Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro



Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro
Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro
Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro
Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro
Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта "королек" in vitro

 


Владельцы патента RU 2490871:

Общество с ограниченной ответственностью "Агро-консалт" (RU)
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Белгородская государственная сельскохозяйственная академия имени В.Я. Горина" (RU)

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro. Способ включает стерилизацию эксплантов и апикальных почек 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промыванием 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч. Затем из эксплантов вырезают листовые пластинки размером более 4 мм и делают надсечки для увеличения площади соприкосновения ткани растения с питательной средой. После чего апикальные почки очищают от поврежденных тканей и для определения чистоты стерильности их помещают на агаризованную питательную среду. Среда содержит 1/2 концентраций макро- и микросолей по Murashige and Skoog (MS), полный состав витаминов и органических добавок среды MS, 1,0-2,0% сахарозы, 0,50-0,70 мМ 1-нафтилуксусной кислоты (НУК). Способ позволяет повысить коэффициент размножения генетически стабильных и свободных от инфекций растений в условиях in vitro. 5 ил., 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию тканей и органов растений, и может быть использовано в садоводстве для повышения коэффициента размножения, оздоровления посадочного материала, а также в селекционной практике для создания новых и улучшения уже известных сортов растений.

Известен способ оздоровления плодовых и цветочных (в частности, гладиолуса) эксплантов и апикальных почек растений. Способ включает замачивание водопроводной водой в течение 24 ч клубнелуковиц диаметром 5-6 мм с последующей поверхностной их стерилизацией 6%-ным раствором гипохлорида натрия в течение 15 мин и промыванием 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч, повторную стерилизацию 90%-ным эгаполом в течение 10 мин и трехкратное промывание, затем клубнелуковицы освобождают от туники и стерилизуют последовательно 70%-ным этанолом в течение 5-7 мин и 90%-ным - в течение 1 мин (RU 2180165 С2, 7 А01Н 4/00, 10.03.2002).

Недостатком данного способа является длительность обработки и применение токсичного стерилизатора - гипохлорита натрия, который, кроме того, сложно приобрести в России.

Известен способ получения оздоровленного посадочного материала путем проведения термо- и химиотерапии в зависимости от вируса, включенного в клетки экспланта и апикальных почек (Лутова Л.А. Биотехнология высших растений: Учебник. - СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2003. - С.212-215).

Недостаток данного способа - использование раздельного применения термо- и химиотерапии, что занимает достаточно длительное время, и, кроме того, данный способ не позволяет полностью удалить вредные микрооргазмы.

Известен также способ обработки эксплантов и апикальных почек такими стерилизаторами, как диацид 0,1%-ный, сулема 0,1%-ная и перекись водорода 10-12%-ная (Егорова Т.А. Основы биотехнологии: учеб. пособие для высш. пед. учеб заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. - 3-е изд., стер. - М.: Издательский центр «Академия», 2006. - С.160-161). Это наиболее близкий и распространенный способ.

Недостатком данного способа является применение токсичных веществ, требующих специальных условий работы с ними.

Задача изобретения - повышение коэффициента размножения генетически стабильных и свободных от инфекций растений в условиях in vitro, что дает возможность повышать урожайность сельскохозяйственных культур.

Это достигается техникой микроклонирования, которая сокращает продолжительность развития плодовых растений в несколько раз по сравнению с жизненным циклом в естественных условиях, а коэффициент размножения повышает на порядки.

Микроклонирование включает стерилизацию, потому что растительные ткани служат серьезным источником заражения, так как на их поверхности всегда находится эпифитная микрофлора. Поэтому необходима поверхностная стерилизация, которую проводят следующим образом. Предварительно часть растения, из которой будет извлечен эксплант, промывают водой с мылом и споласкивают чистой водой. Затем экспланты и апикальные почки обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч. После из эксплантов вырезают листовые пластинки размером более 4 мм и делают надсечки для увеличения площади соприкосновения ткани растения с питательной средой. Апикальные почки очищают от поврежденных тканей и для определения чистоты стерильности их помещают на агаризованную питательную среду, которая содержит 1/2 концентраций макро- и микросолей по Murashige and Skoog (MS), полный состав витаминов и органических добавок среды MS, 1,0-2,0% сахарозы, 0,50-0,70 рМ 1-нафтилуксусной кислоты (НУК).

Пример 1

Экспланты и апикальные почки земляники садовой обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч.

Образующийся каллюс имеет очень низкий процент инфицированности, который составляет 1-3%. Формирующиеся при этом растения имеют хорошо развитую корневую систему с многочисленными боковыми корешками. Длина главного корня составляет 5-6 мм. Утолщенный стебель имеет длину 5-8 мм. Проросток обладает насыщенной зеленой окраской. Побеги, достигшие 5-10 миллиметров, отделяют от каллюса и переносят на среду для укоренения. Оценка состояния проростка - пять баллов. Спустя месяц розетки земляники имеют 10-15 см в высоту, листочки обладают интенсивной зеленой окраской. Корневая система хорошо развита (табл., фиг.1, 2).

Пример 2

Экспланты и апикальные почки винограда также обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч.

Каллюс, образующийся из эксплантов и апикальных почек, имеет низкий процент инфицированности, примерно 3-5%. Растеньица также имеют хорошо развитую корневую систему с многочисленными боковыми корешками. Длина главного корня составляет 8-10 мм. Утолщенный стебель имеет длину 10-15 мм. Проросток обладает насыщенной зеленой окраской. Оценка состояния проростка - пять баллов. Растения после пересадки на торфяную смесь очень быстро укореняются и интенсивно растут. Спустя два-три месяца растения винограда имеют до 20 см в высоту. Стебель несет 5-6 настоящих листочков, они обладают интенсивной зеленой окраской. Корневая система хорошо развита (табл., фиг.3, 4).

Пример 3

Экспланты и апикальные почки хурмы сорта «Королек» обрабатывают 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение 5 минут и промывают 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч.

После воздействия 0,5%-ного спиртового раствора хлоргексидина в течение 5 минут экспланты хурмы имеют небольшой процент инфицированности, примерно 8-10%. Каллюс образуется достаточно быстро, в течение пять-семь дней, растеньица формируются сильными, здоровыми. Длина главного корня составляет 10-15 мм. Утолщенный стебель имеет длину до 20 мм. Проросток обладает насыщенной зеленой окраской. Оценка состояния проростка - пять баллов. Растения после пересадки на торфяную смесь быстро укореняются и интенсивно растут. Через два месяца растения хурмы имеют до 15 см в высоту, утолщенный стебель несет до 8 настоящих листочков, они плотные и обладают интенсивной зеленой окраской. Длина главного корня составляет 25-30 см, боковые корни хорошо развиты (табл., фиг.5).

Таблица
Влияние 0,5%-ного спиртового раствора хлоргексидина на обеззараживание посадочного материала в условиях in vitro
Пример Образцы Кол-во введенных эксплантов, шт. Неинфицированные растения, % Развитие регенерантов в баллах
1 Земляника садовая 50 97-99 5
2 Виноград 50 95-97 5
3 Хурма сорта «Королек» 50 90-92 5

Таким образом, способ получения оздоровленного посадочного материала в условиях in vitro отличается более эффективной обработкой эксплантов и апикальных почек для повышения коэффициента размножения генетически стабильных и свободных от инфекций растений в условиях in vitro, является более быстрым и доступным. Кроме того, данный способ позволяет обеспечить промышленные и любительские садовые хозяйства высококачественным посадочным материалом плодово-ягодных культур местного производства и повысить урожайность сельскохозяйственных растений.

Источники информации

1. RU 2180165 С2, 7 А01Н 4/00, 10.03.2002.

2. Лутова Л.А. Биотехнология высших растений: Учебник. - СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2003. - С.212-215.

3. Егорова Т.А. Основы биотехнологии: учеб. пособие для высш. пед. учеб заведений / Т.А. Егорова, С.М. Клунова, Е.А. Живухина. - 3-е изд., стер. - М.: Издательский центр «Академия», 2006. - С.160-161.

Способ поверхностной стерилизации эксплантов и апикальных почек земляники садовой, винограда, хурмы сорта «Королек» in vitro, включающий стерилизацию эксплантов и апикальных почек растений 0,5%-ным спиртовым раствором хлоргексидина в течение пяти минут и промыванием 5-6 раз стерильной дистиллированной водой в течение 1 ч, затем из эксплантов вырезают листовые пластинки размером более 4 мм и делают надсечки для увеличения площади соприкосновения ткани растения с питательной средой, апикальные почки очищают от поврежденных тканей и их помещают на агаризованную питательную среду, которая содержит 1/2 концентраций макро- и микросолей по Murashige and Skoog (MS), полный состав витаминов и органических добавок среды MS, 1,0-2,0% сахарозы, 0,50-0,70 µМ 1-нафтилуксусной кислоты (НУК).



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к способу укоренения черенков сенполии узамбарской и может быть использовано для цветочной рассады. .
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии, семеноводству картофеля, картофелеводству. .
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в процессе клонального микроразмножения яблони и груши на этапе собственно микроразмножения. .
Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой питательную среду для укоренения побегов яблони и груши in vitro. .
Изобретение относится к адаптации растений к нестерильным условиям. .
Изобретение относится к цветоводству и биотехнологии, может быть использовано для массового размножения ценных декоративных сортов и гибридов ириса сибирского, освобождения их от системных патогенов, а также в селекционной практике для создания новых улучшенных сортов.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к семеноводству картофеля при подготовке оздоровленного посадочного материала. .
Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства. .
Изобретение относится к лесному хозяйству, а именно к созданию сортового плантационного лесовыращивания на основе современных инновационных биотехнологий. .
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к штамму продуценту стефарина. .
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой получение каллуса на питательной среде Мурасиге-Скуга, доведенной до 1 литра водой, в течение одного пассажа, где в питательную среду добавляют 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту с концентрациями 4-8 мг/л, культивируют семена льна многолетнего, в питательную среду Гамборга добавляют 6-бензиламинопурин с концентрацией 1-2 мг/л и α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и затем на питательную среду Гамборга пересаживают полученные каллусы для регенерации и культивируют в течение 2-4 пассажей, в жидкую питательную среду Мурасиге-Скуга с концентрацией всех компонентов 50% добавляют α-нафтилуксусную кислоту с концентрацией 0,1-0,5 мг/л и на нее пересаживают растения-регенеранты и культивируют их в течение 2-4 пассажей. Изобретение позволяет ввести в культуру клетки льна многолетнего. 3 табл.
Изобретение относится к области биотехнологии растений, в частности к микроклональному размножению in vitro. В способе культивируют каллусные культуры из стерильных эксплантов стеблевых сегментов, листьев, листовых черешков. Используют базовые питательные среды Мурасиге-Скуга, Вуди Плант Медиум с содержанием и соотношением регуляторов роста: 6-бензиламинопурин - 0,2-1,5 мг/л, α-нафтилуксусная кислота - 0,2-0,5 мг/л, индолилмасляная кислота - 2 мг/л. Далее проводят адаптацию при освещенности 2000 люкс и питательном режиме регенерантов в теплице с получением посадочного материала для лесных культур. Способ позволяет получать посадочный материал с высокими наследственными свойствами. 2 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений-регенерантов земляники in vitro, включающий в себя введение эксплантов в культуру, размножение и укоренение вновь образованных in vitro побегов, где в качестве эксплантов используют фрагменты цветоложа и цветоножки из цветов земляники, взятых в фазе бутонизации, которые промывают под проточной водой в течение 15-25 минут, стерилизуют 0,1% раствором сулемы 10 минут, затем трижды промывают стерильной дистиллированной водой, цветоложе освобождают от чашелистиков и лепестков, разрезают на фрагменты 5×5 мм и помещают срезом на питательную среду, цветоножку отделяют от цветка, отрезают фрагмент длиной 5 мм и также помещают на питательную среду. Изобретение позволяет получить увеличенное количество растений-регенерантов от одного экспланта. 1 табл., 2 ил.
Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к виноградарству. Способ включает микроразмножение пробирочных растений и высадку их на жидкую питательную среду с добавлением макроэлементов, витаминов и биопрепаратов. При этом на основе субстрата Мурасиге-Скуга исключают активированный уголь, снижают содержание солей и кислот в 2-4 раза и добавляют Гумат+7B в количестве 5-10 мл/л. Способ позволяет повысить эффективность и ускорить размножение оздоровленных от вирусной инфекции перспективных сортов винограда. 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ хранения растений осины в условиях in vitro, включающий культивирование микропобегов осины на питательной среде WPM с добавлением сахарозы 10-20 г/л, агар-агара 9 г/л и витаминов MS 1 мл/л, сорбитола 5-10 г/л и маннитола 5-10 г/л, причем хранение растений осуществляют при температуре +4°С в режиме освещения 8 ч день/16 ч ночь с интенсивностью 2000 люкс. Изобретение позволяет повысить сохранность in vitro культур ценных селекционных генотипов и генетически модифицированных клонов осины. 1 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл.
Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения подвоев яблони, где на этапах введения в культуру и собственно микроразмножения в среду Мурасиге-Скуга в качестве стимулятора роста добавляется препарат фуролан в концентрации 0,004 мг/л. Изобретение позволяет повысить ряд показателей качества эксплантов подвоев яблони. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения цимбидиума in vitro включающий введение стерильных эксплантов в культуру in vitro, микроразмножение путем отделения псевдобульб от экспланта и посадки на питательную среду Мурасиге-Скуга, укоренение псевдобульб в грунте, где после введения в культуру in vitro образовавшиеся псевдобульбы отделяют от экспланта и переносят на агаризованную питательную среду Мурасиге-Скуга,содержащую 30 г/л сахарозы и раствор препарата эпибрассинолида в концентрации 0,001 мг/л, затем псевдобульбы, имеющие корнепобеги, отделяют от эксплантов, обрабатывают раствором индолилуксусной кислоты в концентрации 1,0 мг/л в течение 15 минут и укореняют в условия ex vitro в грунте с добавлением мха и древесной коры. Изобретение позволяет повысить выход размножаемого материала за счет увеличения количества образующихся псевдобульб, при положительном влиянии оптимальных концентраций регуляторов роста.3 табл.
(57) Изобретение относится к области биотехнологии и генной инженерии. Листовые экспланты, вычлененные из тридцатидневных асептических растений исходных сортов, выращенных в сосудах 1 л, помещают в чашки Петри с жидкой средой определенного состава и прединкубируют, кокультивируют и культивируют на питательных средах определенного состава. При появлении регенерантов размером не менее 10 мм их срезают и переносят на среду определенного состава. Проводят первый этап отбора форм, устойчивых к возбудителям фитофтороза и альтернариоза, путем культивирования срезанных регенерантов на среде МС с 50 мл/л канамицина сульфата в течение 30-45 дней при 22-25°C и освещенности 6000-10000 лк при 16-часовом фотопериоде с последующим отбором укоренившихся регенерантов картофеля с зелеными листьями и стеблями. Проводят второй этап отбора форм, устойчивых к возбудитялям фитофтороза и альтернариоза, включающий проверку укоренившихся растений методом ПЦР на наличие целевой ДНК и размножение регенерантов с подтвержденной ПЦР вставкой целевой ДНК микрочеренкованием. Использование заявленного способа позволяет получить устойчивые к возбудителям фитофтороза и альтернариоза формы картофеля. 5 табл.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ размножения растений лапчатки белой (Potentilla alba) методом культуры in vitro, включающий отделение вегетативных почек от корневища, стерилизацию, высаживание на питательные среды, микроразмножение побегов, укоренение побегов, адаптацию растений-регенерантов к нестерильным условиям. Использование заявленного способа позволяет получить более 150 тысяч саженцев в год от одного экспланта. 5 ил., 1 табл.
Способ регенерации адвентивных микропобегов Hyssopus officinalis L. в условиях in vitro включает отделение листьевых дисков от микропобегов после 4-5 пассажа, полученных в культуре in vitro, дальнейшее культивирование их на модифицированной питательной среде Мурасиге и Скуга с половинной концентрацией макроэлементов и дополненной веществом цитокининового типа действия, а именно тидиазуроном, при этом культивирование проводят при пониженной интенсивности освещения. 4 табл.
Наверх