Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс



Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс
Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс
Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс
Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс
Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс
Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс
Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс

 


Владельцы патента RU 2488891:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Московский научно-исследовательский институт глазных болезней имени Гельмгольца" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности офтальмологии, и предназначено для моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс. Проводят однократное интравитреальное введение водного раствора рекомбинантного человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в дозе 3.5 мкг. Способ обеспечивает получение полноценной неоваскуляризации, преимущественно в роговице и зоне цилиарного тела-корня радужки, в короткие сроки с минимальной травматичностью и уменьшением затрат на эксперимент. 7 ил.

 

Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии и предназначено для моделирования неоваскуляризации глаза у крыс.

Сосудистые заболевания глазного дна, приводящие к развитию неоваскуляризации, являются актуальной проблемой офтальмологии. Разработка экспериментальных моделей является необходимой для изучения процессов патогенеза и поиска новых возможностей лечения.

Уровень техники.

Известен способ моделирования неоваскуляризации сетчатки и зрительного нерва (Сарыгина О.И., Нероев В.В., Левкина О.А. Экспериментальное моделирование пролиферативной ретинопатии путем интравитреального введения сосудистого эндотелиального фактора (VEGF) кроликам. // Офтальмология, 2009, Том 6, №3, с.25-29), включающий многократное введение в стекловидное тело кроликов водного раствора рекомбинантного человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста. Интравитреальные инъекции осуществляли с помощью иглы 26 gauge, в 4 мм от лимба, в меридиане 12 часов. Курс включал 6 инъекций препарата, проводимых по следующей схеме: в первые и третьи сутки вводили - по 3 мкг VEGF, на седьмые и одиннадцатые сутки - по 1,5 мкг VEGF, на пятнадцатые сутки - 1 мкг препарата. На двадцать четвертые сутки после начала эксперимента производилась инъекция разрешающей дозы - 5,0 мкг, приводящая к появлению неоваскуляризации сетчатки и зрительного нерва. Суммарная доза препарата составляла - 15 мкг.

Ближайшим аналогом предлагаемого изобретения является способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у обезьян, включающий многократное интравитреальное введение обезьянам водного раствора рекомбинантного человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста (Tolentino M.J., Miller J.W., Gragoudas E.S., Ferrara N., Adamis A.P. Vascular endothelial growth factor is sufficient to iris neovascularization and neovascular glaucoma in a nonhuman primate. // Arch Ophthalmol. Vis. Sci. - 1996. Aug; 114(8) - P.964-70). В данном способе осуществляли введение в стекловидное тело обезьян водного раствора рекомбинантного человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста в дозе 1,25 мкг каждые 3 дня в течение месяца. Данная модель вызывает нарушение проницаемости сосудов переднего отрезка глаза и индукцию роста новообразованных сосудов в радужке и углу передней камеры у обезьян.

Недостатками аналогов являются: необходимость длительного срока наблюдения, многократные интравитреальные введения препарата, что является достаточно травматичным, а также связано с большими финансовыми затратами, обусловленными расходами на дорогостоящих животных (обезьяны), реактивы и уход.

Раскрытие изобретения.

Задачей изобретения является разработка простого и легко воспроизводимого способа моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является получение полноценной неоваскуляризации в переднем отрезке глаза в короткие сроки при минимальной хирургической манипуляции, позволяющей снизить травматичность воздействия, и обусловливает экономические преимущества, связанные с затратами на экспериментальных животных, реактивы и уход.

Технический результат достигается за счет однократного введения в стекловидное тело крыс водного раствора VEGF в дозе 3,5 мкг.

В настоящее время проведено большое количество исследований, в которых оценивалось системное действие сосудистого эндотелиального фактора роста, а также его роль при заболеваниях глаз (Bandello P., Battaglia Parodi M. Anti-VEGF // Dev Ophthalmol. Basel, Karger, 2010. P.186).

VEGF является гомодимерным гликопротеидом, который одновременно является фактором проницаемости сосудов и фактором ангиогенеза. Кроме того, ростовой фактор является активным митогенным лигандом для эндотелиальных клеток сосудов. Сосудистый эндотелиальный фактор роста также стимулирует проколлагеназную активность эндотелия и усиливает хемотаксис через сосудистую стенку клеток мезенхимальной природы, которые способствуют созреванию стромы. Эти особенности дают возможность предполагать, что VEGF играет важную роль в развитии микрососудистых осложнений, наблюдаемых при пролиферативной ретинопатии, развитие которой характеризуется гипоксией ткани, ангиогенезом и повышенной сосудистой проницаемостью. На основании этого в предлагаемом способе моделирования также использовали VEGF.

Для моделирования в офтальмологии в качестве опытных животных наиболее часто используются крысы и кролики, т.к. эти животные имеют практические преимущества, связанные с затратами на реактивы и уход (Hammes H-P, Porta M: Experimental Approaches to Diabetic Retinopathy. Front Diabetes. Basel, Karger, 2010. P42-600).

Однако использование крыс для моделирования сосудистой патологии глаза является наиболее корректным, по сравнению с использованием кроликов, т.к. по морфологическому строению и ангиоархитектонике сосуды сетчатки крысы ближе к сосудам сетчатки человека, чем у кролика. Мы провели исследование по отработке дозы VEGF при условии уменьшения количества интравитреальных введений. Было доказано морфологическими исследованиями, что доза VEGF величиной 3.5 мкг при однократном введении крысам является адекватной для создания патогенетически обоснованной модели неоваскуляризации переднего отрезка глаза. Для адекватного интравитреального введения VEGF у крыс была выбрана зона в области экватора с направлением иглы к заднему полюсу глаза.

Способ осуществляется следующим образом.

Экспериментальной крысе интравитреально вводят рекомбинантный человеческий сосудистый эндотелиальный фактор роста, например, производства фирм «Pro Spec», Израиль, «Pierce», США. Интравитреальное введение VEGF осуществляют с помощью иглы 30 gauge в области экватора по направлению к заднему полюсу глаза. Инъекцию выполняют в стерильных условиях под контролем операционного микроскопа. Введение препарата проводят однократно, в дозе 3,5 мкг. Данную дозу разводят в 0,02 мл стерильной воды для инъекций.

Пример: Крыса №3. Крысе интравитреально ввели рекомбинантный человеческий сосудистый эндотелиальный фактор роста производства фирмы «Pro Spec», Израиль. Для введения использовали иглу 30 gauge. Инъекцию осуществили в области экватора по направлению к заднему полюсу глаза в стерильных условиях под контролем операционного микроскопа. Введение препарата провели однократно, в дозе 3,5 мкг. Дозу развели в 0,02 мл стерильной воды для инъекций.

При осмотре глаза крысы на 2 день после введения 3,5 мкг VEGF наблюдалась неоваскуляризация периферических отделов роговицы. В последующие дни наблюдалось усиление пролиферативной реакции - распространение новообразованных сосудов в центральные отделы роговицы, образование гифемы в передней камере. На 5 день неоваскуляризация занимала около 60% от площади роговицы, что не являлось препятствием для проведения флюоресцентной ангиографии (ФАГ) и осмотра глазного дна (Фиг.1).

По данным ФАГ на 2 день после интравитреального введения VEGF на ангиографических снимках наблюдалось расширение сосудов сетчатки. На 5 день эксперимента выявлялось увеличение дилатации и деформация интраретинальных вен, возникновение интраретинальных микрососудистых аномалий (Фиг.2). На 7 день эксперимента помимо имеющихся изменений отмечалось появление локальной гиперфлюоресценции, усиливающейся в поздней фазе исследования, что связанно с интенсивным просачиванием красителя из новообразованных сосудов (Фиг.3). Энуклеацию производили на 7 сутки после начала эксперимента.

Таким образом, по данным патоморфологического исследования, у крысы через 7 дней развивалась активная неоваскуляризация, преимущественно, в переднем отрезке глаза. Было выявлено, что основными тканевыми мишенями при интравитреальном введении VEGF крысы являлись роговица и зона цилиарного тела-корня радужки, изменения со стороны сетчатки были выражены в меньшей степени. В роговице отмечались многочисленные новообразованные сосуды, пронизывающие строму роговицы. Пролиферация сопровождалась лимфо-лейкоцитарной инфильтрацией (Фиг.4). Кроме этого на наружной поверхности цилиарного тела и в области корня радужки наблюдалось разрастание новообразованных сосудов, заполняющих переднюю камеру и угол передней камеры. Помимо новообразованных сосудов отмечалось появление эндотелиальных почек, свидетельствующих о начальном процессе ангиогенеза (Фиг.5). В радужке и передней камере выявлялись кровоизлияния (Фиг.6). В сетчатке наблюдалось полнокровие сосудов, периваскулярный отек, кровоизлияния и единичные новообразованные сосуды, а также изменения фоторецепторных элементов - деструкция наружных и внутренних сегментов палочек (Фиг.7). Полученные данные подтверждают получение адекватной модели неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крысы.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить полноценную модель неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крысы, является технически доступным, легко воспрозводимым и экономичным.

Способ моделирования неоваскуляризации переднего отрезка глаза у крыс, отличающийся тем, что проводят однократное интравитреальное введение водного раствора рекомбинантного человеческого сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) в дозе 3,5 мкг.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к экспериментальной биологии и медицине, в частности к фармакологии и гематологии, и касается моделирования хронической миелосупрессии для подбора лекарственного средства, корригирующего гематологические нарушения.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной хирургии и патофизиологии, и может быть использовано для коррекции иммунных нарушений. .

Изобретение относится к медицине, экспериментальной онкологии и может быть использовано для доклинического исследования веществ, повышающих противоопухолевое и противометастатическое действие цитостатиков, снижающих их токсичность в отношении клеток белой крови.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть применимо для моделирования спаечной болезни в эксперименте. .

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для изучения стимуляции репаративных процессов, протекающих в тканях поврежденного сустава.

Изобретение относится к медицине и может быть применимо для восстановления иннервации в денервированной ткани резецированной тонкой кишки при гастрэктомии. .
Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к созданию модели подострого отравления четыреххлористым углеродом. .

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной медицине, пластической хирургии, микрохирургии и сосудистой хирургии. .

Изобретение относится к области медицины, в частности фармакологии, физиологии и токсикологии. .

Изобретение относится к биотехнологии и медицине, и может быть использовано в тканевой инженерии и клеточной трансплантологии с целью моделирования тканевой структуры сетчатки.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к травматологии и ортопедии при создании модели субкапитального перелома бедра для изучения этиопатогенеза данной травмы и разработки способов диагностики и лечения субкапитальных переломов бедренной кости (хирургических, медикаментозных, физических и других)

Изобретение относится к экспериментальной медицине
Изобретение относится к медицине, а именно экспериментальной медицине, и может быть использовано для разработки и изучения эффективного лечения панкреонекроза

Изобретение относится к экспериментальной медицине и ветеринарии

Изобретение относится к экспериментальной медицине и физиологии и предназначено для моделирования интенционного тремора в эксперименте на кошках. Для этого проводят стереотаксическое повреждение экстрапирамидной системы мозга путем избирательного одностороннего электролитического повреждения дорсального отдела головки хвостатого ядра, контрлатерального конечности животного, осуществляющей целенаправленное движение. Тестирование двигательной активности производят путем подачи зрительных дифференцировочных сигналов, требующих выполнения выработанного двигательного ответа в виде нажатия передней (рабочей) конечностью на педаль, подкрепляемого вознаграждением, или воздержания от его осуществления. Число пусковых зрительных сигналов, требующих двигательного ответа, и тормозных зрительных сигналов, требующих воздержания от выполнения ответа, в тестируемой последовательности сигналов является равным. Дифференцировочные сигналы предъявляют в случайном порядке. Интенционный тремор выявляют в виде появления быстрых (5-10 Гц) антагонистических фазических движений рабочей конечностью при выполнении двигательной реакции нажатия на педаль, инициируемой подачей пускового зрительного сигнала. Способ обеспечивает моделирование интенционного тремора при снижении травматичности и минимизации побочных эффектов. 3 ил.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для получения модели острого деструктивного гнойного коксита у лабораторных животных. Для этого открытым путем нарушают кровоснабжение головки бедренной кости путем пересечения и перевязки круглой связки головки. При этом предварительно до перевязки инфицирование тазобедренного сустава проводят путем введения патогенной культуры микроорганизмов в сосуды пересеченной связки. Стимуляцию деструктивных процессов проводят путем ограниченного по площади нарушения целостности хряща в контактирующих нагружаемых участках бедренной кости и вертлужной впадины. Способ обеспечивает эффективную и быстро развивающуюся модель заболевания при низкой летальности лабораторных животных. 1 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и касается разработки способа лечения ранних стадий остеохондроза, а также коррекции травматических повреждений межпозвонкового диска. Для этого удаляют пульпозное ядро из межпозвонкового диска. В ложе удаленного ядра укладывают трехмерный хондротрансплантат, содержащий в т.ч. низкодифференцированные хондроциты с высокой потенцией к синтезу и пролиферации. Размер хондротрансплантата соответствует размеру дефекта. При наличии в хондротрансплантате клеток разной степени дифференцировки способ обеспечивает полное замещение пульпозного ядра, восстановление высоты диска в короткие сроки, а также предотвращение его дальнейших дистрофических изменений. 7 ил.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, а именно к разработкам способа лечения фиброза легких. Для этого лабораторным животным интраназальным путем вводят иммобилизированную на полиэтиленгликоле гиалуронидазу в дозе 16 ЕД. Введение осуществляют 1 раз в сутки на 1, 3, 7, 10-е сутки после введения блеомицина - фактора моделирования фиброза легких. Способ обеспечивает повышение устойчивости легочной ткани к отложению фибротических масс, в том числе предупреждает обратный процесс формирования фиброза, за счет свойств пегилированной гиалуронидазы и разработанного режима ее введения, что приводит к длительному антифибротическому эффекту при низкой токсичности и иммуногенности воздействия на организм. 1 пр., 1 табл., 1 ил.
Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной медицине. Через 7 недель воздействия токсиканта проводят стимуляционную электронейромиографию, регистрируют амплитуду и латентный период М-ответа. Рассчитывают каноническую величину (Кв) с учетом константы - 5,95, дискриминационных коэффициентов 0,98 и -1,14, а также числовых значений результатов исследования. При Кв больше 5,95 делают заключение об отсутствии признаков воздействия сулемы на периферические нервы; при Кв меньше или равно 5,95 диагностируют поражение периферических нервов от воздействия сулемы. Способ расширяет арсенал средств для диагностики поражения периферических нервов у лабораторных животных в раннем постконтактном периоде воздействия сулемы. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к проведению доклинических испытаний лекарственных средств с использованием чрезкожного электроболевого раздражения. Установка для чрезкожного электроболевого раздражения лабораторных животных включает освещенный отсек, соединенный дверцей с затемненным отсеком, имеющим электродный пол. Освещенный отсек снабжен съемным источником света с проградуированным регулятором освещенности и имеет прозрачные стенки с непрозрачным покрытием в нижней части. Электродный пол выполнен в виде двух раздельных металлических пластин, электрически изолированных друг от друга, имеет возможность выдвигаться наружу и подсоединен к электростимулятору и микроамперметру. Применение изобретения позволит повысить эффективность работы установки за счет обеспечения необходимого порогового или надпорогового чрезкожного электроболевого раздражения, используя маломощные электростимуляторы, и выбора индивидуальных параметров раздражения при работе с различными животными. 4 ил.
Наверх