Способ получения и консервации минерализованного костного матрикса


 

A01N1/00 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2495567:

федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский научный центр "Восстановительная травматология и ортопедия" имени академика Г.А. Илизарова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу получения минерализованного костного матрикса. Способ получения минерализованного костного матрикса, включающий механическую очистку губчатой кости от хрящевой ткани, перфорацию кости спицей, далее кость последовательно обрабатывают раствором натрия хлорида и твина-100, раствором перекиси водорода, смесью хлороформ-этанол, перемешивают, объем всех используемых растворов составляет не менее 5 объемов губчатой кости, далее обрабатывают спирт-эфирной смесью, перемешивают, все перемешивания проводят на магнитной мешалке, далее центрифугируют и проветривают на воздухе, затем костные фрагменты замораживают, лиофильно высушивают и стерилизуют, при определенных условиях. Вышеописанный способ позволяет сократить время реализации заявленного способа, а продукт, полученный заявленным способом, может храниться в течение 3 лет, сохраняя стерильность и биологические свойства.

 

Изобретение относится к медицине, к травматологии и ортопедии, в частности при ревизионных оперативных вмешательствах реэндопротезирования крупных суставов.

В практике эндопротезирования крупных суставов зачастую стает вопрос о замещении дефекта кости в зоне установки эндопротеза. Для этого используют различные материалы на основе кальция фосфата, гидроксиапатита и т.п. Кроме того, применяется и замещение дефекта собственной костной стружкой, получаемой в процессе операции.

Известен способ изготовления имплантатов из губчатой костной ткани, включающий отмывание костных фрагментов водой и последующим погружением в 6%-ный раствор перекиси водорода на 48 ч при соотношении один объем костных фрагментов на четыре объема раствора перекиси водорода (то есть 1:4) со сменой раствора 4 раза через каждые 12 ч, костные фрагменты подвергают центрифугированию, затем погружают их в смесь этанола и хлороформа в соотношении 1:1, а костные фрагменты и смеси этанола с хлороформом в соотношении 1 объем костных фрагментов на 4 объема смеси, при этом смесь меняют 4 раза через каждые 12 ч, повторно центрифугируют костные фрагменты, проветривают на воздухе в течение 24 ч, после чего костные фрагменты замораживают при температуре -70°С в течение 24 ч, по истечении этого времени их подвергают лиофилизации в течение 48 ч с достижением остаточной влажности 5%, а после этого упаковывают в стандартный двойной пакет и стерилизуют потоком быстрых электронов дозой 18+5 кГр на ускорителе ЛУЭ-8-5М, У003 MB (RU 2172104 С1).

Однако данный способ не предусматривает очистку минерализованного костного матрикса на начальном этапе от клеток ткани, что не обеспечивает полной экстракции полярных липидов, гликолипидов, протеолипидов, углеводов и аминокислот, а также является длительным в реализации - 172 ч.

Целью настоящего изобретения является разработка способа заготовки костного матрикса, предусматривающего удаление клеточных элементов на начальном этапе очистки заготовки, полной экстракции полярных липидов, гликолипидов протеолипидов, углеводов и аминокислот, с уменьшением времени реализации метода.

Указанный результат достигается тем, что губчатую кость на первом этапе механически очищают от хрящевой ткани, перфорируют спицей диаметром 1,5 мм и последовательно обрабатывают раствором натрия хлорида и твина-100 в концентрациях 0,8 и 0,1% соответственно, далее перемешивают в течение 6 ч и меняют раствор 3 раза через каждые 2 ч, затем последовательно губчатую кость обрабатывают перекисью водорода, перемешивают в течение суток, меняют раствор каждые 6 ч, далее обрабатывают смесью хлороформ-этанол, перемешивают в течение 12 ч, меняют раствор 3 раза через каждые 4 ч, объем всех используемых растворов составляет не менее 5 объемов губчатой кости, далее обрабатывают спирт-эфирной смесью (1:2), перемешивают в течение 6 ч, все перемешивания проводят на магнитной мешалке.

Способ иллюстрируется подробным описанием.

Берут губчатую кость и механически очищают от остатков хрящевой ткани. Затем очищенную губчатую кость перфорируют спицей диаметром 1,5 мм. Перфорирование проводят равномерно по всей поверхности губчатой кости. После этого губчатую кость помещают в емкость с раствором, состоящим из хлорида натрия и твина-100 с концентрацией 0,8% и 0,1% соответственно. Объем раствора должен оставлять не менее 5 объемов губчатой кости. Раствор постоянно перемешивают на магнитной мешалке в течение 6 ч. Раствор меняют через каждые 2 ч. Затем губчатую кость помещают в раствор перекиси водорода с концентрацией 6% и продолжают перемешивание на магнитной мешалке в течение 24 ч. Раствор меняют с периодичностью 6 ч. Объем раствора должен составлять не менее 5 объемов заготовки. Затем губчатую кость извлекают из раствора и центрифугируют при 3000 об/мин. При этом на дно центрифужного стакана помещают перфорированную подставку для удаления остатков перекиси водорода. Затем губчатую кость погружают в смесь этанола и хлороформа в соотношении 1:1 и перемешивают на магнитной мешалке в течение 12 ч, при этом смесь меняют 3 раза через каждые 4 ч. Объем раствора должен составлять не менее 5 объемов губчатой кости. После этого губчатую кость помещают в спирт-эфирную смесь (1:2) и перемешивают на магнитной мешалке в течение 6 ч. Далее губчатую кость проветривают в токе воздуха в течение 12 ч, замораживают при -70°С и лиофильно высушивают. Высушенную губчатую кость помещают в герметичный пластиковый контейнер и стерилизуют потоком быстрых электронов дозой 18+5 кГр на линейном ускорителе электронов У003 MB.

Полученный минерализованный костный матрикс использовали при замещении дефектов костной ткани.

Использование предлагаемого способа в ФГБУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г.А.Илизарова показал, что полученный минерализованный костный матрикс не содержит клеток и клеточных элементов и может храниться в течение 3 лет, сохраняя стерильность и биологические свойства. Способ его получения (48 ч) значительно сокращает время и материальные затраты по сравнению с существующими методами.

Способ получения минерализованного костного матрикса, включающий погружение губчатой кости в 6% раствор перекиси водорода с последующей обработкой смесью хлороформ-этанол (1:1), центрифугированием и проветриванием на воздухе, затем костные фрагменты замораживают при температуре -70°С в течение 24 ч, лиофильно высушивают и стерилизуют, отличающийся тем, что губчатую кость на первом этапе механически очищают от хрящевой ткани, перфорируют спицей диаметром 1,5 мм и последовательно обрабатывают раствором натрия хлорида и твина-100 в концентрациях 0,8 и 0,1% соответственно, далее перемешивают в течение 6 ч и меняют раствор 3 раза через каждые 2 ч, затем последовательно губчатую кость обрабатывают перекисью водорода, перемешивают в течение суток, меняют раствор каждые 6 ч, далее обрабатывают смесью хлороформ-этанол, перемешивают в течение 12 ч, меняют раствор 3 раза через каждые 4 ч, объем всех используемых растворов составляет не менее 5 объемов губчатой кости, далее обрабатывают спирт-эфирной смесью (1:2), перемешивают в течение 6 ч, все перемешивания проводят на магнитной мешалке.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к области медицины, а именно инфектологии и патологической анатомии, и может быть использовано для диагностики телэнцефального глиоза (ТГ) у детей с врожденными инфекциями.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. .

Изобретение относится к сельскому хозяйству. .
Изобретение относится к медицине. .

Изобретение относится к медицине. .
Изобретение относится к комбинированному криопротекторному раствору для замораживания тромбоцитов при низкой (-80°C) температуре, включающему гексаметиленбистетраоксиэтилмочевину, лимонную кислоту и воду для инъекций, отличающемуся тем, что дополнительно содержит диметилацетамид при следующем соотношении ингредиентов, мас.%: гексаметиленбистетраоксиэтилмочевина 1,0%; диметилацетамид 1,25%; лимонная кислота 0,1%; вода для инъекций остальное.
Изобретение относится к медицине. Проводят получение донорской крови, смешивание с гемоконсервантом глюцир в соотношении 4:1, разделение донорской крови на плазму и эритроцитную массу с последующим хранением эритроцитной массы в течение 30 суток при t=+4°С. Дополнительно в состав гемоконсерванта вводят 3-окси-6-метил-2-этилпиридина малат. Изобретение позволяет повысить эффективность защиты клеточных мембран эритроцитов, ограничить процесс гемолиза, предупредить образование микросгустков на поздних сроках хранения эритроцитарной массы. 1 з.п. ф-лы, 6 табл., 5 пр.

Изобретение относится к области криобиологии, клеточной биологии, морской биотехнологии и гидробиологии. Проводят обработку клеток морских микроводорослей криопротекторной смесью, содержащей проникающий и непроникающий криопротекторы и питательную среду. Осуществляют замораживание с последующим сохранением в жидком азоте. В качестве питательной среды берут стерильную морскую воду при следующем соотношении компонентов, в масс.%: проникающий криопротектор 5-7,5%; непроникающий криопротектор 1,5-3%; стерильная морская вода - остальное. Перед замораживанием проводят инкубацию клеток морских микроводорослей на ледяной бане в течение не менее 10 минут. Замораживание ведут в три этапа: сначала охлаждают до -25°C со скоростью 0,9-1,1°C/мин; затем охлаждают до -75°C со скоростью 2-2,5°C/мин; после чего охлаждают до -196°C, помещая клетки морских микроводорослей в жидкий азот. В качестве проникающего криопротектора можно использовать диметилсульфоксид (ДМСО) или этиленгликоль. В качестве непроникающего криопротектора - трегалозу или поливинилпирролидон (ПВП). Изобретение позволяет повысить выход жизнеспособных, функционально активных клеток микроводорослей после замораживания-оттаивания и восстановить их культуру в течение недели после криоконсервации, обеспечивая при этом возможность количественной оценки функционального состояния микроводорослей. 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 3 табл., 5 пр.

Изобретение относится к офтальмологии. Раствор для хранения роговицы содержит смесь биологических сред M199 и DMEM, хондроитина сульфат, L-аланил-L-глутамин, 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфоновую кислоту (HEPES), пируват натрия, β-гидроксибутират натрия, гентамицина сульфат, амфотерицин В, 2,3,5,7,8-пентагидрокси-6-этилнафталиндион-1,4 (эхинохром А) и гидроксиэтилкрахмал при следующем соотношении компонентов, мас.%: среда M199 0,64; среда DMEM 0,447; гидроксиэтилкрахмал 5-10; хондроитина сульфат 2,5; эхинохром А 0,001-0,01; L-аланил-L-глутамин 0,05425; буфер HEPES 0,5958; пируват натрия 0,0055; β-гидроксибутират натрия 0,151; гентамицина сульфат 0,01; амфотерицин В 0,0000250; дистиллированная вода до 100. Изобретение позволяет увеличить срок хранения роговицы. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, ветеринарии и биологии. Проводят фиксацию образца, декальцинацию, промывание водой, дегидратацию в спиртовых растворах и заливку в парафин. Фиксацию образца проводят в течение 24-х часов в молекулярном фиксаторе FineFix на спиртовой основе, содержащем FineFix и 96° спирт в соотношении 1:2,5. Декальцинацию осуществляют в течение 2-5 суток в 5-8% забуференном растворе муравьиной кислоты при ежедневной смене декальцинирующего раствора и контроле полноты декальцинации. Соотношение образец: декальцинирующий раствор составляет 1:20. После завершения декальцинации проводят промывку образца водой и до стадии дегидратации повторно помещают образец в спиртовой раствор молекулярного фиксатора FineFix на 6-12 часов. Набор для приготовления препарата костной ткани содержит молекулярный фиксатор FineFix на спиртовой основе, концентрированный раствор декальцинатора, изготовленный из расчета 40 г лимоннокислого натрия, 100 мл 90%-ного раствора муравьиной кислоты, 300 мл дистиллированной воды и рабочие растворы для контроля полноты декальцинации, содержащие насыщенный раствор оксалата аммония и 25%-ный водный раствор аммиака. Изобретение позволяет получать высококачественные препараты, пригодные для последующего гистологического и иммуногистологического исследования при отсутствии использования высокотоксичных компонентов. 2 н.п. ф-лы, 2 ил.

Единица дозирования в форме прессованной таблетки для замедленного высвобождения средства против насекомых содержит испаряющееся средство против насекомых и инертную твердую основу. Твердая основа содержит двухкомпонентную систему, включающую материал для придания объема и материал, обеспечивающий пористость. Материал для придания объема выбран из группы наполнителей прямого прессования. Материал, обеспечивающий пористость, является карбонатом или бикарбонатом. Устройство подачи средства против насекомых содержит емкость для средства против насекомых. Для получения единицы дозирования ингредиенты смешивают и таблетируют при температуре выше температуры плавления средства против насекомых. Дозатор средства против насекомых содержит единицу дозирования в качестве единственного источника средства против насекомых. Состав находится в форме таблетки, помещенной рядом с нагревателем. Устройство содержит вилку, которая обеспечивает электрическое соединение с нагревателем, и колпак для таблетки, содержащий кожух и крышку. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 пр.

Устройство для консервирования замораживанием клеточных взвесей под давлением в атмосфере инертного газа - портативный криобароконтейнер - выполнен из нержавеющей стали марки 12Х18Н10Е и состоит из передней и задней панелей. На передней панели расположено восемь отверстий для стяжных болтов, а в верхней части имеется винт с толкателем для пережатия трубки пластикового контейнера, через которую заливается клеточная взвесь и подается под давлением инертный газ в стандартный контейнер «Компопласт 300». Контейнер находится в криобароконтейнере, а на задней панели в центральной части расположена ниша, выполненная точно по объему и размерам стандартного пластикового контейнера, а в верхней части имеется канал, по которому проходит трубка от него, а в верхней и нижней частях ниши находятся возвышения. Сверху задней панели расположена петля для подвешивания всего устройства, а по всему периметру задней панели расположено восемь стяжных болтов, закрепленных винтовой нарезкой и сваркой в задней панели. С задней стороны задней панели присоединена основными восьмью стяжными болтами и монтажными винтами задняя стенка. Использование данного изобретения позволяет производить замораживание по различным программам. 2 ил.

Изобретение относится к химии азотсодержащих гетероциклических соединений, а именно к производным несимметричных триазинонов, которые могут быть использованы в сельском хозяйстве. Ростстимулирующее средство в качестве основного активного компонента содержит соединение гетероциклического ряда - 4-амино-1,4,5,6-тетрагидро-1,2,4-триазинон-5. Изобретение повышает продуктивность сельскохозяйственных культур и обладает ростстимулирующей активностью. 4 табл.

Изобретение относится к упаковке для вмещения и хранения жидкого вещества, предназначенного для замораживания. Упаковка (1) для вмещения и хранения жидкого вещества (S), предназначенного для замораживания, содержит две герметизирующие стенки (4, 7), соединенные друг с другом для образования камеры (2) вмещения жидкого вещества (S), одно посадочное место (3), изолированное от герметизирующей камеры (2), для вмещения устройства (T) считывания температуры жидкого вещества (S). Герметизирующие стенки (4, 7) содержат две внешние стенки (4), которые образуют внешние габаритные размеры самой упаковки, опорные стенки (7), разграничивающие посадочное место (3) и выполненные с возможностью образования сквозного отверстия через герметизирующую камеру (2), которая имеет две вмещающие области (2а). Внешние стенки (4) образуют край (5), имеющий впускной зазор (6) для жидкого вещества (S). Опорные стенки имеют пару первых сторон (7а) напротив друг друга и пару вторых сторон (7b) напротив друг друга. Изобретение позволяет повысить надежность считывания температурных данных во время контроля и сертификации. 7 з.п. ф-лы, 2 ил.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, акушерству и гинекологии, и может быть использовано при необходимости сохранения и восстановления репродуктивной функции у женщин с онкологическими заболеваниями. Для этого до проведения курса лучевой и/или химиотерапии лапароскопическим доступом осуществляют забор образцов яичниковой ткани из кортикального слоя с фрагментацией их на части по 2-5 мм2. Из полученных образцов одну часть берут на гистологические исследования, а другую помещают в криопробирки и консервируют в две стадии. При этом в качестве криопротектора на первой стадии используют 10-14% раствор диметилсульфоксида, на второй стадии - 20% раствор 2,5 М сахарозы и 29-32% раствор диметилсульфоксида. При проведении аутотрансплантации образцы яичниковой ткани размораживают с использованием среды Kitazata и оценивают их качество путем гистологического исследования. Непосредственно перед трансплантацией лапароскопическим путем проводят биопсию сохраненных яичников с последующим проведением гистологического исследования. При удовлетворительном результате исследования в кортикальном слое каждого яичника формируют ложе и помещают в них от 5 до 10 фрагментированных размороженных образцов. Затем края ложа смыкают, обрабатывают биологически нейтральным клеем и накладывают клеммы для последующего визуального контроля и оценки динамики роста фолликулов трансплантированной ткани с применением визуальной диагностики. Контроль уровня гормонов проводят один раз в месяц до достижения уровня гормонов на момент забора яичниковой ткани для консервации. Способ позволяет сохранить или восстановить репродуктивную функцию у женщин с онкологическими заболеваниями за счет трансплантации декриоконсервированной овариальной ткани в сохраненные яичники, что обеспечивает адекватную васкуляризацию и приживаемость ткани. 3 з.п. ф-лы, 3 табл., 5 ил., 3 пр.

Изобретение относится к пантовому оленеводству, в частности к консервированию варочной пантовой воды непосредственно на мараловодческой ферме в период панторезной компании. Способ заключается в том, что наряду с термообработкой варочной пантовой воды в качестве консерванта используют листья бадана. Предлагаемое изобретение позволяет в период панторезной компании на мараловодческой ферме сохранять для реализации весь объем варочной пантовой воды без изменения ее органолептических характеристик. 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.
Наверх