Способ оценки активности туберкулеза у детей и подростков


 


Владельцы патента RU 2498311:

МИНЗДРАВСОЦРАЗВИТИЯ РОССИИ Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования"Омская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГОУ ВПО ОмГМА Минздравсоцразвития России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, может быть использовано для диагностики скрытой активности туберкулеза у детей и подростков. Для этого проводят оценку состояния специфического клеточного иммунитета с помощью модифицированной реакции бластной трансформации лимфоцитов (мРБТЛ) с туберкулином (ППД-Л) и определение уровня интерферона-гамма (ИФН-γ) с ППД-Л с использованием малого объема (200 мкл) цельной крови и 4-х разведении антигена ППД-Л. При показателях индекса стимуляции клеточного ответа более 3,2 и ИФН-γ с ППД-Л более 7,0 диагностируют активный туберкулезный процесс, а при показателе мРБТЛ с ППД-Л более 3,2 и ИФН-γ с ППД-Л менее 7,0 - не активную туберкулезную инфекцию. Использование данного способа позволяет повысить специфичность диагностики туберкулезной инфекции, а также оценить эффективность проводимого лечения. 2 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к медицине, преимущественно к фтизиатрии, может быть использовано для диагностики первичного инфицирования, скрытой активности туберкулеза у детей и оценки эффективности специфической терапии.

Известен иммунологический метод определения противотуберкулезных антител - иммуноферментный анализ (ИФА). В диагностике туберкулеза серологические методы, в том числе ИФА, не оправдали всех возлагавшихся надежд, поскольку не удалось обнаружить специфичных антигенов M.tuberculosis, на которые у большинства больных вырабатываются соответствующие антитела. Существующие иммуноферментные тест-системы обладают специфичностью на уровне 90-94% (6-10% ложноположительных результатов у здоровых лиц или больных нетуберкулезными заболеваниями), тогда как чувствительность (число положительных результатов у больных активным туберкулезом) составляет, в среднем, около 70%. Поэтому говорить о самостоятельном значении данного метода для дифференциальной диагностики туберкулеза органов дыхания пока не представляется возможным (Диагностика и химиотерапия туберкулеза органов дыхания. Пособие для врачей. - М.: «Медицина и жизнь», 2003. - 48 с.), также как и для дифференциальной диагностики инфицирования микобактериями туберкулеза и парааллергии, чувствительность ИФА у инфицированных составляет 23,2% (Некрасов С.В. Диагностическая и прогностическая значимость определения противотуберкулезных антител при инфицировании и заболевании туберкулезом легких у детей и взрослых: Автореф.дис. … канд.мед.наук. - М., 1999. - 23 с.).

Известен иммунологический метод определения уровня интерферона-гамма (ИФН-γ) с помощью ИФА. Роль ИФН-γ в противотуберкулезном иммунитете подтверждается тяжелым течением микобактериальных инфекций у мышей - нокаутов по гену ИФН-γ (Dalton D.K., Pitts-Meek S., Keshav S. et al. Multiple defects of immune cell function in mice with disrupted interferon-gamma genes // Science. 1993. - Vol.259, №5102. - P.1739-1742) и развитием тяжелых микобактериозов с летальным исходом у людей с генетически обусловленным полным или частичным дефицитом рецептора к ИФН-γ (Jouanguy E., Doffinger R., Dupuis S. et al. IL-12 and IFN-gamma in host defense against mycobacteria and salmonella in mice and men // Curr. Opin. Immunol. 1999. - Vol.11, №3. - P.346-351). Течение туберкулезной инфекции у людей также сопровождается продукцией ИФН-γ - антигенспецифическими клетками. Основанием для клинического применения сывороточного ИФН-γ явились сведения о его сниженной продукции при туберкулезе, 380±147,8 пг/мл (490±54,9 пг/мл у здоровых). Эффективная химиотерапия способствует отчетливому повышению уровня ИФН-γ (р<0,02) по сравнению с исходными данными (Кузнецов В.П., Маркелова Е.В., Федянина Л.Н. Природные препараты альфа-интерферона и цитокинов в практике врача-фтизиатра: реферативный обзор №1. - М., 1999. - 59 с.; Хасанова P.P., Воронкова О.В., Уразова О.И. и др. Роль цитокинов в модуляции субпопуляционного состава лимфоцитов крови у больных туберкулезом легких // Пробл. туб. - 2008. - №3. - С.31-34.). В то же время по некоторым наблюдениям у больных туберкулезом, особенно при благоприятном течении процесса, может отмечаться и высокий уровень сывороточного ИФН-γ. Учитывая данные факты трудно говорить о диагностической значимости уровня сывороточного ИФН-γ при оценке активности туберкулезной инфекции.

В отличие от сывороточного уровня ИФН-γ количество Т-лимфоцитов, содержащих внутриклеточный ИФН-γ, у больных туберкулезом повышено по сравнению со здоровыми донорами и носителями латентной инфекции (Veenstra H., Crous I., Brahmbhatt S. et al. Changes in the kinetics of intracellular IFN-gamma production in ТВ patients during treatment // Clin.Immunol. 2007. - Vol.124, №3. - P.336-344.). Данные о высоком содержании ИФН-γ-продуцирующих лимфоцитов у больных активным туберкулезом позволяют считать, что количество ИФН-γ-продуцирующих клеток может являться мерой микобактериальной нагрузки и использоваться для диагностики туберкулеза. Новые подходы к диагностике латентного и активного туберкулеза основаны именно на определении количества (частоты) клеток, продуцирующих ИФН-γ (тест T-SPOT), и/или количества ИФН-γ, продуцируемого клетками периферической крови после их стимуляции in vitro антигенами M.tuberculosis (Quantiferon Gold) (Lalvani A., Millington K.A. Т Cells and Tuberculosis: Beyond Interferon-gamma // J. Infect. Dis. 2008. - Vol.197. - P.941-3; Pai M., Zwerling A., Menzies D. Systematic Review: T-Cell-Based Assays for the Diagnosis of Latent Tuberculosis Infection: An Update // Annals. Internal, medicine. 2008. - Vol.149, №3; Ferrara G., Lost M. et al. Routine Hospital Use of a New Commercial Whole Blood Interferon-gamma Assay for the Diagnosis of Tuberculosis Infection // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2005. - Vol.172, №5. - P.631-5; Ferrara G., Lost M. et al. Use in routine clinical practice of two commercial blood tests for diagnosis of infection with Mycobacterium tuberculosis: a prospective study // Lancet. 2006. - Vol.367. - P.1328-34.), при постановке реакции рекомендуется короткое время экспозиции - 24 часа, поэтому тест в основном используется как скрининговый при отборе для более детального обследования на туберкулез, что не исключает получения ложноотрицательных результатов. В отечественной практике данные тесты не используются (Киселев В.И., Барановский П.М. и др. Новый кожный тест для диагностики туберкулеза на основе рекомбинантного белка ESAT-CFP // Молекулярная медицина. - 2008, №4. - С.28-34), поэтому оценить чувствительность и специфичность данных тестов не возможно.

Известна реакция бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ) с туберкулином (ППД-Л) для оценки состояния специфического клеточного иммунитета используемая в клинике (особенно в комплексе с рядом других иммунологических тестов) для дифференциальной диагностики туберкулеза, оценки активности его течения и выявления минимальной активности туберкулезных поражений. Механизм этой реакции состоит в трансформации лимфоцитов в бластные клетки под действием специфического митогена - туберкулина. Реакция состоит из 3-х этапов:

1. выделение лимфоцитов (или лейкоцитарной массы);

2. культивирование лимфоцитов (лейкоцитов) с ППД-Л;

3. оценка результатов.

Недостатки методики:

- Данную реакцию чаще оценивают морфологическим методом (подсчет визуальный в окрашенных мазках), что может давать субъективные ошибки.

- Невысокий процент выявления повышенного уровня бластообразования (положительных результатов) можно объяснить потерей лимфоцитов на этапе их выделения (на фекол-верографине). Для оптимального протекания РБТЛ необходимо присутствие макрофагов, поэтому использовать высокоочищенные лимфоциты не рекомендуется (Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунограмма в клинической практике. - М.: Наука, 1990. - 224 с.).

Задачей изобретения является повышение качества и сокращение времени диагностики активного туберкулеза у детей и подростков.

Поставленная задача решается тем, что в способе оценки активности туберкулеза у детей и подростков, включающем на первом этапе оценку состояния специфического клеточного иммунитета с помощью модифицированной реакции бластной трансформации лимфоцитов (мРБТЛ) с туберкулином (ППД-Л), используя четыре разведения, оценивают уровень специфического клеточного ответа по определению индекса стимуляции. Дополнительно после стимуляции ППД-Л оценивают количество ИНФ-γ в супернатантах с помощью иммуноферментного анализа. Проводят мРБТЛ с ППД-Л с использованием малого объема (200 мкл) культуры цельной крови без выделения лимфоцитов. Гепаринизированную кровь (25 ЕД гепарина на 1 мл крови) 0,02 мл культивируют во влажной камере термостата или CO2-инкубатора в стерильных условиях, в круглодонных иммунологических. планшетах, в 0,120 мл полной ростовой среды (ПРС) (среда 199, содержащая 10% эмбриональной телячьей сыворотки, L-глютамин (2mM), HEPES (10mM), гентамицина сульфат 50 мкг/мл) - контрольные 3 образца крови. Опытные образцы крови 0,02 мл культивируют в 0,120 мл ПРС, содержащей ЛПД-Л в качестве индуктора ИФН-γ в четырех разведениях (60, 30, 15, 7,5 мкг/мл) в течение 96 часов. За 18 часов до окончания культивирования в культуры клеток (контрольную и опытную) вносят по 1 MKCi 3Hi-тимидина. По окончании культивирования клетки крови собирают полуавтоматическим сборщиком клеток на стекловолоконные фильтры и высушивают. Подсчет радиоактивности в имп/мин проводят в сцинтилляционной жидкости с помощью «Betta-2» камеры. Оценку уровня специфического клеточного ответа проводят по определению индекса стимуляции (и.с.), расчет и.с.по формуле: .

Установлено, что результат индекса стимуляции лимфоцитов до 3,2 -отрицательный, более 3,2 - положительный (свидетельствует о сенсибилизации организма МБТ). Из полученных контрольных культур и культур клеток с ППД-Л отбирают супернатанты (надосадок) по 0,05 мл, объединяют в общий контрольный (0,15 мл) и общий опытный образец (0,20 мл), которые в дальнейшем используют для количественного определения гамма-интерферона спектрофотометрически с помощью ИФА с использованием тест-систем, предназначенных для определения гамма-интерферона в супернатантах. Оценку уровня ИФН-γ проводят по определению индекса стимуляции. При показателе индекса стимуляции менее 7,0 диагностируют отсутствие активной туберкулезной инфекции, при показателе индекса стимуляции более 7,0 диагностируют активный туберкулезный процесс.

Разработанная реакция на основании РБТЛ (модифицированная РБТЛ с ППД-Л) позволила повысить информативность данного иммунологического теста и информативность ИФА при оценке ИФН-γ. При выполнении теста исключены потери Т-лимфоцитов и других клеток крови, принимающих участие в реакции (макрофаги), использовано несколько доз антигена (туберкулина), параллельно для установления активности туберкулезного процесса определяют максимальное количество выделяемого клетками гамма-интерферона. Отличительными признаками предлагаемого способа является: использование культурального надосадка, возможность использования малого объема крови (200 мкл) и время экспозиции 96 часов.

В исследованиях была определена специфичность и чувствительность мРБТЛ с ППД-Л. Установлена высокая специфичность - 97,9% и чувствительность метода - 97,8%.

Нами была исследована информативность показателя пролиферации лимфоцитов при стимуляции туберкулином (мРБТЛ с ППД-Л) у 279 детей. Среди них у 117детей (41,9%) 2-17 лет рентгенологически был подтвержден туберкулез органов дыхания, в том числе в фазе инфильтрации у 72 (61,5%), в фазе распада у 6 (5,1%), в фазе рассасывания и уплотнения у 11 (9,4%), кальцинации у 16 (13,7%), или внелегочный туберкулез. Инфицирование диагностировано у 107 детей (38,4%) дошкольного и младшего школьного возраста. Здоровых, не реагирующих на туберкулин или с сомнительными результатами пробы Манту с 2 ТЕ ППД-Л, был 31 ребенок (11,1%) дошкольного возраста, из них 9 детей были обследованы в динамике через 6-12 месяцев.

Полученные результаты отражены в таблице 1. Как видно из таблицы уровень пролиферативного ответа лимфоцитов на туберкулин у детей, не инфицированных, инфицированных (в том числе и в период «виража») и больных туберкулезом, достоверно (р=0,000) различался.

При обследовании детей, больных туберкулезом, в фазе инфильтрации до лечения пролиферация лимфоцитов на туберкулин у всех (100%) была выражена, при этом результаты по фазам туберкулезного процесса до лечения достоверно не различались (р=0,302).

Таблица 1
Уровень индекса стимуляции в мРБТЛ с ППД-Л у детей больных туберкулезом, инфицированных МБТ и не инфицированных МБТ
Группы наблюдения n Результат мРБТЛ с ППД-Л, индекс стимуляции
М±m Доверительный интервал
Не инфицированные МБТ 29 2,1±0,2* 1,1-3,1
Больные туберкулезом в фазе инфильтрации до лечения 25 16,6±2,0* 6,7-26,5
Больные туберкулезом независимо от фазы процесса до лечения 42 14,6±1,4* 5,3-23,9
Инфицированные микобактериями туберкулеза (туберкулиноположительные) 107 7,4±0,4* 3,5-11,3
Период ранней туберкулезной инфекции («вираж») 71 7,7±0,5* 3,3-12,1
Инфицированные микобактериями туберкулеза более года 36 6,7±0,4 4,1-9,3
* р=0,000

Нами была дополнительно исследована информативность показателя ИФН-γ с ППД-Л: у 42 детей и подростков, больных туберкулезом, средний уровень показателя составил 624,6±205,2 пг/мл; у 30 здоровых детей и подростков он был 147,6±16,2 пг/мл, при этом данные показатели имели достоверные различия, р=0,000 (критерий Манна-Уитни). При первичных формах туберкулеза (n=20) регистрировали более высокий уровень синтеза ИФН-у после стимуляции ППД-Л (846,0±291,6 пг/мл), чем при вторичных (n=22, 403,2±291,6 пг/мл), но достоверных различий не установили (р=0,288). При этом выявили слабую обратную корреляцию между уровнем синтеза ИФН-γ после стимуляции ППД-Л и генезом заболевания (г=-0,17, р<0,05), что подтверждает тенденцию более выраженного клеточного ответа при первичном генезе туберкулеза. Одновременно с этим установили умеренно выраженную прямую зависимость между мРБТЛ с ППД-Л и ИФН-γ с ППД-Л (г=0,61, р<0,05 по Спирмену) у больных туберкулезом и умеренно выраженную прямую зависимость у здоровых (г=0,43, р<0,05 по Спирмену). Оценивая степень корреляции между показателями (мРБТЛ с ППД-Л и ИФН-γ с ППД-Л) у всех обследуемых детей и подростков, установили умеренно выраженный уровень корреляционной зависимости (г=0,67, р<0,05 по Спирмену). Была проведена оценка ИФН-γ с ППД-Л по индексу стимуляции, так средний показатель индекса стимуляции у больных туберкулезом составил 12,2±2,6, у здоровых детей 2,2±0,3. Определяя уровень ИФН-γ без стимуляции и при стимуляции неспецифическим митогеном (ФГА) у больных туберкулезом и у здоровых детей достоверных различий не установили (р<0,05), следовательно данные показатели диагностического значения в определении активности туберкулезной инфекции не имеют (табл.2). Дополнительно определена специфичность и чувствительность ИФН-γ с ППД-Л для больных туберкулезом. Установлен уровень специфичности - 70% и чувствительности метода - 97%. Анализируя полученные ложноотрицательные результаты ИФН-γ с ППД-Л у детей, больных туберкулезом установили, что данные показатели отмечены в случае завершения туберкулезного процесса (снижения активности сочеталось с низким уровнем пролиферации лимфоцитов на туберкулин), в одном случае регистрировали развитие отрицательной анергии при генерализации туберкулеза.

Таблица 2
Уровень показателя ИФН-γ при стимуляции различными митогенами и без стимуляции у больных туберкулезом и здоровых детей и подростков
Показатели Не инфицированные МВТ Больные туберкулезом органов дыхания до лечения
ИФН-γ с ППД-Л:
М±m, пг/мл 147,6±16,2* 624,6±205,2*
Доверительный интервал, пг/мл 115,2-181,8 208,8-1040,4
М±m, и.с. 2,2±0,3 12,2±2,6
Доверительный интервал, и.с. 1,6-2,9 7,0-17,4
ИФН-γ спонтанный:
М±m, пг/мл 71,1±7,2 82,8±14,4
Доверительный интервал, пг/мл 57,6-64,8 55,8-111,6
ИФН-γ с ФГА:
М±m, пг/мл 9397,8±1155,6 7189,2±1517,4
Доверительный интервал, пг/мл 7021,8-11775,6 3756,6-10621,8
* р=0,000

Полученные результаты проведенных исследований мРБТЛ с ППД-Л и ИФН-γ с ППД-Л позволяют утверждать, что у детей с положительным индексом стимуляции лимфоцитов (более 3,2) и положительном результате уровня ИФН-γ после стимуляции туберкулином (более 209 пг/мл или и.с. более 7,0) имеет место активный туберкулезный процесс. Это позволяет данный иммунологический тест применять как в диагностике первичного специфического процесса, так и при развитии туберкулеза вторичного генеза, в том числе при внелегочных локализациях.

Примерами информативности определения уровня специфического клеточного ответа при первичной туберкулезной инфекции у детей могут служить следующие выписки из историй болезни.

Пример 1. Алексей Р., 15 лет, карта стационарного больного №68, поступил в стационар Бюджетного учреждения здравоохранения Омской области Специализированной детской туберкулезной клинической больницы (БУЗ ОО СДТКБ) 30.04.09 г. на обследование и лечение. Клинический диагноз: Экссудативный плеврит, левосторонний, туберкулезной этиологии, МБТ-. При профилактическом обследовании в апреле 2009 года выявили изменения на флюорограмме. Антибактериальная терапия, проведенная в учреждении общей лечебной сети, эффекта не дала.

При поступлении жалоб не отмечалось, но наблюдали проявление интоксикации в виде бледных кожных покровов, небольшой потливости. По другим органам и системам без особенностей. Уточняя эпидемилогоический анамнез, был установлен семейный контакт. Бактериологическое исследование на МБТ было не информативным. От проведения бронхоскопии отказались. При поступлении был определен уровень специфического клеточного ответа в мРБТЛ с ППД-Л, индекс стимуляции составил 23,5. Уровень интерферона-гамма, после стимуляции туберкулином составил 763,2 пг/мл (и.с.=7,5). При рентгенологическом обследовании на фоне противотуберкулезной терапии была выявлена положительная рентгенологическая динамика в виде рассасывания плеврального выпота на 3 месяце химиотерапии. Таким образом, с помощью мРБТЛ с ППД-Л и ИФН-γ с ППД-Л была подтверждена этиология плеврита и активность туберкулезной инфекции.

Пример 2. Валихан А., 14 лет, карта стационарного больного №51, поступил в стационар БУЗ ОО СДТКБ 07.04.2009 г. с целью оценки активности туберкулезного процесса и подготовки к оперативному лечению.

Диагноз при поступлении: Множественные туберкулемы левого легкого, фаза распада и обсеменения, МБТ+, обострение. Туберкулез левого бронха. Туберкулез мочевой системы, МБТ-.

Семейный контакт, длительный, наличие множественной лекарственной устойчивости. С 2006 года у ребенка регистрируются выраженные и гиперергические туберкулиновые пробы. По контакту получал курсы противотуберкулезной терапии.

При поступлении в стационар проявлений туберкулезной интоксикации, бронхо-легочного синдрома не наблюдалось. При осмотре по органам и системам патологических изменений выявлено не было. При проведении бронхоскопии патологии выявлено не было. В общих анализах крови и мочи без патологии. По результатам туберкулинодиагностики в январе 2009 г. инфильтрат 16 мм (выраженная положительная реакция). Рентгенологически определяли 2 округлые тени до 2 см в диаметре, однородной структуры без зоны перифокального воспаления и очагов отсева в окружающей ткани. По результатам бактериоскопии выявили кислотоустойчивые микобактерии, при посеве результат отрицательный (через 3 мес.). Был определен уровень специфического клеточного ответа в мРБТЛ с ППД-Л, индекс стимуляции составил 3,2, что соответствует уровню инфицирования микобактериями туберкулеза, без активности специфического процесса. Был определен уровень ИФН-γ с ППД-Л, который составил 144,9 пг/мл (и.с.=0,7), что также подтверждало отсутствие активности специфического процесса.

Таким образом, на основании полученных данных можно было говорить об отсутствии прогрессирования туберкулезного процесса и рекомендовать хирургическое лечение в плановом порядке через 3 мес.на фоне противотуберкулезной терапии с учетом возможного риска лекарственной устойчивости. Ребенку 04.08.2009 года была проведена резекция С2, С6 левого легкого, в послеоперационном периоде осложнений не было.

По нашему мнению, учитывая высокую специфичность и чувствительность метода, использование мРБТЛ с ППД-Л в клинической практике в сочетании с ИФН-γ с ППД-Л позволит повысить качество диагностики специфического воспаления, оценить эффективность специфического лечения, сократить сроки диагностики активной туберкулезной инфекции, следовательно, провести своевременную противотуберкулезную терапию.

Способ оценки активности туберкулеза у детей и подростков, включающий оценку состояния специфического клеточного иммунитета с помощью модифицированной реакции бластной трансформации лимфоцитов (мРБТЛ) с туберкулином (ППД-Л) и иммуноферментного анализа (ИФА) с определением уровня интерферона-гамма (ИФН-γ) с ППД-Л, отличающийся тем, что мРБТЛ и ИФА проводят с использованием малого объема (200 мкл) цельной крови с аллергеном туберкулезным (ППД-Л), используют 4 разведения антигена, оценивают уровень специфического клеточного ответа и ИФН-γ после стимуляции по определению индекса стимуляции и при показателях индекса стимуляции клеточного ответа более 3,2 и ИФН-γ с ППД-Л более 7,0 диагностируют активный туберкулезный процесс, а при показателе мРБТЛ с ППД-Л более 3,2 и ИФН-γ с ППД-Л менее 7,0 - не активную туберкулезную инфекцию.



 

Похожие патенты:

Группа изобретений относится к лабораторной диагностике и может быть использована для проведения анализов, основанных на реакции агглютинации частиц. Аналитический наконечник (100), предназначенный для выполнения визуально детектируемой реакции агглютинации после всасывания в него реактивов и образца, включает: первое отверстие (110) для приложения отрицательного или положительного давления к внутреннему объему аналитического наконечника; камеру для образца (120); по меньшей мере, одну боковую камеру (130), которая расположена по периметру камеры для образца; камеру детектирования (150), находящуюся в жидкостной связи с камерой для образца; переходную зону (140) между камерой детектирования и камерой для образца для вращательного перемешивания образца; второе отверстие (160) для всасывания реактивов и образца во внутренний объем аналитического наконечника или для удаления их оттуда.

Заявленная группа изобретений относится к области медицины и предназначена для выявления пациентов с повреждением сердца и оценки эффективности проводимой терапии.

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ ранней диагностики развивающегося пролапса тазовых органов у женщин репродуктивного возраста при отсутствии клинических признаков, заключающийся в отборе материала ткани стенки влагалища, проведении гистохимического анализа, определении количества и состояния эластиновых фибрилл, содержания матриксных белков LOXL1 и FBLN5, в котором развивающийся пролапс тазовых органов диагностируют при снижении количества эластиновых фибрилл и их фрагментации и при одновременном уменьшении содержания матриксных белков LOXL1 и в эпителии, эндотелии сосудов, фибробластах, экстрацеллюлярном матриксе по отношению к одноименным показателям у здоровых женщин.
Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, иммунологии, и может быть применено для определения степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата.

Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом относится к биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК гибридизационного анализа.
Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ выявления наличия гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных с впервые выявленным острым лимфобластным лейкозом путем лабораторного исследования антигена фактора Виллебранда, тромбомодулина, D-димеров, где без исследования целого ряда показателей плазменного гемостаза, таких как протромбиновый индекс, концентрация фибриногена и РФМК, время ХIIа-ЗЭЛ, активность антитромбина III, протеина С, плазминогена и ф.VIII, отклонения которых характеризуют состояние гиперкоагуляции, при уровне указанных маркеров нарушения функции эндотелия, превышающих 152% (ФB:Ag) и 3,99 нг/мл (ТМ), и увеличении D-димеров до 2001-2500 нг/мл и более с высокой долей вероятности устанавливают наличие гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу снижения предела обнаружения иммунохроматографических методов контроля содержания низкомолекулярных соединений.
Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения непсихотических вариантов психоорганического синдрома.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для подбора иммунотропных препаратов у пациентов с ургентной хирургической патологией органов брюшной полости.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано у больных гемобластозами для прогноза развития рецидива заболевания после проведения аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток (АТСКК). Для этого определяют относительное содержание CD4+FOXP3+Т-клеток в периферической крови больных гемобластозами после проведения АТСКК в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл. При увеличении количества CD4+FOXP3+T-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде. Использование данного способа позволяет выделить больных гемобластозами в группу высокого риска развития раннего рецидива основного заболевания после АТСКК и при необходимости проводить дополнительные курсы лучевой и/или химиотерапии с целью повышения эффективности АТСКК. 4 пр.

Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты антитела или его фрагмента, специфичных в отношении β-амилоидного белка. Каждый из вариантов характеризуется тем, что включает Н и L-цепи, или области VH и VL, каждая из которых содержит по три соответствующих CDR. Описаны: полипептид VL, полипептид VH, a также кодирующая нуклеиновая кислота, экспрессионный вектор, ее содержащий, и клетка, несущая вектор, используемые для получения антитела или его функционального фрагмента. Предложены: тест-набор, варианты фармацевтической композиции, смесь для применения в качестве лекарственного средства на основе антитела или его функционального фрагмента. Раскрыты варианты способа получения антитела: с использованием клетки, НК или вектора. Описан способ приготовления композиции, а также способ диагностирования амилоидоза in vitro, способ определения степени загрузки амилоидогенными бляшками in vitro, способ лечения или облегчения воздействий амилоидоза, использующие антитело или его функциональный фрагмент. Предложенное изобретение обеспечивает новые антитела, которые связывают эпитоп, находящийся в области 12-23 белка Aβ1-42, причем остатки 15-20 имеют решающее значение. Изобретение может найти применение в терапии и диагностике болезни Альцгеймера и других перечисленных амилоидозах. 19 н. и 25 з.п. ф-лы, 18 ил., 9 табл., 16 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения антител к Mycobacterium leprae. Способ включает выявление в сыворотках крови антител к Mycobacterium leprae с помощью иммуноферментного метода. В качестве тест-антигена в иммуноферментном анализе используют водную суспензию из культивируемых в условиях термостата на среде Левенштейна-Йенсена в течение 7 суток при температуре 37°C Mycobacterium lufu, прогретую при 100°C в течение 1,5 часов на водяной бане. Предложенное изобретение позволяет упростить способ определения антител к Mycobacterium leprae. 1 табл.

Изобретение относится к области биохимии. Используют липосомы в качестве матрицы для активированного фермента - пероксидазы хрена. К 5 мг окисленной перйодатным методом пероксидазы хрена добавляют 1 мл суспензии липосом в 0,01 М растворе карбонатно-бикарбонатного буфера при рН 9,5. Подвергают ультразвуковой обработке в течение 1 мин. Инкубируют 1 ч. Иммобилизуют с иммуноглобулинами в концентрации 5 мг в течение 2 ч при температуре 22±4°С. Стабилизируют 5 мг боргидрида натрия с последующей гель-хроматографической очисткой. Изобретение позволяет получить липосомально-иммунопероксидазный конъюгат для индикации возбудителей инфекционных заболеваний в иммуноферментном анализе и увеличить срок годности препарата до 6 лет. 1 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования неэффективности консервативной терапии тяжелой формы язвенного колита при тотальном поражении толстой кишки. Сущность способа состоит в определении в сыворотке крови больных антител к эпителиальной базальной мембране. Для этого выполняют иммуногистологическое исследование с использованием метода непрямой иммунофлюоресценции. На первом этапе сыворотку больного инкубируют на срезах ткани почек обезьян, на втором этапе проводят инкубацию с антивидовой козлиной флюоресцирующей сывороткой. Реакцию регистрируют методом люминесцентной микроскопии, определяя количество почечных канальцев с флюоресцирующей базальной мембраной и выражая результат в процентах. При показателе выше 15% прогнозируют значительное увеличение вероятности неэффективности консервативной терапии. Способ прост в исполнении, выполняется в течение 2 часов и не требует затрат дорогостоящих реактивов. 4 пр.
Изобретение относится к клинической биохимии, и может быть использовано в лабораторной диагностике для определения атерогенности крови по уровню содержания минимально модифицированных липопротеинов низкой плотности (ММ-ЛПНП) в сыворотке или плазме крови человека. ММ-ЛПНП агрегируют из сыворотки или плазмы крови путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с мол.массой 12600±2700, при конечной концентрации ПВП от 11,3% до 14,2% в пробе. После инкубации в течение 10 мин измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность и при величине разности более 10 ЕД констатируют атерогенность крови у обследуемого человека за счет повышенного уровня ММ-ЛПНП. Использование простого, доступного и быстрого в осуществлении способа определения ММ-ЛПНП в крови человека позволяет проводить скрининговые обследования с целью выявления наличия атеросклеротического процесса на доклинической стадии и диспансеризации населения. 3 табл., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования невынашивания беременности в ранние сроки. Сущность изобретения состоит в том, что у беременных женщин с выявленной урогенитальной инфекцией в 1 триместре проводят определение в слизи цервикального канала уровня MIP-1α. При значении уровня MIP-1α в цервикальной слизи выше 36,9 пг/мл прогнозируют высокий риск невынашивания беременности в 1 триместре. Использование заявленного изобретения позволяет повысить точность прогнозирования угрозы невынашивания беременности в 1 триместре при урогенитальной инфекции для назначения современных лечебных мероприятий. 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для определения жизнеспособности новорожденных с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) в первые сутки жизни. Способ заключается в определении информативных показателей: веса ребенка при рождении, количества эритроцитов, уровня гемоглобина и гаптоглобина с последующим вычислением диагностического индекса по формуле: DI=0,004×МТ+0,971×Эр-0,013×Гем-0,418×Гапт-4,344, где МТ - вес новорожденного при рождении (в граммах), Эр - количество эритроцитов в венозной крови (×109/л), Гем - уровень гемоглобина в венозной крови (г/л), Гапт - концентрация гаптоглобина в сыворотке пуповинной крови (мкг/дл). При DI более 0 жизнеспособность новорожденного ребенка с ЭНМТ оценивается как высокая, а при DI менее 0 жизнеспособность недоношенного с ЭНМТ оценивается как низкая. Предложенный способ позволяет объективно оценить состояние ребенка, потенциал жизнеспособности и скорректировать тактику наблюдения. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологической лабораторной диагностике, и может быть использовано для постановки диагноза острой ожоговой токсемии у детей. Способ заключается в следующем. В сыворотке крови больных детей определяют количество лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности CD3+; CD4+; CD8+, интерферон γ (INFγ) и интерлейкин 4 (IL-4). При снижении в 1,5 сигмальном интервале CD3+ до 51,7-59,9%; CD4+ - 20,3-31,1%; CD8+ - 13,8-19,6% и при повышении в 1,5 сигмальном интервале IL-4 в популяциях клеток CD4+ до 22,3-27,7%, IL-4 в клетках CD8+ - 27,4-31,6% и INFγ в клетках CD8+ - 13,2-18,0% ставят диагноз острой ожоговой токсемии у детей. Предложенный способ легко воспроизводим, не требует больших материальных затрат, в ранние сроки позволяет поставить диагноз заболевания и позволяет диагностировать острую ожоговую токсемию у детей в 95-100% случаев. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пищевой непереносимости у детей. Сущность заявляемого способа заключается в определении генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов фолатного обмена MTHFR C677T и А1298С, MTRR G66A методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим рестрикционным анализом. При выявлении сочетания аллеля Т промоторного полиморфизма MTHFR C677T, аллеля С промоторного полиморфизма MTHFR А1298С, аллеля А промоторного полиморфизма MTRR G66A прогнозируют развитие пищевой непереносимости у детей. Использование способа дает возможность планировать профилактические мероприятия и тактику ведения ребенка первых лет жизни, позволяет предупредить развитие обострений и осложнений, связанных с приемом пищи, и добиться максимальных достижений в улучшении качества жизни и трудоспособности. 3 пр.
Наверх