Способ определения tlr 2, tlr 3, tlr 4 у больных колоректальным раком в послеоперационном периоде

Авторы патента:

Байкова Оксана Владимировна (RU)

Беляев Алексей Михайлович (RU)

Белоусова Татьяна Александровна (RU)

Орлова Рашида Вахидовна (RU)

Протасова Анна Эдуардовна (RU)

Раскин Григорий Александрович (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2494402:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, патологической анатомии, и может быть использовано для прогнозирования воспалительных осложнений после операций по поводу колоректального рака. Способ состоит в том, что на 3-5 сутки после операции проводят иммуноцитохимическое исследование с целью выявления TLR 2, TLR 3, TLR 4 на лейкоцитах в перитонеальном выпоте, при этом исследование выполняют разведением антител к данным рецепторам - 1/200 и инкубацией в течение 12 часов в холодильной камере при температуре +4 - +8°С, и в случае выявления позитивной реакции на TLR 2 и/или TLR 3 и/или TLR 4 прогнозируют воспалительные осложнения в зоне оперативного вмешательства, а в случае негативной реакции - их отсутствие. Способ позволяет прогнозировать развитие воспалительных осложнений в зоне оперативного вмешательства, обладает простотой, доступностью, информативностью и надежностью. 4 пр.

Толл-подобные рецепторы активируются различными лигандами, которые являются структурными компонентами бактерий, вирусов и грибков. Например, толл-подобный рецептор 4 типа узнает и связывается со структурой клеточной стенки грамотрицательных бактерий- липополисахаридом, а толл-подобный рецептор 2 типа связывается с гликолипидами и липопротеинами стенки грамположительных бактерий, толл-подобный рецептор 3 типа связывается с компонентом вирусной стенки. Рецепторы локализуются на клеточной мембране и играют ключевую роль во врожденном иммунитете.

Известен способ прогнозирования воспалительных осложнений, основанный на выявлении TLR-4 путем иммуногистохимического исследования [Cammarota R, Bertolini V, Pennesi G et al. The tumor microenvironment ofcolorectal cancer: stromal TLR-4 expression a potential prognostic marker. J Transi Med. 2010 Nov 8; 8:112].

Недостатками способа являются: 1) сложность получения материала для исследования (рецепторы определяются в перитуморозных тканях) -инвазивность процедуры; 2) длительность подготовки препарата для исследования, не менее 2-х суток, так как используются гистологические срезы, а в этом случае рецепторы - антигены - оказываются менее доступными для взаимодействия с моноклональными антителами.

Известен способ прогнозирования воспалительных осложнений, основанный на выявлении TLR-4 путем иммунофлюоресцентого исследования, при котором TLR рецепторы определяются на моноцитах периферической крови [Оnо S, Tsujimoto H, Hiraki S. et al. Preoperative Toll-like receptor expression in monocytes is associated with host immunological responses following gastrointestinal surgery. World J Surg. 2011 Feb; 35(2):365-71].

К недостатку данного способа относят отсутствие точной локализации воспалительного процесса, так как положительная реакция на TLR говорит о том, что это может быть как интраабдоминальная инфекция, так и пневмония.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является возможность прогнозирования воспалительных осложнений в зоне оперативного вмешательства после операции по поводу колоректального рака.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования воспалительных осложнений после операции по поводу колоректального рака, согласно изобретению на 3-5 сутки после операции проводят иммуноцитохимическое исследование с целью выявления TLR2, TLR3, TLR4 на лейкоцитах в перитонеальном выпоте; при этом, исследование выполняют иммуноцитохимическим методом с разведением антител к данным рецепторам - 1/200 и инкубацией в течение 12 часов в холодильной камере при температуре +4-+8°С, и в случае выявления позитивной реакции на TLR2 и/или TLR 3 и/или TLR 4 прогнозируют воспалительные осложнения в зоне оперативного вмешательства, а в случае негативной реакции - отсутствие данных осложнений.

Проведенные исследования показали, что из 17 больных с положительными TLR 2, 4 у 8 больных развились осложнения (1 перитонит, 6 нагноений послеоперационной раны, у одного пациента - нагноение послеоперационной раны и пневмония). У 8 пациентов TLR 2, 3, 4 не были обнаружены.

Всего было обследовано 25 пациентов после операции по поводу колоректального рака.

При положительной реакции - вероятность развития гнойно-воспалительных осложнений составляет 47%.

При отрицательной реакции - вероятность развития гнойно-воспалительных осложнений составляет 0%.

Способ осуществляют следующим образом.

Перитонеальный выпот собирают на 3-е - 5-е сутки послеоперационного периода, в зависимости от времени нахождения дренажа в брюшной полости, что в свою очередь зависит от его функциональной активности. К полученным 20-40 мл жидкости добавляется равное количество раствора Хенкса (глюкозо-солевой раствор для хранения и транспортировки клеток) и доставляется в лабораторию. В случае отсутствия выпота выполняется смыв с брюшины раствором Хенкса в количестве 40 мл.

Выпотные жидкости центрифугируют с образованием осадка, который в дальнейшем обрабатывают на цитоцентрифуге Cytospin 4 при среднем ускорении, 800 оборотах в минуту в течение 4-х минут. Для приготовления одного цито-препарата используют 200 мкл осадка, который вносится при помощи микропипетки Biohit до 1000 мкл в собранную пробирку Cytophanel (состоящей из цитоклипа, cytophanel, белого фильтра Cytospin и предметного стекла толщиной 1 мм со шлифованным полем для записи). Полученные цито-препараты высушивают и окрашивают по стандартной методике Романовского и гематоксилин-эозином.

Окрашенный препарат подвергают микроскопическому исследованию. Врач-цитолог оценивает цитологическую картину, клеточную концентрацию, после чего выбирается нужное количество осадка для образования одного мазка при помощи Cytospin 4. Цитологический препарат фиксируются в холодном ацетоне в течение 10 минут и обрабатывается раствором для ингибирования эндогенной пероксидазы в течение 5 минут. После промывки трис-буфере осуществляется инкубация первых антител к TLR2 (abeam, клон ab9100, разведение 1:200), TLR3 (abeam, клон abl3915, разведение 1:200), TLR4 (abeam, клон ab47093-100, разведение 1:200) в течение ночи в условиях холодильной камеры (+4-+8°С). Выявление реакции осуществляется при помощи системы визуализации EnVision в течение 30 минут, в качестве хромогена используется диаминобензидин. Окрашенный препарат оценивается врачом-цитологом. Оценивается мембранная и цитоплазматическая реакция.

Оценивают процент позитивных лейкоцитов, положительной считается реакция, если количество окрашенных лейкоцитов более 10%. В данном случае у пациента прогнозируют развитие воспалительных осложнений.

Сущность способа подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1. Больная А. 51 года, поступила с диагнозом: рак прямой кишки. В перитонеальной жидкости на 5-е сутки после операции определили положительную реакцию на TLR 4. На 8-е сутки послеоперационного периода у пациентки обнаружилось обширное нагноение послеоперационной раны.

Пример 2. Больная Э. 54 лет, поступила с диагнозом: рак прямой кишки. На 5-е сутки послеоперационного периода в выпоте из брюшной полости определили положительную реакцию на TLR 2 и TLR 4. В последующем у пациентки возникло обширное нагноение послеоперационной раны.

Пример 3. Больной Т. 64 лет, поступил с диагнозом: рак прямой кишки. На 3-е сутки после низкой передней резекции прямой кишки в выпоте из брюшной полости реакция на TLR 2, 3, 4 была отрицательная. На 5-е сутки дренаж из брюшной полости был удален и дальнейший послеоперационный период протекал без воспалительных осложнений.

Пример 4. Больная П. 65 лет, поступила с диагнозом: рак прямой кишки. На 3-е сутки после видеоассистированной передней резекции прямой кишки в выпоте из брюшной полости реакция на TLR 2, 3, 4 была отрицательная. В послеоперационном периоде воспалительных осложнений не было отмечено.

Предлагаемый способ позволяет прогнозировать развитие воспалительных осложнений в зоне оперативного вмешательства. Способ обладает простотой, доступностью, информативностью и надежностью.

Способ прогнозирования воспалительных осложнений после операции по поводу колоректального рака, отличающийся тем, что на 3-5-е сутки после операции проводят иммуноцитохимическое исследование с целью выявления TLR 2, TLR 4, TLR 3 на лейкоцитах в перитонеальном выпоте; при этом исследование выполняют иммуноцитохимическим методом с разведением антител к данным рецепторам 1/200 и инкубацией в течение 12 ч в холодильной камере при температуре 4 - 8°С и в случае выявления позитивной реакции на TLR 2, и/или TLR 3, и/или TLR 4 прогнозируют воспалительные осложнения в зоне оперативного вмешательства, а в случае негативной реакции - отсутствие данных осложнений.

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бруцелл в патматериале. Сущность изобретения включает способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью индикации бруцелл в патматериале, посредством изготовления формалинизированных эритроцитов, с последующей сенсибилизацией позитивной бруцеллезной сывороткой, при этом для изготовления эритроцитарного антительного диагностикума позитивную бруцеллезную сыворотку для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов разводят 1:50-1:100, инактивируют при 60°C в течение 30 минут, сенсибилизируют формалинизированные эритроциты, из расчета: осадок от 2 объемов 40%-ной взвеси эритроцитов барана, 1 объем 0,43-0,44% раствора свежеприготовленного амидола, 1,0-1,5 объем позитивной сыворотки, разведенной 1:50-1:100, и выдерживают в течение 28-32 минут при 55-56°C.

Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных // 2493569

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных, включающий определение наличия антител к антигенам семи серогрупп L.hebdomadis, L.pomona, L.tarassovi, L.grippotyphosa, L.canicola, L.sejroe и L.icterohaemorrhagiae в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в качестве антигена применяют смешанные в равных количествах антигенные белки из лептоспир трех серогрупп - L.tarassovi, L.grippotyphosa и L.hebdomadis.

Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных // 2493569

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка // 2493568

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли.

Способ прогнозирования развития необратимой дисфункции трансплантата у реципиентов сердца // 2493567

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и может быть использовано для прогнозирования развития необратимой дисфункции трансплантата у реципиентов после трансплантации сердца.

Наноантитело, специфически связывающее белок сеа, способ его использования для детекции этого белка // 2493166

Настоящее изобретение относится к области молекулярной иммунологии, биотехнологии и медицины. Предложено однодоменное антитело (наноантитело), специфически связывающее карциноэмбриональный антиген (СЕА) человека и охарактеризованное через полную аминокислотную последовательность.

Наноантитело, специфически связывающее белок muc1, способ детекции белка muc1 с помощью наноантител // 2493165

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и медицины. Предложено однодоменное антитело (наноантитело), специфически связывающее белок муцин 1 (MUC1) человека и охарактеризованное через полную аминокислотную последовательность.

Способ прогнозирования эффективности лечения диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 2 типа и дислипидемией // 2491925

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования эффективности лечения диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 2 типа и дислипидемией.

Диагностикум для определения донор-специфических антител к главному комплексу гистосовместимости и способ его получения // 2491552

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, трансплантологии и хирургии, и может быть использовано для проведения мониторинга донор-специфических антител к системе HLA после аллотрансплантации органа в течение пяти лет и более.

Способ видовой идентификации микобактерий туберкулеза у лиц, инфицированных микобактериями туберкулеза // 2491551

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике туберкулеза, и может быть использовано для определения видовой идентификации микобактерий у лиц, инфицированных микобактериями туберкулеза.

Способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость клеточных мембран по натрию // 2494403

Настоящее изобретение относится к области медицины и фармации, а именно к биохимии клеточных мембран человека, и описывает способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость мембран эритроцитов по натрию с использованием определения скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита, при котором измеряют скорость обмена внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации, причем исследуемое вещество вносят в среду 1-часовой инкубации, содержащую в мМ: 150 - NaCl; 10 - глюкозы; 10 - Hepes-Tris; 0,1 - уабаина, и по изменению величины скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита судят о влиянии вещества на проницаемость клеточной мембраны по натрию. Изобретение обеспечивает оптимизацию подбора лекарственной терапии. 6 ил., 1 табл., 1 пр.

Способ динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени // 2494404

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени. Сущность способа состоит в том, что проводят одновременное определение в периферической крови пациента процентного содержания циркулирующих стволовых гемопоэтических клеток CD34+ (СГК) и объемного содержания лимфоцитов (Лф, млн/мл), находят их индивидуальное отношение R по формуле R=ЛФ/СГК и строят кривую степенной зависимости R (ось ординат) от СГК (ось абсцисс), используя ее затем в качестве калибровочной кривой в системе двойных логарифмических координат, а для оценки состояния реципиента в текущий момент в его периферической крови определяют ЛФ и СГК, находят их отношение Rp, положение его в калибровочной системе координат. При расположении Rp на или над калибровочной кривой текущее состояние реципиента оценивают как благоприятное, ниже кривой - неблагоприятное. Использование заявленного способа позволяет повысить точность оценки состояния реципиента в посттрансплантационном периоде. 4 табл., 4 ил., 1 пр.

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе а(н3n2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности // 2495429

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании развития внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности. Сущность способа: во втором триместре гестации при гриппе A(H3N2) у женщин с угрозой невынашивания беременности определяют уровень антител в парных сыворотках крови, используя в качестве показателя уровень антител в первой сыворотке (А); определяют количество баллов, отражающих степень выраженности гиперемии слизистой задней стенки глотки (В); определяют количество баллов, отражающих степень выраженности отека слизистой задней стенки глотки (С); определяют степень выраженности симптомов угрозы невынашивания при температуре более 37,8° в баллах (Д). Затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции: D=-0,080×А-1,767×В-1,487×С-1,068×Д. При D больше -10,10 прогнозируют отсутствие внутриутробного инфицирования плода, а при D меньше -10,10 прогнозируют внутриутробное инфицирование плода. Использование способа обеспечивает возможность прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности с вероятноситью 82,2%. 2 пр.

Способ оценки эффективности терапии хронического миелолейкоза // 2495430

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки эффективности лечения ингибитором тирозинкиназ первого поколения иматинибом мезилатом (гливеком) хронического миелолейкоза. Проводится определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с детекцией тандемной масс-спектрометрией концентрации гливека в сыворотке крови больных хроническим миелолейкозом, получающих лечение ингибитором тирозинкиназ первого поколения - гливеком. При выявлении низкой концентрации гливека - 998,15±115,7 нг/мл прогнозируют неэффективность терапии хронического миелолейкоза с недостижением полного цитогенетического ответа; при выявлении высокой концентрации гливека - 1475,15±95,5 нг/мл прогнозируют эффективность терапии хронического миелолейкоза с достижением полного цитогенетического ответа. Способ позволяет повысить точность оценки эффективности терапии. 4 пр., 1 табл., 2 ил.

Способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений // 2495431

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования развития репродуктивных нарушений. Сущность способа состоит в том, что у мужчин исследуют эякулят, а у женщин - цервикальное отделяемое на десятый день менструального цикла, в качестве параметров определяют уровни интерлейкина 1 бета и интерферона гамма одновременно. При содержании интерлейкина 1 бета больше 38,8±3,8 пг/мл и одновременном содержании интерферона гамма больше 8,1±0,5 пг/мл прогнозируют формирование репродуктивных нарушений. Использование заявленного способа позволяет заблаговременно выявить развивающуюся инфертильность и осуществлять скрининговые обследования. 2 табл., 5 пр.

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека // 2495432

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения. Сущность способа в том, что в лунках микропанели сорбируют тромбин, как активатор компонента С4, затем вносят пробу, содержащую компонент С4 комплемента человека с неизвестной активностью, проводят инкубацию в присутствии ЭДТА, а затем вносят конъюгат фермента с антителами против компонента С4 человека и субстрат этого фермента, расчет активности компонента С4 проводят по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор для определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека содержит плоскодонную микропанель с сорбированным тромбином, конъюгат фермента с антителами к компоненту С4 комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови с известной активностью С4 в качестве стандарта. Группа изобретений позволяет определять функциональную активность компонента С4 системы комплемента человека и обладает хорошей воспроизводимостью результатов и отсутствием необходимости активации всей системы комплемента. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.

Набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости // 2495433

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости методом двухстадийного иммуноферментного анализа в сыворотке крови человека in vitro. Набор включает 96-луночный разборный стрипованный планшет с нанесенными на его поверхность последовательно всеми конъюгатами из ряда: β-эндорфин, серотонин, дофамин, гистамин, орфанин и ангиотензин; а также емкости, содержащие положительные и отрицательные контрольные образцы, антивидовые антитела против иммуноглобулинов человека, меченные пероксидазой из корня хрена, фосфатно-солевой буферный раствор, содержащий твин-20, субстратный буферный раствор, раствор субстрата тетраметилбензидина и стоп-реагент. Изобретение обеспечивает повышение точности определения заболеваний зависимости, в том числе алкоголизма, наркомании, токсикомании, пищевой зависимости и гэмблинга (игромания), за счет использования набора из шести маркеров. 3 табл., 9 пр.

Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови // 2495434

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови. Набор включает подложку, которая представляет собой пластину в виде гребня, на поверхности каждого зубца которого дискретно нанесены антигены возбудителей вирусных инфекций и положительный контроль в виде иммуноглобулинов человека, в качестве отрицательного контроля один из сегментов зубца подложки оставлен свободным от специфических белков для оценки фоновых явлений, причем подложка дополнительно блокирована неспецифическими природными или синтетическими полимерами. В состав набора также входит емкость для проведения анализа, выполненная в виде многоячеистой аналитической ванны с возможностью введения каждого зубца подложки в отдельную ячейку ванны, растворы для отмывок, разведения образца и конъюгата, конъюгат и систему проявления. Изобретение обеспечивает усовершенствованную тест-систему для диагностики инфекционных заболеваний, в том числе для оценки у детей гуморального иммунитета к вакциноуправляемым вирусным инфекциям: кори, краснухе, эпидемическому паротиту и полиомиелиту. 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 2 пр.

Способ определения атерогенности крови человека // 2497116

Настоящее изобретение относится к клинической биохимии и описывает способ определения модифицированных липопротеинов низкой плотности (мЛПНП) в сыворотке (плазме) крови человека путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, где обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 10% раствором ПВП-35000±5000 в 0,01 М Трис-HCl-буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, при объемном соотношении сыворотка(плазма) : ПВП от (1:2) до (1:10), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при величине разности более 15 Е констатируют повышенный уровень атерогенных мЛПНП в крови и наличие атеросклеротического процесса у обследуемого человека. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения мЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризацию населения. 5 пр., 5 табл.

Способ прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов после холецистэктомии // 2497122

Изобретение относится к области медицины, в частности гастроэнтерологии, а именно к способу прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов, перенесших холецистэктомию. Сущность способа состоит в том, что у пациентов, перенесших холецистэктомию, в сыворотке крови определяют уровень антител к миелопероксидазе. При уровне антител к миелопероксидазе свыше 200,0 Ед/мл прогноз развития избыточного бактериального роста в кишечнике считают положительным. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и чувствительность прогнозирования развития бактериального роста в кишечнике у пациента, перенесшего холецистэктомию. 1 табл., 3 пр.