Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации

Авторы патента:

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2499260:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" Сибирского отделения РАМН (RU)

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации. Сущность способа: в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией на третьем триместре гестации определяют количество эритроцитов, окрашенных 0,1% раствором метиленового синего, выполняющего роль переносчика электронов, и содержание метгемоглобина в эритроцитах. Если при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 будет наблюдаться увеличение числа окрашенных эритроцитов до 12,0±0,9%, а увеличение метгемоглобина до 1,5±0,42%, то оценивают нарушение восстановления метгемоглобина и угрозу насыщения гемоглобина эритроцитов кислородом. 2 ил.

Цель работы - показать отрицательное влияние цитомегаловирусной инфекции на восстановление метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных на третьем триместре гестации.

Как известно, в безъядерных эритроцитах широко представлен пентозный цикл утилизации глюкозы, в процессе которого происходит восстановление никотинамидадениннуклеотидфосфата (НАДФ) в восстановленную форму - НАДФ·Н (Федоров Н.А., 1976). За весь пентозный цикл образуется две молекулы НАДФ·Н (J. Murphy, 1960).

Образующиеся НАДФ·Н участвуют в разных клеточных процессах: синтезе жирных кислот, холестерина, восстановлении метгемоглобина. Нарушение пентозного цикла связано с разрушением структур эритроцитов и наступлением их гемолиза.

Особое место в функциональной деятельности эритроцита занимает метгемоглобин, являясь той формой гемоглобина, в которой железо гема окислено до Fe (III) и поэтому он не способен переносить кислород.

Формирование метгемоглобина в эритроцитах происходит при отравлении нитратами, анилином, полипептидами (Новицкий В.В., Сапрыкина Э.В. и др., 2006; Галоян А.А., Симонян М.А. и др., 2007).

Интенсивность реакций пентозного цикла в эритроцитах заметно увеличивается в присутствии метиленового синего, что способствует восстановлению метгемоглобина.

Вероятно, в безъядерных эритроцитах с утратой ядра произошла и утрата одного из факторов, участвующих в общей дыхательной системе -акцептора и переносчика водорода, который может быть заменен метиленовым синим (Энгельгардт В.А., 1943).

В норме восстановление метгемоглобина выполняется метгемоглобин-редуктазой. При подавлении ее функции могут ее заменить неферментативные системы; такие как глютатион, аскорбиновая кислота, метиленовый синий.

Однако на настоящее время в литературе нет сведений, указывающих на то, что в ингибировании метгемоглобин-редуктазы принимают участие антигены персистирующих инфекций, в том числе такие как антигены цитомегаловирусной инфекции.

В представленной работе мы остановились на следующих не освещенных в литературе факторах:

1. Содержание метгемоглобина в эритроцитах беременных изучалось в эритроцитах беременных при обострении во время гестации цитомегаловирусной инфекции, на третьем триместре беременности.

2. Процесс переноса электронов для восстановления метгемоглобина определяли путем окрашивания эритроцитов 0,1% раствором метиленового синего, предполагая, что ингибирование при цитомегаловирусной инфекции метгемоглобин-редуктазы приведет к повышенному включению в восстановление метгемоглобина метиленового синего как источника электронов.

Заявленный способ имеет следующие приемы:

1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания СО РАМН. Обследовано 30 беременных, у которых на третьем триместре гестации появилось нарастание титра антител к цитомегаловирусу до 1:1600. Обследовано 15 беременных, у которых в период гестации не обнаружено антител к цитомегаловирусу.

2. Все исследования были проведены с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной ассоциации «Этические принципы проведения научных медицинских исследований с участием человека» с поправками 2000 г. и «Правилами клинической практики в Российской Федерации», утвержденными приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. №266.

3. Титр антител к цитомегаловирусу определяли иммуноферментным методом в периферической крови беременных на спектрофотометре «Stat Fax - 2100» (USA) с реагентами «Вектор-Бест» (Новосибирск).

4. Содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови определяли спектрофотометрическим методом по Кушаковскому М.С. (1968).

5. Активность метиленового синего в эритроцитах периферической крови определяли следующим образом:

гепаринизированную кровь, взятую из локтевой вены беременной в количестве 0,5 мл, помещали в 0,5 мл 0,1% раствора метиленового синего, приготовленного на фосфатном буфере с рН 7,4. Полученную взвесь эритроцитов в течение 5 мин содержали в термостате при температуре 37°С. Затем каплю взвеси помещали на предметное стекло и накрывали покровным стеклом, окатовав его парафином. Камеру со взвесью эритроцитов в 0,1% растворе метиленового синего помещали на микроскоп и изучали при увеличении 10×100. Полученные поля фотографировались на пленку «Кодак», с которой через сканер вносились в компьютер. В последующем производили подсчет количества эритроцитов, окрашенных метиленовой синькой, на 100 от общего числа подсчитанных как у здоровых беременных, так и беременных с обострением цитомегаловирусной инфекцией.

В процессе исследования были получены следующие результаты.

При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации при титре 1:1600 в периферической крови количество окрашенных 0,1% раствором метиленового синего эритроцитов насчитывалось 12,0±0,9% (фигура 1), а количество метгемоглобина увеличивалось до 1,5±0,42%. У здоровых беременных содержание эритроцитов, окрашенных 0,1% раствором метиленового синего, составило 3,0±0,08% (фигура 2), а содержание метгемоглобина - 0,5±0,04%.

Таким образом, цитомегаловирусная инфекция подавляет восстановления метгемоглобина и создает угрозу насыщения гемоглобина эритроцитов кислородом.

1. Галоян А.А., Симонян М.А. и др. Влияние обогащенного пролином полипептида на восстановление метгемоглобина и образование супероксида под действием металлопротеинов-цитохрома b558111 и супрола in vitro. // Нейрохимия. - 2007. - №1. - с.37-40.

2. Кушаковский М.С. Клинические формы повреждения гемоглобина. // Лен. отделение. - «Медицина». - 1968. - 324 с.

3. Новицкий В.В., Сапрыкина Э.В. и др. Механизмы повреждения эритроцитов при токсическом действии метгемоглобино-образователей. // Бюллетень Сибирской медицины. - 2006. - №1. - с.32-37.

4. Федоров Н.А. Нормальное кроветворение и его регуляция.// М.:. - «Медицина». - 1976. - 543 с.

5. Энгельгардт В.А., Саков Н.Е. О механизме пастеровского эффекта. // «Биохимия». - Т.8. - 1943. - С.9-12.

6. Murphy J.R. Erythrocyte metabolism I The equilibration of glucose - С between serum and erythrocytes // J. Lab. Clin. Med. - 1960. - vol.55. - p.281-286.

На фигуре 1 изображена реакция окраски эритроцитов периферической крови беременной на третьем триместре гестации 0,1% раствором метиленового синего при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600. В силу ингибирования цитомегаловирусом процесса восстановления метгемоглобина число окрашенных эритроцитов остается высоким (12,0±0,9), так как блокируется перенос электронов с метиленовым синим.

На фигуре 2 изображена реакция окраски эритроцитов периферической крови здоровых беременных. В периферической крови определяется только 3,0±0,08% эритроцитов, окрашенных 0,1% раствором метиленового синего, поскольку путь для него к восстановлению метгемоглобина свободен.

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременных в третьем триместре, отличающийся тем, что дополнительно определяют количественное содержание в периферической крови эритроцитов, окрашенных 0,1% раствором метиленового синего, выполняющего роль переносчика электронов, и если при титре антител к цитомегаловирусу 1:1600 в третьем триместре гестации будет наблюдаться увеличение числа окрашенных эритроцитов до 12,0±0,9%, а увеличение метгемоглобина до 1,5±0,42%, то оценивают как нарушение восстановления метгемоглобина и угрозу насыщения гемоглобина эритроцитов кислородом.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения.

Способ прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого // 2498305

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ).

Способ определения содержания титана, алюминия в тканях сердечно-сосудистой системы // 2498304

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включающий помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 час при 75°С, последующее приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 часов при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 часа при температуре 110°С, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 часов при 20°С с последующим нагревом в течение 6 часов при 75°С и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой, при следующем соотношении компонентов, мас.%: НNО3 35, Н2О2 5, HF 13,3, деионизированная вода - остальное.

Способ выявления инфекционных осложнений у больных острым лимфобластным лейкозом при нейтропении // 2497129

Изобретение относится к медицине и касается способа лабораторной диагностики развития инфекции у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) в состоянии индуцированной нейтропении.

Способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания // 2497120

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания.

Способ выбора тактики лечения больных острым деструктивным панкреатитом // 2497119

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выбора тактики лечения деструктивной формы острого панкреатита. В сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина (ПКТ) с помощью количественного иммуноферментного анализа.

Быстрый способ обработки гладкомышечных клеток кишечника гемолизином ii bacillus cereus // 2497118

Изобретение относится к медицине и предназначено для повышения проницаемости мембран гладкомышечных клеток тонкого кишечника. Проводят обработку клеток в одной пробе пороформирующим гемолизином HlyII из Bacillus cereus в концентрации 3-5 мкг/мл.

Способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы // 2497117

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы, включающий определение вентиляционной функции легких и исследование мононуклеаров, выделенных из венозной крови больного, с последующим расчетом индекса, характеризующего воспалительный процесс.

Способ прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом // 2496111

Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом. Сущность способа: у больных гриппом определяют возрастную группу, срок наблюдения и значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах.

Способ прогнозирования "тлеющей" формы хронического лимфолейкоза // 2496110

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии, может быть использовано для прогнозирования развития «тлеющей» формы хронического лимфолейкоза. Сущность способа: проводят генотипирование полиморфного локуса - 248G>A гена Bcl-2 ассоциированного X белка (ВАХ - 248G>A).

Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении // 2499261

Изобретение относится к медицине и касается способа персонифицированного подбора антиагрегантых препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, включающего забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования крови, разделение ее на пробы и введение в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°C и с индуктором агрегации тромбоцитов. Изобретение обеспечивает повышение точности подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении. 2 пр., 5 ил.

Способ определения чувствительности опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ // 2499994

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной диагностике. Предложен способ определения чувствительности опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ у пациентов с раком легкого в цитологическом опухолевом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при помощи праймеров для выявления 8 делеций в 19 экзоне гена EGFR и замены L858R гена EGFR в 21 экзоне. При выявлении любой из этих мутаций определяют чувствительность опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ как положительную и назначают терапию гефитинибом или эрлотинибом. Способ обладает высокой информативностью и чувствительностью, прост в исполнении и интерпретации результата. 2 ил., 2 табл., 1 пр.

Способ дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей // 2499995

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа. При значениях миелопероксидазы в пределах 0,18-0,2 усл.ед. диагностируют гнойный менингит, а при значениях 0,059-0,061 усл.ед. - серозный менингит. Показатель активности цитохромоксидазы в пределах 0,49-0,57 усл.ед. свидетельствует о гнойном менингите, в пределах 0,186-0,174 усл.ед. - о серозном менингите. Показатель активности кислой фосфатазы в ликворе в пределах 0,14-0,18 усл.ед. следует расценивать как гнойный менингит, а в пределах 0,069-0,071 усл.ед. - как серозный менингит. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. 1 табл., 2 пр.

Способ определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий // 2501014

Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце. При наличии липолитической активности наблюдают матовые ореолы вокруг лунки, при отсутствии липолитической активности среда вокруг лунки остается прозрачной. Использование заявленного способа позволяет просто, доступно и экономично определить липолитическую активность субклеточных фракций бактерий. 3 з.п. ф-лы, 6 пр.

Способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада // 2501015

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада. В буккальных эпителиоцитах определяют предрасполагающие и протективные генотипы: маркер Arg399Gln гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Gln, протективный генотип Arg/Arg; маркер Arg194Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Trp; маркер Glu185Gln гена NBS1 - предрасполагающий генотип Glu/Gln, протективный генотип Glu/Glu; маркер Ser326Cys гена hOGG1 - предрасполагающий генотип Ser/Cys; маркер Asp1853Asn гена ATM - предрасполагающий генотип Asp/Asp, протективный генотип Asp/Asn; маркер Asp1104His гена XPG - протективный генотип His/His. При преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона и о прогнозировании накопления микроядер и протрузий. При количественном преобладании протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона и о прогнозировании устойчивости к накоплению микроядер и протрузий. Предложенный способ позволяет проводить оценку генетически детерминированной предрасположенности к формированию повышенного уровня микроядер и протрузий еще до воздействия радиационного фактора. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 2 пр.

Способ определения щелочной фосфатазы в костной и хрящевой тканях // 2501016

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к определению ферментов в костной и хрящевой тканях при изучении регенераторных процессов, и описывает способ определения щелочной фосфатазы в костной и хрящевой тканях, включающий подготовку образцов исследуемых тканей и гистохимическое исследование срезов полученного материала, где образцы исследуемых костной и хрящевой тканей выдерживают в забуференном растворе нейтрального 10% формалина в течение 1 суток при температуре +4°C, затем обрабатывают в 0,1 М растворе фосфатного буфера сначала в 4 смены по 2 часа каждая, а после в 9 смен по часу с добавлением сахарозы постепенно возрастающей концентрации, после чего исследуемый материал погружают в реагент Tissue-Tek O.C.T. Compound, замораживают при -35°C, готовят срезы и визуально определяют наличие щелочной фосфатазы. Способ прост в исполнении, его возможно использовать для определении щелочной фосфатазы в образцах ткани в каждом учреждении медицинского профиля и научной лаборатории без использования специального оборудования. 5 ил., 1 пр.

Способ прогнозирования развития нарушений функции миокарда у детей с острым лимфобластным лейкозом // 2502071

Изобретение относится к педиатрии и онкогематологии и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений функции миокарда у детей с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) на разных этапах полихимиотерапии (ПХТ). Для чего проводят исследование в крови N-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида (NT-pro-BNP), прогормона предсердного натрийуретического пептида (pro-ANP), белка, связывающего жирные кислоты (БСЖК), ферритина, гепсидина, гомоцистеин, неоптерина до начала ПХТ и уровня ферритина 2 после проведения индукции ремиссии. Выявленные значения показателей вышеперечисленных параметров подставляют в уравнения для расчета изменения показателей ЭКГ, ИЖМ, В(Е-Еа), NT-pro-BNP, ФВ после окончания интенсивной ПХТ. Рассчитывают общий коэффициент К по следующей формуле: К=ЭКГ3×ИЖМ3×В(Е-Еа)3×NT-pro-BNP3×ФВ3. При значениях коэффициента К>0,17 прогнозируют развитие кардиальных осложнений. Изобретение позволяет выбрать тактику сопроводительной терапии для коррекции и предупреждения нарушений функции миокарда у детей острым лимфобластным лейкозом. 6 табл.

Способы скрининга с использованием насекомых, имеющих гематоэнцефалический барьер // 2503004

Предлагаются модели на насекомых, предназначенные отображать проницаемость гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) у млекопитающего, в частности, человека. Изобретение касается способа оценки транспорта химического соединения через ГЭБ, а также применения насекомых в скрининге веществ, обладающих биологическим действием на мозг или центральную нервную систему и/или действующих на заболевание или нарушение, затрагивающее мозг или центральную нервную систему. Способ включает: введение химического соединения насекомому, имеющему ГЭБ; выдерживание насекомых; препарирование мозга насекомых и измерение концентрации химического соединения в мозге. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 табл., 12 пр.

Способ оценки функционального состояния эндотелия экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте // 2503961

Изобретение относится к медицине, в частности к способу оценки функционального состояния эндотелия (ФСЭ) экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. Сущность способа состоит в том, что для оценки ФСЭ осуществляют исходный анализ биохимических показателей крови, таких как оксид азота (II), супероксиддисмутаза (СОД), малоновый диальдегид (МДА), проводят аллопластику брюшной аорты, затем осуществляют биохимический контроль через 6 месяцев, выводят животных из эксперимента, далее проводят гистологическое исследование зоны аллопластики аорты с помощью компьютерной морфометрии и осуществляют расчет корреляции. При увеличении уровня метаболитов NO считают развитие утолщения интимы менее выражено, что не превышает физиологических значений восстановления стенки артерии после операционного воздействия, при уменьшении уровня метаболитов N0 развивается гиперплазия интимы, а при увеличении активности СОД и уровня МДА определяют активное развитие утолщение интимы артерии. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки ФСЭ у животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. 3 табл., 5 ил., 1 пр.

Способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии штаргардта // 2504781

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Фибробласты кожи, взятые у пациента, культивируют и обрабатывают вирусными конструкциями, несущими гены Oct4, Sox2 и Klf4 под контролем CMV промотера. Осуществляют направленную дифференцировку фибробластов в клетки ретины. Из клеток ретины выделяют кодирующую РНК гена АВСА4. По наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4 диагностируют предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Изобретение позволяет эффективно диагностировать предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта по наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4. 3 ил., 1 табл., 1 пр.