1-0,2
Субстрат 0,003-0,01
Полиэфирный гетерополимер 40-60
Вода остальное

В композиции реагентов для постановки ксантиноксидазной реакции, субстрат, выбранный из группы: пурины (пурин, 2,6-дигидропурин (ксантин), 1-метилксантин, 6-меркаптопурин, гипоксантин(6-оксипурин), аденин); птеридины (птеридин, 2,6-диоксиптеридин, гистидин), цистеин, 6-деоксиацикловир, аллопуринол; альдегиды (алифатические альдегиды (алкенали, алканали, 2-бутеналь, 2-ноненаль, 4-гидрокси-2-ноненаль), ароматические альдегиды (бензальдегид, ванилин), и воду, согласно изобретения, дополнительно содержит полиэфирный гетерополимер выбранный из группы: акриловый, олефиновый, силоксановый.

Использование полиэфирного гетерополимера в качестве разделительного геля, позволяет существенно упростить постановку реакции, поскольку реакция может быть проведена в один этап, так как во время центрифугирования кровь разделяется на твердую и жидкую фракции, при этом твердая фракция осаждается под гелем, а жидкая, которую разделительный гель пропускает сквозь себя, остается сверху. В связи с тем, что исследуемый фермент (ксантиноксидаза) функционирует преимущественно в клетках, этот механизм обеспечивает стабильность состава плазмы и останавливает ферментативную реакцию. При этом исключается необходимость использования для остановки реакции токсичной трихлоруксусной кислоты, или подобных реагентов, необходимых для осаждения белка. Поэтому использование для разделения компонентов крови и остановки реакции полиэфирного гетерополимера позволяет сделать композицию нетоксичной.

Реакция может быть проведена при помощи химически стабильной, композиции реагентов, что позволяет производить ее серийно и поставлять в лаборатории непосредственно в готовом для постановки реакции виде, например, в пробирках, где полиэфирный гетерополимер до начала центрифугирования находится в нижней части пробирки в виде слоя, не смешанного с другими компонентами композиции.

Заявляемая композиция реагентов позволяет определять активность ксантиноксидазы в цельной гепаринизированной крови, а при необходимости - в другом биоматериале, и может применяться для определения активности ксантиноксидазы с использованием как сложного оборудования исследовательского уровня, современных биохимических анализаторов, так и недорогого легкодоступного фотометрического оборудования поскольку для регистрации накопления продукта реакции, в отличие от аналога (где используется спектрофотометрическое определение по поглощению монохроматического ультрафиолетового света депротеинатами исследуемых образцов, требующий оборудования исследовательского уровня), могут быть использованы стандартные методы определения мочевой кислоты, которые выполняются с применением любого доступного фотометрического оборудования, поскольку регистрация накопления продукта реакции осуществляется в видимой области спектра.

При концентрации компонентов буферной смеси (калий фосфорнокислый двузамещенный и соляную кислоту,) вне указанных диапазонов (3-4% и 0,1-0,2% соответственно) нарушается стабильность исследуемого фермента и/или применяемого субстрата, скорость реакции замедляется. Буферная смесь предназначена для поддержания в реагентной композиции оптимального значения водородного показателя (pH), что необходимо для нормального протекания ферментативной реакции и для обеспечения стабильности субстрата, входящего в состав композиции.

Субстрат для ксантиноксидазы выбран из группы: пурины (пурин, 2,6-дигидропурин (ксантин), 1-метилксантин, 6-меркаптопурин, гипоксантин(6-оксипурин), аденин); птеридины (птеридин, 2,6-диоксиптеридин, гистидин), цистеин, 6-деоксиацикловир, аллопуринол; альдегиды (алифатические альдегиды (алкенали, алканали, 2-бутеналь, 2-ноненаль, 4-гидрокси-2-ноненаль), ароматические альдегиды (бензальдегид, ванилин), поскольку перечисленные субстраты специфично взаимодействуют с ферментом (ксантиноксидазой), что делает возможным оценку его активности (по скорости образования продуктов, копродуктов, а также по скорости убыли субстрата). Субстраты могут быть использованы как в виде монореагента, так и в сочетании. Выбор конкретного субстрата или нескольких субстратов для включения их в композицию, а также их концентраций (в границах установленного диапазона) осуществляется в зависимости от предполагаемого способа регистрации скорости ферментативной реакции (по скорости образования продуктов, копродуктов, по скорости убыли субстрата, спектрофотометрическая регистрация, флюорометрическая регистрация, хроматографическая регистрация, уриказный метод и т.п.). При низкой или избыточной концентрации субстрата снижается аналитическая чувствительность определения активности фермента.

Полиэфирный гетерополимер выбран из группы: акриловый, олефиновый, силоксановый поскольку именно данные вещества обладают физико-химическими свойствами, которые не препятствуют протеканию ферментативной реакции (поэтому могут находиться в составе композиции изначально), эффективно отделяют красные кровяные клетки от плазмы крови при центрифугировании (что позволяет остановить ферментативную реакцию после ее проведения), не являются токсичными. Включение в состав реагента полиэфирного гетерополимера в массовой доле 40-60% необходимо для остановки ферментативной реакции с применением центрифуги и получения образцов для определения активности фермента. Увеличение или снижение массовой доли полиэфирного гетерополимера снижает качество получаемых при центрифугировании образцов и разделения компонентов крови.

Пример использования композиции реагентов

В стеклянную или пластиковую пробирку, содержащую в качестве стабилизатора гепарин, забирают 1,0 мл крови, перемешивают. Материал стабилен в течение 48 часов при 4°C.

Для исследования активности ксантиноксидазы необходимо 0,6 мл цельной крови, предлагаемый реагент и стандартный набор реактивов и оборудования для определения содержания мочевой кислоты в сыворотке крови уриказным методом.

Ход исследования

Пример конкретного состава композиции для постановки ксантиноксидазной реакции:

Соотношение компонентов, мас.%:

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-4
Кислота соляная 0,1-0,2
2,6-дигидропурин 0,003-0,004
Полиэфирный гетерополимер 40-60
Вода остальное

1) Инициация ферментативной реакции.

В полиэтилентерфталатовую пробирку, содержащую реагентную композицию вносят 0,3 мл цельной крови. Параллельно готовится «холостая проба». Состав, объем и соотношение реагентов полностью идентично опытной пробе за исключением 2,6-дигидропурина. Содержимое пробирок перемешивают.

2) Инкубация. Осуществляется в течение 90 минут при 37°C в термостате.

3) Получение образцов для определения содержания мочевой кислоты. Центрифугирование 15 минут при 4000 об/мин. Надосадочную жидкость используют для дальнейшего анализа.

5) Определение содержания мочевой кислоты в опытной и «холостой» пробах с использованием стандартных тест-систем.

Активность ксантиноксидазы рассчитывается как разность содержания мочевой кислоты между опытной и «холостой» пробами, и выражается в мкМ/мин/л или в международных единицах активности (mU/ml).

В отличие от аналога из реагентной композиции исключен оксонат калия, предназначенный для ингибирования уриказы - фермента, содержащегося в тканях некоторых животных и препятствующий накоплению продукта ксантиноксидазной реакции - мочевой кислоты. В тканях человека (в том числе и в крови) данный фермент не содержится, поэтому нет необходимости включать в состав реагентной смеси ее ингибитор (оксонат калия). Кроме того, наличие оксоната калия в реагентной смеси сделает невозможным регистрацию продукта при помощи стандартного уриказного метода.

Композиция реагентов для постановки ксантиноксидазной реакции, содержащая калий фосфорнокислый двузамещенный, соляную кислоту, субстрат, воду, отличающаяся тем, что субстрат (сочетание субстратов) выбраны из группы - птеридины, альдегиды, цистеин, а также дополнительно содержит полиэфирный гетерополимер, выбранный из группы - акриловый, олефиновый, силоксановый, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Калий фосфорнокислый двузамещенный 3-4
Кислота соляная 0,1-0,2
Субстрат 0,003-0,01
Полиэфирный гетерополимер 40-60
Вода Остальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к лабораторной диагностике осложнений инфекционных болезней и может быть использовано для оценки степени выраженности цитолиза кардиомиоцитов при поражениях миокарда, развивающихся на фоне различных острых инфекционных заболеваний.
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и применяется для оценки остеорепаративных процессов. .
Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, аллергологии, внутренним болезням, и может быть использовано для дифференциальной диагностики бронхиальной астмы (БА).

Изобретение относится к области медицины и касается способа диагностики нарушений образования энергии в митохондриях у подростков. .

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и касается способа прогнозирования развития остеопенического синдрома в послеродовом периоде.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной онкологии, и может быть использовано для молекулярно-генетической диагностики чувствительности опухоли у пациентов с раком легкого на терапию гефитинибом.
Изобретение относится к медицине, онкологии и гематологии и может быть использовано для определения кардиотоксических осложнений у больных хроническим лимфолейкозом, получающих полихимиотерапию.
Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики увеита при ревматоидном артрите и болезни Бехтерева.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и касается способа прогноза перехода острого бактериального конъюнктивита в затяжное или хроническое течение.

Группа изобретений относится к медицине, фармакологии, к способам и композициям ингибиторов фосфатазы PTEN для созревания овариальных фолликулов и ооцитов in vitro. Использование ингибиторов фосфатазы PTEN, таких как комплексы оксованадата и пероксованадата: биспероксо (бипиридин) оксованадат, биспероксо (1,10-фенантролин) оксованадат, биспероксо (пиколинато) оксованадат, биспероксо (5-гидроксипиридин-2-карбоксил) оксованадат, ди-(пиколинат) оксованадат, ди-(3-гидроксипиколинат) оксованадат, биспероксо (фенилбигуанид) оксованадат, ди-(фенилбигуанид) оксованадат и биспероксо (изохинолинкарбоновой кислоты) оксованадат, обеспечивает созревание и/или активацию in vitro ооцитов и фолликулов, таких как примордиальные, промежуточные и первичные фолликулы. 6 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 ил., 2 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроорганизмов к антибиотикам и факта присутствия бактериальных биопленок на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический дигуанозинмонофосфат, с пороговой чувствительностью 50 пг/мл, включающий: 1) выделение фосфодиэстеразы-мишени из лизированных бактериальных клеток; 2) связывание фосфодиэстеразы биотинилированными антителами, специфичными к некаталитическим доменам фосфодиэстеразы; 3) аффинную очистку комплексов, сформированных фосфодиэстеразой-мишенью и биотинилированным антителом при помощи парамагнитных частиц, содержащих нейтравидин или его аналоги, связывающие биотин; 4) взаимодействие комплексов фосфодиэстераза/биотинилированное антитело, иммобилизованных на парамагнитных частицах, с комплексами, содержащими с-di-GMP в форме G-квадруплексов с интеркалированным красителем, сопровождающееся падением интенсивности флуоресценции по мере разрушения комплексов интеркалирующего красителя c-di-GMP; 5) измерение падения флуоресценции при гидролизе c-di-GMP и разрушении комплекса c-di-GMP с интеркалирующим красителем с последующим количественным определением активности фосфодиэстеразы на основании калибровочных кривых, построенных с использованием известных количеств рекомбинантного фермента фосфодиэстеразы, идентичного исследуемой мишени; 6) выявление повышенного уровня фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемого тестируемыми антибиотикоустойчивыми бактериальными штаммами, способными к формированию биопленок, по сравнению с уровнем фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемым для контрольных штаммов бактерий того же вида, не обладающих антибиотикоустойчивостью и способностью к формированию биопленок. Способ позволяет определить неспецифическую устойчивость патогенных микроорганизмов к антибиотикам и установить факт присутствия бактериальных биопленок. 4 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области биохимии и предназначено для определения IgG-протеиназной активности. В лунках полистиролового планшета сорбируют полимерные матрицы небелковой природы - ДНК, хитин, затем в лунки добавляют специфические к этой матрице IgG и раствор, содержащий протеолитические ферменты. После инкубации, в ходе которой происходит протеолитическое расщепление иммуноглобулиновых молекул, в лунки вносят конъюгат фермента пероксидазы с белком A стафилококка и субстрат этого фермента. Далее производят учет результатов реакции с помощью спектрофотометра с вертикальным лучом измерением светопоглощения при 492 нм и проведение расчета IgG-протеиназной активности по количеству гидролизованного субстрата ферментативной реакции. Предлагаемый способ обладает высокой чувствительностью, отсутствием необходимости использовать белковые антигены, малым расходом субстрата, при котором саму реакцию и ее детекцию осуществляют в одной и той же лунке микропланшета. 1 ил., 1 табл., 12 пр.

Группа изобретений относится к области медицинской диагностики, иммунологии и онкологии, в частности к новым онкомаркерам и способам диагностики онкологических заболеваний. Предложены новые антигены для проведения иммуноферментного анализа для выявления аутоантител, ассоциированных со злокачественными новообразованиями, а именно фрагменты плазминогена, содержащие кринглы. Предложен также способ выявления диагностического признака при онкологических заболеваниях, заключающийся в выявлении аутоантител типа IgA, IgG, IgM к следующим фрагментам плазминогена: тяжелая цепь (Glu-H), тяжелая цепь (Lys-H), легкая цепь (L), K1-4 (Tyr80-Ala440), K1-3 (Tyr80-Val338), K1-3 (Tyr80-Val354), K1-4 (Asn60-Pro447), K1-4 (Lys78-Pro447), K1-4 (Lys78-Pro446), K1-4 (Lys78-Lys468), K1-4,5 (Lys78-Arg530), K4-5 (Val355-Phe546), K1 (Tyr80-Glul64), K2-3 (Cysl65-Val338), K4 (Val354-Ala440), K5 (Ser441-Fhe546), K5 (Val442-Arg561), мини-плазмин в образце плазмы крови человека. Настоящая группа изобретений эффективна в ранней диагностике онкологических заболеваний. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 5 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования неблагоприятного исхода гипертрофической кардиомиопатии. Методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) в крови пациента определяют величины тканевого ингибитора металлопротеиназы 1 (TIMP 1) и терминального фрагмента мозгового натрийуретического пептида (NT pro BNP). Методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) определяют генотипы полиморфных вариантов G894T гена эндотелиальной NO-синтазы (NOS3) и A(-1903)G гена химазы (СМА1). При величинах TIMP 1 =< 635,7 нг/мл, NT pro BNP => 42,56 пмоль/мл в сочетании с наличием генотипа g/t G894T NOS3 и генотипа a/g A(-1903)G СМА1 делают вывод о неблагоприятном исходе заболевания. Изобретение обеспечивает прогнозирование неблагоприятного исхода гипертрофической кардиомиопатии (фибрилляция предсердий, прогрессирующее течение гипертрофической кардиомиопатии, внезапная сердечная смерть) еще до появления первых клинических симптомов и способствует более эффективному проведению первичной профилактики внезапной сердечной смерти и других жизненно опасных осложнений заболевания. 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, инфектологии и гепатологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики стадий хронизации вирусного гепатита С у подростков. Для осуществления изобретения в лимфоцитах, выделенных из венозной крови больных, определяют активность фермента глутатионредуктазы (ГР). При значении показателя равном или выше 0,37 мкЕ/10000 кл диагностируют первую-вторую стадию хронизации, а при значении показателя ниже 0,37 мкЕ/10000 кл - третью стадию хронизации инфекционного процесса. Способ позволяет прогнозировать течение заболевания без биопсии печени, определять адекватную стратегию лечения и может быть рекомендован для широкого использования в клинической практике. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине и описывает способ идентификации модуляторов активности фермента катехол-O-метилтрансферазы (СОМТ), включающий а) получение 4-нитрокатехола, ковалентно связанного с Alexa Fluor® 488, б) приведение в контакт молекулы из этапа а) с ферментом катехол-O-метилтрансферазой (COMT), S-аденозилметионином (SAM) и соединением-кандидатом и в) измерение показателей флуоресценции смеси из этапа б), в котором измененные показатели флуоресценции в присутствии соединения-кандидата по сравнению с контролем являются признаком наличия модулятора фермента катехол-O-метилтрансферазы (COMT). Также описан способ идентификации субстрата фермента катехол-O-метилтрансферазы. Заявленное изобретение может быть использовано для идентификации соединений, которые ингибируют фермент СОМТ, для определения активности СОМТ в образцах тканей животных. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 3 пр.,7 ил.

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах. Сущность изобретения состоит в том, что в лунках микропанели сорбируют препарат пептидогликана, затем вносят пробу, содержащую компонент C3 комплемента человека с неизвестной активностью, проводят инкубацию в присутствии ЭДТА, а затем вносят конъюгат фермента с антителами против компонента C3 человека и субстрат этого фермента, расчет активности компонента C3 проводят по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор для определения функциональной активности компонента C3 комплемента человека содержит плоскодонную микропанель с сорбированным препаратом пептидогликана, конъюгат фермента с антителами к компоненту C3 комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови с известной активностью C3 в качестве стандарта. Группа изобретений позволяет определять функциональную активность компонента C3 системы комплемента человека и обладает хорошей воспроизводимостью результатов. 2 н. и 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Группа изобретений относится к медицине, а именно диагностике глютен-чувствительной энтеропатии у генетически предрасположенных пациентов, и может быть использована для уточнения диагноза аутоиммунного заболевания. Для этого измеряют уровень связывания аутоантител в образцах сыворотки крови пациента с неизменным целиакальным эпитопом белков семейства трансглутаминаз по сравнению с уровнем связывания тестового соединения (ТС). ТС представляет собой тестовое антитело либо его фрагмент, вариант или аналог. ТС способно связываться с основным целиакальным эпитопом белков семейства трансглутаминаз. Превышение уровня связывания аутоантител в отсутствие ТС или снижение уровня связывания аутоантител на 50% в присутствие ТС указывают на индуцируемое глютеном аутоиммунное заболевание у указанного индивидуума. Группа изобретений обеспечивает корректировку диагностики индуцируемых глютеном аутоиммунных заболеваний и назначение сопутствующей диеты с устранением источников глютена. 4 н. и 4 з.п. ф-лы, 15 ил., 2 табл. 10 пр.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному моноклональному анти-LOXL2 антителу или его антиген-связывающему фрагменту, а также к конъюгатам, их содержащим. Раскрыта фармацевтическая композиция для лечения заболевания, связанного с ангиогенезом, фиброза, опухоли или метастазов, включающая вышеуказанное выделенное моноклональное анти-LOXL2 антитело или его антиген-связывающий фрагмент в эффективном количестве. Также изобретение относится к способу определения наличия и/или уровней LOXL2 в биологическом образце, к способу ингибирования активности LOXL2, к способу ослабления роста экспрессирующей LOXL2 опухоли у субъекта, нуждающегося в этом, к способу подавления ангиогенеза у субъекта, нуждающегося в этом, к способу подавления фиброзного заболевания у субъекта, нуждающегося в этом, а также к способу мониторинга реакции субъекта на терапию против LOXL2 с использованием вышеуказанного антитела или его антиген-связывающего фрагмента и вышеуказанного конъюгата. Изобретение позволяет эффективно лечить заболевания, связанные с LOXL2. 11 н. и 17 з.п. ф-лы, 6 ил., 6 табл., 9 пр.

Изобретение относится к химическим композициям реагентов

Наверх