Средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием, на основе экстракта семян лотоса орехоносного (nelumbo nucifera)
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием. Средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием, получают путем экстрагирования семян Лотоса орехоносного 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета при определенном соотношении компонентов. Вышеописанное средство обладает эффективным анксиолитическим и антидепрессивным действием. 3 табл., 2 пр.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к созданию средства на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием.
По данным ВОЗ, тревожно-депрессивные состояния, являясь широко распространенным проявлением стресс-обусловленных заболеваний центральной нервной системы, встречаются более чем у 120 млн. человек во всем мире. По данным ряда исследователей, в зависимости от предъявляемых критериев, тревога как патологическое состояние встречается в 5-25%, а смешанные тревожно-депрессивные расстройства встречаются у 13% населения [3]. Рост тревожных и тревожно-депрессивных состояний, связанных с увеличением стрессогенных воздействий в современном обществе угрожает не только психическому здоровью населения, но и провоцирует также развитие психосоматических заболеваний. Хорошо известно, что практически всегда психические эквиваленты этого психического расстройства сочетаются с соматическими жалобами, чаще всего с нарушениями функции сердечно-сосудистой, иммунной и эндокринной систем. Поэтому поиск путей коррекции указанных патологических состояний является одной из важнейших задач современной психофармакологии. Несмотря на то, что современная медицина научилась справляться с состоянием повышенной тревожности и депрессией, существуют проблемы терапевтической резистентности к известным психотропным препаратам и формирования серьезных осложнений психофармакотерапии аффективных расстройств. Средства растительного происхождения могут сыграть существенную роль в решении этих проблем.
В настоящее время известны следующие анксиолитические и антидепрессивные средства природного происхождения: «Деприм» и «Негрустин» (зверобой продырявленный); «Гипер» (зверобой продырявленный, белокудренник, боярышник, витамин С, витамин В, витамин В6, витамин В12, магния карбонат); «Пассилат» (страстоцвет, боярышник, валериана, витамин B1, витамин В6, витамин B12). Близким к предлагаемому изобретению является средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием из высушенных измельченных надземной и подземной частей видов рода альфредия (Alfredia) или их водных или водно-этанольных экстрактов (патент РФ №2354397). Однако, идентичной совокупности признаков нами не обнаружено в патентной и научно-медицинской литературе.
Задачей настоящего изобретения является создание отечественного средства на растительной основе с анксиолитическим и антидепрессивным действием, обладающего широким спектром терапевтической активности. Впервые установлено, что в качестве средства, обладающего анксиолитическим и антидепрессивным действием, можно использовать водно-спиртовой экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera).
Лотос орехоносный применяют в народной медицине с давних времен. Основные биологически активные вещества экстракта семян лотоса - это флавоноиды (кверцетин, изокверцетин, нелумбозид), лейкоантоцианиды (лейкоцианидин, лейкодельфинидин), алкалоиды (нуцефирин). Плоды лотоса входят в состав более чем двухсот препаратов китайской и индийской медицины. Экстракт семян Лотоса орехоносного обладает гепатопротективным и антиоксидантным действием. Лотос орехоносный обладает мочегонным, жаропонижающим, гипогликемическим видами активности. В литературе отсутствуют данные о применении водно-спиртового экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве средства, обладающего анксиолитическим действием.
Способ приготовления экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), полученного путем водно-спиртового экстрагирования 50%-ным этиловым спиртом при соотношении 3:1 в аппарате Сокслета (согласно протоколу WHO CG-04) [4]:
500 г семян высушивали, измельчали до порошкообразного состояния с размером частиц 0,2 мм и подвергали водно-спиртовому экстрагированию 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета, затем отгоняли спирт в ротационном испарителе, при следующем соотношении компонентов: мас.%
| семена Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) | - 75 |
| спирт этиловый | - 25 |
Выход активного вещества (суммы алкалоидов) экстракта - около 7% вязкого смолообразного вещества.
Решение задачи настоящего изобретения - использование экстракта семян Лотоса орехоносного по предлагаемому назначению - стало возможным благодаря экспериментальному выявлению его новых свойств, а именно способности нормализовать функции ЦНС за счет анксиолитической и антидепрессивной активности.
Пример 1.
Был проведен химический анализ полученного экстракта семян Лотоса орехоносного. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии изучен состав алкалоидов, содержащихся в экстракте. Согласно проведенному нами химическому анализу основным активными компонентами семян Лотоса орехоносного при используемом способе экстрагирования были следующие алкалоиды (в % соотношении):
Дигидроремерин 27,14
Ремерин 21,87
Нуциферин 14,73
Лиензинин 14,25
Изолиензинин 11,02
Неферин 6,21
Процианидин 4,78
Оценку анксиолитической активности экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 92 белых беспородных половозрелых крысах-самках по изучению особенностей поведения в «Суок-тесте». Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.
Суок-тест представляет собой «гибрид» нескольких поведенческих моделей, что позволяет вести регистрацию широкого диапазона поведенческих реакций, от локомоции и исследовательской активности до вегетативных маркеров поведения. Как совершенно новая поведенческая модель, Суок-тест рекомендуется в психофармакологии для скрининга психотропных эффектов препаратов [2]. Об анксиолитической активности экстракта судили по следующим показателям: латентному периоду выхода из центра; времени, проведенном в темном и светлом отсеках Суок-теста; количеству и продолжительности грумингов; числу падений вниз; числу соскальзывания задних лап; числу остановок возле границы между черным и белым отсеком. Дополнительными показателями, характеризующими условно-рефлекторную, эмоциональную и смещенную активность, служили число посещенных сегментов; стойки; число и продолжительность остановок; число исследовательских заглядываний вниз; количество направленных в стороны движений головой при вытянутом положении тела.
Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 50 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Экстракт семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор вводили животным в течение 1, 2, 3, 4 и 6 недель и соответственно подразделяли животных на 1-, 2-, 3-, 4- и 5-ю группы. Каждую группу животных тестировали в Суок-тесте однократно через 30 минут после последнего введения растворов.
Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р≤0,05.
Проведенные нами исследования (Табл.1, 2) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к снижению времени латентности выхода из центра; уменьшению количества соскальзывания лап; уменьшению дефекации, начиная с первой недели внутрижелудочного введения экстракта семян Лотоса орехоносного по сравнению с интактными животными. При этом у животных, получавших физиологический раствор, происходит повышение уровня тревожности в ответ на процедуру внутрижелудочного введения (манипуляции с животными, взятие в руки), особенно на первой и второй неделях введения физиологического раствора. Это проявляется в снижение двигательной и исследовательской активности, повышении времени груминга и длительности остановок, появлении падений и особенно в светлом отсеке.
| Таблица 1 | ||||||
| Динамика показателей поведенческих реакций в Суок-тесте при введении экстракта семян Лотоса орехоносного | ||||||
| 1 неделя | 2 неделя | 3 неделя | 4 неделя | 6 неделя | контроль | |
| Латентность выхода, сек | 3,9±0,56 * | 2,7±0,47 * | 4,0±0,60 * | 18,9±11,48 | 24,5±18,83 | 11,8±3,05 |
| Длительность остановки, сек, ПО/О | 61,2±27,45 | 34,5±9,81 | 33,67±11,38 | 11,5±7,64 | 62,0±18,94 | 20,1±10,23 |
| Горизонтальная активность | 14,0±5,01 | 16,5±3,39 | 16,22±4,99# | 10,3±5,66 ▲ | 12,75±4,46 | 24,3±4,73 |
| 20,6±5,12 | 26,5±5,83 | 14,3±3,95 # | 40,0±1,17 | 28,4±7,29 | ||
| Вертикальная активность | 0 | 0,3±0,15 | 0,22±0,22 | 0,1±0,1 | 0 | 0,8±0,36 |
| 0,3±0,21 | 0,3±0,15 | 0 | 0 | 0,6±0,44 | ||
| Остановки | 1,9±0,70 | 2,4±0,65 | 1,7±0,48# | 0,8±0,61 ▲ ▲ | 1,8±0,32 | 2,8±0,95 |
| 3,0±0,76 | 2,3±0,68 | 3,1±0,95 | 3,2±0,61 | 2,4±1,00 | ||
| Заглядывания вниз | 3,3±0,99 | 5,3±1,18 | 5,4±1,95 | 3,6±1,38 | 5,2±1,33 | 6,9±1,75 |
| 4,5±1,44 | 4,7±1,22 | 5,1±1,17 | 4,4±1,40 | 6,4±1,55 | ||
| Ориентация | 0,4±0,31 *▲ | 3,1±0,71 о | 1,22±0,36 | 0,8±0,42 * | 0,6±0,31 ** | 2,4±0,64 |
| 3,5±1,10 | 4,04-1,02 | 1,33±0,47 | 1,5±0,56 | 2,2±0,78 | ||
| Проведенное время в отсеке, сек | 64,9±18,76 ** | 139,3±29,64 | 117,2±24,41 # | 69,6±35,93 | 117,8±28,52 | 160,3±28,38 |
| 134,7±31,06 | 127,9±28,75 | 147,4±32,76 | 152,7±40,03 | 120,2±29,32 | ||
| Смещенная активность, груминг, сек | 12,0±6,41 | 11,5±4,99 | 18,56±6,44 | 3,0±2,79 | 4,42±4,15 | 4,3±2,08 |
| 9,8±5,05 | 7,0±3,81 | 15,6±6,56 | 22,4±17,7 | 5,8±3,88 | ||
| Дефекация, количество болюсов | 0,3±0,21 | 1,4±0,99 | 0,44±0,34 | 0,3±0,21 | 0,25±0,18 | 0,6±0,27 |
| 0 | 0,6±0,34 | 0,1±0,11 | 1,3±0,49 | 0,1±0,10 | ||
| Продолжительность остановок, сек | 21,0±9,9 | 51,3±7,89 | 60,6±24,14 | 34,0±24,65 | 58,7±24,12 | 41,8±12,38 |
| 31,8±9,08 | 32,1±13,93 | 58,0±21,97 | 87,4±29,32 | 26,1±11,47 | ||
| Падения | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0,1±0,10 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | |
| Соскальзывания лап | 0,7±0,42 | 0,6±0,29 ▲ | 1,2±0,32 | 0,6±0,34 | 1,6±0,45 | 1,2±0,36 |
| 1,5±0,56 | 0,5±0,22 | 1,0±0,44 | 1,2±0,39 | 2,0±0,60 |
| Таблица 2 | ||||||
| Динамика показателей поведенческих реакций в Суок-тесте при введении физиологического раствора | ||||||
| 1 неделя | 2 неделя | 3 неделя | 4 неделя | 6 неделя | контроль | |
| Латентность выхода, сек | 6,0±1,76 | 3,5±0,67 * | 23,0±9,81 | 5,3±1,36 | 11,8±4,97 | 11,8±3,05 |
| Длительность остановки, сек, ПО/О | 22,6±1,01 | 28,1±10,42 | 27,6±22,26 | 22,3±8,72 | 94,4±23,21 * | 20,1±10,23 |
| Горизонтальная активность | 22,0±10,52 | 22,3±4,41 | 4,4±3,97 ** | 9,5±3,28 * | 11,9±5,73 * | 24,3±4,73 |
| 22,2±9,64 | 14,3±3,24 | 3,8±2,85 ** | 27,4±5,53 | 28,4±7,29 | ||
| Вертикальная активность | 0 | 0,6±0,27 | 0 | 0,3±0,21 | 0,3±0,15 | 0,8±0,36 |
| 0,8±0,62 | 0,5±0,30 | 0 | 0,3±0,30 | 0,6±0,44 | ||
| Остановки | 2,66±1,01 | 2,3±0,62 | 0,2±0,13 ** | 0 | 1,6±0,65 | 2,8±0,95 |
| 4,2±1,44 | 1,5±0,82 | 1,3±0,58 | 4,4±0,73 | 2,4±1,00 | ||
| Заглядывания вниз | 2,4±0,87 ** | 7,6±1,76 | 2,9±0,95 * | 4,3±0,97 | 7,7±1,32 | 6,9±1,75 |
| 4,9±2,74 | 3,6±0,73 | 0,7±0,37 | 6,9±1,38 | 6,4±1,55 | ||
| Ориентация | 1,7±0,69 | 2,2±0,55 | 1,1±0,48 | 1,2±0,42 | 2,4±0,92 | 2,4±0,64 |
| 3,4±1,19 | 4,5±0,56 | 0,4±0,34 | 6,3±1,4 | 2,2±0,78 | ||
| Проведенное время в отсеке, сек | 116,7±37,47 | 156,2±30,55 | 38,4±27,36 ** | 23,2±7,32 ** | 115,9±26,85 | 160,3±28,38 |
| 108,1±42,48 | 116,8±32,83 | 21,33±21,33 | 215,7±26,64 | 120,2±29,32 | ||
| Смещенная активность, груминг, сек | 7,9±7,28 | 4,51±3,01 | 3,7±2,56 | 0 | 7,0±3,42 | 4,3±2,08 |
| 4,88,±3,23 | 4,1±4,10 | 0 | 9,6±4,74 | 5,8±3,88 | ||
| Дефекация, количество болюсов | 0,7±0,37 | 0,5±0,27 | 1,6±1,16 | 0,3±0,28 | 1,4±0,75 * | 0,6±0,27 |
| 0,2±0,16 | 0,6±0,49 | 0 | 0,7±0,42 | 0,1±0,10 | ||
| 27,1±16,23 | 41,4±13,32 | 29,0±26,85 | 0 | 29,2±13,24 | 41,8±12,38 | |
| Продолжительность остановок, сек | 22,0±7,76 | 31,8±19,44 | 71,0±36,11 | 47,8±12,47 | 26,1±11,47 | |
| Падения | 0 | 0,2±0,13 | 0 | 0 | 0,2±0,13 | 0,1±0,10 |
| 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | ||
| Соскальзывания лап | 1,1±0,54 | 2,3±0,58 # | 1,1±0,46 | 1,4±0,39 | 3,3±0,75 * | 1,2±0,36 |
| 1,5±0,65 | 0,8±0,33 | 0 | 2,7±0,68 | 2,0±0,60 | ||
| * - по сравнению с контролем; ▲ - между черным и белым отсеком; о - по сравнению с предыдущей группой; # - между лотос и физ. раствор |
Тогда как экстракт семян Лотоса орехоносного, проявляет анксиолитическое действие, при этом поведенческие реакции изменяются не только относительно реакций животных, получающих физиологический раствор, но и относительно интактных крыс, что указывает на эффективность экстракта семян Лотоса орехоносного в качестве анксиолитического средства.
Пример 2.
Оценку антидепрессивного действия экстракта семян Лотоса орехоносного проводили на 24 белых беспородных половозрелых крысах-самках в тесте «Порсолт» (плавательный тест «отчаяния»). Животные содержались в виварии при свободном доступе к воде и пищи.
Тест «Порсолт», рекомендуемый при проведении психофармакологических исследований с целью выявления антидепрессивных свойств фармакологических веществ [1]. Установка представляет собой стеклянный цилиндр d=20 см и высотой 40 см, на 2/3 заполненный водой (t=25±1°С). Животное помещаются в цилиндр и регистрируются следующие параметры: время активного и пассивного (дрейф+полная неподвижность) плавания, латентный период (ЛП) до проявления первой иммобильности и первого движения, продолжительность иммобильности. Время наблюдения: 3 мин.
Раствор экстракта семян Лотоса орехоносного (0,5%-ный), приготовленный на физиологическом растворе, вводили животным внутрижелудочно с помощью зонда в дозе 100 мг/кг массы тела. Животные были разделены на три группы: I - интактный контроль, II - животные, получавшие внутрижелудочно физиологический раствор, III - животные, получавшие внутрижелудочно раствор экстракта семян Лотоса орехоносного. Животные получали раствор экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологический раствор ежедневно в одно и то же время с 10 до 12 часов. Продолжительность введения экстракта семян Лотоса орехоносного и физиологического раствора составила 8 недель. Каждую группу животных тестировали в тесте «Порсолт» однократно через 30 минут после последнего введения растворов.
Полученные экспериментальные данные обрабатывали статистически с использованием t критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони. Различия считали достоверными при р≤0,05.
Проведенные нами исследования (Табл. 3) показали, что экстракт семян Лотоса орехоносного приводит к достоверному снижению латентного периода до первого движения и первой иммобильности, а также изменению соотношения «активное/пассивное плавание» за счет увеличения активного компонента по сравнению с интактными животными, что говорит о повышении на фоне введения экстракта семян Лотоса орехоносного физической выносливости в «аверсивной» водной среде и о проявлении им выраженных антидепрессивных свойств.
| Таблица 3 | |||||
| Изучение антидепрессивной активности экстракта семян Лотоса орехоносного в тесте «Порсолт» | |||||
| Группы | ЛП до 1-го движения, М±m, с | ЛП до 1-ой иммобильности, М±m, с | Время активного плавания, М±m, с | Время пассивного плавания, М±m, с | Иммобильность, М±m, с |
| Контроль 1 | 5,2±0,6 | 59,2±6,2 | 120,3±3,5 | 41,3±2,7 | 16,7±1,3 |
| Контроль 2 (физ. р-р) | 16,4±2,1Δ | 60,5±5,9 | 117,4±4,3 | 60,0±6,4Δ | 18,8±1,2 |
| Семена Nelumbo nucifera (100 мг/кг) | 7,8±1,5* | 87,8±9,4* | 131,2±4,3* | 27,4±3,5* | 21,4±1,9 |
| Обозначения: Δ и * - р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем 1 и 2 соответственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони) |
Таким образом, как показывают полученные нами экспериментальные данные, экстракт семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) обладает выраженным анксиолитическим и антидепрессивным действием и может быть рассмотрен как основа для создания нового лекарственного препарата с последующим применением в клинической практике.
Литература
1. Андреева Н.И. Методические указания по изучению антидепрессивной активности фармакологических веществ / Н.И. Андреева // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / Под общей редакцией чл.-корр. РАМН, профессора Р.У. Хабриева. - М.: ОАО «Издательство «Медицина», 2005. - С.244-252.
2. Калуев А.В. Суок-тест - новая поведенческая модель тревоги / А.В. Калуев, П. Туохимаа // Нейронауки. - 2005. - №1. - С.17-23.
3. Santana L. A review of studies concerning treatment adherence of patients with anxiety disorders / L. Santana, L.F. Fontenelle // Patient Prefer Adherence. - 2011. - №5. - P.427-439.
4. WHO: protocol CG-04. Preparation of alcoholic extract for bioassay and phytochemical studies (APJF/IP, 1001 A). Geneva, World Health Organization, 1983.
Средство, обладающее анксиолитическим и антидепрессивным действием, на основе экстракта семян Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera), характеризующееся тем, что он получен путем водно-спиртового экстрагирования 50%-ным этиловым спиртом в аппарате Сокслета при следующем соотношении компонентов, мас.%:
| семена Лотоса орехоносного (Nelumbo nucifera) | 75 |
| спирт этиловый | 25, |
выход активного экстракта - около 7% вязкого смолообразного вещества.
