Способ моделирования диабетического макулярного отека


 


Владельцы патента RU 2498415:

Государственное бюджетное учреждение "УФИМСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЛАЗНЫХ БОЛЕЗНЕЙ Академии наук Республики Башкортостан" (RU)

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к офтальмологии, и касается моделирования диабетического макулярного отека. Для этого крысе вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1) в дозе 1 мкл. Способ упрощает и сокращает сроки формирования стойкого первичного макулярного отека, характерного для сахарного диабета, позволяет анализировать течение патологического процесса, формировать новые схемы лечения. 1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания модели диабетического макулярного отека сетчатки в экспериментальной офтальмологии.

Известен способ создания экспериментальной модели инсулинозависимого сахарного диабета путем однократного внутрибрюшинного введения аллоксана гидрата экспериментальным животным в дозе 170 мг/кг. Аллоксан, применяемый в моделировании сахарного диабета, генерирует токсичные свободные радикалы, повреждающие В-клетки островков Лангерганса, клетки почек, печени, легких, а также адипоциты (Szkudelski Т. The mechanism of alloxan end streptozotocin action in В cells of the rat pancreas // Physiol. Res. - 2001. - №50. - P.536-546.). При аллоксановом диабете возникает окислительный стресс в жировой ткани, характеризующийся увеличением содержания в ней продуктов липидной пероксидациии нарушением тиолдисульфидного обмена. Активация перекисного окисления липидов и снижение антиоксидантного потенциала системы глутатиона в жировой ткани крыс при экспериментальном диабете может приводить к стимуляции спонтанного липолиза в адипоцитах и к возникновению инсулинорезистентности (Иванов В.В. и др. Перекисное окисление липидов и система глутатиона в жировой ткани крыс с аллоксановым диабетом // Бюллетень СО РАМН. - 2010. - 30, №6. - С.101-104.). При моделировании сахарного диабета в эксперименте, патологические изменения на глазном дне не появляются, т.к. для возникновения процесса пролиферации в стекловидном теле требуется до 2 лет, что существенно затрудняет проведение эксперимента.

Наиболее близким аналогом изобретения является способ воспроизведения возрастного отека макулы путем интравитреального введения кроликам фактора роста сосудистого эндотелия - VEGF 164 (Vascular endothelial growth factor). Данный способ не является этиотропным для сахарного диабета, т.к. воспроизводится при отсутствии гипергликемии. Патологические изменения, возникающие на глазном дне, при гистологическом исследовании не совпадают с диабетическим поражением макулярной зоны.

На сегодняшний день доказано, что патологические изменения в макулярной области сетчатки напрямую связаны с уровнем инсулиноподобного фактора - 1 (Insulin-like growth factor - 1)- IGF-1 (Ringholm L., Vestgaard M., Laugesen C.S., Juul A., Damm P., Mathiesen E.R. Pregnancy-induced increase in circulating IGF-I is associated with progression of diabetic retinopathy in women with type 1 diabetes / Growth Horm IGF Res. №21(1), 2011. P.25-30). Повышенный уровень IGF-I является индикатором патологических изменений сетчатки при сахарном диабете I и II типа. В тоже время, между диабетическим отеком макулярной области и этим ростовым фактором определена прямая этио-патогенетическая зависимость, как прямая, так и обратная.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка достоверного, технически простого в выполнении метода моделирования диабетического макулярного отека в эксперименте.

Технический результат при использовании изобретения - формирование макулярного диабетического отека, этиотропность патологических изменений макулярной зоны с общими эндокринными нарушениями.

Предлагаемый способ моделирования диабетического макулярного отека осуществляется следующим образом: экспериментальным животным в брюшную полость вводят аллоксан в дозе 15,0 мг/100 г веса. Животные находятся под наблюдением до развития признаков сахарного диабета - 6,5 недель. Через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета каждому животному под эфирным наркозом выполняют интравитреальные инъекции: через плоскую часть цилиарного тела вводят инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1) в дозе 1 мкл на расстоянии 1 мм от лимба в нижне-наружном секторе.

Для контроля проводится непрямая офтальмоскопия на 3-й, 7-е и 14-е сутки после инъекции в условиях медикаментозного мидриаза (инсталляции S.Tropicamidi 1%) и гистологические исследования на 15-й день. Методика апробирована на 93 крысах-самцах породы Wistar весом 200 г. Животных выводили из эксперимента методом воздушной эмболии после введения в наркоз на 15-е сутки, глаза энуклеировали (согласно приказу Минвуза СССР №724 от 13.11.1984). Для морфологического исследования на микротоме готовили серийные срезы толщиной 7-10 мкм. Окраску гистологических срезов осуществляли гематоксилин-эозином.

Сочетание в одной модели двух компонентов (экспериментального сахарного диабета и интравитреального введения IGF-1) дает развитие стойкого диабетического макулярного отека. Действие аллоксана и инсулиноподобного фактора определяет однонаправленность патологического процесса, характеризующегося проявлением на местном и общем уровне. Ростовой фактор IGF-1 становится пусковым для развития отека макулы, т.к. действует на фоне общей гипергликемии.

Результатом использования подобной модели является развитие отека, направленное по классическому пути. На гистологическом уровне в зоне фоторецепторного слоя образуются полости в виде кист, друз. В 34% они объединены в один конгломерат, проявляющийся локальной отслойкой сетчатки. Изменения слоя пигментного эпителия типичны для диабетического макулярного отека. При использовании данной модели не выявлены тракции со стороны стекловидного тела, что характеризует данный диабетический отек как первичный.

Пример.

Предлагаемый способ иллюстрируется следующим примером: крысе-самцу породы Wistar, весом 174 грамма воспроизводился сахарный диабет после 24 ч голодания путем внутрибрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета животному под эфирным наркозом через плоскую часть цилиарного тела вводился IGF-1 в дозе 1 мкл. Затем животное выводилось из эксперимента методом воздушной эмболии после введения в наркоз (согласно приказу МинВуза СССР №724 от 13.11.1984) на 15-е сутки. Гистологически на 15-е сутки эксперимента, по данным световой микроскопии, на срезах центральной области сетчатки определялся отек сетчатки с кистами наружного плексиформного слоя, деструкцией пигментного эпителия. Высота отека составила 370 мкм. В зоне хориоидеи патологических очагов не выявлено.

Способ моделирования диабетического макулярного отека, включающий интравитреальное введение токсического агента экспериментальному животному, отличающийся тем, что качестве экспериментального животного используют крысу, причем предварительно вводят аллоксан в брюшную полость в дозе 15,0 мг/100 г веса, через 6,5 недель после введения аллоксана и развития экспериментального сахарного диабета в качестве токсического агента вводят инсулиноподобный фактор роста-1 (IGF-1) в дозе 1 мкл.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции ишемии. Для этого лабораторным животным моделируют кожный лоскут на вторые сутки эксперимента.
Изобретение относится к области медицины, конкретно к экспериментальной медицине. Лабораторным животным через 9 недель после прекращения воздействия токсиканта проводят стимуляционную миографию.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого моделируют ишемию мышц голени, в том числе при одновременном дополнительном моделировании дефицита оксида азота внутрибрюшинным введением в течение 7 суток блокатора синтеза оксида азота N-нитро-L-аргинин метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг ежедневно.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования энцефалопатии в пренатальном периоде развития животного. Для этого самкам мелких лабораторных животных ежедневно подкожно вводят раствор нитрита натрия в дозе 50 мг/кг с 10-го по 19-й день беременности.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для изучения фармакологического обеспечения выживаемости кожного лоскута в условиях редуцированного кровообращения.
Изобретение относится к экспериментальной фармакологии и хирургии и может быть использовано для изучения возможности коррекции ишемии скелетной мышцы. Для этого крысам моделируют ишемию мышц голени на вторые сутки проводимого эксперимента.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины, в частности к области травматологии и ортопедии и конкретно к методам моделирования патологических процессов образования минеральных фаз при костных заболеваниях.
Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии и микробиологии. Для оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов в организм контрольной и испытуемой групп беспородных разнополых белых 8-15-суточных мышей линии ICR массой 9-11 г вводят суспензию исследуемого препарата.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной урологии. Лигируют нижнюю полую вену в нижней трети у крысы.

Изобретение относится к области медицины. При осуществлении способа получают маммограммы на двух различных энергиях излучения.
Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности к хирургии, и может быть использовано при моделировании хронической гнойной костной раны. Формирование костного дефекта проводят вдоль оси кости, помещают в него смесь культуры музейного штамма Staphylococcus Aureus №5 в количестве 40-45 млн KОЕ на 1 кг массы тела экспериментального животного и 0,1 мл стерильного кварцевого песка. Через трое суток после операции удаляют некротические массы и гной из зоны костного дефекта. Выполняют реинфицирование раны той же культурой в дозе 20-25 млн KОЕ на 1 кг массы тела. В последующем сохраняют рану в свищевом виде. Способ минимизирует риск перелома оперируемой кости, гибель животных от септического шока и снижает время эксперимента. 1 пр.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для моделирования первичного билиарного цирроза. Для этого в просвет бульбарного отдела двенадцатиперстной кишки и терминальный отдел подвздошной кишки крысы вводят по 0,08-0,12 мл 45-50% спиртового раствора пикрилсульфоновой кислоты с интервалом 5-10 минут. Первичный билиарный цирроз устанавливают через 1-1,5 месяца. Способ обеспечивает развитие морфологических изменений печени, характерных для данной патологии. 2 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции дефицита оксида азота. Для этого в эксперименте моделируют дефицит оксида азота ежедневным, в течение 7 дней, внутрибрюшинным введением крысам-самцам линии Wistar N-нитро-L-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг. Коррекцию дефицита оксида азота осуществляют одновременным, также в течение 7 дней, внутрижелудочным введением комбинации тадалафила в дозе 0,09 мг/кг и L-норвалина в дозе 10 мг/кг и 1 раз в сутки. Способ обеспечивает эффективное устранение дефицита оксида азота на данной модели при впервые установленном для этого лекарственном взаимодействии препаратов. 1 пр., 2 табл.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, патофизиологии и касается моделирования атеросклероза, что может быть использовано для изучения диагностики, профилактики и лечения этого заболевания. Для этого лабораторным животным - крысам добавляют в корм порошок холестерина в количестве 1%, маргарин 10%, мерказолил 10 мг/кг и витамин D - 2,5 ME на кг массы тела. Дополнительно животным проводят операцию, состоящую из наложения лигатуры на почечную ножку левой почки нерассасывающимся шовным материалом и прошивания верхнего полюса правой почки, оставляя 2/3 органа. Способ легко выполним, не вызывает гибели животных, является адекватной моделью повреждения эндотелия и развития атеросклеротического процесса. 12 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной стоматологии, и касается моделирования деминерализации эмали зуба. Для этого на удаленный зуб фиксируют брекет. Ограничивают очаг, который расположен на вестибулярной поверхности зуба вокруг брекета, восковым покрытием. Погружают зуб в индивидуальную емкость с деминерализирующим гелем, состоящим из (вес.%): дигидрофосфата кальция - 0.04-0.08, молочной кислоты - 0.8-1.0, праестола 2510 - 3.0-4.5, раствора гидроксида натрия - 0.4, дистиллированной воды - остальное. Затем емкость с зубом помещают в термостат при pH=4.5 на 96 часов. Способ обеспечивает повышение четкости очага деминерализации. 4 ил., 2 пр.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и фармакологии и предназначено для изучения принадлежности изучаемых лекарственных препаратов к субстратам эффлюксного белка-транспортера Pgp (гликопротеина-Р). Для этого моделируют в эксперименте состояние индукции функциональной активности этого белка. В качестве препарата-индуктора используют финастерид. Препарат вводят кроликам внутрижелудочно в форме суспензии в оливковом масле в суточной дозе 0,225 мг/кг массы тела животного в течение 14 дней. Способ обеспечивает создание модели, являясь безопасным, не требующим дорогостоящего лабораторного спецоборудования и материалов. 1 табл.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаза. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей аденовирус типа 6, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 10000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока начиная с 7 суток после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения аденовирусного увеита, осложненного невритом зрительного нерва. 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для создания моделей заболеваний глаз. Для этого через плоскую часть цилиарного тела в стекловидное тело глаза кролика породы шиншилла иглой 33 G вводят 0,1 мл культуральной жидкости, содержащей вирус простого герпеса (ВПГ) типа I штамм L2, адаптированный к перевиваемой линии эмбриональных клеток почек свиньи, в дозе 100000 ТЦД50. При этом проводят гистологическое исследование удаленного глазного яблока на 21 сутки после заражения. Способ обеспечивает повышение частоты и точности воспроизведения изолированного неврита зрительного нерва. 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к регенеративной медицине и тканевой инженерии, и может быть использовано для получения экстрацеллюлярных матриксов кровеносных сосудов малого калибра. Для этого на первом этапе тканей фрагмент кровеносного сосуда отмывают дистиллированной водой в течение 1 часа при температуре +4°С. Затем фрагмент помещают в 0,05% раствор трипсина и 0,02%-ной ЭДТА на 1 час при температуре +37°С. На третьем этапе проводят обработку в 0,075% растворе додецилсульфата натрия в течение 24 часов при температуре 26°С. Далее фрагмент помещают в 0,25%-ный раствор Тритон Х-100 на 24 часа при температуре 26°С. На четвертом этапе данный фрагмент обрабатывают раствором, содержащим РНКазу А 20 мкг/мл и ДНКазу I 200 мкг/мл, в течение 6 часов при температуре +37°С. При этом после каждого этапа обработки фрагмент кровеносного сосуда трижды промывают в фосфатно-солевом буферном растворе по 10 минут. Весь процесс обработки осуществляют при постоянном перемешивании растворов и одновременной вибрации, создаваемой вибромотором, который расположен на наружной стенке емкости. Способ позволяет повысить качество децеллюляризации кровеносных сосудов малого калибра, сохранить их целостность и ультраструктуру для последующей иммобилизации клеток реципиента. 2 пр., 6 ил.
Изобретение относится к медицине, а именно к экспериментальной офтальмологии, и касается моделирования диабетической макулярной неоваскуляризации. У крыс моделируют сахарный диабет путем интрабрюшинного введения аллоксана в дозе 15,0 мг/100 г веса. Через 6,5 недель в стекловидное тело по методике интравитреального доступа вводят крысиный VEGF 164 на 1-е, 3-и и 7-е сутки по 1 мкг, в суммарной дозе 3 мкг. Способ обеспечивает неоваскуляризацию макулярной области, типичную для сахарного диабета, что позволяет в дальнейшем изучать эффективность и определять целесообразность проводимой терапии этого заболевания. 1 пр.
Наверх