Способ диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей



Способ диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей
Способ диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей
Способ диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей

 


Владельцы патента RU 2490634:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Пермская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО ПГСХА) (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Тюменская государственная сельскохозяйственная академия" (ФГБОУ ВПО ТГСХА) (RU)

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики хламидиоза у хряков-производителей включает исследования спермы и определения в ней ретикулярных телец хламидий методом электронной микроскопии. Полученный, путем центрифугирования, концентрат спермы фиксируют 2,5% глютаральдегидом, отмывают в фосфатном буфере, обрабатывают осмиевым фиксатором, производят заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата и цитратом свинца по Рейнольдсу, просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75, поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И.Лысенко. 1 табл., 3 ил.

 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к инфекционной патологии животных и может использоваться в ветеринарной практике для диагностики хламидиоза у хряков-производителей.

Основные диагностические тесты направлены на выявление хламидий или их антигенов в клиническом материале от больных животных. Известен способ диагностики хламидиоза у хряков-производителей. Сущность способа состоит в том, что проводят серологическое исследование сыворотки крови и определяют титр антител к этой инфекции [1]. Известно применение антигенов для обнаружения антител к хламидиям в сыворотке крови больных с применением постановки реакции иммуноферментого анализа (РИФ). Антиген представляет собой полисахаридно-белковый комплекс в рабочей концентрации 5-15 мкг/мл адсорбционного буфера. Набор содержит также хламидийную (положительную) и нормальную (отрицательную) контрольные сыворотки в разведении 1:50-1:150 в инкубационном буфере и коньюгат антивидового иммуноглобулина класса G с пероксидазой (патент РФ 2156620, 1998).

Недостатком известных способов является недостаточная информативность диагностики хламидиозов, в частности отрицательный результат при персистентной форме инфекции.

Целью изобретения является разработка способа диагностики хламидийной инфекции у хряков - производителей, обеспечивающего достоверную информативность, в том числе и у животных, имеющих персистентную форму инфекции.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является более достоверная (100%) диагностика хламидийной инфекции у хряков-производителей.

Поставленная цель достигается тем, что при диагностике хламидиоза у хряков-производителей проводят исследование спермы на хламидийную инфекцию методом электронной микроскопии.

Взятие спермы у хряков-производителей осуществляют мануальным способом. Концентрат спермы получают путем центрифугирования, фиксируют 2,5% глютаральдегидом, в течение 4-6 часов. Далее комочки спермы отмывают в фосфатном буфере и обрабатывают осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре плюс 4 градуса. Затем производят заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу [2], просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75К. Поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко [3].

Заявляемый способ диагностики хламидиоза хряков-производителей является новым и в литературе не описан.

Сущность изобретения поясняется следующим примером.

Для обоснования информативности заявляемого способа диагностики хламидиоза хряков-производителей было использовано 95 хряков-производителей, принадлежащих СЗПК «Русь» Пермского района Пермского края и 25 голов, принадлежащих свинокомплексу «Рощинский» Республики Башкортостан. Взятие спермы у хряков-производителей осуществляли мануальным способом. Диагностику хламидийной инфекции у хряков-производителей проводили известным способом с применением постановки реакции иммуноферментого анализа (РИФ) и заявляемым способом. Для осуществления заявляемого способа, путем центрифугирования получали концентрат спермы, который сразу же фиксировали 2,5% глютаральдегидом, в течение 4-6 часов. Далее комочки спермы отмывали в фосфатном буфере и обрабатывали осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 часов при температуре плюс 4 градуса. Затем производили заливку в аралдит и эпон идентичных фирм. Срезы получали на ультратоме LKB-Ш, концентрировали 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 минут и цитратом свинца по Рейнольдсу.

Полученные срезы просматривали в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75К. Поиск и индикацию очагов поражения осуществляли методом прицельного ультрамикротомирования путем получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко.

Результаты сравнительного исследования известного способа и заявляемого способа диагностики хламидиоза хряков-производителей представлены в таблице.

Таблица. Результаты исследований по диагностике хламидиозов хряков-производителей с помощью РИФ и заявляемым способом
Название хозяйства Количество животных в опыте Количество положительно реагирующих на хламидиоз животных
голов %
Диагностика РИФ
СЗПК «Русь» 95 36 37,9
Свинокомплекс «Рощинский» 25 7 28,0
Заявляемый способ
СЗПК «Русь» 95 43 45,3
Свинокомплекс «Рощинский» 25 9 36,0

При использовании заявляемого способа, в 52 срезах (40,6%) нативной спермы хряков-производителей обнаружили ретикулярные тельца хламидий. Хламидии имели различную форму: округлую, овальную, неправильную, с неравномерно плотной мембраной, ограничивающей мелкозернистый с фибриллярными структурами матрикс. Встречались одиночные ретикулярные тельца хламидий или неопределенной формы с закругленными контурами, в цитоплазме которых на фоне разрежения матрикса содержалось множество мелких шаровидных или овальных структур. Некоторые ретикулярные тельца были нафаршированы «дочерними» тельцами и в местах их скоплений наблюдалась деструкция и лизис мембраны с выходом этих структур во внеклеточное пространство. При изучении ультраструктуры сперматозоидов наблюдалось разрежение и деформация ядра головки и шейки. Отмечалось нарушение клеточной оболочки по всему телу, что выражалось в отслаивании, лизисе и обволакивании тела вокруг гомогенной массой (фиг.1, 2, 3).

При этом, при использовании общеизвестного способа хламидийная инфекция диагностировалась только у 43 животных (32,9%).

Таким образом, предлагаемый способ значительно повышает достоверность диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей.

Источники информации

1. Хамадеев Р.Х. Хламидиозы рогатого скота и свиней (эпизоотология, диагностика, специфическая профилактика и меры борьбы). Автореф. дисс.… доктора ветеринарных наук. Казань, 1991. - 40 с.

2. Б. Уикли Электронная микроскопия для начинающих. М.: Мир, 1975. - 324 с.

3. Лысенко А.И. Методы ориентирования и прицельно ультратомирования ткани для электронной микроскопии // Архив патологии. - 1973. №5. - С.68-72.

4. Патент РФ, 2156620, 1998.

Способ диагностики хламидийной инфекции у хряков-производителей путем исследования спермы и определения в ней ретикулярных телец хламидий, отличающийся тем, что проводят исследование производителей на хламидийную инфекцию методом электронной микроскопии, при этом у хряков-производителей перед исследованием получают концентрат спермы путем ее центрифугирования, фиксируют его 2,5%-ным глютаральдегидом в течение 4-6 ч, отмывают в фосфатном буфере, обрабатывают осмиевым фиксатором в течение 1,5-2 ч при температуре плюс 4°С и производят заливку в аралдит и эпон идентичных форм, срезы получают на ультратоме LKB-Ш, концентрируют 2%-ным спиртовым раствором уранилацетата в течение 15 мин и цитратом свинца по Рейнольдсу, просматривают в электронном микроскопе типа ЭМВ-100БР при ускоряющем напряжении 75, поиск и индикацию очагов поражения осуществляют методом прицельного ультрамикротомирования получения полутонких срезов и окрашивания их толуидиновым синим по прописи А.И. Лысенко.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины и биологии, в частности к пульмонологии, и касается способа морфологического и физиологического исследования ультраструктурных характеристик суспензий клеток при воздействии на организм здоровых людей антиоксидантов.

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной медицине и лабораторной диагностике, и касается моделирования дисфункции эндотелия in vitro. .
Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования возникновения гематогенных метастазов при плоскоклеточном раке легкого.
Изобретение относится к области биотехнологии. .
Изобретение относится к области медицины, в частности к терапевтической стоматологии, а именно к способу диагностики хронического генерализованного пародонтита. .
Изобретение относится к области медицины, конкретно к методам диагностики аутоиммунных заболеваний крови человека. .
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования печеночной недостаточности после выполнения обширных резекций печени. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу оценки устойчивости мембран эритроцитов новорожденного на фоне обострения у беременной герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления препаратов фиксированных клеток для флуоресцентной in situ гибридизации нуклеиновых кислот (fluorescent in situ hybridization - FISH)

Изобретение относится к медицине, конкретно к кардиологии, также может использоваться в терапии, нефрологии и лабораторной диагностике
Изобретение относится к медицине, в частности, к экспериментальной гематологии, а именно к способу оценки развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY
Изобретение относится к медицине, в частности к пульмонологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности и оценки показаний к терапии системными глюкокортикоидами у больных с обострением хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ)
Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки нарушения процессов адаптации у детей в условиях внешнесредового воздействия тяжелых металлов

Изобретение относится к медицине, диагностике, может быть использовано в спорте и восстановительной терапии
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и перинатологии, и касается способа прогнозирования внутриутробного инфицирования плода у женщин с гриппом А(Н3N2) во втором триместре беременности при анемическом синдроме
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для прогнозирования исхода трансюгулярных интрапеченочных портосистемных шунтирующих хирургических вмешательств у больных с портальной гипертензией цирротического генеза

Изобретение относится к области медицинской радиологии
Наверх