Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови



Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови
Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови
Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови

 


Владельцы патента RU 2495434:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ФБУН ГНЦ ВБ "Вектор") (RU)
Закрытое акционерное общество "ИмДи" (ЗАО "ИмДи") (RU)

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови. Набор включает подложку, которая представляет собой пластину в виде гребня, на поверхности каждого зубца которого дискретно нанесены антигены возбудителей вирусных инфекций и положительный контроль в виде иммуноглобулинов человека, в качестве отрицательного контроля один из сегментов зубца подложки оставлен свободным от специфических белков для оценки фоновых явлений, причем подложка дополнительно блокирована неспецифическими природными или синтетическими полимерами. В состав набора также входит емкость для проведения анализа, выполненная в виде многоячеистой аналитической ванны с возможностью введения каждого зубца подложки в отдельную ячейку ванны, растворы для отмывок, разведения образца и конъюгата, конъюгат и систему проявления. Изобретение обеспечивает усовершенствованную тест-систему для диагностики инфекционных заболеваний, в том числе для оценки у детей гуморального иммунитета к вакциноуправляемым вирусным инфекциям: кори, краснухе, эпидемическому паротиту и полиомиелиту. 6 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к наборам для иммунохимического анализа и направлено на усовершенствование тест-систем для выявления специфических антител в препаратах крови, в частности, для оценки у детей гуморального иммунитета к вакциноуправляемым вирусным инфекциям: кори, краснухе, эпидемическому паротиту и полиомиелиту. В России приняты и реализуются национальные программы по искоренению этих заболеваний, в которых одним из наиболее важных мероприятий является серологический мониторинг детского населения. В настоящее время такое обследование проводится с использованием моноспецифических тест-систем для иммуноферментного анализа (ИФА) и требует выполнения четырех тестов, что предполагает одновременное наличие четырех тест-наборов и немалые затраты времени и средств.

Настоящее изобретение предполагает одновременное (в одном анализе) выявление в исследуемых образцах специфических, антител к нескольким возбудителям, в частности, к вирусам кори, паротита, коревой краснухи и полиомиелита. Сущность такого выявления заключается в образовании специфических комплексов между антителами исследуемого образца и известными антигенами, в определенном порядке дискретно зафиксированными на плотной подложке. Образовавшиеся комплексы затем обнаруживаются с помощью вторичного иммунореагента, специфичного к антителам анализируемой сыворотки (антивидовые антитела, стафилококковые белки А и G и др.), и связанного с легко выявляемой меткой - щелочной фосфатазой или каталитически активными золями золота.

Известны наборы ИФА для определения суммарных антител к 4 инфекциям [1, 2]. В наборах используют смесь конъюгатов 4 антигенов с пероксидазой, выявляя антитела ко всем 4 инфекциям в одной лунке. Недостатком этих наборов является невозможность дифференцированного выявления отдельных возбудителей.

Известен также набор "Orgenics immunocomb HIV 1+2 bi-spot" фирмы «Orgenics» (Франция) для определения антител на непористых носителях [3]. Этот набор позволяет проводить одновременно выявление антител к вирусам имунодефицита человека 1 и 2 типов (HIV 1+2) в одном из вариантов дот-иммуноанализа на поверхности непористого носителя. Его рабочий элемент (твердая фаза) представлен в виде плоской пластиковой гребенки, на каждом зубце которой нанесены в виде отдельных пятен антигены HIV 1 и 2, а также человеческие иммуноглобулины - контроль для проверки работы конъюгата. Набор содержит все рабочие растворы, готовые к применению. При положительном результате анализа в месте нанесения антигена образуются визуально определяемые синие пятна. Эту тест-систему можно рассматривать как набор для дифференциального, многопрофильного анализа, но только на две близкородственные инфекции.

Известен набор, описанный в Патенте США №5486452 [4], в состав которого входит устройство для иммунологического анализа, представляющее собой пористую подложку, содержащую множественные ограниченные области адсорбированных на ее поверхности различных антигенов, представленные в виде точек, микроточек или линий, расположенных в определенном геометрическом порядке, и полученные путем нанесения аликвот антигенов на подложку дозирующими устройствами. Свободные от антигенов участки подложки блокированы неспецифическим белком. Набор содержит также реактивы индикаторной системы, позволяющей выявлять комплексы антиген-антитело.

Приведенный выше набор имеет следующие недостатки:

В качестве плотной подложки устройства используется пористая матрица, предпочтительно из нитроцеллюлозы, с толщиной листа, предпочтительно, 0,1 мм. Такие матрицы отличаются хрупкостью и малой механической прочностью, что значительно затрудняет их рутинное использование. Другим недостатком таких подложек является сложность удаления не связавшихся компонентов реакции из мелких пор матрицы (длительная, многократная отмывка с активацией), что значительно усложняет методику и повышает вероятность фоновых явлений.

С целью миниатюризации описанного устройства, зоны адсорбции антигенов представлены в виде пятен диаметром менее 2 мм или линиями с шириной менее 2 мм (получаемые нанесением аликвот антигенов в объеме менее 1 мкл), что предполагает использование специальных считывающих устройств, и не позволят проводить достоверный прямой визуальный учет результатов анализа.

В качестве индикаторной системы используются антитела или белок комплемента, конъюгированные с изотопной, флюоресцентной или ферментной (пероксидазой хрена) меткой. Работа с изотопами требует обеспечения специальных условий безопасности и не может широко использоваться в рутинных анализах. Использование флюоресцентных меток требует специального оборудования для инструментального учета результатов анализа. Для анализов с применением в качестве метки пероксидазы хрена в сочетании с субстратами, дающими нерастворимые продукты (4-хлоро-1-нафтол или 3,3-диаминобензидин) характерна относительно невысокая чувствительность, примерно на порядок уступающая чувствительности планшетного варианта иммунопероксидазного теста с использованием субстратов, дающих растворимые окрашенные продукты [5].

Наиболее близким техническим решением (прототипом) является набор, описанный в патенте РФ №2298795 [6], в состав которого входят следующие составные части.

1. Устройство для иммунологического определения, представляющее собой плоскую непористую подложку, изготовленную из синтетического материала (предпочтительно из синтетической бумаги Polylith или полистирола), на которой дискретно, в определенном порядке нанесены восемь антигенов возбудителей TORCH-инфекций (Toxoplasma gondii, Clamidia trachomatis, Rubella virus, Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealytica, Treponema pallidum, Cytomegalovirus, Herpes simplex virus-1), а также человеческие иммуноглобулины - контроль эффективности работы иммунозоля. Подложки имеют ширину от 7 до 10 мм и длину от 50 до 70 мм. Ширина подложки позволяет наносить антигены в два ряда аликвотами до 3 мкл, а длина - позволяет удобно работать с растворами, разлитыми в пенфлаконы. Отрицательным контролем служат участки, свободные от антигенов и положительного контроля. Природные или рекомбинантные антигены наносятся в виде дозированных аликвот объемом или в виде электроспрея на подложку в концентрации от 5 до 20 мкг/мл (предпочтительно - 10 мкг/мл). После фиксации антигенов свободные участки подложки блокируются одним или несколькими природными или синтетическими полимерами.

2. Конъюгат (иммунозоль), представляющий собой золь золота или серебра (средний диаметр частиц 10-20 нм), связанный с антителами против иммуноглобулинов человека или со стафилококковыми протеинами А или G.

3. Физический проявитель для усиления иммунологического сигнала, содержащий растворимую соль серебра и восстанавливающий агент. Предпочтительно в наборе используется двухкомпонентный проявитель, содержащий: сухую смесь метола и лимонной кислоты в соотношении по массе 2:5, соответственно, таблетированную или расфасованную по 35 мг, и 10%-ный раствор AgNO3. Проявитель готовят непосредственно перед использованием, растворяя одну порцию сухой смеси в 5 мл дистиллированной воды и, затем, добавляя в полученный раствор 100 мкл раствора азотнокислого серебра.

4. Раствор для отмывок и для разведения конъюгата (ТСР-Т): 0,01 моль/л трис-HCl с 0,15 моль/л NaCl и 0,1% твин-20, pH 7,2-7,4.

5. Раствор для разведения образцов сывороток (РБР-С): ТСР-Т с добавкой 5% лизата клеток Е.coli, доведенный 1 моль/л раствором NaOH до pH 9,5-9,7.

Этот анализ осуществляется в пенфлаконах, предполагает применение разведения анализируемой сыворотки или плазмы крови 1:10 на РБР-С и последовательное выполнение 10 операций по инкубации и отмывке. Учет результатов производится визуально по наличию или отсутствию темных пятен в местах нанесения соответствующих антигенов. Возможен инструментальный учет с использованием сканирующего устройства и последующей компьютерной обработки изображения.

Техническим результатом заявляемого изобретения является сокращение сроков проведения иммунологического анализа за счет одновременного анализа несколько проб сыворотки крови с использованием набора включающего подложку в виде гребенки с антигенами и многоячеистой аналитической ванны с иммунореагентами.

Указанный технический результат достигается тем, что в наборе для многопрофильного иммунологического анализа антител в сыворотке крови, включающем: устройство в виде подложки с набором дискретно нанесенных на ее поверхность антигенами возбудителей инфекционных заболеваний и дополнительно блокированной неспецифическими природными или синтетическими полимерами; емкость для проведения анализа; растворы для отмывок, разведения образца и конъюгата; конъюгат и систему проявления, согласно изобретения, подложка представляет собой пластину с зубцами в виде гребня, на поверхности каждого зубца которой расположены дискретно нанесенные набор антигенов возбудителей вирусных инфекций и положительный контроль в виде иммуноглобулинов человека для контроля качества конъюгата, причем, в качестве отрицательного контроля один из сегментов зубца подложки оставлен свободным от специфических белков для оценки фоновых явлений, а емкость для проведения анализа выполнена в виде многоячеистой аналитической ванны с возможностью введения каждого зубца подложки в отдельную ячейку ванны.

Ванна заполнена готовыми рабочими растворами и герметизирована;

Между зубцами на пластине подложки может быть выполнена перфорация.

В качестве набора антигенов возбудителей вирусных инфекций используют набор антигенов вакциноуправляемых инфекций: краснухи, эпидемического паротита, кори и полиомиелита, Иммобилизованные на каждом зубце пластины антигены представлены рекомбинантными белками, или природными белками, или комбинацией рекомбинантных и природных белков.

Зона нанесения антигенов на каждом зубце пластины очерчена контрастной позиционирующей рамкой.

В качестве конъюгата используют вторичные иммунореагенты: антитела к иммуноглобулинам человека, или стафилококковый белок А, связанный со щелочной фосфатазой, (например, Protein A, Alkaline Phosphatase Conjugate фирмы «Merck», кат. №539251), а в качестве проявляющей системы - субстрат для выявления щелочной фосфатазы (предпочтительно, BCIP/NBT Liquid Substrate System фирмы «SIGMA-ALDRICH» кат. № В1911). В качестве конъюгата используют вторичные иммунореагенты: антитела к иммуноглобулинам человека, или стафилококковый белок А, связанный с каталитически активными золями золота, а в качестве проявляющей системы - состав "физического проявителя", включает: 0,2% - ментола; 0,2% - серебра азотнокислого; 0,5% - лимонной кислоты, бидистиллированную воду - остальное до 100%.

Для иллюстрации изобретения приведены графические фигуры.

На фиг.1 приведена схема подложки с нанесенными на ней антигенами и имммуноглобулинами. Все антигены и контроль нанесены в концентрации 10 нг/мл аликвотами по 2 мкл (20 нг белка на точку).

На фиг.2 приведен пример результатов многопрофильного анализа сывороток и капиллярной крови, полученных с использованием предлагаемого набора. Цифрами обозначены номера образцов.

На фиг.3 изображена схема подложки, размещенной в многоячеистой аналитической ванне.

Предлагаемый набор включает:

- плоскую подложку 1 для иммунологического анализа, выполненную в виде гребня, каждый зубец 2 которого содержит зону, графически выделенную рамкой 3, с нанесенным набором дискретно в виде пятен 4 нанесенных на ее поверхность антигенами возбудителей инфекционных заболеваний и положительный контроль в виде иммуноглобулинов и является аналитическим устройством;

- в качестве отрицательного контроля сегмент 5 каждого зубца 2 подложки 1 оставлен свободным от специфических белков для оценки фоновых явлений

- аналитическую многоячеечную ванну 6 с изолированными ячейками 7, заполненными готовыми рабочими растворами, которая герметизирована пленкой;

- между зубцами на пластине подложки может быть выполнена перфорация 8.

- перфоратор (на чертежах не показан) для вскрытия ячеек 7 аналитической ванны 6.

Описание конкретного выполнения заявляемого набора. Подложка 1 изготавливается из непористого синтетического материала (предпочтительно из синтетической бумаги) в виде плоского гребня, например, с пятью зубцами 2, на каждом из которых в определенном порядке нанесен набор (в виде пятен 4) из антигенов четырех возбудителей вирусных инфекций у человека: краснухи (Rubella virus), кори (Polinosa morbillarum virus), эпидемического паротита (Mumps virus) и полиомиелита (Poliovirus hominis I-III серотипов), а также положительный контроль (человеческие иммуноглобулины) - контроль эффективности работы конъюгата (см. фиг.1). Антигены на подложке могут быть представлены как нативными, так и рекомбинантными белками. Антигены и контроль на поверхности подложки нанесены в виде расположенных в определенном порядке отдельных точек (пятен 4) с диаметром от 2 до 5 мм (предпочтительно 3 мм), что позволяет прямой визуальный учет результатов анализа.

Аналитическая ванна 6 выполнена из инертной пластмассы и имеет несколько рядов, состоящих из пяти ячеек 7 каждый. Каждый ряд ячеек 7 заполнен определенным готовым к применению рабочим раствором и герметизирован.

Описание процесса использования заявляемого набора. При выполнении анализа ячейки 7 вскрывают перфоратором, в первый ряд ячеек вносят исследуемые образцы сыворотки (5 мкл) или цельной капиллярной крови (10 мкл) и погружают зубцы 2 подложки 1. Затем, через определенные интервалы времени подложку 1 передвигают и погружают в ячейки 7 следующего ряда ванны 6 и, после выемки из последнего ряда ячеек 7 визуально учитывают результат по наличию или отсутствию темных пятен в местах нанесения антигенов. Для одиночных анализов используют отдельные зубцы 2, которые отделяют от гребенки подложки 1 по перфорации 8. Анализ осуществляют при комнатной температуре.

В наборе могут быть использованы: конъюгаты вторичных иммунореагентов (антител к иммуноглобулинам класса G человека или белка A Staphylococcus aureus) со щелочной фосфатазой или коллоидным золотом и, соответственно, субстрат для проявления щелочной фосфатазы или физический проявитель для каталитического выявления золей золота.

Далее приведены примеры 1 и 2 конкретного применения набора.

В пробных экспериментах используют:

Подложку 1 (гребенку) для многопрофильного иммуноанализа анализа с нанесенными по схеме, приведенной на Фиг.1, антигенами:

- смесь рекомбинантных белков (Е1, Е2 и С) Rubella virus;

- натуральный антиген Polinosa morbillarum virus;

- натуральный антиген Mumps virus;

- смесь натуральных антигенов Poliovirus hominis I-III серотипов

- IgG из сыворотки крови человека - положительный контроль

Аналитическую ванну.

Ванну для анализа с применением конъюгатов щелочной фосфатазы заполняют растворами:

- ряд 1 - раствор для разведения образцов - ТСБ-Т с 0,05% (в/о) казеина, pH 8,0;

- ряды 2, 3, 5, 6, 8 - раствор для отмывок (ТСБ-Т) - 0,1 М Трис-HCl с 0,15 М NaCl и 0,1% твин-20, pH 7,2-7,4;

- ряд 4 - конъюгат антител против иммуноглобулинов человека или белка A Staphylococcus aureus со щелочной фосфатазой;

- ряд 7 - однокомпонентный субстрат для проявления щелочной фосфатазы (например, Sigma B1911-100ML BCIP®/NBT Liquid Substrate System).

Ванну для анализа с применением конъюгатов коллоидного золота заполняют растворами:

- ряд 1 - раствор для разведения образцов - ТСБ-Т с 0,05% (в/о) казеина, pH 8,0;

- ряды 2, 3, 5 - раствор для отмывок (ТСБ-Т) - 0,1 М Трис-HCl с 0,15 М NaCl и 0,1% твин-20, pH 7,2-7,4;

- ряд 4 - конъюгат антител против иммуноглобулинов человека или белка A Staphylococcus aureus с коллоидным золотом;

- ряды 6 и 8 - дистиллированной водой;

- ряд 7 заполняется проявителем состава: 0,2% - ментол; 0,2% - серебро азотнокислое; 0,5% - лимонная кислота, бидистиллированная вода - остальное до 100%.

Заполненные ванны герметизируют. При выполнении анализа герметизирующее покрытие вскрывают перфоратором.

Выполнение анализа:

Все операции выполняются при температуре не ниже 20°С.

В ячейки первого ряда пипеткой вносят по 10 мкл исследуемых сывороток или по 20 мкл образцов цельной капиллярной крови, перемешивают, помещают белковые матрицы и инкубируют 20 мин. Затем матрицы переносят из ячейки в ячейку следующих рядов с инкубациями: 1 и 4 ряды - 20 мин; 2, 3, 5, 6 и 8 ряды - 2 мин, 7 ряд - 15 мин для субстратов щелочной фосфатазы или 8 мин для проявителя коллоидного золота. После выемки из последней ячейки визуально учитывают результаты анализа. Положительными по определенной инфекции считают образцы, дающие отчетливое темное пятно в месте нанесения соответствующего антигена.

ПРИМЕР 1. СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВЫЯВЛЕНИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ В ПЛАНШЕТНЫХ ИФА-ТЕСТ-СИСТЕМАХ В И МНОГОПРОФИЛЬНОМ ДОТ-ИММУНОАНАЛИЗЕ

Многопрофильный анализ 5 образцов сывороток крови проводят с использованием предлагаемого набора в двух вариантах исполнения - с применением конъюгата вторичных антител со щелочной фосфатазой (ЩФ-a/IgG) и коллоидного золота, связанного с протеином A Staphylococcus aureus (Au-SpA). Результат считают положительным, если в месте нанесения соответствующего антигена визуально определяется четко различимое темное пятно.

Иммунопероксидазный планшетный анализ проводят на моноспецифических тест-системах для определения антител к отдельным вирусным инфекциям, серийно выпускающихся ЗАО «Вектор Бест» (г.Новосибирск). Выполнение иммуноанализа и учет результатов проводят в соответствии с инструкциями производителя. Для определения титра антител, готовят серию двукратных разведении на РБР-С образцов сывороток (от 1:100) и анализируют каждое разведение. За титр антител принимают наибольшее разведение образца, в котором уровень сигнала превышает ОПкрит. Результаты, полученные с использованием предлагаемого набора, в сравнении с данными моноспецифического иммуноферментного анализа приведены в таблице.

Таблица
Сравнительные результаты определения в сыворотке крови антител к возбудителям вирусных инфекций с применением моноспецифических планшетных тест-систем для ИФА и многопрофильного дот-анализа с использованием конъюгатов на основе щелочной фосфатазы и коллоидного золота.
Тест-система Обратные титры сывороток в моноспецифическом планшетном ИФА Результаты многопрофильного дот-анализа
Конъюгат ПХ-a/IgG ЩФ-a/IgG Au-SpA
Сыворотка 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
Краснуха 400 отр 200 800 800 + - + + + + - + + +
Корь 800 400 800 400 отр + + + + - + + + + -
Паротит 200 800 отр 200 100 + + - + + + + - + +
Полиомиелит 100 400 100 200 400 + + + + + + + + + +
Примечание:
+ отчетливо определяемое пятно в месте нанесения антигена (положительный результат),
- слабо определяемое пятно в месте нанесения антигена или чистый фон подложки (отрицательный результат).

ПРИМЕР 2. СРАВНЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ В СЫВОРОТКЕ И ЦЕЛЬНОЙ КРОВИ С ПРИМЕНЕНИЕМ МНОГОПРОФИЛЬНОГО АНАЛИЗА В ПОСТАНОВКЕ С КОНЪЮГАТАМИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ И КОЛЛОИДНОГО ЗОЛОТА

Параллельно выполняют многопрофильный анализ 5 образцов сывороток крови и капиллярной крови (крови из пальца) от тех же пациентов, сыворотки которых были использованы в примере 1. Анализ проводят с использованием предлагаемого набора в двух вариантах исполнения - с применением конъюгата вторичных антител со щелочной фосфатазой (ЩФ-a/IgG) и коллоидного золота, связанного с протеином А Staphylococcus aureus (Au-SpA). При учете результатов сравнивают наличие или отсутствие четких темных пятен в местах нанесения соответствующих антигенов. Результаты в разных вариантах постановки анализа считают сходными, если наличие и локализация пятен на матрицах при анализе образцов от одного пациента совпадают. Полученные результаты приведены на Фиг.2.

Предлагаемый набор имеет следующие отличия от прототипа:

1. Подложка аналитического устройства выполнена в виде плоского гребня с пятью зубцами, на каждом из которых расположено аналитическое устройство (белковую матрицу) для выполнения одного многопрофильного анализа, а между зубцами на перемычке выполнена перфорация, позволяющая отделять от гребенки один или несколько (по числу выполняемых анализов) зубцов.

2. На белковую матрицу нанесены антигены возбудителей кори, краснухи, эпидемического паротита и полиомиелита.

3. Анализ выполняется не в пенфлаконах, а в многоячеечной аналитической ванне, заполненной готовыми к применению растворами и герметизированной, что делает набор автономным и пригодным к внелабораторному применению.

4. Набор для разведения образцов не содержит концентрат блокирующего раствора, что позволяет выполнять анализ в диапазоне разведения сывороток от 1:50 до 1:100 или использовать для анализа капиллярную кровь в объеме до 20 мкл (использование малых аликвот капиллярной крови важно в педиатрической практике, поскольку у детей малого возраста отбор даже 5 мл крови из вены представляет значительную кровопотерю).

5. Набор предполагает использование конъюгатов на основе щелочной фосфатазы и однокомпонентных субстратов для ее проявления, что позволяет полностью укомплектовать набор готовыми к употреблению растворами и сделать его автономным.

Предлагаемый набор содержит полный комплект компонентов, автономен и может использоваться не только в лабораториях, но и во внелабораторных условиях, как для массового скрининга сывороток, так и для индивидуальных анализов. Чувствительность многопрофильного анализа с использованием предлагаемого набора не уступает чувствительности серийно выпускающихся планшетных моноспецифических иммунопероксидазных тестов (см. Пример 1). Предлагаемый набор позволяет за счет определения в одном анализе сразу ряда параметров значительно сократить время на обследование пациента. Кроме того, поскольку один анализ с использованием предлагаемого набора эквивалентен нескольким анализам в моноспецифических системах и по стоимости эти анализы близки, внедрение изобретения в широкую практику может дать значительный экономический эффект.

Источники патентной и научно-технической информации

1. Патент Китая №1286403, МПК G01N 33/53.

2. Патент Китая №1340712, МПК G01N 33/569.

3. www.biograd.ru; www.orgenics.com.

4. Патент США №5486452, МПК G01N 033/548.

5. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б. и др. Теория и практика иммуноферментного анализа. - М.: Высш. школа, 1991. - с.360.

6. Патент РФ №2298795 «Набор для многопрофильного анализа сыворотки крови с целью одновременного выявления специфических антител к возбудителям TORCH-инфекций методом дот-иммуноанализа».

1. Набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови, включающий: устройство в виде подложки с набором дискретно нанесенных на ее поверхность антигенов возбудителей инфекционных заболеваний и дополнительно блокированной неспецифическими природными или синтетическими полимерами; емкость для проведения анализа; растворы для отмывок, разведения образца и конъюгата; конъюгат и систему проявления, отличающийся тем, что подложка представляет собой пластину в виде гребня, на поверхности каждого зубца которого дискретно нанесены набор антигенов возбудителей вирусных инфекций и положительный контроль в виде иммуноглобулинов человека для контроля качества конъюгата, причем в качестве отрицательного контроля один из сегментов зубца подложки оставлен свободным от специфических белков для оценки фоновых явлений, а емкость для проведения анализа выполнена в виде многоячеистой аналитической ванны с возможностью введения каждого зубца подложки в отдельную ячейку ванны.

2. Набор по п.1, отличающийся тем, что в качестве набора антигенов возбудителей инфекций используют набор антигенов вакциноуправляемых вирусных инфекций: краснухи, эпидемического паротита, кори и полиомиелита.

3. Набор по п.1, отличающийся тем, что между зубцами на пластине подложки выполнена перфорация.

4. Набор по п.1, отличающийся тем, что иммобилизованные на каждом зубце пластины антигены представлены рекомбинантными белками, или природными белками, или комбинацией рекомбинантных и природных белков.

5. Набор по п.1, отличающийся тем, что зона нанесения антигенов на каждом зубце пластины очерчена контрастной позиционирующей рамкой.

6. Набор по п.1, отличающийся тем, что в качестве конъюгата используют вторичные иммунореагенты: антитела к иммуноглобулинам человека, или стафилококковый белок А, связанный со щелочной фосфатазой, а в качестве проявляющей системы - субстрат для выявления щелочной фосфатазы.

7. Набор по п.1, отличающийся тем, что в качестве конъюгата используют вторичные иммунореагенты: антитела к иммуноглобулинам человека, или стафилококковый белок А, связанный с каталитически активными золями золота, а в качестве проявляющей системы - состав "физического проявителя", включающий 0,2% ментола; 0,2% серебра азотнокислого; 0,5% лимонной кислоты, бидистиллированную воду - остальное до 100%.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости методом двухстадийного иммуноферментного анализа в сыворотке крови человека in vitro.

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования развития репродуктивных нарушений. Сущность способа состоит в том, что у мужчин исследуют эякулят, а у женщин - цервикальное отделяемое на десятый день менструального цикла, в качестве параметров определяют уровни интерлейкина 1 бета и интерферона гамма одновременно.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки эффективности лечения ингибитором тирозинкиназ первого поколения иматинибом мезилатом (гливеком) хронического миелолейкоза.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано при прогнозировании развития внутриутробного инфицирования плода при гриппе A(H3N2) у женщин во втором триместре гестации с угрозой невынашивания беременности.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу динамической оценки состояния реципиента после трансплантации трупной печени. Сущность способа состоит в том, что проводят одновременное определение в периферической крови пациента процентного содержания циркулирующих стволовых гемопоэтических клеток CD34+ (СГК) и объемного содержания лимфоцитов (Лф, млн/мл), находят их индивидуальное отношение R по формуле R=ЛФ/СГК и строят кривую степенной зависимости R (ось ординат) от СГК (ось абсцисс), используя ее затем в качестве калибровочной кривой в системе двойных логарифмических координат, а для оценки состояния реципиента в текущий момент в его периферической крови определяют ЛФ и СГК, находят их отношение Rp, положение его в калибровочной системе координат.

Настоящее изобретение относится к области медицины и фармации, а именно к биохимии клеточных мембран человека, и описывает способ оценки влияния лекарственных веществ на проницаемость мембран эритроцитов по натрию с использованием определения скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита, при котором измеряют скорость обмена внутриклеточного лития в загруженных этим ионом клетках на внеклеточный натрий из среды инкубации, причем исследуемое вещество вносят в среду 1-часовой инкубации, содержащую в мМ: 150 - NaCl; 10 - глюкозы; 10 - Hepes-Tris; 0,1 - уабаина, и по изменению величины скорости Na+-Li+-противотранспорта в мембране эритроцита судят о влиянии вещества на проницаемость клеточной мембраны по натрию.
Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, патологической анатомии, и может быть использовано для прогнозирования воспалительных осложнений после операций по поводу колоректального рака.
Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бруцелл в патматериале. Сущность изобретения включает способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью индикации бруцелл в патматериале, посредством изготовления формалинизированных эритроцитов, с последующей сенсибилизацией позитивной бруцеллезной сывороткой, при этом для изготовления эритроцитарного антительного диагностикума позитивную бруцеллезную сыворотку для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов разводят 1:50-1:100, инактивируют при 60°C в течение 30 минут, сенсибилизируют формалинизированные эритроциты, из расчета: осадок от 2 объемов 40%-ной взвеси эритроцитов барана, 1 объем 0,43-0,44% раствора свежеприготовленного амидола, 1,0-1,5 объем позитивной сыворотки, разведенной 1:50-1:100, и выдерживают в течение 28-32 минут при 55-56°C.

Изобретение относится к ветеринарии. Способ диагностики лептоспироза сельскохозяйственных животных, включающий определение наличия антител к антигенам семи серогрупп L.hebdomadis, L.pomona, L.tarassovi, L.grippotyphosa, L.canicola, L.sejroe и L.icterohaemorrhagiae в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа, отличающийся тем, что в качестве антигена применяют смешанные в равных количествах антигенные белки из лептоспир трех серогрупп - L.tarassovi, L.grippotyphosa и L.hebdomadis.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу молекулярно-генетического типирования штаммов Bordetella pertussis. Способ включает выделение ДНК из штаммов B.pertussis, проведение полимеразной цепной реакции с одновременным введением специфических праймеров PF-PR для получения ампликонов фрагмента промотора коклюшного токсина ptxP, рестрикции полученных ампликонов эндонуклеазами KpnI и MluI и электрофорезу продуктов рестрикции в агарозном геле.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к реагенту для предотвращения по меньшей мере одного ошибочного старта в амплификации полимеразной цепной реакции (ПЦР), способу предотвращения по меньшей мере одного ошибочного старта в амплификации полимеразной цепной реакции (ПЦР-амплификация) и наборам, которые включают данный реагент.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и химии. Предложена выделенная нуклеиновая кислота, кодирующая флуоресцентный биосенсор для детекции пероксида водорода, а также соответствующая кассета экспрессии, клетка-продуцент биосенсора и выделенный флуоресцентный биосенсор.

Изобретение относится к области биотехнологии и вирусологии. Описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие геномы двух новых штаммов свиного цирковируса типа 2В.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу оценки степени пролиферации лимфоцитов с помощью маркерных генов методом полимеразной цепной реакции в реальном времени (ПЦР РВ).

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к способу анализа онкологических заболеваний молочной железы, и может быть использовано в медицине. .

Изобретение относится к области биохимии и молекулярной биологии. .

Изобретение относится к генной диагностике офтальмологических расстройств и предназначено для диагностики аутосомно-доминантной оптической нейропатии. .

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу и набору для определения наличия или отсутствия мутации в гене PIK3CA. .

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для повышения биогенного продуцирования метана. .

Изобретение раскрывает дифференциацию штаммов возбудителя чумы основного подвида античного и средневекового биоваров. Определение проводят методом полимеразной цепной реакции (ПЦР). Способ предусматривает выделение ДНК, проведение ПЦР с применением синтезированных праймеров Med(24) и Med(19) для амплификации фрагментов хромосомных генов исследуемого штамма. Дифференциацию осуществляют путем сравнения размеров полученных амплифицированных фрагментов исследуемого штамма с размерами фрагментов генов, характерных для штаммов средневекового биовара 198 и 82 п.н. и для штаммов античного биовара 222 и 101 п.н. Способ позволяет эффективно и надежно проводить дифференциацию штаммов Y.pestis основного подвида античного и средневекового биоваров. 2 пр.
Наверх