Способ определения содержания титана, алюминия в тканях сердечно-сосудистой системы


 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2498304:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Национальный исследовательский Томский государственный университет" (RU)

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включающий помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 час при 75°С, последующее приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 часов при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 часа при температуре 110°С, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 часов при 20°С с последующим нагревом в течение 6 часов при 75°С и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой, при следующем соотношении компонентов, мас.%: НNО3 35, Н2О2 5, HF 13,3, деионизированная вода - остальное. 1 пр., 1 таб.

 

Изобретение относится к области аналитической химии, а конкретно к химической пробоподготовке, предшествующей анализу, требующему полной деструкции составляющей матрицы биоминеральных объектов, и может быть использовано:

- в медицине, при исследовании болезней, связанных с нарушениями элементного статуса человеческого организма.

- в фармакологии, косметологии и пищевой промышленности для предупреждения ятрогенных болезней, вызванных различными лекарственными, косметическими и пищевыми наполнителями, в первую очередь оксидом титана и неорганическими соединениями алюминия, входящими в состав лекарственных, косметических препаратов и пищевых добавок в качестве отбеливателя.

- в экологии человека, для изучения взаимоотношений человека со средой обитания, в которой он постоянно подвергается нагрузке минералами и элементами пероральным ингаляционным и перкутанным путями проникновения.

При исследовании элементного состава тканей растений и животных в настоящее время во всем мире применяются такие методы, как атомно-эмиссионная спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (АЭС-ИСП), масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой (МС-ИСП), несколько реже атомно-абсорбционная спектрометрия с атомизацией в пламени (ААС-П) и в электротермическом атомизаторе (ААС-ЭТА).

Основное требование вышеперечисленных методов - необходимость переведения анализируемого образца в раствор с полным растворением пробы при минимальном уровне загрязнения получаемого раствора и исключение потерь определяемых элементов. Авторами данной заявки доказывается, что в этапе растворения исследуемых тканей заложен повсеместный порок элементных исследований, поскольку до настоящего времени не было известно о минеральных включениях в тканях, таких как рутил, анатаз, ильменит, алюмосиликаты, кварц и др. Эти минералы часто негативно влияют на окружающие ткани. Как показали авторские исследования, распределение микроэлементов в организме человека является минералозависимым, особенно в патогенно измененных тканях. Поэтому для правильной оценки элементного состава тканей человеческого организма методами МС-ИСП, АЭС-ИСП и др. необходимо растворение вышеперечисленных минералов. Ранее для растворения образцов тканей повсеместно применялась азотная кислота и перекись водорода. Довольно редко к этим двум реагентам присоединяют соляную или хлорную кислоты. Однако широко известно, что для того, чтобы растворить кварц, оксиды титана и алюмосиликаты необходимо применение плавиковой кислоты (Орлова В.А. Аналитические автоклавы. Автоклавная пробоподготовка в химическом анализе. - М.: ЦИНАО, 2003, 104 с.)

Существует значительное количество литературы и методик, посвященных мокрому озолению тканей человеческого организма (в частности сердечно-сосудистой системы) для различных методов элементного анализа. Все они включают многоэтапную обработку проб с визуальным контролем протекания каждого этапа и использования ряда реагентов, однако плавиковая кислота в число этих реагентов не входит никогда.

Известна также статья Т. Minami, S. Tohno, М. Utsumi, Y. Moriwake. M. - O. Yamada, Y. Tohno / Selective Accumulations of Aluminium in Five Human Arteries// Biological Trace Element Research 2001. - V.79. - P.29-38.

Растворение тканей в этой работе производилось следующим образом: к высушенной ткани добавлялся 1 мл концентрированной азотной кислоты и образец нагревался при 100°C в течение 2 часов, затем добавлялось 0,5 мл концентрированной хлорной кислоты и нагревание продолжалось при той же температуре в течение еще 2 часов. Причем этап растворения пробы с добавлением хлорной кислоты отмечается специфическим для измерения металлов. После охлаждения все образцы были разбавлены до 10 мл ультрачистой водой. На этом этапе растворение ткани было завершено.

Недостатком данного способа растворения тканей является то обстоятельство, что в нем не учитывается присутствие в тканях минеральных форм. Для растворения минералов необходим дифференцированный подход к разным группам минералов. Если для растворения сульфидов, фосфатов кальция или оксидов железа достаточно концентрированной азотной кислоты, то для растворения оксидов титана, кремния, алюмосиликатов необходима плавиковая кислота.

Суть изобретения сводится к тому, что без применения для растворения тканей сердечно-сосудистой системы плавиковой кислоты невозможно получение точных содержаний таких элементов, как Ti, Al. Неправильное определение содержаний титана и алюминия в тканях человеческого организма привело к бесконтрольному повсеместному использованию оксидов титана и неорганических соединений алюминия в пищевой, фармакологической и косметической промышленности, что не может негативно не сказываться на здоровье людей.

Задачей данного изобретения является способ полного определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, А1 с целью растворения не только органической матрицы образцов, но и алюминий-, и титансодержащих минералов патогенного происхождения для последующего исследования методом МС-ИСП.

Поставленная задача решается тем, что способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включает помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 часов при 75°C, последующие приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 часов при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 часа при температуре 110°C, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 часов при 20°C с последующим нагревом в течение 6 часов при 75°C и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой, при следующем соотношении компонентов, мас.%:

HNO3 35
H2O2 5
HF 13,3
деионизированная вода остальное

Пример осуществления изобретения приведен ниже.

Пример 1:

Исследовались 10 образцов тканей кардиоздоровых людей, умерших от внезапной смерти в возрасте от 2 до 60 лет. Все образцы были разделены на две равноценных половины с массой около 0,05 г. Одна часть растворялась с помощью HNO3 и H2O2 без применения HF. Другая дополнительно растворялась плавиковой кислотой, после чего обе части анализировались на приборе Agilent Tehnologies 7500 Series ISP-MS. В качестве внутреннего стандарта брали индий. Полученные результаты показали, что образцы тканей, растворенных с добавлением HF, показывают более высокие значения Ti и AL.

Растворение ткани с помощью плавиковой кислоты осуществлялась следующим образом.

Навеску ткани массой около 0,05 г помещают в тефлоновые стаканчики, приливают 2 мл концентрированной HNO3, выдерживают 3 часа при 75°C, добавляют 1 мл H2O2 и выдерживают еще два часа, затем вновь добавляют 1 мл концентрированной HNO3 и два часа выдерживают при 110°C, после чего добавляют 2 мл концентрированной HF и оставляют на 18 часов при температуре 20°C, греют 6 часов при 75°C в микроволновой печи, выпаривают и обмывают стаканчики 5 мл 15% HNO3 со следами HF и добавляют смыв в исследуемый раствор.

Результаты отражены в таблице 1. Как видно из полученных данных, после обработки плавиковой кислотой количественные оценки титана и алюминия возрастают в несколько раз даже в тканях здоровых людей.

Таблица 1
Количественное содержание титана и алюминия по данным масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой
TI ppm Al ppm
без HF CHF Без HF С HF
1 7,04 17,44 68,14 131,73
2 7,01 15,61 59,36 293,64
3 10,10 17,81 73,85 129,18
4 4,22 23,10 76,66 1071,42
5 7,42 21,08 121,15 170,60
6 7,39 18,83 21,44 101,80
7 7,22 19,45 47,63 141,77
8 5,30 24,08 121,40 193,66
9 6,59 16,65 46,54 140,08
10 10,67 17,26 89,32 121,74

Способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включающий помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 ч при 75°С, последующие приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 ч при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 ч при температуре 110°С, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 ч при 20°С с последующим нагревом в течение 6 ч при 75°С и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой при следующем соотношении компонентов, мас.%:

HNO 35
H2O2 5
F 13,3
деионизированная вода остальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине и касается способа лабораторной диагностики развития инфекции у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) в состоянии индуцированной нейтропении.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выбора тактики лечения деструктивной формы острого панкреатита. В сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина (ПКТ) с помощью количественного иммуноферментного анализа.

Изобретение относится к медицине и предназначено для повышения проницаемости мембран гладкомышечных клеток тонкого кишечника. Проводят обработку клеток в одной пробе пороформирующим гемолизином HlyII из Bacillus cereus в концентрации 3-5 мкг/мл.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы, включающий определение вентиляционной функции легких и исследование мононуклеаров, выделенных из венозной крови больного, с последующим расчетом индекса, характеризующего воспалительный процесс.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом. Сущность способа: у больных гриппом определяют возрастную группу, срок наблюдения и значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах.
Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, может быть использовано для прогнозирования развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза. Сущность способа: проводят генотипирование полиморфного локуса - 248G>A гена Bcl-2 ассоциированного X белка (ВАХ - 248G>A).

Настоящее изобретение относится к медицине, в частности к медицинским, химико-токсикологическим исследованиям, и описывает способ подготовки пробы для газохроматографического определения тиодигликолевой кислоты в моче, включающий дериватизацию, извлечение тиодигликолевой кислоты из пробы этилацетатом, где дериватизацию тиодигликолевой кислоты проводят метанолом в присутствии концентрированной серной кислоты при температуре 80°C в течение 15 минут, а извлечение тиодигликолевой кислоты из пробы проводят этилацетатом путем жидкостно-жидкостной микроэкстракции в течение 5 минут, при этом все операции выполняют в одной емкости.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ определения инфицированности пациента вирусом клещевого энцефалита, основанный на обнаружении РНК вируса методом РТ - ПЦР.
Изобретение относится к медицине и предназначено для прогнозирования ответа на проводимую химиотерапию хронического лимфолейкоза. Проводят генотипирование полиморфного локуса 9360Т гена фактора роста эндотелия сосудов.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ). Сущность способа состоит в том, что проводят гистологическое исследование фрагментов ткани удаленного легкого с главным, промежуточным или сегментарным бронхами, находящимися на расстоянии 4-5 см от опухоли, в респираторном эпителии бронхов определяют варианты дисрегенераторных изменений: базальноклеточную гиперплазию (БКГ), плоскоклеточную метаплазию (ПМ) и при наличии в смежном с опухолью эпителии бронхов сочетания базальноклеточной гиперплазии с плоскоклеточной метаплазией (БКГ+ПМ+) прогнозируют риск развития рецидива немелкоклеточного рака легкого. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и информативность прогнозирования возникновения рецидивов при НМРЛ. 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения. Для этого до начала лечения метопрололом больному в один и тот же день проводят 2 теста с физической нагрузкой до достижения пороговой мощности нагрузки по одинаковому протоколу, исходно и через 2 часа после приема разовой дозы метопролола 50 мг. Если при выявлении при 2-й нагрузке по сравнению с 1-й нагрузкой увеличения на 120 секунд и более интервала времени от начала нагрузки до появления приступа стенокардии и/или снижения на электрокардиограмме сегмента ST ишемического типа глубиной не менее 1 мм, риск развития нарушения толерантности к глюкозе считают высоким. В таком случае через 4-5 недель регулярного приема метопролола проводят тест на толерантность к глюкозе. При выявлении нарушения толерантности к глюкозе лечение метопрололом прекращают. Если при 2-й нагрузке по сравнению с 1-й нагрузкой интервал времени до появления приступа стенокардии и/или снижения на электрокардиограмме сегмента ST ишемического типа глубиной не менее 1 мм увеличивается менее чем на 120 секунд, риск развития нарушения толерантности к глюкозе считают незначительным. В таком случае лечение метопрололом продолжают без дополнительного проведения теста на толерантность к глюкозе. Способ обеспечивает профилактику нарушений углеводного обмена у заявленной группы больных на фоне приема метопролола и возможность своевременной коррекции терапии за счет выявления компенсаторного увеличения использования глюкозы в условиях инсулинорезистентности и сниженной доступности свободных жирных кислот для обеспечения энергетических потребностей миокарда. 4 пр.

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации определяют количество эритроцитов, окрашенных 0,1% раствором метиленового синего, выполняющего роль переносчика электронов, и содержание метгемоглобина в эритроцитах. Если при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 будет наблюдаться увеличение числа окрашенных эритроцитов до 12,0±0,9%, а увеличение метгемоглобина до 1,5±0,42%, то оценивают нарушение восстановления метгемоглобина и угрозу насыщения гемоглобина эритроцитов кислородом. 2 ил.

Изобретение относится к медицине и касается способа персонифицированного подбора антиагрегантых препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, включающего забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования крови, разделение ее на пробы и введение в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°C и с индуктором агрегации тромбоцитов. Изобретение обеспечивает повышение точности подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении. 2 пр., 5 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной диагностике. Предложен способ определения чувствительности опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ у пациентов с раком легкого в цитологическом опухолевом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при помощи праймеров для выявления 8 делеций в 19 экзоне гена EGFR и замены L858R гена EGFR в 21 экзоне. При выявлении любой из этих мутаций определяют чувствительность опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ как положительную и назначают терапию гефитинибом или эрлотинибом. Способ обладает высокой информативностью и чувствительностью, прост в исполнении и интерпретации результата. 2 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа. При значениях миелопероксидазы в пределах 0,18-0,2 усл.ед. диагностируют гнойный менингит, а при значениях 0,059-0,061 усл.ед. - серозный менингит. Показатель активности цитохромоксидазы в пределах 0,49-0,57 усл.ед. свидетельствует о гнойном менингите, в пределах 0,186-0,174 усл.ед. - о серозном менингите. Показатель активности кислой фосфатазы в ликворе в пределах 0,14-0,18 усл.ед. следует расценивать как гнойный менингит, а в пределах 0,069-0,071 усл.ед. - как серозный менингит. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце. При наличии липолитической активности наблюдают матовые ореолы вокруг лунки, при отсутствии липолитической активности среда вокруг лунки остается прозрачной. Использование заявленного способа позволяет просто, доступно и экономично определить липолитическую активность субклеточных фракций бактерий. 3 з.п. ф-лы, 6 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада. В буккальных эпителиоцитах определяют предрасполагающие и протективные генотипы: маркер Arg399Gln гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Gln, протективный генотип Arg/Arg; маркер Arg194Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Trp; маркер Glu185Gln гена NBS1 - предрасполагающий генотип Glu/Gln, протективный генотип Glu/Glu; маркер Ser326Cys гена hOGG1 - предрасполагающий генотип Ser/Cys; маркер Asp1853Asn гена ATM - предрасполагающий генотип Asp/Asp, протективный генотип Asp/Asn; маркер Asp1104His гена XPG - протективный генотип His/His. При преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона и о прогнозировании накопления микроядер и протрузий. При количественном преобладании протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона и о прогнозировании устойчивости к накоплению микроядер и протрузий. Предложенный способ позволяет проводить оценку генетически детерминированной предрасположенности к формированию повышенного уровня микроядер и протрузий еще до воздействия радиационного фактора. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к определению ферментов в костной и хрящевой тканях при изучении регенераторных процессов, и описывает способ определения щелочной фосфатазы в костной и хрящевой тканях, включающий подготовку образцов исследуемых тканей и гистохимическое исследование срезов полученного материала, где образцы исследуемых костной и хрящевой тканей выдерживают в забуференном растворе нейтрального 10% формалина в течение 1 суток при температуре +4°C, затем обрабатывают в 0,1 М растворе фосфатного буфера сначала в 4 смены по 2 часа каждая, а после в 9 смен по часу с добавлением сахарозы постепенно возрастающей концентрации, после чего исследуемый материал погружают в реагент Tissue-Tek O.C.T. Compound, замораживают при -35°C, готовят срезы и визуально определяют наличие щелочной фосфатазы. Способ прост в исполнении, его возможно использовать для определении щелочной фосфатазы в образцах ткани в каждом учреждении медицинского профиля и научной лаборатории без использования специального оборудования. 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к педиатрии и онкогематологии и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений функции миокарда у детей с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) на разных этапах полихимиотерапии (ПХТ). Для чего проводят исследование в крови N-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида (NT-pro-BNP), прогормона предсердного натрийуретического пептида (pro-ANP), белка, связывающего жирные кислоты (БСЖК), ферритина, гепсидина, гомоцистеин, неоптерина до начала ПХТ и уровня ферритина 2 после проведения индукции ремиссии. Выявленные значения показателей вышеперечисленных параметров подставляют в уравнения для расчета изменения показателей ЭКГ, ИЖМ, В(Е-Еа), NT-pro-BNP, ФВ после окончания интенсивной ПХТ. Рассчитывают общий коэффициент К по следующей формуле: К=ЭКГ3×ИЖМ3×В(Е-Еа)3×NT-pro-BNP3×ФВ3. При значениях коэффициента К>0,17 прогнозируют развитие кардиальных осложнений. Изобретение позволяет выбрать тактику сопроводительной терапии для коррекции и предупреждения нарушений функции миокарда у детей острым лимфобластным лейкозом. 6 табл.
Наверх