Лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина

Авторы патента:

 


Владельцы патента RU 2494744:

Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов" (ФГУП "ГосНИИгенетика") (RU)

Предложено лечебное средство с повышенной противоопухолевой активностью на основе акадезина, включающее дополнительно к акадезину нестероидный противовоспалительный препарат: ибупрофен, или индометацин, или аспирин. Показано синергетическое противоопухолевое действие заявленного средства на модели В-клеточного лейкоза. 3 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности онкологии и гематологии, а именно к лечебному средству для лечения В-клеточного лейкоза на основе 5-аминоимидазол-4-карбоксамид-1-рибофуранозида (АИКАР, акадезина) в комбинации с одним из нестероидных противовоспалительных препаратов (НСПВП).

Среди распространенных видов злокачественных опухолей - гемобластозы (опухоли кроветворной системы), в частности малигнизация В-лимфоцитов (В-клеточный лейкоз). В настоящее время практически единственным средством сохранения жизни и поддержания ее относительно высокого качества у больных В-клеточным лейкозом служит базисная полихимиотерапия (антрациклиновые антибиотики, алкилирующие агенты, антимитотические препараты и др.). При рецидивах заболевания используют препараты нового поколения - ингибиторы протеинкиназ дасатиниб и понатиниб. Указанные режимы лечения проводятся как многомесячные и многолетние курсы и, следовательно, дорогостоящи [Тrаре АР, Gonzalez-Angulo AM. Breast cancer and metastasis: on the way toward individualized therapy. Cancer Genomics Proteomics. 2012 9(5):297-310; Rodrigues G, Sanatani M. Age and comorbidity considerations related to radiotherapy and chemotherapy administration. Semin Radiat Oncol. 2012, 22(4):277-283)].

Особенность опухолевых клеток - приобретение устойчивости к практически любым препаратам. Это обусловлено нарушением механизмов гибели в опухолевых клетках и выживанию вариантов с нефункционирующими сигнальными путями программированной гибели (апоптоза). Эта важнейшая трудность противоопухолевой терапии делает необходимым поиск веществ, способных вызывать неапоптотические виды гибели опухолевых клеток. К таким веществам относят акадезин [Van Den Neste Е, Van den Berghe G, Bontemps F. AICA-riboside (acadesine), an activator of AMP-activated protein kinase with potential for application in hematologic malignancies. Expert Opin. Investig. Drugs. 2010, 19(4):571-578; Drew BG, Kingwell BA. Acadesine, an adenosine-regulating agent with the potential for widespread indications. Expert Opin. Pharmacother. 2008, 9(12):2137-2144].

Акадезин важен для противоопухолевой терапии благодаря уникальному механизму противоопухолевого действия: это соединение вызывает сложную гибель с участием механизма некроза [Глазунова и соавт., АИКАР - противоопухолевый препарат широкого спектра действия. Онкологический журнал общественного объединения "Белорусское онкологическое общество", 2012, том 6, стр.16]. Практическое применение акадезина сдерживается крайне высокой стоимостью субстанции, получаемой путем органического синтеза. Недавно разработан эффективный метод получения акадезина с помощью микробиологического синтеза с использованием рекомбинантного продуцента (RU 2405833). Цитотоксичность природной субстанции для культуры клеток В-лейкоза не отличается от активности синтетического акадезина [Глазунова и соавт., АИКАР - противоопухолевый препарат широкого спектра действия. Онкологический журнал общественного объединения "Белорусское онкологическое общество", 2012, том 6, стр.16].

Молекулярные механизмы противоопухолевого эффекта акадезина далеко не ясны, однако в настоящее время его рассматривают как перспективный противолейкозный препарат [Leukemia PLoS ONE, 2009,4(11), е2889, р.1-11; Expert Opin.Invest. Drugs. 2010,19(4),p.571-578; Blood. 2010., 116(16)3023-3032; Oncotarget. 2011, 2(12), p.1322-1328; Mol.Cancer Ther. 2011, 10(3), p.437-447].

Ближайшим аналогом заявляемого изобретения является акадезин - лечебное средство с противоопухолевой активностью, характеризующейся избирательным подавлением В-лимфоцитов, но не Т-лимфоцитов [WO 203/080076, Blood. 2003, 101, р.3674-3680; Leukemia. 2005, 19, р.292-294]. Недостатком акадезина как противоопухолевого средства является его быстрое превращение в пуриновые нуклеотиды, что снижает его внутриклеточное содержание. Вместе с тем известно, что некоторые НСПВП (ибупрофен, индометацин, аспирин) подавляют in vitro активность фермента трансформилазы-циклогидролазы, ответственного за превращение акадезина в пуриновые нуклеотиды [Baggott JE, Morgan SL, На Т, Vaughn WH, Hine RJ. Inhibition of folate-dependent enzymes by non-steroidal anti-inflammatory drugs. Biochem J. 1992, 15;282 (Pt l):197-202].

Задача настоящего изобретения - разработать лечебное средство на основе акадезина с более выраженной противоопухолевой активностью.

Задача решена путем разработки лечебного средства на основе акадезина, включающего дополнительно НСПВП: ибупрофен, или индометацин, или аспирин.

Изобретение подтверждено следующими примерами.

Пример 1. Цитотоксичность акадезина и его комбинаций с НСПВП для клеток В-лимфоцитарного лейкоза мыши (линия Р388).

Клетки линии В-клеточного лейкоза (линия Р388) культивировали в питательной среде Игла, модифицированной Дульбекко (среда DMEM) с добавлением 2 мМ L-глутамина, 100 ЕД/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина (культуральная среда) при 37°C, 5% CO2 в увлажненной атмосфере. В день эксперимента клетки подсчитывали в камере Горяева и суспендировали в культуральной среде до концентрации 50000 клеток/мл. В лунки 96-луночного планшета (Nunc, Дания) вносили 190 мкл клеточной взвеси (-10 тыс. клеток) в культуральной среде и инкубировали 16 ч при 37°C, 5% CO2. Приготавливали серийные разведения акадезина, ибупрофена, индометацина, аспирина и пироксикама из стоковых растворов (10 мМ в диметилсульфоксиде для каждого исследуемого соединения, кроме аспирина; 100 мг/мл для аспирина). Из каждого разведения получали требуемую конечную концентрацию препарата в лунке в объеме 5-10 мкл. В контрольные лунки вносили раствор диметилсульфоксида до конечной концентрации 0,5%. Клетки инкубировали с каждым соединением в отдельности или с комбинациями акадезина с остальными соединениями в течение 72 ч. Каждую концентрацию исследовали в трех повторностях. После окончания инкубации в лунки вносили 20 мкл водного раствора (5 мг/мл) бромида 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,5-дифенилтетразолия. Клетки инкубировали 2 ч до развития темно-фиолетовой окраски клеток (формазан), удаляли культуральную среду. К клеткам добавляли 100 мкл диметилсульфоксида и суспендировали. Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре при длине волны 570 нм, вычитая оптическую плотность при 690 нм. Процент выживших клеток рассчитывали как отношение оптической плотности (OD570 нм-OD690 нм) контрольных (без препаратов) лунок к соответствующему показателю в лунках с той или иной концентрацией исследуемого соединения или комбинации исследуемых соединений.

Таблица 1
Цитотоксичность акадезина и НСПВП для клеток линии Р388.
Соединение Концентрация
Акадезин 0 1.5 3 7 15 30 мкМ
Ибупрофен 0 мМ 100* 100 100 94 62 29
0,2 мМ 100 100 98 65 32 12
0,4 мМ 100 60 39 18 8 5
Индометацин 0 мМ 100 100 100 94 62 29
0,1 мМ 96 15 12 5 4 3
Аспирин 0 мМ 100 100 100 94 62 29
0,5 мг/мл 98 64 51 32 21 15
1 мг/мл 95 46 32 20 16 8

Примечания: *% выживших клеток (среднее 3-х независимых измерений). Подчеркнуты наиболее выраженные результаты синергизма акадезина с другими соединениями.

Из приведенных данных следует, что воздействие только акадезина на клетки В-лейкоза оказалось токсичным в диапазоне концентраций 15-30 мкМ. Соединения, с которыми исследованы комбинации акадезина, использованы в нетоксических или слаботоксических концентрациях. Эффект синергизма наблюдали для ибупрофена, или индометацина, или аспирина. Так, акадезин (3 мкМ) и ибупрофен (0.4 мМ) по отдельности не вызывали выраженной гибели клеток, а при комбинации двух соединений в тех концентрациях выживало только 39% клеток. Выраженный синергизм виден при совместном действии 1,5-3 мкМ акадезина и 0,1 мМ индометацина.

Таким образом, нестероидные противовоспалительные агенты: ибупрофен, или индометацин, или аспирин, усиливают цитотоксичность акадезина для культувируемых клеток В-лимфоцитарного лейкоза.

Пример 2. Противоопухолевая активность акадезина в комбинации с ибупрофеном на модели В-клеточного лейкоза Р388 у лабораторных мышей.

Клетки лимфоцитарного лейкоза Р388, индуцированного у мышей линии DBA/2 путем смазывания кожи метилхолантреном, перевивали мышам-гибридам первого поколения BDF1 (C57Bl/6j×DBA/2) подкожно в правую подмышечную область. Клетки получали из асцитной жидкости мышей-опухоленосителей. Количество клеток для прививки - 106 клеток в питательной среде 199. Лечение начинали через 24 часа после перевивки опухолевых клеток.

Группы животных формировали для получения статистически достоверных результатов: контрольная группа состояла из 12 мышей, опытные - из 8 животных.

Критерием оценки противоопухолевого эффекта служило торможение роста опухоли (ТРО, %). Для вычисления ТРО проводили измерение трех максимальных взаимно перпендикулярных размеров опухоли (длина, ширина, высота) у каждого животного и вычисляли ее объем, а затем средний объем опухоли в группе. Измерение объема опухоли проводили каждые 3 дня, начиная с 7-го дня опыта, когда опухоли у нелеченных животных становятся измеримыми.

Торможение роста опухоли вычисляется по формуле:

ТРО (%)=(Vk-Vo)/Vk×100, где

Vk - средний объем опухолей в контрольной группе (мм3);

Vo - средний объем опухолей в опытной группе (мм3).

Акадезин вводили внутрибрюшинно в терапевтической дозе 80 мг/кг, а также в неэффективной дозе 50 мг/кг внутрибрюшинно в течение 10 дней. Ибупрофен вводили перорально в дозе 100 мг/кг в течение 10 дней.

При сочетанном применении акадезина в двух дозах и ибупрофена наблюдался синергический противоопухолевый эффект при взаимодействии двух препаратов. Сочетанное применение акадезина в дозе 80 мг/кг и неэффективной дозе ибупрофена 100 мг/кг противоопухолевый эффект выше: ТРО=87%-84%-68%, чем при использовании акадезина в неэффективной дозе 50 мг/кг и той же дозе ибупрофена: ТРО=64%-77%-58%. Эта разница в противоопухолевом действии двух групп статистически недостоверна (р>0,05). Однако при сочетанном применении акадезина (80 мг/кг) и ибупрофена (100 м/кг) наблюдалась гибель 3 мышей из 8, получавших такую комбинацию (37,5% случаев).

Таблица 2
Противоопухолевое действие акадезина в сочетании с ибупрофеном на В-клеточный лейкоз Р388.
Группа Доза, мг/кг Дни введения Путь введения ТРО, % (дни от начала опыта) Гибель от токсичности***
8 10 13
Акадезин 80 1-10 в/бр 55* 46 37 0/8
-“- 50 1-10 -“- 17 49 38 0/8
Ибупрофен 100 1-10 per os 35 20 4 0/8
Акадезин+ 80 1-10 в/бр per os 87** 84** 68** 3/8
Ибупрофен 100
Акадезин+ 50 1-10 в/бр per os 54** 77** 58** 0/8
Ибупрофен 100

Примечания: *р<0,05 по отношению к контролю; **р>0,05 между группой сочетанного введения акадезина в дозе 80 мг/кг с ибупрофеном в дозе 100 мг/кг и группой сочетанного применения акадезина в дозе 50 мг/кг с ибупрофеном в дозе 100 мг/кг; ***в числителе: число мышей, погибших от токсичности в первые 3 дня после окончания лечения, в знаменателе: общее число животных в группе.

Таким образом, акадезин в сочетании с НСПВП ибупрофен проявляет синергическое противоопухолевое действие на В-клеточный лейкоз Р388.

Пример 3. Противоопухолевая активность акадезина в комбинации с аспирином на модели В-клеточного лейкоза Р388 у лабораторных мышей.

Противоопухолевую активность акадезина в комбинации с аспирином определяли по схеме, приведенной в примере 2, но акадезин вводили внутрибрюшинно в терапевтической дозе 60 мг/кг, а аспирин в дозе 200 мг/кг перорально в течение 10 дней.

Таблица 3
Противоопухолевое действие акадезина в сочетании с аспирином на В-клеточный лейкоз Р388.
Группа Доза, Дни Путь ТРО, % (дни от начала Гибель от
мг/кг введе- введе- опыта) токсич-
ния ния 8 10 13 ности***
Акадезин 60 1-10 в/бр 58* 62* 37** 0/8
Аспирин 200 1-10 per os 43 19 44 0/8
Акадезин+ 60 1-10 в/бр 58* 63* 73*,** 1/8
Аспирин 200 per os

Примечания: *р<0,05 по отношению к контролю; **р<0,05 между группой сочетанного введения акадезина в дозе 60 мг/кг с аспирином в дозе 200 мг/кг и группой применения акадезина в дозе 50 мг/кг в монотерапии; ***в числителе: число мышей, погибших от токсичности в первые 3 дня после окончания лечения, в знаменателе: общее число животных в группе.

Из данных, приведенных в таблице 3, следует, что акадезин в режиме монотерапии вызывал торможение роста опухоли (ТРО) через 8-10 дней после начала введения (58% и 62%). Величина ТРО не отличалась от таковой при комбинации акадезина и аспирина в указанные сроки (58% и 63%). Однако в последующем терапевтическое действие акадезина ослабевало: к 13-м суткам после начала монотерапии акадезином ТРО составил лишь 37%), тогда как при сочетанном воздействии акадезина и аспирина достигнут выраженный эффект: %ТРО=73 (таблица 3). Следовательно, комбинация акадезина с аспирином приводит к стойкому и выраженному противоопухолевому эффекту, тогда как эффективность только акадезина кратковременна. Аспирин в режиме монотерапии также проявлял противоопухолевое действие, и его эффект в комбинации с акадезином к 13-м суткам лечения следует считать аддитивным (ТРО 37% акадезин, 44% аспирин, 73% комбинация акадезина и аспирина).

Таким образом, из результатов, представленных в таблицах 2 и 3, следует, что заявляемое лечебное средство в соответствующих дозах проявляет более выраженную противоопухолевую активность, чем акадезин.

Лечебное средство с противоопухолевой активностью на основе акадезина, отличающееся тем, что дополнительно включает нестероидный противовоспалительный препарат: ибупрофен, или индометацин, или аспирин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и фармацевтической промышленности. Изобретение обеспечивает применение тритерпеновых гликозидов из голотурий фрондозида А или комплекса фрондозида А с холестерином в качестве средства, ингибирующего множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток, а также для приготовления фармацевтической композиции, ингибирующей множественную лекарственную устойчивость опухолевых клеток.

Изобретение относится к области химико-фармацевтической промышленности, в частности к комбинации антагониста эндотелиального рецептора формулы (I) с паклитакселом.

Изобретение относится к области фармации и касается новых фармацевтических композиций для пероральной доставки фитонутриентов. Фармацевтическая композиция включает, по меньшей мере, один фитонутриент из ряда: эпигаллокатехин-3-галлат, дииндолилметан, гинестеин, ресвератрол, куркумин, и солюбилизатор - привитый сополимер поливинилкапролактам/поливинилацетат/полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 90000-140000 г/моль при массовом соотношении, по меньшей мере, одного фитонутриента и солюбилизатора от 1:5 до 1:1.

Группа изобретений относится к медицине и касается липосомного лекарственного препарата, содержащего мультивалентный ионный лекарственный препарат в качестве активного вещества с двумя или несколькими диссоциирующимися группами с константой диссоциации 4,5-9,5, где липосома имеет размер около 30-80 мм и фосфолипидный бислой имеет фосфолипид с температурой фазового перехода выше температуры тела, так что температура фазового перехода липосомы выше температуры тела; способа лечения опухоли у пациента, включающего введение указанного липосомного лекарственного препарата.

В изобретении раскрыты способы лечения нарушения, регулируемого ангиогенезом, предусматривающие введение субъекту эффективного количества антитела, которое связывается с человеческим белком бета-тирозин фосфатазой (HPTPβ).

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. В настоящем изобретении раскрывается кодон-оптимизированный ген, кодирующий главный капсидный белок L1 вируса папилломы человека, который способен, после трансдукции в клетку дрожжей, к эффективной экспрессии главного капсидного белка L1 вируса папилломы человека.

Настоящее изобретение относится к моноядерному динитрозильному комплексу железа с общей формулы (N2H5)+[Fe(SR)2(NO)2]-, где R представляет собой 5-нитропиридинил, а также 2-нитро-, 3-нитро- и 4-нитрофенилы и пиридинил.

Изобретение относится к соединениям тиенопиридазина формулы (I) и к их фармацевтически приемлемым солям или гидратам, в которых R1 и R2 независимо обозначают Н или С1-4 алкил, R3 обозначает насыщенное или ненасыщенное 5- или 6-членное кольцо, содержащее N, S или О, или их оптические изомеры, R4 обозначает фенил, монозамещенный или дизамещенный галогеном.

Изобретение описывает связывающиеся с простата-специфическим мембранным антигеном (PSMA) соединения, имеющие структуру где, Z представляет собой тетразол или CO2Q; каждый Q независимо выбран из водорода или защитной группы; и где (A) m имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6; R представляет собой пиридиновое кольцо, выбранное из группы, включающей , и где Х представляет собой фтор, йод, радиоизотоп фтора, радиоизотоп йода, хлор, бром, радиоизотоп брома, радиоизотоп астата, NO2, NH2, N+(R2)3, Sn(R2)3, Si(R2)3, Hg(R2), В(ОН)2, -NHNH2, -NHN=CHR3, -NHNH-CH2R3; n имеет значение 1, 2, 3, 4 или 5; Y представляет собой О, S, N(R'), C(O), NR'C(O), C(O)N(R), OC(O), C(O)O, NR'C(O)NR, NR'C(S)NR', NR'S(O)2, S(CH2)P, NR'(CH2)p, O(CH2)P, OC(O)CHR8NHC(O), NHC(O)CHR8NHC(O) или ковалентную связь; где р имеет значение 1, 2 или 3, R' представляет собой Н или C1-С6 алкил, и R8 представляет собой водород, алкил, арил или гетероарил, каждый из которых может быть замещен; R2 представляет собой C1-С6 алкил; и R3 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероарил, каждый из которых замещен фтором, иодом, радиоизотопом фтора, радиоизотопом йода, хлором, бромом, радиоизотопом брома или радиоизотопом астата, NO2, NH2, N+(R2)3, Sn(R2)3, Sn(R2)3, Hg(R2) или В(ОН)2; или (В) m имеет значение 0, 1, 2, 3, 4, 5 или 6; Y представляет собой О, S, N(R'), C(O), NR'C(O), C(O)N(R'), OC(O), C(O)O, NR'C(O)NR, NR'C(S)NR, NR'S(O)2, S(CH2)p, NR'(CH2)P, O(CH2)P, OC(O)CHR8NHC(O), NHC(O)CHR8NHC(O) или ковалентную связь; где р имеет значение 1, 2 или 3, R' представляет собой Н или C1-С6 алкил, и R8 представляет собой водород алкил, арил или гетероарил, каждый из которых может быть замещен; R представляет собой где X' выбран из группы, включающей NHNH2, -NHN=CHR3 и -NHNH-CH2R3; где R3 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероарил, каждый из которых замещен фтором, йодом, радиоизотопом фтора, радиоизотопом йода, бромом, радиоизотопом брома или радиоизотопом астата; NO2, NH2, N+(R2)3, Sn(R2)3, Si(R2)3, Hg(R2) или В(ОН)2; R2 представляет собой C1-С6 алкил; n имеет значение 1, 2, 3, 4 или 5; или (С) m имеет значение 4, Y представляет собой NR', и R представляет собой где G представляет собой О, NR' или ковалентную связь; R' представляет собой Н или C1-С6 алкил; р имеет значение 1, 2, 3 или 4, и R7 выбран из группы, включающей NH2, N=CHR3, NH-CH2R3, где R3 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероарил, каждый из которых замещен фтором, иодом, радиоизотопом фтора, радиоизотопом иода, хлором, бромом, радиоизотопом брома или радиоизотопом астата, NO2, NH2, N+(R2)3, Sn(R2)3, Si(R2)3, Hg(R2), B(OH)2; и R2 представляет собой C1-С6 алкил, а также описан способ визуализации клеток, органов или тканей, включающий воздействие на клетку или введение в организм соединения, описанного выше, а также способ лечения опухоли и набор, включающий соединение описанное выше.

Изобретение относится к новым стирольным производным, имеющим структурную формулу (А) в виде геометрических изомеров или таутомеров, и их фармацевтически приемлемым солям.
Изобретение относится к области медицины и косметологии, конкретно к фармацевтической композиции для местного применения, обладающей противоугревым и антибиотическим действием, содержащей эффективное количество антибиотика клиндамицина, салициловой кислоты и вспомогательные вещества.
Изобретение относится к области медицины и фармацевтической промышленности и касается комбинированной фармацевтической композиции с антибактериальной и антифунгальной активностью.
Изобретение относится к медицине и касается способа лечения хронического вирусного гепатита С, включающего оральное введение в организм липосомального препарата альфа-2 интерферона в виде «Реаферон-ЕС-Липинт» и липосомального препарата рибавирина в виде «Рибавирин-ЛИПИНТ», а также введение в организм инъекционной формы альфа-2 интерферона в виде «Реаферон-ЕС».

Изобретение относится к новым комбинациям на основе антихолинергиков, агонистов 2-адренорецепторов, ингибиторов фосфодиэстеразы-4 (ФДЭ-4), глюкокортикоидов и антагонистов лейкотриеновых рецепторов, способу их получения и применения для лечения воспалительных заболеваний, в первую очередь таких, как бронхиальная астма, хроническая обструктивная болезнь легких (ХОБЛ), ревматических или аутоиммунных заболеваний.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционным болезням, и может быть использовано для лечения больных хроническим вирусным гепатитом С (ХВГС). .

Изобретение относится к композиции микрочастиц или наночастиц для локальной доставки и доставки к слизистой поверхности активного ингредиента, содержащей 0,1-99,5 мас.% неорганического элемента, выбранного из диоксида, алкоксида, оксида, оксалата, уреата, нитрата или ацетата щелочного, щелочно-земельного или переходного металла, лантанидов или кремния, 0,01-95 мас.% фармацевтического или косметически активного ингредиента и 0,001-75 мас.% регулирующего скорость высвобождения средства, выбранного из природных, синтетических или полусинтетических полимеров, полисахаридов, моносахаридов, солей, белков или пептидов.

Изобретение относится к фармацевтической композиции для местного применения, включающей терапевтически эффективное количество адапалена, или его фармацевтически приемлемой соли, или сложного эфира, клиндамицин, или его фармацевтически приемлемую соль, или сложный эфир и гидрофильную матрицу в количестве от 0,1 мас.% до 5 мас.%, содержащую карбомер.
Изобретение относится к медицине и предназначено для профилактики гнойных осложнений при панкреонекрозе. Определяют проницаемость слизистой оболочки кишечника у пациента при помощи теста «маннитол/лактулоза».
Наверх