Способ оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата



Способ оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата
Способ оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата
Способ оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата

 


Владельцы патента RU 2497121:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Нижегородская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО "НижГМА" Минздравсоцразвития России) (RU)

Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть применено для определения содержания пероксида водорода (H2O2) в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата, в частности цисплатина. Способ осуществляют следующим образом: на опухолевые клетки, которые представляют собой клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, воздействуют цисплатином при его концентрации 1,85-3,85 мкг/мл. Измеряют внутриклеточное содержания H2O2 методом лазерной сканирующей микроскопии, определяя интенсивность сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм. Рассчитывают величину отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм (F488/F458), по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода. Для оценки содержания пероксида водорода в динамике осуществляют определение интенсивности сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм и расчет величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода, каждые 60 секунд в течение 30 минут. Способ позволяет выявлять место образования пероксида водорода в клетке, и на основе этого судить о механизмах токсического действия цисплатина на молекулярном уровне, а также позволяет исключить возможную погрешность оценки содержания пероксида водорода, обусловленную неспецифическим накоплением сенсора. 2 з.п. ф-лы, 3 пр., 1 ил.

 

Предлагаемый способ относится к медицине, в частности к онкологии, и может быть применен для определения содержания активных форм кислорода, а именно пероксида водорода (H2O2), в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата, в частности цисплатина.

Химиотерапия является одним из основных методов лечения злокачественных новообразований. Известно, что химиотерапевтические методы, по крайней мере, частично, основаны на чувствительности раковых клеток к окислительному стрессу (1), а активные формы кислорода (АФК), в том числе и H2O2, играют важнейшую роль в реализации цитотоксического действия противоопухолевых препаратов (1, 2).

Известно, что окислительный стресс, вызываемый в тканях цитотоксическими препаратами в ходе химиотерапии, инициирует перекисное окисление липидов и, соответственно, продукцию множества электрофильных альдегидов, атакующих внутриклеточные мишени (3). Другой проблемой современной химиотерапии являются серьезные токсические эффекты в отношении нормальных тканей, в том числе и в отношении жизненно важных органов (4). Понимание механизмов, регулирующих генерацию и метаболизм АФК, является исключительно важным для разработки патогенетически обоснованных методов лечения злокачественных новообразований, в том числе, путем создания более активных и менее токсичных лекарственных средств.

С этой точки зрения особенно актуальны исследования, посвященные изучению природы окислительного стресса, особенностям его развития в злокачественных новообразованиях, возможностям воздействия на оксидантный статус опухоли с целью повышения эффективности терапии. До настоящего времени остается неясным, в каких именно клеточных структурах происходит генерация АФК, и какие именно формы АФК принимают участие в развитии клеточного повреждения, вызванного лекарственным препаратом. Нерешенными остаются вопросы участия конкретных форм АФК (сайт генерации, основные мишени, пути утилизации) в развитии ответа злокачественных новообразований на различные виды противоопухолевых воздействий. Особый интерес для понимания механизмов реализации противоопухолевых эффектов лекарственных препаратов представляет такая форма АФК, как пероксид водорода (H2O2), который является сигнальной молекулой, регулирующей пролиферацию и миграцию как нормальных, так и раковых клеток (5). Несмотря на важную роль, которую играет H2O2 в развитии клеточного повреждения при воздействии противоопухолевых препаратов токсических агентов, места образования накопления и деградации H2O2, остаются недостаточно разъясненными.

Исследования функции H2O2 в клетках осложняются рядом серьезных ограничений вследствие высокой его реактивности, короткого времени жизни и низкой концентрации данной биологической молекулы. Для оценки участия АФК и, в частности, пероксида водорода, в развитии клеточного повреждения предложены различные биохимические и оптические методы:

Так известен способ выявления участия АФК в процессах цисплатин-индуцированного клеточного повреждения на основе ингибирования развития окислительного стресса ловушками АФК (6). Указанный способ является косвенным и не дает возможности прямой оценки количества АФК в клетках, а также не позволяет селективно определить уровень пероксида водорода.

Известны также способы определения продукции АФК в клетках методом выявления хемилюминесценции люминола или люциногена (7, 8).

Основным недостатком данных способов является отсутствие специфичности по отношению к отдельным формам АФК, в частности, к пероксиду водорода. Кроме того, люцигенин способен вызывать дополнительную продукцию супероксид-анион радикала (9).

Наиболее близким по совокупности существенных признаков и техническому результату к предлагаемому способу является способ оценки в динамике содержания пероксида водорода в опухолевых клетках простаты при воздействии на них противоопухолевого препарата цисплатина, который выбран авторами в качестве прототипа.

Данный способ осуществляют путем воздействия противоопухолевого препарата цисплатина на клетки человеческого рака простаты, представляющие собой гормонорезистентные и гормоночувствительные клеточные линии, и измерения внутриклеточного содержания H2O2, при этом измерения внутриклеточного содержания H2O2 осуществляют с использованием специфических флуоресцентных зондов (сенсоров), представляющих собой экзогенно введенные флуорофоры, изменяющие свои свойства при взаимодействии с H2O2 (10).

Способ позволяет определить содержание H2O2 в клетках человеческого рака простаты при воздействии цисплатина в динамике.

Однако данный способ не позволяет выявить клеточные структуры, в которых происходит изменение содержания пероксида водорода и, как следствие, отсутствует возможность судить о механизмах токсического действия цисплатина на молекулярном уровне. Кроме того, недостатком способа является возможная погрешность оценки содержания пероксида водорода, обусловленная неспецифическим накоплением сенсора (11-14).

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата, позволяющего выявить место образования пероксида водорода в клетке, и на основе этого судить о механизмах токсического действия цисплатина на молекулярном уровне, а также позволяет исключить возможную погрешность оценки содержания пероксида водорода, обусловленную неспецифическим накоплением сенсора.

Поставленная задача решается предлагаемым способом оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата, включающем воздействие препарата цисплатина на опухолевые клетки человека и последующее измерение внутриклеточного содержания H2O2 флуоресцентным сенсором, согласно изобретения, что в качестве опухолевых клеток человека берут клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, в качестве флуоресцентного сенсора пероксида водорода используют генетически-кодируемый белок HyPer-cyto, измерение внутриклеточного содержания H2O2 осуществляют методом лазерной сканирующей микроскопии, определяя интенсивность сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, затем рассчитывают величину отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода.

Предпочтительно воздействие на опухолевые клетки человека - клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto осуществляют при концентрации цисплатина 1,85-3,85 мкг/мл.

Предпочтительно для оценки содержания пероксида водорода в динамике осуществляют определение интенсивности сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, и расчет величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода, каждые 60 секунд в течение 30 минут.

Техническим результатом предлагаемого способа является выявление места образования H2O2 в клетке, что позволяет судить о механизмах токсического действия цисплатина на молекулярном уровне и исключение возможной погрешности оценки содержания пероксида водорода, обусловленной неспецифическим накоплением сенсора.

Данный технический результат достигается тем, что в качестве опухолевых клеток человека берут клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, в качестве флуоресцентного сенсора пероксида водорода используют генетически-кодируемый белок HyPer-cyto, измерение внутриклеточного содержания H2O2 осуществляют методом лазерной сканирующей микроскопии, определяя интенсивность сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, затем рассчитывают величину отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода, при этом воздействие на опухолевые клетки осуществляют при концентрации цисплатина 1,85-3,85 мкг/мл, а для оценки пероксида водорода в динамике осуществляют определение интенсивности сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, и расчет величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода, каждые 60 секунд в течение 30 минут.

Данный технический результат обусловлен тем, что в качестве опухолевых клеток человека используют клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, стабильно экспрессирующую генетически-кодируемый сенсор пероксида водорода белок HyPer-cyto, локализованный в цитоплазме клетки. Генетически кодируемый клетками аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto сенсор HyPer-cyto для детекции внутриклеточного H2O2 представляет собой химерный белок, состоящий из двух доменов: чувствительного к H2O2 (регуляторный домен транскрипционного фактора OxyR из Escherichia coli) и флуоресцентного (т.н. круговой пермутант желтого флуоресцентного белка - cpYFP) (15),

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом

На опухолевые клетки, которые представляют собой клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, стабильно экспрессирующую генетически-кодируемый сенсор пероксида водорода HyPer-cyto, воздействуют противоопухолевым препаратом - цисплатином при его концентрации 1,85-3,85 мкг/мл и измеряют внутриклеточное содержания H2O2 методом лазерной сканирующей микроскопии, определяя интенсивность сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, после чего рассчитывают величину отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм (F488/F458), по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода.

Для оценки содержания пероксида водорода в динамике осуществляют определение интенсивности сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, и расчет величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода, каждые 60 секунд в течение 30 минут.

При возрастании уровня H2O2 в клетках происходит пропорциональное уменьшение интенсивности флуоресценции при возбуждении в диапазоне 400-460 нм и увеличение интенсивности флуоресценции при возбуждении в диапазоне 450-510 нм (15).

Предлагаемым способом была осуществлена оценка содержания H2O2 в опухолевых клетках аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, стабильно экспрессирующих генетически-кодируемый сенсор пероксида водорода HyPer-cyto при воздействии на них препарата цисплатина при его концентрации 1,85-3,85 мкг/мл в 8 экспериментах.

Введение цисплатина в указанных концентрациях вызывает повышение содержания H2O2 в клетках линии HeLa Kyoto, экспрессирующих HyPer-cyto непосредственно после добавления препарата в среду инкубации клеток.

Примеры конкретного использования предлагаемого способа

Пример 1. На опухолевые клетки аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, стабильно экспрессирующие генетически-кодируемый сенсор пероксида водорода HyPer-cyto, и находящиеся в среде инкубации, воздействовали противоопухолевым препаратом - цисплатином при его концентрации 3,85 мкг/мл, при этом измерение внутриклеточного содержания H2O2 осуществляли каждые 60 секунд в течение 30 минут методом лазерной сканирующей микроскопии с помощью системы лазерной сканирующей микроскопии LSM 510 на базе инвертированного микроскопа Axiovert 200 М (Carl Zeiss GmbH, Jena, Germany), определяя интенсивность сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 нм и 488 нм, после чего рассчитали величину отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, для каждого измерения.

Зависимость величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм от времени измерения приведена на графике 1 (фиг.1).

При этом график зависимости величины отношения (F488/F458) усреднен по данным об уровне флуоресценции 8 клеток после воздействия цисплатина. Данные представлены в виде средних вычислений. Вычисления проводились с использованием программы формирования изображений LSM 5 (Carl Zeiss) и лицензионного программного обеспечения Excel 5.0.

Динамику содержания пероксида водорода в опухолевых клетках оценивали по изменению величины отношения.

Контакт клеток с цисплатином в данной концентрации вызывает быстрое и относительно кратковременное повышение уровня генерации пероксида водорода в цитоплазме клеток линии HeLa-Kyoto-HyPer-cyto. При этом непосредственно после введения препарата в среду инкубации клеток отмечалось повышение величины отношения F488/F458, которое продолжалось в течение 5 минут.В дальнейшем, через 10 минут после введения цисплатина, концентрация H2O2 вновь падала, о чем свидетельствовало снижение величины отношения F488/F458 до исходных значений.

Пример 2.

Пример 2 осуществляли как пример 1, только воздействовали противоопухолевым препаратом - цисплатином при его концентрации 1,85 мкг/мл.

Зависимость величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм от времени измерения приведена на графике 2 (фиг.1).

При этом график зависимости величины отношения (F488/F458) усреднен по данным об уровне флуоресценции 8 клеток после воздействия цисплатина данной концентрации.

Содержание пероксида водорода в опухолевых клетках оценивали по изменению величины отношения во времени.

При этом наблюдается быстрое повышение содержания перексида водорода в цитоплазме, а затем постепенное снижение в течение 10 минут.

Пример 3.

Пример 3 осуществляли как пример 1, только воздействие противоопухолевым препаратом - цисплатином отсутствовало.

Зависимость величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм от времени измерения приведена на графике 3 (фиг.1).

При этом график зависимости величины отношения F488/F458 усреднен по данным об уровне флуоресценции 9 клеток в контроле.

Содержание пероксида водорода в опухолевых клетках оценивали по изменению величины отношения во времени. В данном случае подъема уровня пероксида не наблюдалось.

Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет оценивать содержание пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата цисплатина, выявляя место образования пероксида водорода в клетке, и на основе этого судить о механизмах токсического действия цисплатина на молекулярном уровне, а также позволяет исключить возможную погрешность оценки содержания пероксида водорода, обусловленную неспецифическим накоплением сенсора.

Понимание механизмов, регулирующих генерацию и метаболизм, является исключительно важным для разработки патогенетически обоснованных методов лечения злокачественных новообразований, в том числе, и для разработки более активных и менее токсичных лекарственных средств. С этой точки зрения особенно актуальны исследования, посвященные изучению природы окислительного стресса, особенностям его развития в злокачественных новообразованиях, возможностям воздействия на оксидантный статус опухоли с целью повышения эффективности терапии.

Источники информации

1. Способ оценки содержания пероксида водорода в опухолевых клетках при воздействии на них противоопухолевого препарата, включающий воздействие препарата цисплатина на опухолевые клетки человека и измерение внутриклеточного содержания пероксида водорода (H2O2) флуоресцентным сенсором, отличающийся тем, что в качестве опухолевых клеток человека берут клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto, в качестве флуоресцентного сенсора пероксида водорода используют генетически - кодируемый белок HyPer-cyto, измерение внутриклеточного содержания H2O2 осуществляют методом лазерной сканирующей микроскопии, определяя интенсивность сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 и 488 нм, затем рассчитывают величину отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что воздействие на опухолевые клетки - клеточную линию аденокарциномы шейки матки человека HeLa Kyoto осуществляют при концентрации цисплатина 1,85-3,85 мкг/мл.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что для оценки содержания пероксида водорода в динамике осуществляют определение интенсивности сигнала флуоресценции при возбуждении сенсора на длинах волн 458 и 488 нм и расчет величины отношения между интенсивностью сигнала флуоресценции на длине волны 488 нм к интенсивности сигнала флуоресценции на длине волны 458 нм, по которой и судят о внутриклеточном содержании пероксида водорода, каждые 60 с в течение 30 мин.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения рода возбудителей бактериемий. Изобретение может быть использовано в бактериологических лабораториях клиник для идентификации рода возбудителей бактериемии.

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии и аллергологии, и может быть использовано для диагностики реактивного изменения специфического иммунитета у детей в условиях химической контаминации.
Изобретение относится к медицине, в частности, к экспериментальной гематологии, а именно к способу оценки развития сингенного перевивного миелобластного лейкоза у мышей линии AKR/JY.

Изобретение относится к области исследования или анализа материалов, в том числе ксенобиотиков, путем разделения образцов материалов на составные части с использованием хроматографии и масс-спектрометрии, а точнее к способам идентификации и определения в живом организме веществ, запрещенных к применению, и может быть использовано например в допинговом контроле лошадей.

Изобретение относится к медицине, в частности к клинической биохимии, цитологии, патоморфологии, и может быть использовано для определения энергетической активности клеток костного мозга (ККМ).

Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной и клинической офтальмологии, аналитической химии и может быть использовано для экспресс-диагностики проникающих и непроникающих травм роговицы при отсутствии клинических данных.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для определения антибактериального потенциала хитозана в отношении стафилококков путем оценки активации хитозановым полимером ферментативного разрушения клеток бактерий.
Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования повышенного риска формирования у ребенка 3-7 лет хронической оториноларингологической патологии.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу снижения предела обнаружения иммунохроматографических методов контроля содержания низкомолекулярных соединений. Способ включает проведение в ходе движения реагентов вдоль иммунохроматографической тест-полоски конкурентного взаимодействия специфических антител с определяемым соединением (антигеном) в пробе и конъюгатом антиген-белок, иммобилизованным на поверхности рабочей мембраны тест-полоски. Выявляют окрашенные комплексы в результате иммобилизации коллоидного маркера в составе комплекса с конъюгатом антиген-белок. При этом первая стадия представляет собой конкурентное взаимодействие свободных специфических антител с антигеном в пробе и с иммобилизованным на поверхности рабочей мембраны конъюгатом антиген-белок. Вторая стадия представляет собой взаимодействие образовавшихся комплексов специфических антител и конъюгата антиген-белок с антивидовыми антителами, меченными коллоидным маркером. Предложенное изобретение позволяет уменьшить количество специфических антител на стадии конкурентного взаимодействия и благодаря этому снизить предел обнаружения. 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к неврологии, в частности к способу прогнозирования тяжести течения эпилепсии. Сущность способа состоит в том, что определяют спектр молекул средней массы в сыворотке крови пациента до начала терапии. При значениях фракции молекул средней массы, определяемых как оптическое поглощение Е при длине волны 230 нм, ниже 0,118 усл.ед. и значении нуклеарно-пептидарного коэффициента, определяемого как отношение оптического поглощения Е при длине волны 230 нм к оптическому поглощению Е при длине волны 254 нм ниже 0,4 прогнозируют тяжелое течение эпилепсии. Использование заявленного способа позволяет повысить точность прогнозирования течения эпилепсии. 1 табл., 2 пр.

Группа изобретений относится к составу реагента датчика-анализатора, адаптированного для содействия определению концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе, к способам определения концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе и к способу нанесения состава реагента датчика анализатора на подложку способом трафаретной печати. Состав реагента датчика-анализатора содержит от 1 мас.% до 4,0 мас.% энзима глюкозоксидазы, от 15 мас.% до 20 мас.% феррицианидного медиатора, от 3,6 мас.% до 6,0 мас.% полимера гидроксиэтилцеллюлозы и от 0,2 мас.% до 1,6 мас.% смектитовой глины. Способ определения концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе включает создание электрохимического датчика-анализатора, который состоит из противоэлектрода и рабочего электрода, области приема жидкости и указанного выше реагента датчика-анализатора, и определение концентрации анализируемого вещества за время менее 35 секунд. Другой способ определения концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе включает прокол пальца у испытуемого человека с целью забора пробы жидкости, размещение пробы жидкости, содержащей одно анализируемое вещество, в датчике-анализаторе, контактирование пробы жидкости с реагентом датчика-анализатора и определение концентрации анализируемого вещества в пробе жидкости. Способ нанесения указанного выше состава реагента датчика-анализатора на подложку способом трафаретной печати включает создание сетчатого трафарета, состоящего из первой части со светочувствительной эмульсией и второй части, выполненной без светочувствительной эмульсии; подачу реагента датчика-анализатора на сетчатый трафарет и контактирование реагента с подложкой через вторую часть сетчатого трафарета. Заявленная группа изобретений обеспечивает повышение стабильности датчика, простое нанесение реагента, сокращение общего времени анализа и повышение сцепления реагента с подложкой. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 11 ил., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии и радиологии, и может найти применение при лечении больных злокачественными опухолями головного мозга. В способе определения показаний к проведению лучевой терапии у опухоленосителей путем предикции ее эффективности, включающем взятие пробы крови, гамма-облучение части этой пробы in vitro, инкубацию облученной и необлученной частей пробы крови, окрашивание ДНК-компонентов обеих частей крови ДНК-специфичным флуоресцентным красителем, определение количества лейкоцитов в облученной части пробы крови, количества лейкоцитов в необлученной части пробы крови, окрашивание всех ДНК-содержащих компонентов крови, определение ИДо - количества ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах крови в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн - количества ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах крови в расчете на один лейкоцит необлученной части пробы, вычисление ИДн/ИДо, берут дополнительную пробу крови, в которую вводят водный раствор, содержащий ионы двухвалентного железа в концентрации 50-75 мг/л в объеме 8-14% от объема пробы крови, затем инкубируют дополнительную пробу крови в течение 15-30 минут, после чего осуществляют гамма-облучение части дополнительной пробы, далее инкубируют облученную и необлученную части дополнительной пробы в течение 2,5-3,5 часов, определяют количество лейкоцитов в облученной и необлученной частях дополнительной пробы, окрашивают все ДНК-содержащие компоненты частей дополнительной пробы и определяют ИДо доп - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах дополнительной пробы в расчете на один лейкоцит облученной части пробы и ИДн доп - количество ДНК во всех ДНК-содержащих компонентах в расчете на один лейкоцит необлученной части дополнительной пробы, после чего вычисляют соотношение ИДн доп/ИДо доп и при ИДн доп/ИДо доп>ИДн/ИДо на 20-35% и ИДН/ИД0>1 считают показанным проведение лучевой терапии. Изобретение обеспечивает повышение эффективности способа при определении показаний к проведению ЛТ у опухоленосителей глиобластом. 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для индивидуализации лечения больных раком тела матки молодого возраста. В опухолевой ткани эндометрия, полученной после операции у женщин репродуктивного возраста, анализируют плоидность клеток опухоли по фазам клеточного цикла. Выявляют соотношение анеуплоидных клеток в S-фазе клеточного цикла к диплоидным клеткам в S-фазе клеточного цикла, выраженное в процентах. При значении соотношения ≤0,8 больным в послеоперационном периоде назначают лучевую терапию. При значении соотношения >0,8 назначают курс полихимиотерапии с последующей сочетанной лучевой терапией. Изобретение обеспечивает объективный критерий, характеризующий состояние опухолевых клеток и позволяющий сделать эффективный выбор последовательности адъювантных воздействий и тем самым увеличить продолжительность жизни больных раком тела матки молодого возраста. 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии и неонатологии, и может быть использовано в качестве одного из диагностических критериев определения степени выраженности гипоксии новорожденных. Сущность способа: выполняют исследование крови методом РАМАН-спектроскопии с записью кривых РАМАН-спектра гемоглобина новорожденного, по которым определяют структурно-функциональные свойства гемоглобина. При этом, если относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах составляет от 0,589 до 0,680, относительная способность гемоглобина связывать лиганды от 0,446 до 0,645, относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,598 до 0,786, сродство гемоглобина к лигандам от 0,661 до 1,099, колебания метиновых мостиков от 1,518 до 1,652, то делают заключение о первой степени церебральной ишемии у новорожденного; если относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах лежит в диапазоне от 0,620 до 0,743, относительная способность гемоглобина связывать лиганды от 0,346 до 0,565, относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,627 до 0,789, сродство гемоглобина к лигандам от 0,659 до 0,998, колебания метиновых мостиков от 1,553 до 1,874, то делают заключение о второй степени церебральной ишемии у новорожденного; если относительное количество оксигемоглобина в эритроцитах лежит в диапазоне от 0,643 до 0,982, относительная способность гемоглобина связывать лиганды от 0,351 до 0,545, относительная способность гемоглобина выделять лиганды от 0,711 до 0,816, сродство гемоглобина к лигандам от 0,614 до 0,894, колебания метиновых мостиков от 1,689 до 1,903, то делают заключение о третьей степени церебральной ишемии у новорожденного. Изобретение обеспечивает высокую точность определения степени выраженности гипоксии новорожденных. 1 табл., 2 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к урологии, и может быть использовано при оценке степени тяжести течения мочекислого уролитиаза. Способ предусматривает следующие стадии: больному мочекислым уролитиазом предварительно в течение 3 суток определяют исходные показатели уровня pH мочи и при условии, что во всех порциях мочи pH<6,2 с помощью цитрата натрия у больного доводят pH мочи до уровня 7,8 с последующим ожиданием самостоятельного снижения pH мочи до исходного уровня; затем при условии дозировки цитрата натрия до 0,06 мг/кг массы тела больного и последующем самостоятельном снижении pH мочи до исходного уровня более чем через 48 часов определяют легкую степень течения мочекислого уролитиаза; при дозировке в пределах 0,07-0,15 мг/кг массы больного и самостоятельном снижении pH мочи до исходного уровня в промежутке от 30 до 48 часов включительно определяют среднюю степень течения мочекислого уролитиаза; а при дозировке от 0,16 мг/кг массы больного и самостоятельном снижении pH мочи до исходного уровня менее чем за 30 часов - тяжелую степень течения мочекислого уролитиаза. Способ позволяет обеспечить обоснованную тактику лечения мочекаменной болезни; повысить информативность показателей, отражающих метаболическое состояние больного мочекислым уролитиазом, которые позволят определить сроки медико-социальной реабилитации и сроки ремиссии. 1 табл.
Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим исследованиям в онкогинекологии, и описывает способ прогнозирования возникновения рецидива рака вульвы, включающий биохимическое исследование крови, причем при контрольных осмотрах больных раком вульвы в эритроцитах крови определяют погруженность белков в липидный матрикс мембран эритроцитов, и при ее значении в пределах 0,21-0,35 прогнозируют появление рецидивов, а при 0,08-0,2 - продолжительное нахождение больных в состоянии ремиссии. Способ обеспечивает возможность индивидуально для каждой больной прогнозировать возникновение рецидива рака вульвы до его клинического проявления на основе биохимического исследования крови, что дает возможность своевременного проведения противоопухолевого лечения и способствует увеличению продолжительности и улучшению качества жизни больных раком вульвы. 1 табл., 3 пр.

Изобретение относится к биологии, экологии, токсикологической и санитарной химии, а именно к способам определения 4-нитроанилина в биологическом материале, и может быть использовано в практике санэпидстанций, химико-токсикологических и экологических лабораторий. Биологический объект, содержащий 4-нитроанилин, двукратно настаивают с органическим изолирующим агентом, которым является 1,4-диоксан, полученные извлечения объединяют, объединенное органическое извлечение упаривают до полного удаления растворителя, остаток неоднократно обрабатывают ацетоном, ацетоновые извлечения отделяют, объединяют, растворитель из объединенного извлечения испаряют, остаток растворяют в ацетонитриле, ацетонитрильный раствор разбавляют буферным раствором с рН 9-10 в соотношении 1:4 по объему, раствор обрабатывают хлоридом калия, экстрагируют этилацетатом, насыщенным водой, полученный экстракт упаривают в токе воздуха при температуре 18-22°С до получения сухого остатка, остаток растворяют в смеси тетрахлорметана и ацетона, взятых в соотношении 9:1 по объему, хроматографируют в колонке с силикагелем L 40/100 мкм с использованием подвижной фазы тетрахлорметан-ацетон в соотношении 9:1 по объему, фракции элюата, содержащие анализируемое вещество, объединяют, элюент испаряют в токе воздуха при температуре 18-22°С до полного удаления растворителя, остаток растворяют в дихлорметане, обрабатывают в течение 20 минут дериватообразующим реагентом, которым является N-трет-бутил-диметилсилил-N-метилтрифторацетамид, в условиях нагревания при температуре 60°С и проводят определение хромато-масс-спектрометрическим методом с применением капиллярной колонки DB-5 MS EVIDEX с неподвижной фазой, представляющей собой 5%-фенил-95%-метилполисилоксан, используя масс-селективный детектор, работающий в режиме электронного удара, начальная температура термостата колонки составляет 70°С, данная температура выдерживается в течение 3 минут, в дальнейшем температура повышается от 70°С до 290°С со скоростью 20°С в минуту, конечная температура колонки выдерживается в течение 16 минут, температура инжектора составляет 250°С, температура квадруполя 150°С, температура интерфейса детектора 300°С, регистрируют интенсивность сигнала, обусловленного заряженными частицами, образующимися при бомбардировке анализируемого вещества, вышедшего из капиллярной колонки и попавшего в источник ионов, ионизирующим пучком электронов с энергией 70 эВ, регистрируют масс-спектр по полному ионному току и вычисляют количество 4-нитроанилина по площади хроматографического пика его триметилсилильного производного. Способ обеспечивает повышение чувствительности. 3 табл., 2 пр.

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к способам дифференциальной диагностики, и может использоваться для дифференциальной диагностики новообразований головного мозга. Способ осуществляют путем исследования методом ИК-спектроскопии образца сыворотки крови пациента в области спектров поглощения 1200-1000 см-1, для этого предварительно готовят образец сыворотки крови пациента, путем высушивания сыворотки крови, измельчения сухого осадка и суспензирования в вазелиновом масле, определяют высоту пика полос поглощения с максимумами 1170; 1165; 1160; 1150; 1140; 1130; 1125; 1100; 1070; 1050 и 1025 см-1 и вычисляют значение отношения высот пиков: отношение высоты пика с максимумом при 1170 см-1 к высоте пика с максимумом при 1150 см-1; отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом при 1160 см-1; отношение высоты пика с максимумом 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1130 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1070 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1150 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1140 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1040 см-1 к высоте пика с максимумом 1070 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1070 см-1 к высоте пика с максимумом 1025 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1050 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1165 см-1 к высоте пика с максимумом 1025 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1100 см-1 к высоте пика с максимумом 1050 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1170 см-1 к высоте пика с максимумом 1160 см-1, отношение высоты пика с максимумом при 1125 см-1 к высоте пика с максимумом 1165 см-1, и на основании полученных значений отношений строят дифференциально-диагностический профиль образца сыворотки крови пациента, для этого на 13 радиальных лучах, исходящих из центра (в системе координат 0:0) с углом между собой 30°, каждый из которых соответствует определенному отношению высот пиков полос поглощения, так: луч 1 соответствует отношению полос поглощения 1165/1160, луч 2 - отношению полос поглощения 1165/1070, луч 3 - отношению полос поглощения 1165/1150, луч 4 - отношению полос поглощения 1165/1140, луч 5 - отношению полос поглощения 1040/1070, луч 6 - отношению полос поглощения 1165/1130, луч 7 - отношению полос поглощения 1070/1025, луч 8 - отношению полос поглощения 1165/1050, луч 9 - отношению полос поглощения 1165/1025, луч 10 - отношению полос поглощения 1100/1050, луч 11 - отношению полос поглощения 1170/1150, луч 12 - отношению полос поглощения 1170/1160, луч 13 - отношению полос поглощения 1125/1165, откладывают вычисленные значения отношений на соответствующем каждому отношению лучу, и, соединяя между собой концы отрезков, получают плоский многоугольник, который сравнивают с многоугольниками, являющимися эталонными дифференциально-диагностическими профилями злокачественных новообразований головного мозга, такими как: анапластическая астроцитома, глиобластома, анапластическая олигодендроастроцитома, и доброкачественных новообразований, такими как: эпендимома, менингиома, аденома гипофиза, невринома, при этом для дифференциально-диагностического профиля анапластической астроцитомы значения 13 отношений составляют: 1 (0,56±0,07), 2 (0,54±0,06), 3 (0,42±0,05), 4 (0,39±0,02), 5 (1,34±0,16), 6 (0,73±0,17), 7 (0,72±0,12), 8 (0,44±0,01), 9 (0,38±0,08), 10 (0,27±0,12), 11 (0,15±0,05), 12 (0,20±0,07), 13 (0,97±0,17), для глиобластомы: 1 (0,83±0,04), 2 (1,16±0,12), 3 (0,62±0,01), 4 (0,63±0,04), 5 (1,26±0,21), 6 (1,26±0,13), 7 (0,73±0,12), 8 (0,96±0,13), 9 (1,13±0,01), 10 (0,27±0,13), 11 (0,34±0,04), 12 (0,34±0,14), 13 (0,57±0,18), для анапластической олигодендроастроцитомы: 1 (0,50±0,02), 2 (0,50±0,05), 3 (0,50±0,02), 4 (0,50±0,02), 5 (1,14±0,03), 6 (1,44±0,04), 7 (0,75±0,01), 8 (0,41±0,06), 9 (0,37±0,03), 10 (0,33±0,04), 11 (0,17±0,04), 12 (0,16±0,03), 13 (0,46±0,03), для эпендимомы: 1 (0,38±0,03), 2 (0,15±0,04), 3 (0,26±0,09), 4 (0,25±0,07), 5 (1,16±0,07), 6 (0,30±0,03), 7 (0,86±0,01), 8 (0,12±0,03), 9 (0,12±0,02), 10 (0,41±0,01), 11 (0,14±0,02), 12 (0,20±0,01), 13 (2,50±0,70), менингиомы: 1 (0,40±0,03), 2 (0,35±0,03), 3 (0,37±0,01), 4 (0,35±0,01), 5 (1,07±0,01), 6 (0,54±0,01), 7 (0,93±0,03), 8 (0,34±0,01), 9 (0,32±0,01), 10 (0,40±0,01), 11 (0,12±0,02), 12 (0,13±0,01), 13 (1,13±0,05), для аденомы гипофиза: 1 (0,45±0,05), 2 (0,34±0,04), 3 (0,41±0,03), 4 (0,56±0,03), 5 (1,05±0,02), 6 (0,60±0,05), 7 (0,94±0,04), 8 (0,30±0,03), 9 (0,32±0,03), 10 (0,48±0,01), 11 (0,12±0,04), 12 (0,13±0,05), 13 (1,05±0,03), для невриномы: 1 (0,53±0,01), 2 (0,35±0,05), 3 (0,48±0,01), 4 (0,53±0,01), 5 (0,85±0,07), 6 (0,90±0,08), 7 (1,28±0,09), 8 (0,40±0,01), 9 (0,45±0,02), 10 (0,52±0,03), 11 (0,05±0,01), 12 (0,04±0,01), 13 (0,73±0,09), и при наличии сходства полученного дифференциально-диагностического профиля пациента с эталонным профилем и совпадении всех 13 значений отношений образца сыворотки крови пациента со значениями отношений сходного эталонного профиля диагностируют у пациента новообразование головного мозга и его морфологический характер. Как видно из полученных результатов, предлагаемый способ позволяет с высокой точностью и информативностью определять не только наличие и вид новообразования головного мозга, но и морфологический характер новообразования. 14 ил.
Наверх