Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка

Авторы патента:

Вторушин Сергей Владимирович (RU)

Степанов Иван Вадимович (RU)

Литвяков Николай Васильевич (RU)

Григорьева Евгения Сергеевна (RU)

Перельмутер Владимир Михайлович (RU)

Афанасьев Сергей Геннадьевич (RU)

Завьялова Марина Викторовна (RU)

Чердынцева Надежда Викторовна (RU)

Августинович Александра Владимировна (RU)

Савенкова Ольга Владимировна (RU)

Берестень Сергей Федорович (RU)

Волкоморов Виктор Владимирович (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2493568:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт онкологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИ онкологии" СО РАМН) (RU)
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта Российской академии наук (ИМБ РАН) (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли. Для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP 1-54388 при рабочем разведении 1:1200. При наличии позитивной цитоплазматической экспрессии CypA в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов. Изобретение позволяет прогнозировать низкий риск гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка и избегать избыточной агрессивной адъювантной терапии. 2 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способов прогнозирования низкого риска гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка.

В настоящее время одной из наиболее важных гистологических классификаций рака желудка является классификация, предложенная Lauren P. с разделением опухолей на кишечный и диффузный типы [1]. Несмотря на значительные достижения в области диагностики и прогнозирования течения заболевания при раке желудка до сих пор остаются высокими показатели заболеваемости и смертности от данной патологии [2].

Наиболее существенными прогностическими параметрами, предсказывающими гематогенную диссеминацию, являющуюся одной из наиболее частых причин смерти больных раком желудка, считают глубину прорастания стенки органа, интраваскулярную инвазию, выраженность ангиогенеза в опухолевом узле и лимфогенное метастазирование [3, 4, 5].

Наиболее близким к предлагаемому является способ определения показателей пятилетней выживаемости по выраженности экспрессии в первичной опухоли показателя апоптоза р53, предложенный IkeguchiM., Cai J., Yamane N. et al. (1999). При высоких показателях экспрессии пятилетняя выживаемость составляет 82%, при низких - 60%. Известный способ является недостаточно точным и информативным в плане прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном раке желудка Недостатком данного способа является то, что исследование проводится на общей группе больных раком желудка без уточнения гистотипа опухоли, не уточняется конкретная граница значений, относящихся к «высоким» и «низким показателям» [6]. Кроме того, пятилетняя выживаемость является широким понятием, включающим случаи наступления летальных исходов не только от отдаленного метастазирования.

Новая техническая задача - повышение точности и информативности способа.

Для решения поставленной задачи в способе прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка, путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли, для исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA)клон NBP1-54388 при рабочем разведении 1:1200 и при наличии позитивной цитоплазматической экспрессии СурА в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск возникновения гематогенных метастазов.

Способ осуществляют следующим образом. У пациентов с обнаруженным в операционном материале диффузным типом рака желудка проводят иммуногистохимическое исследование препаратов первичной опухоли. Для детекции экспрессии циклофиллина A используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP1-54388, рабочее разведение 1:1200, фирмы Novus, USA. Определяют наличие клеток с позитивной цитоплазматической экспрессией CypA в первичной опухоли при большом увеличении микроскопа (×400). В случаях с позитивной экспрессией CypA прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов.

Сущность предлагаемого способа иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной С., 43 года, с диффузным типом рака желудка без предоперационной химиотерапии, стадии T2N3M0. Проведено исследование риска гематогенного метастазирования согласно предлагаемому способу. При иммуногистохимческом исследовании определялась позитивная экспрессия CypA в клетках первичной опухоли. В течение 60 месяцев наблюдения гематогенных метастазов не возникло.

Пример 2. Больной О., 31 год, с диффузным типом рака желудка без предоперационной химиотерапии, стадии T2N3M0. При иммуногистохимческом исследовании определялась негативная экспрессия CypA. Через 24 месяца после операции у пациента возникли гематогенные метастазы в печени.

Выбор маркера обусловлен изучением данных литературы, патентных источников и проанализированных клинических наблюдений. Циклофилин A (CypA) является белком, локализованным в цитозоле, одним из представителей семейства иммунофилинов, катализирующим реакцию цис-транс изомеризации X-Pro пептидной связи [3]. Показано, что данный белок участвует в регуляции процессов клеточного роста и дифференцировки [4]. Кроме цитозольной формы, существует секретируемая форма, которую синтезируют активированные макрофаги [5]. Внеклеточная форма CypA действует как агент хемотаксиса, регулирующий миграцию моноцитов, нейтрофилов, эозинофилов и T-клеток [5]. Этот белок обладает иммуномодулирующей активностью, стимулируя созревание и антигенпредставляющую функцию дендритных клеток [4]. В последние годы было проведено множество исследований, которые выявили гиперэкспрессию CypA в злокачественных опухолях различных локализаций [7, 8]. Однако, точная роль CypA в канцерогенезе остается до конца не ясной.

Критерии предлагаемого способа подобраны на основании анализа данных клинических исследований

В исследование вошло 29 пациентов с кишечным и 17 с диффузным типом рака желудка стадии T_1-3N_0-3M₀, из них 48% мужчин и 52% женщин. Средний возраст больных 59,5±10,1 лет. Предоперационного лечения больным не проводилось. Операция выполнялась в объеме субтотальной дистальной резекции желудка, гастроэктомии, проксимальной резекции желудка, паллиативной субтотальной резекции желудка, операции Бильрот 2. Длительность наблюдения составила 5 лет.

Гистологический тип рака желудка устанавливался согласно классификации, предложенной Lauren P., 1965. Иммуногистохимичское исследование выполнялось по стандартной методике. Для детекции экспрессии циклофиллина A (CypA) использовались антитела Cyclophilin A Antibody (клон NBP 1-543 88) (рабочее разведение 1:1200) фирмы Novus, USA. Определялось наличие клеток с позитивной цитоплазматической экспрессией изучаемого маркера при большом увеличении микроскопа (х400). Статистическая обработка результатов выполнялась с помощью пакета программ Statistica 6,0 for Windows.

В группах больных с кишечным и диффузным типами рака желудка оценивалась экспрессия CypA (фиг.1, 2). Частота встречаемости случаев с позитивной экспрессией CypA не различалась у больных с кишечным и диффузным типами рака желудка (табл.1).

У больных с диффузным типом опухоли гематогенные метастазы выявлялись реже при позитивной экспрессии CypA, в то время как при кишечном типе рака желудка частота возникновения отдаленных метастазов не была связана с наличием экспрессии CypA (табл.2). Чувствительность метода составила 40%, специфичность, определяющая долю лиц с низким риском развития гематогенных метастазов - 100%.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет прогнозировать низкий риск гематогенного метастазирования и избегать избыточной агрессивной адъювантной терапии.

Источники информации, использованные при составлении описания:

1. Lauren P. The two histological main types of gastric carcinoma: diffuse and so-called intestinal-type carcinoma [Text] / P. Lauren // Acta. Pathol. Microbiol. Scand. - 1965. - №64. - P.31-49.

2. Tenderenda M. Expression of CD34 in gastric cancer and its correlation with histology, stage, proliferation activity, p53 expression and apoptotic index / M. Tenderenda, P. Rutkowski, D. Jesionek-Kupnicka, R. Kubiak // Pathol Oncol Res. - 2001. - Vol.7(2). - P.129-34.

3. Fischer G. Determination of enzymatic catalysis for the cis-trans-isomerization of peptide binding in proline-containing peptides [Text] / G. Fischer, H. Bang, C. Mech // Biomed. Biochim. Acta. - 1984. - Vol 43. - P.1101-1111.

4. Bharadwaj U. Effects of cyclophilin A on myeloblastic cell line KG-1 derived dendritic like cells (DLC) through p38 MAP kinase activation [Text] / U. Bharadwaj, R. Zhang, H. Yang, M. Li, L.X. Doan, C. Chen, Q. Yao // J. Surg. Res. - 2005. - Vol.127. - P.29-38.

5. Sherry В. Identification of cyclophilin A as a proinflammatory secretory product of lipopolysaccharide-activated macrophages [Text] / B. Sherry, N. Yarlett, A. Strupp, A. Cerami // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1992; - Vol.89. - P.3511-3515.

6. IkeguchiM., Cai J., Yamane N. et al. // Cancer (Philad.). - 1999. - V.85. - P.2329-2335.

7. Lee J. Role of Cyclophilin A during Oncogenesis / J. Lee // Arch Pharm Res. - 2010. - VoL 33. P.181-187.

8. Obchoei S. Cyclophilin A enhances cell proliferation and tumor growth of liver fluke-associated cholangiocarcinoma / S. Obchoei, S. M. Weakley, S. Wongkham, C. Wongkham, K. Sawanyawisuth, Q. Yao, C. Chen // Mol Cancer. - 2011. - Vol.10. - P.102.

Приложение

Фиг.1. Экспрессия CypA в криброзных структурах при кишечном типе рака желудка (ув. ×400).

Фиг.2. Экспрессия CypA в дискретных опухолевых клетках при диффузном типе рака желудка (ув. ×400).

Таблица 1. Частота встречаемости случаев с экспрессией CypA в опухолевых клетках при кишечном и диффузном типе рака желудка.

Таблица 2. Взаимосвязь экспрессии CypA в опухолевых клетках с наличием гематогенных метастазов при кишечном типе рака желудка.

Таблица 1
Тип рака желудка	Экспрессия CypA (количество больных, а.ч., %)
негативная	позитивная
Кишечный	3/29 (10%)	26/29 (90%)
Диффузный	2/17 (12%)	15/17 (88%)
χ²=0,02; p=0,88

Таблица 2
Экспрессия циклофилина A	Гематогенные метастазы (количество больных, а.ч., %)
Экспрессия циклофилина A	нет (М₀)	есть (М₊)	нет (М₀)	есть (М₊)
кишечный тип	диффузный тип
негативная	3/3 (100%)	0/3 (0%)	0/2 (0%)	2/2 (100%)
позитивная	22/26 (85%)	4/26 (15%)	12/15 (80%)	3/15 (20%)
	χ²=0,53; p=0,46	χ²=5,4; p=0,01

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли, отличающийся тем, что для проведения исследования используют антитела Cyclophilin A Antibody (CypA) клон NBP 1-54388 при рабочем разведении 1:1200, и при наличии позитивной цитоплазматической экспрессии CypA в клетках первичной опухоли прогнозируют низкий риск развития гематогенных метастазов.

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и может быть использовано для прогнозирования развития необратимой дисфункции трансплантата у реципиентов после трансплантации сердца.

Наноантитело, специфически связывающее белок сеа, способ его использования для детекции этого белка // 2493166

Настоящее изобретение относится к области молекулярной иммунологии, биотехнологии и медицины. Предложено однодоменное антитело (наноантитело), специфически связывающее карциноэмбриональный антиген (СЕА) человека и охарактеризованное через полную аминокислотную последовательность.

Наноантитело, специфически связывающее белок muc1, способ детекции белка muc1 с помощью наноантител // 2493165

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и медицины. Предложено однодоменное антитело (наноантитело), специфически связывающее белок муцин 1 (MUC1) человека и охарактеризованное через полную аминокислотную последовательность.

Способ прогнозирования эффективности лечения диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 2 типа и дислипидемией // 2491925

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования эффективности лечения диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 2 типа и дислипидемией.

Диагностикум для определения донор-специфических антител к главному комплексу гистосовместимости и способ его получения // 2491552

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, трансплантологии и хирургии, и может быть использовано для проведения мониторинга донор-специфических антител к системе HLA после аллотрансплантации органа в течение пяти лет и более.

Способ видовой идентификации микобактерий туберкулеза у лиц, инфицированных микобактериями туберкулеза // 2491551

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике туберкулеза, и может быть использовано для определения видовой идентификации микобактерий у лиц, инфицированных микобактериями туберкулеза.

Применение моноклональных антител для идентификации ямагатской или викторианской эволюционных линий вируса гриппа типа в, штамм гибридомы 4н7 для получения моноклональных антител, предназначенных для определения вирусов гриппа в ямагатской ветви, штамм гибридомы в/4н1 для получения моноклональных антител, предназначенных для определения вирусов гриппа в викторианской ветви // 2491338

Модифицированный пептид и его использование для тестирования онкологических заболеваний цнс и эффективности терапии // 2491291

Изобретение относится к области:- медицины, а именно к диагностике нарушений функции гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) и мониторингу эффективности проводимой терапии; - иммуно-диагностики, а именно к определению уровня содержания натуральных антител в сыворотке крови; - пептидной химии, а именно к конструированию и модификации синтетических пептидных фрагментов для использования в качестве антигена для определения натуральных антител к природным белкам человеческого организма, в частности для определения натуральных антител к белку S100 человека.

Способ дифференциальной диагностики бруцеллеза // 2490647

Способ верификации фазы гнойно-септических осложнений при остром деструктивном панкреатите // 2490646

Изобретение относится к медицине, в частности к гистологии, морфометрии, абдоминальной хирургии. .

Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных // 2493569

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных, включающий определение наличия антител к антигенам семи серогрупп L.hebdomadis, L.pomona, L.tarassovi, L.grippotyphosa, L.canicola, L.sejroe и L.icterohaemorrhagiae в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в качестве антигена применяют смешанные в равных количествах антигенные белки из лептоспир трех серогрупп - L.tarassovi, L.grippotyphosa и L.hebdomadis. Изобретение значительно упрощает и максимально сокращает диагностику лептоспироза, позволяет осуществлять оперативный контроль за эпизоотическим состоянием животных по лептоспирозу. Способ обладает высокой специфичностью, чувствительностью и стандартностью, а также обеспечивает создание безопасных условий труда для персонала диагностических лабораторий. 4 табл., 4 пр.

Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных // 2493569

Способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) с целью индикации бруцелл в патматериале // 2493871

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бруцелл в патматериале. Сущность изобретения включает способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью индикации бруцелл в патматериале, посредством изготовления формалинизированных эритроцитов, с последующей сенсибилизацией позитивной бруцеллезной сывороткой, при этом для изготовления эритроцитарного антительного диагностикума позитивную бруцеллезную сыворотку для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов разводят 1:50-1:100, инактивируют при 60°C в течение 30 минут, сенсибилизируют формалинизированные эритроциты, из расчета: осадок от 2 объемов 40%-ной взвеси эритроцитов барана, 1 объем 0,43-0,44% раствора свежеприготовленного амидола, 1,0-1,5 объем позитивной сыворотки, разведенной 1:50-1:100, и выдерживают в течение 28-32 минут при 55-56°C. Изобретение позволяет получить обладающий высокой активностью и специфичностью эритроцитарный бруцеллезный антительный диагностикум. 4 табл.

Способ определения tlr 2, tlr 3, tlr 4 у больных колоректальным раком в послеоперационном периоде // 2494402

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, патологической анатомии, и может быть использовано для прогнозирования воспалительных осложнений после операций по поводу колоректального рака. Способ состоит в том, что на 3-5 сутки после операции проводят иммуноцитохимическое исследование с целью выявления TLR 2, TLR 3, TLR 4 на лейкоцитах в перитонеальном выпоте, при этом исследование выполняют разведением антител к данным рецепторам - 1/200 и инкубацией в течение 12 часов в холодильной камере при температуре +4 - +8°С, и в случае выявления позитивной реакции на TLR 2 и/или TLR 3 и/или TLR 4 прогнозируют воспалительные осложнения в зоне оперативного вмешательства, а в случае негативной реакции - их отсутствие. Способ позволяет прогнозировать развитие воспалительных осложнений в зоне оперативного вмешательства, обладает простотой, доступностью, информативностью и надежностью. 4 пр.

Способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость клеточных мембран по натрию // 2494403

Настоящее изобретение относится к области медицины и фармации, а именно к биохимии клеточных мембран человека, и описывает способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость мембран эритроцитов по натрию с использованием определения скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита, при котором измеряют скорость обмена внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации, причем исследуемое вещество вносят в среду 1-часовой инкубации, содержащую в мМ: 150 - NaCl; 10 - глюкозы; 10 - Hepes-Tris; 0,1 - уабаина, и по изменению величины скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита судят о влиянии вещества на проницаемость клеточной мембраны по натрию. Изобретение обеспечивает оптимизацию подбора лекарственной терапии. 6 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени // 2494404

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени. Сущность способа состоит в том, что проводят одновременное определение в периферической крови пациента процентного содержания циркулирующих стволовых гемопоэтических клеток CD34+ (СГК) и объемного содержания лимфоцитов (Лф, млн/мл), находят их индивидуальное отношение R по формуле R=ЛФ/СГК и строят кривую степенной зависимости R (ось ординат) от СГК (ось абсцисс), используя ее затем в качестве калибровочной кривой в системе двойных логарифмических координат, а для оценки состояния реципиента в текущий момент в его периферической крови определяют ЛФ и СГК, находят их отношение Rp, положение его в калибровочной системе координат. При расположении Rp на или над калибровочной кривой текущее состояние реципиента оценивают как благоприятное, ниже кривой - неблагоприятное. Использование заявленного способа позволяет повысить точность оценки состояния реципиента в посттрансплантационном периоде. 4 табл., 4 ил., 1 пр.

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе а(н3n2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности // 2495429

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании развития внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности. Сущность способа: во втором триместре гестации при гриппе A(H3N2) у женщин с угрозой невынашивания беременности определяют уровень антител в парных сыворотках крови, используя в качестве показателя уровень антител в первой сыворотке (А); определяют количество баллов, отражающих степень выраженности гиперемии слизистой задней стенки глотки (В); определяют количество баллов, отражающих степень выраженности отека слизистой задней стенки глотки (С); определяют степень выраженности симптомов угрозы невынашивания при температуре более 37,8° в баллах (Д). Затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции: D=-0,080×А-1,767×В-1,487×С-1,068×Д. При D больше -10,10 прогнозируют отсутствие внутриутробного инфицирования плода, а при D меньше -10,10 прогнозируют внутриутробное инфицирование плода. Использование способа обеспечивает возможность прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности с вероятноситью 82,2%. 2 пр.

Способ оценки эффективности терапии хронического миелолейкоза // 2495430

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки эффективности лечения ингибитором тирозинкиназ первого поколения иматинибом мезилатом (гливеком) хронического миелолейкоза. Проводится определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с детекцией тандемной масс-спектрометрией концентрации гливека в сыворотке крови больных хроническим миелолейкозом, получающих лечение ингибитором тирозинкиназ первого поколения - гливеком. При выявлении низкой концентрации гливека - 998,15±115,7 нг/мл прогнозируют неэффективность терапии хронического миелолейкоза с недостижением полного цитогенетического ответа; при выявлении высокой концентрации гливека - 1475,15±95,5 нг/мл прогнозируют эффективность терапии хронического миелолейкоза с достижением полного цитогенетического ответа. Способ позволяет повысить точность оценки эффективности терапии. 4 пр., 1 табл., 2 ил.

Способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений // 2495431

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования развития репродуктивных нарушений. Сущность способа состоит в том, что у мужчин исследуют эякулят, а у женщин - цервикальное отделяемое на десятый день менструального цикла, в качестве параметров определяют уровни интерлейкина 1 бета и интерферона гамма одновременно. При содержании интерлейкина 1 бета больше 38,8±3,8 пг/мл и одновременном содержании интерферона гамма больше 8,1±0,5 пг/мл прогнозируют формирование репродуктивных нарушений. Использование заявленного способа позволяет заблаговременно выявить развивающуюся инфертильность и осуществлять скрининговые обследования. 2 табл., 5 пр.

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека // 2495432

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения. Сущность способа в том, что в лунках микропанели сорбируют тромбин, как активатор компонента С4, затем вносят пробу, содержащую компонент С4 комплемента человека с неизвестной активностью, проводят инкубацию в присутствии ЭДТА, а затем вносят конъюгат фермента с антителами против компонента С4 человека и субстрат этого фермента, расчет активности компонента С4 проводят по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор для определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека содержит плоскодонную микропанель с сорбированным тромбином, конъюгат фермента с антителами к компоненту С4 комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови с известной активностью С4 в качестве стандарта. Группа изобретений позволяет определять функциональную активность компонента С4 системы комплемента человека и обладает хорошей воспроизводимостью результатов и отсутствием необходимости активации всей системы комплемента. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.