Применение стволовых клеток из корневых сумок волос и клеток предшественников (продромальных) кератиноцитов для восстановления постаревшей кожи

Авторы патента:

A61K35/36 - кожа; волосы; ногти; сальные железы; ушная сера

Владельцы патента RU 2498809:

СКИНРЕПХЭАР ЛТД. (CH)

Изобретение относится к области биотехнологии и клеточной биологии. Предложено применение стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи в косметических целях и для профилактики кожных болезней. Кроме того, предложен способ восстановления постаревшей кожи. Изобретение может быть использовано в медицине и косметологии для восстановления кожного покрова. 3 н. и 10 з.п. ф-лы, 1 пр.

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к применению стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи в косметических целях и для профилактики кожных болезней. Также изобретение относится к косметическому способу восстановления постаревшей кожи.

Уровень техники

Молодой красивой коже придается сегодня возрастающее психосоциальное значение, в связи с этим на рынке присутствует большое количество препаратов для местного применения, препятствующих старению кожи или восстанавливающих ее. Однако в значительной степени убедительное научно-медицинское подтверждение стойкости эффектов отсутствует.

Старение кожи зависит, во-первых, от большой возрастной индивидуальной изменчивости (внутреннее или хронологическое старение) и, во-вторых, от вредных внешних факторов, в частности, от суммарного (ультрафиолетового) воздействия солнца, неправильного питания, злоупотребления лекарствами, механических нагрузок и злоупотребления никотином (внешнее старение).

Постаревшая кожа характеризуется истончением (атрофией) как своего верхнего слоя (эпидермиса), так и собственно кожи (дермы), образованием множественных морщин и потерей эластичности (эластоз дермы), сухостью, потерей тургора и, при известных условиях, дополнительно пигментной неравномерностью (например, солнечной пигментацией (Lentigines solares) кожи. Обновление кожи (гомеостаз) на протяжении жизни основано, с одной стороны, на постоянной замене ее верхнего слоя в результате деления стволовых клеток кератиноцитов в ее самом нижнем слое (базальном слое) с последующей дифференциацией в роговые пластинки и подъемом в самый наружный слой, роговой слой (stratum comeum).

В старческой коже этот процесс нарушен, что приводит к атрофии. Если дифференциация кератиноцитов сильно нарушена, то может произойти перерождение, т.е. образование так называемого белого рака кожи (спиноцеллюлярного рака, базалиомы) или предстадии рака (актинические кератозы). Это происходит преимущественно на кожных участках хронически подверженных солнечному воздействию, что подчеркивает пусковую функцию ультрафиолетового излучения. Следовательно, устойчивый терапевтический подход к восстановлению кожи желателен не только по косметическим причинам. Наличие полноценного верхнего слоя кожи важно также для сохранения структуры и функции нижележащей дермы, так как клеточные системы этих обоих слоев кожи (кератиноциты эпидермиса и фибробласты или эндотелии сосудов дермы) сообщаются между собой посредством растворимых факторов (например, цитокинов, факторов роста). Следовательно, функционально полноценный верхний слой кожи также может содействовать восстановлению дермы при старческих изменениях, т.е. при дермальной атрофии с эластозом и расширением сосудов (телеангиэктазы).

Продромальные клетки кератиноцитов или стволовые клетки, имеющие решающее значение для гомеостаза верхнего слоя кожи, расположены в эпителиальных клетках корневых сумок волос (Outer Root Sheath: ORS), т.е. в глубине собственно кожи и, следовательно, защищены от вредоносного ультрафиолетового излучения (особо вредное ультрафиолетовое излучение проникает только через эпидермис). Из волос головы, извлеченных на фазе роста, могут быть выделены клетки ORS и лабораторно размножены.

Известно применение стволовых клеток ORS или их производных продромальных клеток меланоцитов из аутологических корневых сумок волос для репигментации кожи (Vanscheidt & Hunziker, Dermatologe, 904, 2009, WO 2009/049734).

Кроме того продромальные клетки для эпидермальных кератиноцитов из аутологических корневых сумок волос применяются при лечении хронических ран (EpiDex®, Euroderm; Tausche и др., Wound Repair and Regeneration, 11(4), 248-252, 2003, EP 1198557 B1, EP 1326654 B1).

Наряду с лечением хронических ран описано также лечение и других кожных повреждений с применением продромальных клеток кератиноцитов, например, после хирургического удаления раковых участков или татуировок или при ранениях и пр. (EP 1198557 B1, EP 1702979 A1).

Эпидермальные стволовые клетки нервных валиков (EPI-NCSC, epidermal neural crest stem cells) представляют собой мультипотентные стволовые клетки, произведенные от эмбрионального нервного валика и расположенные в корневых сумках волос. Такие стволовые клетки постоянно обновляются и способны развиваться в любые важные клеточные производные нервного валика, в т.ч. в нейроны, укрепляющие нервы клетки, гладкомышечные клетки, клетки костей/хрящей и меланоциты. Такие стволовые клетки способны даже образовывать виды клеток, которые типичны для мезодермы. На примере мыши с повреждениями спинного мозга было показано, что такие стволовые клетки могут объединяться со скелетными мышечными волокнами взрослого человека так, что введенные ядра клеток остаются функциональными, а скелетные мышцы взрослого человека образуют окружение, пригодное для долгосрочного выживания ядер стволовых клеток (Sieber-Blum & Hu, Stem Cell Rev. 4(4), 256-60, 2008). Авторы делают вывод из результатов исследования на скелетной мышце мыши, что такие плюрипотентные стволовые клетки могут обладать привлекательными свойствами для будущих видов дополнительной клеточной терапии и/или для биомедицинских разработок.

Раскрытие изобретения

Задачей настоящего изобретения является обеспечение восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи.

Данная задача решается посредством применения стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи.

Понятие «здоровая и не поврежденная кожа» означает кожу без дефектов, в частности, без наличия ран, а также без воспалительных, инфекционных или дегенеративных кожных заболеваний, без доброкачественных или злокачественных опухолей или их предстадий (например, актинические каратозы, злокачественное лентиго), послеоперационных кожных изменений, как, например, после кожных трансплантаций, и пр.

Понятие «постаревшая кожа» означает в смысле изобретения внутреннее и/или наружное постарение кожи при наличии предпочтительно, по меньшей мере, одного из возрастных явлений: истончение (атрофия), образование мелких морщин, потеря эластичности (эластоз), возросшая ранимость со склонностью к кровотечению при незначительном травмировании, а также, при известных условиях, пигментные неравномерности, но при наличии глубоких морщин или складок на сухой, при известных условиях, шелушащейся/ороговевшей поверхности кожи, снизившаяся активность сальных желез, уменьшенный тургор кожи, пониженная доля подкожного жира, склонность к образованию трещин и ложных рубцов, расширение небольших кровеносных сосудов (телеангиэктазы), потеря способности к восстановлению и связанные с этим нарушения процесса заживления ран. Эти явления обусловлены нарушением активности факторов транскрипции или генов-супрессоров опухолей (например, NF-kappa B, с-Мус, р53), регулирующих пролиферацию и дифференциацию кожных клеток (в частности, кератиноцитов и фибробластов) и, следовательно, гомеостаз кожи. Так, например, для NF-kappa B было показано на примере стареющих мышей, что его блокирование в течение двух недель имело своим следствием биологическое омоложение кожи в течение ограниченного периода.

Восстановление постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи согласно изобретению имеет наряду с косметическими аспектами также медицинские преимущества. Введенные в кожу продромальные клетки кератиноцитов в качестве дифференцированных кератиноцитов не только утолщают верхний слой кожи, но также регулярно делятся, вытесняя таким образом в течение длительного срока медленно делящиеся «старые» клетки, а также деградировавшие клетки. Кроме того они положительно влияют на клетки в своем непосредственном окружении (фибробласты, эндотелии сосудов, меланоциты) в результате выделения цитокинов и факторов роста, что в целом улучшает на длительный срок состояние здоровья и процесс старения кожи, вследствие чего снижается образование морщин (новообразование коллагеновых волокон), повышается эластичность (новообразование эластичных волокон) и при известных условиях снижаются имеющиеся пигментные неравномерности (регулирование выработки меланина и его распределения). Под действием микроциркуляции в коже улучшается питательная ситуация, что также повышает, например, трофику и активность сальных желез и, следовательно, нормализует обратимое образование жира кожи. Следовательно согласно изобретению понятие «восстановление постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи» включает в себя не только косметическое восстановление кожи, но также и медицинское профилактическое восстановление.

Согласно предпочтительному варианту выполнения настоящее изобретение относится к чисто косметическому применению стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи людей и млекопитающих.

Согласно другому предпочтительному варианту выполнения настоящее изобретение направлено на применение стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для профилактики кожных заболеваний у людей и млекопитающих, преимущественно кожных заболеваний из группы заболеваний, основанных на генетических или благоприобретенных нарушениях сцепления кожи, гомеостаза кожи, дифференциации кожи и/или барьерной функции кожи, предпочтительно Epidermolysis bullosa, Xeroderma pigmentosum, прогерии, ихтиозы, состояние после хирургического вмешательства и рентгеновского облучения, экзогенно индуцированная атрофия или гиперплазия, в частности, гиперпластические рубцы и келоиды, предпочтительно атрофия, вызванная топическими или системными кортикостероидами, и пр.

Следовательно изобретение относится также к применению указанных клеток для приготовления медикамента для профилактики кожных болезней.

Могут применяться как аутологические, так и аллогенные и ксеногенные клетки, при этом аутологические клетки предпочтительны для предупреждения иммунных реакций.

Согласно другому аспекту изобретение относится к косметическому способу восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи, включающему в себя стадию нанесения стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов на постаревшую, но в остальном здоровую и не поврежденную кожу.

При лечении постаревшей кожи предпочтительно применяются стволовые клетки из корневых сумок волос или предпочтительно их производные продромальные клетки кератиноцитов самого пациента, так называемые аутологические продромальные клетки кератиноцитов. Продромальные клетки кератиноцитов из корневых сумок волос содержат плюропотентные стволовые клетки, восстанавливающие эпителиальные кожные структуры в течение жизни. В результате и у пожилых доноров они обладают большим потенциалом пролиферации. Такие стволовые или продромальные клетки могут быть получены не только инвазивно, но также шаблонно и без биопсии кожи от донора со слабым волосяным покровом. Следовательно в случае применения упомянутых клеток обеспечивается незначительно инвазивная возможность для стойкого восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожи, в частности, ее верхнего слоя.

Стволовые клетки из корневых сумок волос и/или продромальные клетки кератиноцитов, а также их получение, отделение, размножение и хранение достаточно известны специалисту в области дерматологии. Предпочтительно стволовые клетки и/или продромальные клетки кератиноцитов, при осуществлении изобретения, получают из корневых сумок волос, в частности, из наружного эпителиального слоя корневой сумки волос на фазе роста (анагенеза).

Получение таких клеток является достаточно простым, безболезненным и не связано с риском для здоровья. Так, например, волосы для получения клеток получают извлечением (выщипыванием) длинных волос, в частности, волос капиллиции на стадии анагена. При этом предпочтительно, чтобы волосы происходили от подлежащего лечению лица или млекопитающего.

Понятие «получение» означает предпочтительно, по меньшей мере, частичное выделение и/или обогащение, а также размножение и селекцию клеток внутри культуры. Согласно предпочтительному варианту выполнения клетки высвобождают для этого из корневой сумки отобранного волоса ферментативно, например, с помощью раствора трипзина при его концентрации от 0,01 до 10%, предпочтительно от 0,025 до 0,1% и более предпочтительно около 0,05%, при необходимости с этилендиаминтетрауксусной кислотой и предпочтительно в физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS) в течение предпочтительно 5-60 мин., более предпочтительно в течение 10-15 мин. предпочтительно при 20°C, более предпочтительно при 37°C. Такая форма ферментативного отделения является наиболее щадящей для получаемых клеток. Также могут применяться и другие ферментативные системы, как, например, диспаза. Другими возможными стадиями получения клеток являются прекращение ферментативного отделения добавлением сыворотки и Ca/Mg, центрифугирование суспензии и суспендирование/введение содержащего клетки осадка в предназначенный для нанесения на кожу раствор или биологически деградируемую или биологически не деградируемую несущую матрицу. Предпочтительным применением является суспендирование содержащего клетки осадка в растворе с содержанием тромбина, который обеспечивает немедленную фиксацию нанесенных клеток в виде тонкого слоя после нанесения на кожу, предварительно обработанную фибриногеном и, следовательно, делает возможным однородное, не слишком герметическое нанесение на кожу на любом участке тела. Предпочтительно в способе согласно изобретению применяются аутологические стволовые клетки из корневых сумок волос и/или продромальные клетки кератиноцитов.

При необходимости клетки могут применяться в виде суспензии или осадка или при необходимости в виде экстракта клеток. При этом их помещают в биологически совместимый раствор или биологически совместимый носитель.

Стадия нанесения покрытия проводится предпочтительно с применением суспензии с 10²-10⁹, более предпочтительно с 10³-10⁵ клеток/см² обрабатываемого участка кожи, например, с помощью шприца или распылителя или с помощью биологически совместимого носителя или нетканого материала. Это может производиться с помощью биологически совместимого раствора (например, физиологического раствора с фосфатным буфером, среды из клеточной культуры, тромбина) или с помощью биологически совместимого биологического (например, фибрина, гуалуронана, коллагена) или синтетического (например, полиуретана, карбоксиметилцеллюлозы, полилизина, наночастиц) носителя. При этом клетки могут применяться в виде живых, способных к пролиферации или прекративших рост (например, в результате обработки митомицином С или рентгеновским облучением) клеток или же в виде экстрактов клеток (например, продукты сублимационной сушки, ультразвукового разрушения, раздражающего действия). Также могут применяться клетки, производные этих клеток при разных условиях инкубации in vitro (например, переменные концентрации pO₂ и/или pCO₂, переменные культурные среды, переменные матричные субстраты, переменные питающие клетки в непосредственном клеточном контакте или раздельные в двухкамерных системах культивирования, культура в глубине питательной среды или органо-типичная культура).

Понятие «нанесение покрытия» в смысле изобретения означает обычное нанесение клеток на кожу. При этом клетки предпочтительно фиксируются на коже, например, с помощью фибринозного клея и защищаются окклюзионной повязкой. Также возможен любой другой подходящий вид нанесения, например, путем введения клеток в биологические или синтетические матрицы с последующим их нанесением. Предпочтительно клетки могут быть также введены непосредственно в кожу. Для этого перед нанесением клеток с обрабатываемой кожи удаляют физически и/или механически эпидермис, а именно предпочтительно посредством дермабразии, поверхностного воздействия лазером (например, Fraxel re:hair® CO₂-лазер, Soltamedical, США) или поверхностного иглоукалывания (например, Dermaroller®, Skintes, Швейцария), при этом в верхнем слое кожи создаются плоскостные или предпочтительно точечные, т.е. фракционные дефекты в виде сетки, обеспечивающие проникновение нанесенных клеток внутрь кожи в смысле чресэпидермального применения. В результате вовлечения верхних слоев дермы в такой процесс абляции достигается дополнительно кожная стимуляция или же стимулируется также кожное восстановление.

Поэтому согласно предпочтительному варианту выполнения способа по изобретению верхний слой кожи удаляется перед нанесением клеток физически и/или механически, предпочтительно посредством поверхностной дермабразии, лазерной аппликации и/или поверхностного иглоукалывания.

Согласно еще более предпочтительному варианту выполнения перед нанесением клеток верхний слой кожи удаляют в виде частичного/фракционного удаления эпидермиса при разной глубине проникания с помощью лазера методом Fraxel и/или Dermaroller.

При нанесении или введении стволовые клетки и/или продромальные клетки кератиноцитов присутствуют предпочтительно в виде обогащенных или изолированных клеток в виде экстракта, суспензии, раствора или находящихся в биологически совместимом биологическом или синтетическом носителе.

Согласно еще одному предпочтительному варианту выполнения стволовые клетки из корневых сумок волос и/или продромальные клетки кератиноцитов перед своим нанесением или введением в кожу размножают культивированием in vitro и/или производят их селекцию при помощи специальных условий культивирования (например, переменные концентрации pO₂- и/или pCO₂, переменные среды культивирования, переменные матричные субстраты, переменные питательные клетки в прямом контакте с клетками или раздельно в двухкамерных системах культивирования, культура в глубине питательной среды или органо-типическая культура и пр.) в соответствии с предпочтительными критериями, такими, например, как содержание стволовых клеток и/или продромальных клеток кератиноцитов, потенциал стволовых клеток (монопотентность в противоположность мульти/плюрипотентности), мощность пролиферации, потенциал дифференциации, способность к выживанию и пр. Селекция в смысле изобретения означает преднамеренный выбор определенных стволовых клеток и/или продромальных клеток кератиноцитов или сопутствующих клеток (не стволовые или продромальные клетки кератиноцитов с такими функциями, как интерактивная стимуляция пролиферации или дифференциации стволовых или продромальных клеток кератиноцитов в смысле питательных клеток) с предпочтительными свойствами.

Кожу с нанесенными на нее клетками, в частности, если она была предварительно механически обработана и оставалась частично «открытой», предпочтительно плотно укрывают с тем, чтобы можно было защитить кожу и нанесенные на нее клетки от высыхания, инфекций и механических воздействий и, следовательно, для создания оптимальной влажной среды для роста клеток.

В целях предупреждения иммунных реакций при наличии аутологических, в частности, аллогенных и ксеногенных клеток предпочтительно предписывается применение, по меньшей мере, одного подавляющего (ауто)иммунную реакцию активного вещества, предпочтительно топического или системного кортикостероида и/или тормозного раздражителя Calcineurin.

Также было установлено, что дополнительное нанесение продромальных клеток меланоцитов оказывает благоприятное влияние на структуру и физиологию постаревшей кожи. Поэтому предпочтительным вариантом выполнения способа согласно изобретению предусматривается также дополнительное нанесение продромальных клеток меланоцитов на кожу, а именно до, после или предпочтительно одновременно со стволовыми клетками и/или продромальными клетками кератиноцитов. Наиболее предпочтительно, чтобы при получении стволовых и/или продромальных клеток кератиноцитов продромальные клетки меланоцитов совершенно не отделялись.

Применяемые согласно изобретению клетки могут предпочтительно содержать наряду со стволовыми клетками и/или продромальными клетками кератиноцитов, а также при необходимости с продромальными клетками меланоцитов также и другие содержащиеся в корневых сумках волос, в частности, другие продромальные клетки.

Также настоящее изобретение относится к упомянутому выше способу профилактики кожных болезней у млекопитающих и людей с постаревшей, но в остальном здоровой и не поврежденной кожей, в частности, для профилактики кожных болезней из группы кожных болезней, основанных на генетических или благоприобретенных нарушениях сцепления кожи, гомеостаза кожи, дифференциации кожи и/или барьерной функции кожи, преимущественно Epidermolysis bullosa, Xeroderma pigmentosum, прогерии, ихтиозы, состояние после хирургических вмешательств и рентгеновского облучения, а также экзогенно индуцированная атрофия или гиперплазия, в частности, гиперпластические рубцы и келоиды, предпочтительно атрофия, вызванная топическими или системными кортикостероидами, и пр. Предпочтительные варианты выполнения данного способа аналогичны вариантам выполнения описанного выше косметического способа.

Настоящее изобретение поясняется на примере приводимого ниже специфичного применения.

Пример

У 50-летней женщины с сильно постаревшей под действием ультрафиолета кожей лица, с неравномерной эпидермальной атрофией, мелкими морщинами, телеангиэктазиями щек, сухостью и пониженным тургором кожи было извлечено из кожи головы 50 анагенных волос, у них были отделены корни, которые в течение 10 минут инкубировали в растворе трипзина (0,05% трипзина/0,02% этилендиаминтетрауксусной кислоты в физиологическом растворе с фосфатным буфером (PBS) без Ca/Mg) при 37°C. Контроль под микроскопом после инактивирования трипзина добавкой физиологического раствора с фосфатным буфером с содержанием Ca/Mg и 20% сыворотки АВ человека подтвердил отделение всех клеток эпителия корневых сумок волос от стержня волоса. После пропуска через клеточное сито и последующего центрифугирования (1200 об./мин., 10 мин. при комнатной температуре) выделенные клетки поместили в физиологический раствор с фосфатным буфером с содержанием Ca/Mg и 5% глюкозы и капельно нанесли на участки лба и щек (0,1 мл на 5 см², соответственно около 5×10³ клеток/см²), обработанные CO₂-лазером методом Fraxel (сетчатая абляция около 20% обработанной поверхности эпидермиса до самого верхнего слоя дермы, глубина проникания около 100 мкм). После этого обработанный участок плотно закрыли современной раневой повязкой в целом на одну неделю. Первая смена повязки произошла через 3 суток. Затем обработанные участки кожи обрабатывали по утрам солнцезащитным кремом, фактор >50, и по вечерам - средством для ухода за кожей. В течение 3 месяцев отмечалось очевидное разглаживание кожных неровностей при снижении сухости кожи, увеличении тургора и гомогенизации эпидермальной структуры, также и телеангиэктазы щек были слегка регрессными, в целом был достигнут очень удовлетворительный для пациентки косметический результат.

1. Применение стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и неповрежденной кожи.

2. Применение стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов для профилактики кожных болезней у людей и млекопитающих, преимущественно кожных болезней из группы кожных болезней, основанных на генетических или благоприобретенных нарушениях сцепления кожи, гомеостаза кожи, дифференциации кожи и/или барьерной функции кожи, предпочтительно Epidermolysis bullosa, Xeroderma pigmentosum, прогерии, ихтиозы, состояние после хирургических вмешательств и рентгеновского облучения, а также экзогенно индуцированная атрофия или гиперплазия, в частности гиперпластические рубцы и келоиды, предпочтительно атрофия, индуцированная топическими или системными кортикостероидами.

3. Применение по п.1, которое осуществляют путем косметической обработки кожи людей и млекопитающих.

4. Применение по п.2, которое осуществляют путем предварительного приготовления медикамента.

5. Способ восстановления постаревшей, но в остальном здоровой и неповрежденной кожи, включающий в себя стадии:
i) обеспечение стволовых клеток из корневых сумок волос и/или продромальных клеток кератиноцитов и
ii) нанесение указанных клеток на постаревшую, но в остальном здоровую и неповрежденную кожу.

6. Способ по п.5, в котором стволовыми клетками из корневых сумок волос и/или продромальными клетками кератиноцитов являются аутологические клетки.

7. Способ по п.5 или 6, в котором верхний слой кожи удаляется перед нанесением клеток физически и/или механически, предпочтительно посредством поверхностной дермабразии, лазерной аппликации и/или поверхностного иглоукалывания.

8. Способ по п.7, в котором верхний слой кожи удаляется перед нанесением клеток в виде частичного/фракционного удаления эпидермиса с разной глубиной проникания с помощью лазера методом Fraxel и/или Dermaroller.

9. Способ по п.5, в котором клетки присутствуют в виде обогащенных или обособленных клеток в качестве экстракта, суспензии, раствора или введены в биологически совместимый биологический или синтетический носитель.

10. Способ по п.5, в котором стволовые клетки из корневых сумок волос и/или продромальные клетки кератиноцитов перед их нанесением размножают и/или отбирают посредством культивирования in vitro.

11. Способ по п.5, в котором во время и/или после нанесения клеток предписано применение, по меньшей мере, одного подавляющего аутоиммунную реакцию активного вещества, предпочтительно топического или системного кортикостероида и/или топического тормозного раздражителя Calcineurin.

12. Способ по п.5, в котором на кожу дополнительно наносят продромальные клетки меланоцитов.

13. Способ по п.5, в котором клетки включают в себя наряду со стволовыми и/или продромальными клетками кератиноцитов и при необходимости продромальными клетками меланоцитов также дополнительные содержащиеся в корневых сумках волос клетки, предпочтительно другие продромальные клетки.

Изобретение относится к биологической субстанции, получаемой из нервной и кожной тканей эмбрионов копытных сельскохозяйственных животных, предназначенной в качестве биологически активной субстанции, для производства фармацевтических препаратов и косметической продукции, стимулирующей физиологическую и репаративную регенерацию кожи, проявляющуюся уменьшением выраженности признаков ее старения с омолаживающим эффектом и защитой от вредных факторов внешней среды, и способу ее получения.

Способ лечения трофических язв // 2484837

Изобретение относится к области медицины, а именно к хирургии, и может быть использовано для лечения трофических язв. .

Способ получения веществ, влияющих на пролиферацию эпидермоидных клеток карциномы человека а431 // 2481113

Изобретение относится к области медицинской биотехнологии и фармацевтической промышленности и касается способа получения веществ, влияющих на пролиферацию эпидермоидных клеток карциномы человека А431.

Способ повышения эффективности вакцинации лошадей // 2476237

Изобретение относится к ветеринарии. .

Способ получения резорбируемой полилактидной матрицы для культивирования и имплантации клеток, предназначенных для заживления ран // 2464987

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины и представляет собой способ получения резорбируемой полилактидной матрицы для культивирования и имплантации клеток, предназначенных для заживления ран, включающий получение резорбируемой гидрофильной пористой полилактидной матрицы, равномерно покрытой микрофибриллярным коллагеном 1-го типа, для чего предварительно получают гидрофильную пористую полилактидную матрицу толщиной от 13 мкм до 15 мкм и диаметром пор от 2 мкм до 3 мкм, затем проводят нанесение на гидрофильную пористую полилактидную матрицу 0,01%-ного раствора коллагена 1-го типа в 0,1%-ной уксусной кислоте, инкубируют в течение 30 минут при комнатной температуре, далее поверхность матрицы промывают фосфатно-солевым буфером рН 7,4 для удаления несвязавшегося с субстратом белка, процедуру нанесения раствора коллагена 1-го типа проводят еще 2 раза, гидрофильную поверхность пористой полилактидной матрицы, равномерно покрытую микрофибриллярными структурами коллагена диаметром от 10 нм до 20 нм, используют для культивирования кератиноцитов человека.

Лекарственное средство для лечения фибромиалгии // 2464023

Изобретение относится к области фармакологии и представляет собой лекарственное средство для лечения фибромиалгии, включающее пилокарпин или гидрохлорид пилокарпина и фармацевтически приемлемый носитель, в котором ежедневная доза пилокарпина или гидрохлорида пилокарпина составляет от 0,1 мг до 1000 мг.

Способ лечения базально-клеточного рака кожи // 2451531

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для лечения базально-клеточного рака кожи. .

Применение стромальных стволовых клеток жировой ткани для лечения свищей // 2435846

Изобретение относится к биотехнологии. .

Биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей (варианты), способ получения биотрансплантата (варианты) и способ коррекции дефектов мягких тканей // 2428996

Изобретение относится к медицине и представляет собой биотрансплантат для коррекции дефектов мягких тканей, характеризующийся тем, что он представляет собой суспензию, содержащую аутологичную культуру фибробластов в 0,9% растворе хлорида натрия в концентрации 0,6-3,0×106 в 1 мл биотрансплантата, интегрированных на фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой измельченной до размера 100-200 мкм бесклеточной матрице в растворе фармацевтически приемлемого биосовместимого биодеградируемого препарата гиалуроновой кислоты, при этом объемное соотношение аутологичной культуры фибробластов, бесклеточной матрицы и препарата гиалуроновой кислоты составляет 4:1:1 соответственно, а в качестве фармацевтически приемлемой биосовместимой биодеградируемой бесклеточной матрицы используют препарат «Сайметра», представляющий собой переработанную донорскую кожу человека, лишенную клеток и структурных иммуноспецифических белков, основу которого составляет коллаген и эластин, представленный в виде инъекционной формы.

Способ лечения алопеции // 2406512

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лечения алопеции. .

Способ замещения дефекта периферического нерва // 2499565

Изобретение относится к медицине, в частности к реконструктивной хирургии периферических нервов, и может быть использовано для замещения дефектов периферических нервов при их посттравматическом повреждении. Способ включает пересечение невром и замещение дефекта аутонервными вставками. Предварительно у пациента осуществляют забор аутологичной жировой ткани методом липосакции. После проведения ферментной обработки из нее получают клетки стромальной сосудистой фракции (ССФ). Полученные клетки ССФ интраневрально трансплантируют в периферический и центральный отрезки нерва и в каждую вставку. Концы нерва, а также сами вставки покрывают фибриновым клеем. В условиях клинической практики способ позволяет восстановить функции поврежденного нерва при значительном сокращении сроков лечения. 1 пр., 4 ил.

Способ лечения глубоких ожогов на ранних этапах // 2499603

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения глубоких ожогов на ранних этапах. Для этого берут трансплантат из здоровых тканей пациента. Приготавливают клеточную суспензию в лабораторных условиях и наносят одновременно с фибриновым клеем «Тиссукол». Изобретение позволяет надежно зафиксировать клеточную суспензию на ожоговой ране, при этом не используются дополнительные химические элементы и добавки в процессе работы с клеточным материалом. Использование изобретения в ходе операции позволяет сократить время пребывания пациента на операционном столе. Кроме того, клеточная суспензия, применяемая совместно с фобриновым клеем, представлена целостными клеточными элементами, что способствует успешной адгезии и сохранению их функционального состояния. 1 пр.

Способ изготовления дермального матрикса // 2524619

Изобретение относится к медицине, в частности к хирургии, травматологии, трансплантологии, кумбостиологии, и представляет собой способ изготовления дермального матрикса (ДМ). Способ включает забор кожи у донора-трупа в операционной дерматомом по стандартной методике с соблюдением правил асептики и антисептики. Сразу после заготовки биологический материал помещают в стерильную емкость, содержащую водный раствор антибиотика широко спектра действия. С сохранением стерильности емкость герметично закрывают. Биоматериал хранят при -40°C до получения результатов патологоанатомического исследования донора, исследования биологической безопасности тканей донора. Биоматериал с подтвержденной биологической безопасностью используют для изготовления ДМ. Изготовление ДМ включает следующие этапы: разделение эпидермиса и дермы, децеллюляризация дермы, обеспечение биосовместимости трансплантата. Способ позволяет сократить производство до 36 ч и обеспечивает получение бесклеточного, биосовместимого дермального матрикса толщиной до 1 мм, с сохранением структур и ориентации волокон. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 ил.

Применение ланохолестероловой фракции из шерстного жира в качестве биоэмульгатора для косметических антивозрастных средств // 2526158

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, в частности к применению ланохолестероловой фракции из шерстного жира в качестве биоэмульгатора для косметических антивозрастных средств. Применение ланохолестероловой фракции из шерстного жира в качестве биоэмульгатора для косметических антивозрастных средств, которая получена путем щелочного гидролиза шерстного жира смесью этанола, едкого натрия, пирогаллола и воды, либо смесью этанола, едкого натрия, пирогаллола, толуола и воды, взятых в определенном соотношении, с последующим выделением и очищением, при определенных условиях. Применение вышеописанной фракции из шерстного жира способствует длительному увлажнению и усилению водоудерживающей способности кожи.

Комбинированный трансплантат дермального матрикса с мезенхимальными мультипотентными стромальными клетками, способ его получения и способ лечения ран с его использованием // 2526813

Группа изобретений относится к медицине, а именно к биотехнологии, и может быть использована для восстановления кожного покрова с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей. Комбинированный трансплантат (КТ) представляет собой дермальный матрикс (ДМ), полученный из донорского слоя с колонизированными на его поверхности аутологичными ММСК в количестве не менее 750-1500 тыс на 1 см2. Группа изобретений относится также к способу получения комбинированного трансплантата, включающему забор костного мозга у пациента, получение культуры ММСК, нанесение суспензии ММСК с концентрацией не менее 1 млн/мл на поверхность ДМ из расчета 1 млн ММСК на 5 см2 ДМ. Использование данного комбинированного трансплантата обеспечивает заживление ран кожи и мягких тканей за счет ускорения процессов регенерации. 3 н. и 8 з.п. ф-лы.

Способ восстановления кожного покрова у пациентов с обширными ранами с дефектом мягких тканей (варианты) // 2526814

Представленная группа изобретений относится к медицине, а именно к дерматологии и хирургии, и может быть применено для восстановления кожного покрова у пациентов с обширными травматическими ранами с дефектом мягких тканей. Для этого выполняют иссечение утильной кожи по краям раны. Иссеченную кожу препарируют от остатков подкожной жировой клетчатки и измельчают до фрагментов площадью 1-2 мм2. Затем моделируют дермальный матрикс, изготовленный из кожи донора-трупа, по форме раны. Перфорируют дермальный матрикс (ДМ) для создания путей оттока раневого отделяемого и укладывают на дно раны таким образом, чтобы между краями перфораций был диастаз. В перфорации в шахматном порядке вносят фрагменты утильной кожи пациента. Затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой. Другим изобретением является трансплантация в дно раны аллогенных мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток (ММСК) в виде суспензии при помощи инъекций на глубину 0,1-0,3 мм с частотой 10 инъекций на 1 см2. Объем каждой инъекции составляет 0,05-0,1 мл. Затем моделируют дермальный матрикс, изготовленный из кожи донора-трупа, по форме раны. Перфорируют его для создания путей раневого отделяемого, укладывают на дно раны. Затем рану укрывают стерильной марлевой повязкой. Заявленные изобретения обеспечивают оптимизацию заживления раны кожи и мягких тканей за счет стимуляции процессов регенерации стволовыми клетками, в том числе с алло- и ауто-ММСК и резидентными столовыми клетками. Такой результат достигается за счет использования ДМ как оптимального биосовместимого носителя для клеток и для создания необходимой микросреды в ране, стимулирования процессов регенерации за счет комбинации с гомогенизированной аутологичной кожей или инъекциями аллогенных ММСК в область раны. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 2 пр.

Способ противоопухолевой иммунотерапии // 2530523

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для противоопухолевой иммунотерапии. Для этого больному вводят дендритные клетки (ДК), получаемые из кожи, селезенки, костного мозга, тимуса, лимфатических узлов, пуповинной крови или периферической крови больного (аутологичные ДК), при этом ДК больному вводят поэтапно. На первом этапе осуществляют введение зрелых аллогенных ДК, нагруженных опухолеспецифичным антигеном, созревание которых осуществляют ex vivo. На втором этапе не менее чем через 24 часа, но не более чем через 120 часов после первого этапа осуществляют повторное введение зрелых аллогенных ДК одновременно с введением незрелых аутологичных ДК in situ в опухоль, при этом опухоль предварительно или одновременно с введением ДК подвергают воздействию абляции. Использование данного способа позволяет достичь усиления иммунного ответа путем введения двухкомпонентного иммунного агента, состоящего из сенсибилизирующей дозы аллогенных зрелых клеток и терапевтической дозы незрелых ДК, при этом для сенсибилизации достаточно 10% от терапевтической дозы ДК. 1 з.п. ф-лы, 3 пр.

Биологически активная добавка к пище // 2536296

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к биологически активной добавке к пище. Биологически активная добавка к пище, обладающая адаптогенным и тонизирующим действием, включающая цельную кровь пантовых оленей, пантовый концентрат по ТУ 9860-010-29734071-11, мед, фруктовую эссенцию, аскорбиновую кислоту и препарат «Цитросепт грейпфрутовый», взятые при определенном соотношении компонентов. Вышеописанный состав позволяет получить биологически активную добавку к пище, с повышенной адаптогенной и тонизирующей активностью. 1 з.п. ф-лы, 8 табл., 1 пр.

Способ повышения общей физической работоспособности спортсменов // 2542506

Изобретение относится к спортивной медицине и фармакологии и может быть использовано для повышения общей физической работоспособности спортсменов скоростно-силовых видов спорта. Для этого вводят биологически активную добавку «Эпсорин» ежедневно два раза в день. При этом во время этапа общефизической подготовки «Эпсорин» принимают в течение двух недель за 30-40 минут до начала учебно-тренировочного процесса по 10-15 капель на стакан воды; в период специальной физической подготовки принимают в течение 10 дней за 30-40 минут до начала учебно-тренировочного процесса по 10-15 капель на стакан воды; в переходный период принимают в течение 3-5 дней за 30-40 минут до тренировки по 5-7 капель на стакан воды; в день соревнований доза увеличивается до 20-30 капель на стакан воды. Способ позволяет повысить общую физическую работоспособность и выносливость спортсменов за счет активации метаболизма и антиоксидантных систем организма. 1 табл.

Способ лечения трофических язв // 2543344

Изобретение относится к хирургии и может быть использовано для лечения трофических язв. Для этого используют аутосыворотку, полученную из 20,0-25,0 мл крови, после центрифугирования и отделения ее от белково-тромбоцитарного свертка обкалывают края под дно раны, а белково-тромбоцитарный сверток используют для непосредственного наложения на рану. Повторяют указанные приемы до 20 раз через два дня. Изобретение позволяет обеспечить ускоренное заживление раны с полноценным восстановлением дермального слоя кожи за счет использования материала с высокой биосовместимостью, содержащего компоненты, создающие оптимальную среду для регенерации раны. 2 пр.