Способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость клеточных мембран по натрию

Авторы патента:

Ослопов Владимир Николаевич (RU)

Орлова Ольга Валериановна (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

Владельцы патента RU 2494403:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (RU)
Ослопов Владимир Николаевич (RU)
Орлова Ольга Валериановна (RU)

Настоящее изобретение относится к области медицины и фармации, а именно к биохимии клеточных мембран человека, и описывает способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость мембран эритроцитов по натрию с использованием определения скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в мембране эритроцита, при котором измеряют скорость обмена внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации, причем исследуемое вещество вносят в среду 1-часовой инкубации, содержащую в мМ: 150 - NaCl; 10 - глюкозы; 10 - Hepes-Tris; 0,1 - уабаина, и по изменению величины скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в мембране эритроцита судят о влиянии вещества на проницаемость клеточной мембраны по натрию. Изобретение обеспечивает оптимизацию подбора лекарственной терапии. 6 ил., 1 табл., 1 пр.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины и фармации, а именно к биохимии клеточных мембран человека, и может быть использовано при изучении биофармацевтической доступности лекарственных средств путем определения влияния лекарственных препаратов на проницаемость клеточных мембран, что будет способствовать оптимизации подбора лекарственной терапии.

При изучении эффективности лекарственных средств местного действия необходимо проводить экспериментальные исследования по фармацевтической доступности лекарственных веществ. Для этого биофармацевтические исследования проводятся на моделях мембран: как на искусственных, так и на биологических. Известно, что в качестве искусственных мембран используются тефлоновые мембраны, мембраны из силиконов, полиуретана, 2-полигидроксиэтиленметакрилата, которые рекомендуют пропитывать липофильной фазой (н-додеканолом или изопропилмиристатом). Наиболее распространено использование мембран из производных целлюлозы, в частности из ацетата целлюлозы и целофана. Однако результаты, полученные с использованием всех искусственных мембран, по ряду причин дают весьма относительное представление о проникновении лекарственных веществ из лекарственных форм через кожу. В биофармацевтических исследованиях для приближения экспериментальных моделей к условиям in vivo широко используются в качестве диализных мембран биологические объекты: обезволошенная кожа мыши, тонкие лоскуты кожи человека, взятой в процессе хирургического вмешательства, кожа человека после пластической операции, кожа трупа человека, сброшенная кожа змеи, подскорлуповая оболочка куриного яйца. Однако при исследовании биологических объектов не выдерживается температурный режим. Резюмируя, можно заключить, что стандартные модели для оценки фармацевтической доступности лекарственной формы местного действия отсутствуют, и остается актуальной задача унификации биофармацевтических методов исследования.

В настоящее время для изучения проницаемости биомембран стали использоваться мембраны клеток крови. В качестве естественной модели для исследования общих характеристик, в том числе проницаемости всех биологических мембран, наиболее удобна мембрана эритроцита (МЭ), так как, с одной стороны, эритроцит - это безъядерная клетка, это, фактически, идеальная изолированная («чистая») мембрана, а с другой, - была доказана корреляция между изменениями свойств МЭ и мембран других клеток.

Существует два пути транспорта веществ через мембраны клеток (в том числе через мембрану эритроцита): активный и пассивный транспорт. Пассивный транспорт подразделяется на движение ионов по градиенту концентрации и посредством облегченной диффузии, когда для транспортировки ионов используются специфические белки-переносчики клеточной мембраны. Na⁺-Li⁺-противотранспорт (Na⁺-Li⁺-ПТ) является примером облегченной диффузии ионов. Na⁺-Li⁺-ПТ является лабораторным аналогом Na⁺-Na⁺-обмена и, хотя физиологическое и биофизическое значение Na⁺-Li⁺-ПТ остается неясным, тем не менее определение скорости Na⁺-Li⁺-ПТ является широко используемой методикой для оценки функционального состояния мембран клеток в целом.

Известен способ диагностики мембранной патологии определением скорости Na⁺-Li⁺-ПТ в МЭ, основанный на регистрации скорости выхода Li⁺ с внутренней поверхности мембраны во внешнюю среду после предварительной инкубации эритроцитов в среде, содержащей LiCl. Увеличение скорости Na⁺-Li⁺-ПТ показано при гипертонической болезни [см., Ослопов В.Н., Смирнов Ю.В., Хасанов З.Ш. и др. // Казмеджурнал., 1990, №5, с.329-331].

Однако исследования скорости Na⁺-Li⁺-ПТ не позволяют определять влияние лекарственных препаратов и веществ на проницаемость клеточных мембран по Na⁺.

Известен способ диагностики патологии клеточных мембран, которая характеризуется их повышенной проницаемостью для ионов H⁺ и снижением параметра X. Венозная кровь центрифугируется, полученные эритроциты отмываются физраствором, pH доводится до 6,8-6,9 при контроле на pH-метре, далее проводится регистрация трансляционной подвижности ионов Н⁺ посредством ЯМР [см., заявка на изобретение РФ №94015013 на «Способ диагностики патологии клеточных мембран методом ЯМР спектроскопии ионов H+», опубл. 10.09.1996 г.].

Однако это способ диагностики патологии клеточных мембран, и он не предусматривает изучения влияния лекарственных веществ на проницаемость клеточных мембран по Na⁺.

Известен способ диагностики синдрома эндогенной интоксикации, включающий оценку проницаемости мембран эритроцитов, в котором определяют эритроциты, имеющие мембрану, блокированную иммунными комплексами, для чего оценивают проницаемость мембран эритроцитов в присутствии водного раствора NaCl в разведениях, из пробирки с наименьшим количеством негемолизированных эритроцитов отбирают жидкость для определения количества эритроцитов в камере Горяева, количество эритроцитов, превышающее 1,0 с соответствующей им концентрацией NaCl, принимают за контроль у данного больного, в контрольном разведении NaCl исследуют гемолиз в концентрации эритроцитов, в 10 раз превышающей стандартный уровень концентрации, производят повторное исследование в камере Горяева, определяют количество негемолизированных эритроцитов и при их количестве, более чем в 10 раз превышающем контрольное, диагностируют синдром эндогенной интоксикации [см., патент РФ №2234095, опубл. 10.08.2004].

Однако способ диагностики синдрома эндогенной интоксикации не позволяет определить влияние вещества на проницаемость клеточных мембран по Na⁺.

Известен способ определения чувствительности мембран эритроцитов к воздействию тяжелых металлов, который включает биофизическое исследование крови, взятой из пальца обработкой на предметном стекле, вычисляют количество дискоцитов и коэффициент чувствительности мембран эритроцитов по формуле [см., патент РФ №2332668, опубл. 10.05.2011].

Однако при этом не изучается проницаемость по Na⁺, а используется определение количества деформированных клеток и их морфологии. Наш метод предусматривает изучение изменения транспорта ионов через клеточную мембрану.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению является способ определения скорости Na⁺-Li⁺-ПТ в мембране эритроцита [см. Canessa M., Adragna N., Solomon H. et al. // New Engl. G. Med. 1980, v.302, p.772-776], в котором измеряется обмен внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий и магний из среды инкубации.

Однако способ определения скорости Na⁺-Li⁺-ПТ в мембране эритроцита не позволяет изучать биодоступность лекарственных веществ в более высоких концентрациях.

Целью предлагаемого изобретения является возможность определения влияния лекарственных препаратов и веществ на проницаемость клеточных мембран по Na⁺.

Поставленная цель достигается способом оценки влияния лекарственных веществ на проницаемости мембран эритроцитов по Na⁺ с использованием метода M. Canessa et al., при котором измеряют скорость обмена внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации, а биологическую доступность лекарственного вещества определяют путем 1-часовой инкубации лекарственного вещества при его внесении в среду, содержащую (в мМ): 150 - NaCl; 10 - глюкозы; 10 - Hepes-Tris; 0,1 - уабаина, и по изменению величин скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в мембране эритроцита от 0,001 до 0,025 µМ судят об индивидуальной терапевтической дозе исследуемого лекарственного вещества.

Более высокие концентрации лекарственных веществ порядка 1,0 µМ и более вызывают гемолиз. Гемолиз свидетельствует о том, что концентрации веществ выходят из области физиологических параметров (в случае вещества C₁₆ гемолиз наступает при концентрации даже 0,025 µМ).

Оценка влияния лекарственных веществ на проницаемость клеточных мембран по натрию проводится по следующей методике:

Кровь в количестве 3 мл забирают из вены самотеком в пластиковые пробирки, смоченные гепарином (20 ЕД на 1 мл крови), содержимое перемешивают и пробирки помещают в контейнер с тающим льдом.

Исследование состоит из следующих этапов:

Отделение эритроцитов проводят путем их осаждения на рефрижераторной центрифуге с вертикальным ротором (при 3000 g) при 0-2°C в течение 5 минут. Плазму и лейкоциты удаляют путем отсасывания.

Промывание эритроцитов проводят дважды трехкратным объемом холодной (температура тающего льда) среды А, при тех же условиях осаждения.

Прединкубацию - нагрузку эритроцитов литием - осуществляют в среде Г, содержащей изоосмотическую концентрацию LiCl, где при блокированной уабаином Na⁺-K⁺-АТФазе натрий в эритроцитах замещался на литий.

Прединкубация продолжалась 3 часа при 37°C с периодическим автоматическим встряхиванием (шейкированием) - каждые 15 минут по 15 секунд.

Промывание эритроцитов для удаления наружного лития производят четырехкратным объемом среды А при 0-2°C 4 раза.

Инкубацию (ключевую часть исследования) проводят путем переноса упакованных эритроцитов (по 0,1 мл) в 1 мл среды В (среда с Na) и в 1 мл среды Б (среда с Mg). Инкубация продолжается 60 минут при 37°C с периодическим шейкированием.

Содержание Li⁺ в конечном супернатанте в натриевой и магниевой средах регистрируют методом атомной абсорбционной спектрофотометрии в эмиссионном режиме. Спектрофотометрию осуществляют на атомном абсорбционном спектрофотометре СА-455 (ПО «КОМЗ», г.Казань) в лаборатории спектроскопии кафедры медицинской и биологической физики Казанского государственного медицинского университета. Программа измерения концентрации лития в исследуемом растворе в эмиссионном режиме состояла в сравнении интенсивности светового потока эталонного раствора известной концентрации с интенсивностью светового потока исследуемого раствора.

Конечный результат - максимальная скорость Na⁺-Li⁺-ПТ в мембране эритроцита в микромолях Li на литр клеток в час (в дальнейшем для краткости обозначается как «мкМ Li») определялась как разность между концентрациями лития в среде, богатой натрием (А Na⁺), и в среде, свободной от натрия, - в магниевой среде (A Mg²⁺) через 60 минут инкубации по формуле: скорость Na⁺-Li⁺-ПТ=(A Na⁺ - A Mg²⁺)×K, где K (коэффициент) = 33.

Сущность заключается в том, что, используя методику M. Canessa определения скорости Na⁺-Li⁺-ПТ в мембране эритроцита, при внесении в среду В при 1 часовой инкубации, мы, определяя изменения скорости Na⁺-Li⁺-ПТ, судим о том, что исследуемое вещество изменяет (или не изменяет) проницаемость клеточной мембраны по Na⁺.

Мы проводили пилотные исследования по изучению изменения величины скорости Na⁺-Li⁺-ПТ путем внесения исследуемого вещества изолированно в каждую из 3-х сред инкубации (в средах Б, В, Г). Нами было обнаружено, что скорость Na⁺-Li⁺-ПТ изменяется при внесении исследуемого вещества только в среду В (среду, содержащую Na⁺).

Выявлено, что при внесении в среду В различных концентраций исследуемых веществ происходит увеличение проницаемости по Na⁺ на малых дозах (концентрациях) исследуемых веществ - для диметилсульфоксида (в %) - 0,01% и для синтезированных веществ C₁₀, C¹², C₁₃, C₁₄, С₁₆, С₁₈ [см. пат. РФ 2423372, опубл. 10.07.2011] (в µM) - 0,01 µM и 0,05 µM, что оценивается по достоверному увеличению скорости Na⁺-Li⁺-ПТ.

Таким образом, по скорости Na⁺-Li⁺-ПТ (при добавлении испытуемого вещества в среду В в период 1 часовой инкубации) можно судить о возможности использования определенных концентраций исследуемых веществ в отношении их влияния на проницаемость клеточной мембраны по натрию.

Приводим примеры исследования различных веществ по их влиянию на проницаемость клеточной мембраны по натрию с помощью определения скорости Na⁺-Li⁺-ПТ в МЭ.

Фиг №1. «Исследование влияния диметилсульфокида на величину скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в МЭ (in vitro) при внесении в среду В».

Результаты исследования влияния «Диметилсульфоксида» приведены на фиг.1.

Как следует из представленных данных (фиг.1), при инкубации эритроцитов в среде В (среда с NaCl) при 1 часовой инкубации препарат «Диметилсульфоксид» повлиял на скорость Na⁺-Li⁺-ПТ в мембране эритроцита на проницаемость по Na⁺ в концентрации 0,01% (увеличил проницаемость по Na⁺).

Вещества С₁₀, С₁₂, С₁₄, C₁₆, C₁₈ - это поверхностно-активные вещества с высоким катионным зарядом на атоме фосфора, обладающие противомикробной, фунгицидной активностью. Результаты исследования представлены на фиг.2-6. «Исследование влияния C₁₀, C₁₂, C₁₄, C₁₆, C₁₈ на величину скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в МЭ (in vitro) при внесении в среду В».

При этом различные концентрации исследуемых веществ C₁₀, C₁₂, C₁₄, C₁₆, C₁₈ вносились в среду В, содержащую NaCl (1 часовая инкубация).

Данные опытов сведены в таблицу №1.

Таблица 1
Влияние фармакологически активных веществ C₁₀, C₁₂, C₁₄, C₁₆, C₁₈ на скорость Na⁺-Li⁺-ПТ в МЭ (в исследованиях in vitro)
(скорость Na⁺-Li⁺-ПТ в мкМ Li/л кл./ч, M±m)
Вещество	Исходное значение скорости Na⁺-Li⁺-ПТ	Концентрация веществ C₁₀-C₁₈ в µM
0,001	0,005	0,010	0,025	0,05	1,0
C₁₀	337±5	403±13*	370±4*	322±7	362±5	376±1	гемолиз
C₁₂	337±5	398±15*	350±24*	303±12	322±15	323±15	гемолиз
C₁₄	337±5	430±27*	381±5*	359±7	355±8	343±7	гемолиз
C₁₆	337±5	443±39*	441±42*	369±20	гемолиз	гемолиз	гемолиз
C₁₈	337±5	416±10*	368±4*	327±5	365±14	381±6	гемолиз
* достоверные различия с исходным значением скорости Na⁺-Li⁺-ПТ (p<0,05)

Из таблицы 1 видно, что для веществ C₁₀, C₁₂, C₁₄ и C₁₈ гемолиз наступает при концентрации 1,0 µM, а у вещества C₁₆ гемолиз наблюдается при меньшей концентрации порядка 0,025 µM.

Увеличение скорости Na⁺-Li⁺-ПТ в мембране эритроцита происходит под влиянием минимальной концентрации вещества. Под влиянием других концентраций скорость Na⁺-Li⁺-ПТ не изменяется. Таким образом, увеличение проницаемости клеточных мембран по Na⁺ происходит под влиянием минимальной концентрации вещества, дальнейшее увеличение концентрации не влияет на скорость Na⁺-Li⁺-ПТ.

Способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость мембран эритроцитов по натрию с использованием определения скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в мембране эритроцита, при котором измеряют скорость обмена внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации, отличающийся тем, что исследуемое вещество вносят в среду 1-часовой инкубации, содержащую в мМ: 150 - NaCl; 10 - глюкозы; 10 - Hepes-Tris; 0,1 - уабаина, и по изменению величины скорости Na⁺-Li⁺-противотранспорта в мембране эритроцита судят о влиянии вещества на проницаемость клеточной мембраны по натрию.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, патологической анатомии, и может быть использовано для прогнозирования воспалительных осложнений после операций по поводу колоректального рака.

Способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) с целью индикации бруцелл в патматериале // 2493871

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бруцелл в патматериале. Сущность изобретения включает способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью индикации бруцелл в патматериале, посредством изготовления формалинизированных эритроцитов, с последующей сенсибилизацией позитивной бруцеллезной сывороткой, при этом для изготовления эритроцитарного антительного диагностикума позитивную бруцеллезную сыворотку для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов разводят 1:50-1:100, инактивируют при 60°C в течение 30 минут, сенсибилизируют формалинизированные эритроциты, из расчета: осадок от 2 объемов 40%-ной взвеси эритроцитов барана, 1 объем 0,43-0,44% раствора свежеприготовленного амидола, 1,0-1,5 объем позитивной сыворотки, разведенной 1:50-1:100, и выдерживают в течение 28-32 минут при 55-56°C.

Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных // 2493569

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных, включающий определение наличия антител к антигенам семи серогрупп L.hebdomadis, L.pomona, L.tarassovi, L.grippotyphosa, L.canicola, L.sejroe и L.icterohaemorrhagiae в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в качестве антигена применяют смешанные в равных количествах антигенные белки из лептоспир трех серогрупп - L.tarassovi, L.grippotyphosa и L.hebdomadis.

Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных // 2493569

Способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка // 2493568

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования гематогенного метастазирования при диффузном типе рака желудка путем иммуногистохимического исследования препаратов первичной опухоли.

Способ прогнозирования развития необратимой дисфункции трансплантата у реципиентов сердца // 2493567

Изобретение относится к медицине, а именно к трансплантологии и может быть использовано для прогнозирования развития необратимой дисфункции трансплантата у реципиентов после трансплантации сердца.

Наноантитело, специфически связывающее белок сеа, способ его использования для детекции этого белка // 2493166

Настоящее изобретение относится к области молекулярной иммунологии, биотехнологии и медицины. Предложено однодоменное антитело (наноантитело), специфически связывающее карциноэмбриональный антиген (СЕА) человека и охарактеризованное через полную аминокислотную последовательность.

Наноантитело, специфически связывающее белок muc1, способ детекции белка muc1 с помощью наноантител // 2493165

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и медицины. Предложено однодоменное антитело (наноантитело), специфически связывающее белок муцин 1 (MUC1) человека и охарактеризованное через полную аминокислотную последовательность.

Способ прогнозирования эффективности лечения диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 2 типа и дислипидемией // 2491925

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии, и касается прогнозирования эффективности лечения диабетической полинейропатии у больных сахарным диабетом 2 типа и дислипидемией.

Диагностикум для определения донор-специфических антител к главному комплексу гистосовместимости и способ его получения // 2491552

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, трансплантологии и хирургии, и может быть использовано для проведения мониторинга донор-специфических антител к системе HLA после аллотрансплантации органа в течение пяти лет и более.

Способ динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени // 2494404

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени. Сущность способа состоит в том, что проводят одновременное определение в периферической крови пациента процентного содержания циркулирующих стволовых гемопоэтических клеток CD34+ (СГК) и объемного содержания лимфоцитов (Лф, млн/мл), находят их индивидуальное отношение R по формуле R=ЛФ/СГК и строят кривую степенной зависимости R (ось ординат) от СГК (ось абсцисс), используя ее затем в качестве калибровочной кривой в системе двойных логарифмических координат, а для оценки состояния реципиента в текущий момент в его периферической крови определяют ЛФ и СГК, находят их отношение Rp, положение его в калибровочной системе координат. При расположении Rp на или над калибровочной кривой текущее состояние реципиента оценивают как благоприятное, ниже кривой - неблагоприятное. Использование заявленного способа позволяет повысить точность оценки состояния реципиента в посттрансплантационном периоде. 4 табл., 4 ил., 1 пр.

Способ прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе а(н3n2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности // 2495429

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании развития внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности. Сущность способа: во втором триместре гестации при гриппе A(H3N2) у женщин с угрозой невынашивания беременности определяют уровень антител в парных сыворотках крови, используя в качестве показателя уровень антител в первой сыворотке (А); определяют количество баллов, отражающих степень выраженности гиперемии слизистой задней стенки глотки (В); определяют количество баллов, отражающих степень выраженности отека слизистой задней стенки глотки (С); определяют степень выраженности симптомов угрозы невынашивания при температуре более 37,8° в баллах (Д). Затем с помощью дискриминантного уравнения рассчитывают величину дискриминантной функции: D=-0,080×А-1,767×В-1,487×С-1,068×Д. При D больше -10,10 прогнозируют отсутствие внутриутробного инфицирования плода, а при D меньше -10,10 прогнозируют внутриутробное инфицирование плода. Использование способа обеспечивает возможность прогнозирования внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности с вероятноситью 82,2%. 2 пр.

Способ оценки эффективности терапии хронического миелолейкоза // 2495430

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки эффективности лечения ингибитором тирозинкиназ первого поколения иматинибом мезилатом (гливеком) хронического миелолейкоза. Проводится определение методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с детекцией тандемной масс-спектрометрией концентрации гливека в сыворотке крови больных хроническим миелолейкозом, получающих лечение ингибитором тирозинкиназ первого поколения - гливеком. При выявлении низкой концентрации гливека - 998,15±115,7 нг/мл прогнозируют неэффективность терапии хронического миелолейкоза с недостижением полного цитогенетического ответа; при выявлении высокой концентрации гливека - 1475,15±95,5 нг/мл прогнозируют эффективность терапии хронического миелолейкоза с достижением полного цитогенетического ответа. Способ позволяет повысить точность оценки эффективности терапии. 4 пр., 1 табл., 2 ил.

Способ прогнозирования развития репродуктивных нарушений // 2495431

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования развития репродуктивных нарушений. Сущность способа состоит в том, что у мужчин исследуют эякулят, а у женщин - цервикальное отделяемое на десятый день менструального цикла, в качестве параметров определяют уровни интерлейкина 1 бета и интерферона гамма одновременно. При содержании интерлейкина 1 бета больше 38,8±3,8 пг/мл и одновременном содержании интерферона гамма больше 8,1±0,5 пг/мл прогнозируют формирование репродуктивных нарушений. Использование заявленного способа позволяет заблаговременно выявить развивающуюся инфертильность и осуществлять скрининговые обследования. 2 табл., 5 пр.

Способ и набор для иммуноферментного определения функциональной активности компонента с4 комплемента человека // 2495432

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения. Сущность способа в том, что в лунках микропанели сорбируют тромбин, как активатор компонента С4, затем вносят пробу, содержащую компонент С4 комплемента человека с неизвестной активностью, проводят инкубацию в присутствии ЭДТА, а затем вносят конъюгат фермента с антителами против компонента С4 человека и субстрат этого фермента, расчет активности компонента С4 проводят по количеству образовавшегося продукта ферментативной реакции. Набор для определения функциональной активности компонента С4 комплемента человека содержит плоскодонную микропанель с сорбированным тромбином, конъюгат фермента с антителами к компоненту С4 комплемента человека, субстратный буфер и донорскую сыворотку крови с известной активностью С4 в качестве стандарта. Группа изобретений позволяет определять функциональную активность компонента С4 системы комплемента человека и обладает хорошей воспроизводимостью результатов и отсутствием необходимости активации всей системы комплемента. 2 н.п. ф-лы, 1 ил.

Набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости // 2495433

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости методом двухстадийного иммуноферментного анализа в сыворотке крови человека in vitro. Набор включает 96-луночный разборный стрипованный планшет с нанесенными на его поверхность последовательно всеми конъюгатами из ряда: β-эндорфин, серотонин, дофамин, гистамин, орфанин и ангиотензин; а также емкости, содержащие положительные и отрицательные контрольные образцы, антивидовые антитела против иммуноглобулинов человека, меченные пероксидазой из корня хрена, фосфатно-солевой буферный раствор, содержащий твин-20, субстратный буферный раствор, раствор субстрата тетраметилбензидина и стоп-реагент. Изобретение обеспечивает повышение точности определения заболеваний зависимости, в том числе алкоголизма, наркомании, токсикомании, пищевой зависимости и гэмблинга (игромания), за счет использования набора из шести маркеров. 3 табл., 9 пр.

Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови // 2495434

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови. Набор включает подложку, которая представляет собой пластину в виде гребня, на поверхности каждого зубца которого дискретно нанесены антигены возбудителей вирусных инфекций и положительный контроль в виде иммуноглобулинов человека, в качестве отрицательного контроля один из сегментов зубца подложки оставлен свободным от специфических белков для оценки фоновых явлений, причем подложка дополнительно блокирована неспецифическими природными или синтетическими полимерами. В состав набора также входит емкость для проведения анализа, выполненная в виде многоячеистой аналитической ванны с возможностью введения каждого зубца подложки в отдельную ячейку ванны, растворы для отмывок, разведения образца и конъюгата, конъюгат и систему проявления. Изобретение обеспечивает усовершенствованную тест-систему для диагностики инфекционных заболеваний, в том числе для оценки у детей гуморального иммунитета к вакциноуправляемым вирусным инфекциям: кори, краснухе, эпидемическому паротиту и полиомиелиту. 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 2 пр.

Способ определения атерогенности крови человека // 2497116

Настоящее изобретение относится к клинической биохимии и описывает способ определения модифицированных липопротеинов низкой плотности (мЛПНП) в сыворотке (плазме) крови человека путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, где обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 10% раствором ПВП-35000±5000 в 0,01 М Трис-HCl-буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, при объемном соотношении сыворотка(плазма) : ПВП от (1:2) до (1:10), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при величине разности более 15 Е констатируют повышенный уровень атерогенных мЛПНП в крови и наличие атеросклеротического процесса у обследуемого человека. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения мЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризацию населения. 5 пр., 5 табл.

Способ прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов после холецистэктомии // 2497122

Изобретение относится к области медицины, в частности гастроэнтерологии, а именно к способу прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов, перенесших холецистэктомию. Сущность способа состоит в том, что у пациентов, перенесших холецистэктомию, в сыворотке крови определяют уровень антител к миелопероксидазе. При уровне антител к миелопероксидазе свыше 200,0 Ед/мл прогноз развития избыточного бактериального роста в кишечнике считают положительным. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и чувствительность прогнозирования развития бактериального роста в кишечнике у пациента, перенесшего холецистэктомию. 1 табл., 3 пр.

Способ определения хлорамфеникола с помощью пьезокварцевого иммуносенсора // 2497123

Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и описывает способ высокочувствительного определения хлорамфеникола с помощью пьезокварцевого иммуносенсора, основанный на регистрации изменения частоты колебания сенсора в связи с изменением массы покрытия, включающий регенерацию рецепторного покрытия для проведения последующих определений, обеспечивая многократное использование сенсора, где на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора наносят рецепторное покрытие на основе хлорамфеникол-белкового конъюгата (соевый трипсиновый ингибитор), к пробе добавляют фиксированное количество антител к хлорамфениколу и выдерживают в течение 5-10 мин при 20°С до образования иммунокомплекса, вводят в проточно-инжекторную ячейку и регистрируют изменение частоты колебания сенсора при взаимодействии хлорамфеникол-белкового конъюгата с несвязавшимися антителами к хлорамфениколу, аналитический отклик сенсора обратно пропорционален концентрации хлорамфеникола в анализируемом растворе, концентрацию определяют по градуировочному графику, регенерацию рецепторного покрытия осуществляют пропусканием 0,04 mM раствора тиоционата калия над поверхностью электрода сенсора. Способ позволяет проводить определение содержания хлорамфеникола в пищевой продукции в диапазоне концентраций 0,5-100,0 нг/мл. 9 пр., 1 табл.