Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении



Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении
Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении
Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении
Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении
Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении

 

G01N33/50 - химический анализ биологических материалов, например крови, мочи; испытания, основанные на способах связывания биоспецифических лигандов; иммунологические испытания (способы измерения или испытания с использованием ферментов или микроорганизмов иные, чем иммунологические, составы или индикаторная бумага для них, способы образования подобных составов, управление режимами микробиологических и ферментативных процессов C12Q)

Владельцы патента RU 2499261:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр неврологии" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НЦН" РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине и касается способа персонифицированного подбора антиагрегантых препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, включающего забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования крови, разделение ее на пробы и введение в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°C и с индуктором агрегации тромбоцитов. Изобретение обеспечивает повышение точности подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении. 2 пр., 5 ил.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии, и может быть использовано для исследования индивидуальной чувствительности и резистентности больных к антиагрегантным препаратам, что позволит улучшить лечение больных в ангионеврологических клиниках.

Известно, что разные люди по разному отвечают на одни и те же антиагрегантные препараты. Индивидуальный ответ на данные препараты является комплексным признаком, зависящим как от внешних факторов (образ жизни, возраст, взаимодействие с другими лекарственными препаратами, состояние здоровья и т.п.), так и от генетических особенностей конкретного больного.

Одним из факторов риска считается активизация сосудисто-тромбоцитарного звена гемостаза и нарушение реологических свойств крови, в частности повышение свертываемости, которое может привести к опасным последствиям для организма, тромбообразованию. В этой связи для предотвращения активации внутрисосудистого тромбообразования патогенетически обоснованным является назначение антитромбоцитарных средств, которые требуют к себе особого внимания при выборе конкретного препарата [Косарев В.В. и др. Фармакология и лекарственная терапия. Под редакцией В.К. Лепахина, М.: Эксмо, 2009, 482 с.].

Как известно, процесс тромбообразования регулируется в основном на двух уровнях: подавление метаболизма простагландинов и подавление АДФ-индуцируемой агрегации тромбоцитов. Тромбоциты можно рассматривать в качестве ключевой мишени для направленного терапевтического воздействия. Они первыми отвечают на эндотелиальное повреждение [Маслова Н.Ф. и др. Клопидогрель (плавикс) - современное антиагрегантное средство: доказанная фармакологическая эффективность. Ж. Провизор, 2007, №20, с.10-13].

Наиболее перспективными средствами, с позиции доказательной медицины, являются антиагреганты. Антиагрегантными свойствами обладают следующие группы препаратов:

- ингибиторы циклооксигеназы - нестероидные противовоспалительные средства (ацетилсалициловая кислота, индометацин, сульфинпиразон, напроксен и др.);

- ингибиторы фосфодиэстеразы цАМФ и аденилатциклазы (дипиридамол, пентоксифиллин);

- селективные ингибиторы тромбоксансинтетазы (производные имидазола);

- стимуляторы синтеза простациклина (производные пиразолина, кумарина и никотиновой кислоты);

- простаноиды (простациклин, в том числе синтетические аналоги, простагландины Е2 и D2);

- ингибиторы связывания аденозиндифосфата (АДФ) с рецепторами тромбоцитов (клопидогрель (К), тиклопидин (тиклид)).

Учитывая значение тромбоцитов для первичного и коагуляционного гемостаза, особое внимание уделяется препаратам, способным воздействовать на их активность. В настоящее время известно около 20 антитромбоцитарных средств, которые могут путем влияния на различные звенья блокировать агрегацию тромбоцитов, тем самым прекращая тромбообразование уже на начальном этапе. Однако широкое клиническое применение в качестве антиагрегантов, эффективность которых доказана различными исследованиями, получили такие лекарственные средства как ацетилсалициловая кислота (аспирин), тиклопидин и пентоксифиллин (трентал).

Аспирин (ацетилсалициловая кислота) - одно из наиболее распространенных средств профилактики тромбообразования, которое было признано «золотым стандартом» антиагрегантной терапии. Механизм действия аспирина связан с блокированием циклооксигеназы тромбоцитов, вследствие чего нарушается синтез индукторов их агрегации (простагландинов G2, Н2 и тромбоксана А2) из арахидоновой кислоты.

Несмотря на то, что антиагрегантное действие аспирина развивается быстро и отличается продолжительностью, он блокирует только один механизм агрегации тромбоцитов. К физиологически значимым индукторам агрегации относятся также АДФ, тромбин, серотонин, коллаген. Самым важным из них является АДФ. Недостатками аспирина, ограничивающими его применение как антиагреганта, являются также низкая эффективность при высоких концентрациях адреналина в плазме, возможность развития толерантности, а также отрицательное действие на желудочно-кишечный тракт: риск кровотечений и язвообразования. К тому же ему присуща довольно широкая вариабельность индивидуальных ответов, что затрудняет подбор индивидуальной дозы.

Тиклопидин является производным тиенопиридина. По химической структуре и по механизму антитромботического действия он отличается от других антиагрегантов. Предполагают, что его фармакологический эффект связан с блокадой активации рецепторов IIb/IIIa тромбоцитов, индуцированной АДФ. Тиклопидин необратимо ингибирует функцию тромбоцитов, но не оказывает влияния на циклооксигеназу и цАМФ.

Пентоксифиллин (трентал) является производным пурина. Обладает антиагрегационным действием. Ингибирует фосфодиэстеразу, стабилизирует цАМФ и снижает концентрацию внутриклеточного кальция. Блокирует аденозиновые рецепторы. Тормозит агрегацию тромбоцитов, повышает их устойчивость к деформации, улучшает реологические свойства крови, подавляет тромбообразование и нормализует микроциркуляцию.

На сегодняшний день известны способы определения индивидуальной чувствительности и резистентности больных к антиагрегантным препаратам путем капиллярного электрофореза [Minarik M, Kopeckova M, Gassman М, Osmancik P, Benesova L. Rapid testing of clopidogrel resistance by genotyping of CYP2C19 and CYP2C9 polymorphisms using denaturing on-chip capillary electrophoresis. Electrophoresis, 2012 Apr; 33(8):1306-10]. Однако в данной работе оценивается механизм резистентности только для одного препарата - клопидогрела по скорости его метаболизма ферментами цитохрома Р450.

Известен также способ персонифицированного подбора антиагрегантных лекарственных препаратов больным, нуждающимся в данном лечении путем проведения ПЦР в реальном времени [Jorge L. Sepulveda, MD, PhD. Microarray Technology and Other Methods in Pharmacogenomics Testing. - Pharmacogenomics in Clinical Therapeutics, First Edition. Edited by Loralie J. Langman and Amitava Dasgupta. 2012. - p.185-200].

Но метод ПЦР в реальном времени является дорогостоящим и трудоемким.

В качестве ближайшего аналога нами рассмотрен способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, путем определения агрегации тромбоцитов in vitro [RU 2188419 от 27.06.2000]. Однако данный способ не дает возможности установить механизм действия препаратов и визуализировать молекулярную белковую мишень - экспрессия, которая изменяется в ответ на действие про- и антиагрегантов, что непосредственно влияет на точность индивидуального подбора антиагрегантных препаратов.

Нами разработан более информативный способ в отношении определения механизмов антиагрегационной активности препаратов, в котором актин цитоплазматический 1 является маркером тромбообразования и потенциальной лекарственной мишенью.

Техническим результатом изобретения является повышение точности индивидуального подбора антиагрегантных препаратов за счет визуализации белков протеома тромбоцитов, в частности идентификация фракции белка актина цитоплазматического 1, экспрессия которого изменяется под действием про- и антиагрегантов.

Технический результат достигается тем, что для персонифицированного подбора антиагрегантых препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, проводят забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью ее центрифугирования, разделения плазмы богатой тромбоцитами на пробы и введения в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°С и с индуктором агрегации тромбоцитов, затем после инкубации проводят осаждение тромбоцитов из проб плазмы с антиагрегантными препаратами путем повторного центрифугирования при 6000 об/мин в течение 10 минут и температуре 10°С, каждый из полученных клеточных осадков растворяют в 167 мкл буфера TES, который содержит: 2% додецилсульфата натрия (SDS), 1 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, pH 6.8, и прогревают при 37°С в течение 60 минут при перемешивании, после чего смешивают осадки с краской для нанесения образцов на полиакриламидный гель (ПААГ) в соотношении 1:1 и прогревают 20 минут в тех же условиях, затем методом 1-D электрофореза в 14% полиакриламидном геле в присутствии SDS определяют в каждой из проб фракцию белка актин цитоплазматического 1 по м.м. 45 кДа и выявляют для каждой пробы степень его экспрессии - интенсивность окрашивания белковой полосы м.м. 45 кДа, причем оптимальным для лечения больного антиагретантным препаратом является препарат пробы, в которой фракция белка актин цитоплазматического 1 имеет наименьшую интенсивность окраски.

Способ осуществляется следующим образом.

Больному производят забор крови из кубитальной вены, затем получают обогащенную тромбоцитами плазму путем центрифугирования в течение 5 минут при 1000 об/мин и проводят разделение обогащенной тромбоцитами плазмы на пробы аликвоты по 300 мкл с внесением в каждую из них антиагрегационного препарата с определенным механизмом антиагрегационного действия на тромбоциты (при этом используются препараты с различными механизмами антиагрегационного действия). Осуществляют инкубацию проб плазмы с различными антиагрегационными препаратами с перемешиванием при температуре 36,5-37,5°С в течение 10 минут. Затем вносят в исследуемые пробы индуктор агрегации тромбоцитов АДФ или адреналин и проводят вновь инкубацию при тех же условиях. После инкубации из проб плазмы, обогащенной тромбоцитами, и с находящимися в них различными антиагрегационными препаратами проводят осаждение тромбоцитов путем повторного центрифугирования при 6000 об/мин в течение 10 минут и температуре 10°С, полученный супернатант удаляют и проводят отмывание тромбоцитов фосфатным буфером рН 7,4. Затем полученные клеточные осадки растворяют в 167 мкл буфера TES, который содержит: 2% SDS, 1 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, pH 6.8, и прогревают при 37°С в течение 60 минут при перемешивании и смешивают с краской для нанесения образцов на 14% полиакриламидный гель (ПААГ) в соотношении 1:1 и прогревают еще 20 минут в тех же условиях (температуре 37°С и в течение 60 минут). На гель наносят каждую пробу по 2,5 мкл образца. Краска для нанесения образцов на полиакриламидный гель содержит: 1 ml I M Tris-HCl, pH 6.8; 2.4 g глицерина; 4 ml 20% SDS; 0.4 ml 2-меркаптоэтанола; 2 mg Кумасси голубого G-250 и 2.7 ml воды. После чего проводят исследование белков кровяных пластинок в ПААГ в присутствии SDS по Леммли (U.K. Laemmli. Cleavage of Structural Proteins during the Assembly of the Head of Bacteriophage T4. Nature, 1970; V.227, P.680-685). Электрофорез проводят в тонком слое полиакриламидного геля. Белки мигрируют в зависимости от молекулярной массы. После завершения электрофореза выявляют зону фракции белка актин цитоплазматического 1 по м.м. 45 кДа, определяют для каждой пробы степень его экспрессии - интенсивность окрашивания белковой полосы м.м. 45 кДа. Оптимальным для лечения больного антиагретантным препаратом является препарат пробы, в которой фракция белка актин цитоплазматического 1 имеет наименьшую интенсивность окраски.

Сущность предложенного нами способа состоит в том, что исследование протеома тромбоцитов позволяет добиться улучшения процесса подбора антиагрегантов у больных, имеющих цереброваскулярную патологию в короткие сроки.

Способ отличается следующим:

- позволяет проводить оценку протеома тромбоцитов и визуализировать молекулярные белковые мишени, через которые лекарственные препараты оказывают свое действие, путем исследования тромбоцитов пациентов;

- позволяет оценить белковый состав протеома тромбоцитов каждого пациента;

- позволяет визуализировать белок-маркер актин цитоплазматический 1, экспрессия которого изменяется под действием про- и антиагрегантов;

- дает возможность исследовать механизм действия большого набора известных и потенциальных антиагрегантов;

- является более простым и экономически выгодным и открывает новые возможности для исследования и подбора адекватной лекарственной терапии.

Примеры осуществления способа.

Пример 1.

Больная С., 65 лет, наблюдалась в НЦН РАМН с артериальной гипертонией. Получала симптоматическую терапию антиагрегантным препаратом тиклопидин и гипотензивными препаратами с незначительным временным положительным эффектом на фоне прогрессирования заболевания. Проведенное исследование протеома тромбоцитов пациентки предлагаемым способом выявило, что для нее препаратом выбора является аспирин. На рисунке 1 приведены данные по исследованию протеома тромбоцитов и идентификация фракции белка-маркера актин цитоплазматического 1. Проведенное исследование выявило, что для данной больной препаратом выбора является аспирин, так как наименьшая интенсивность окраски фракции белка актин цитоплазматического 1 была в пробе плазмы, обогащенной тромбоцитами с аспирином (рис.1, дорожка 5). На рисунке 1 указаны результаты исследования для пациентки С. на дорожках 1-6:

1-дорожка - белки-маркеры молекулярного веса

2-дорожка - контроль

3-дорожка - адреналин

4-дорожка - АДФ

5-дорожка - АДФ+аспирин

6-дорожка - АДФ+тиклопидин.

На рисунке 2 представлен результат обработки данных электрофореграммы (определение индивидуальной чувствительности к действию про- и антиагрегантов больной С.) в программе Melanie Viewer 7, которая также подтверждает, что препаратом выбора является аспирин.

На рисунках 4 и 5 представлен результат обработки данных электрофореграммы (определение индивидуальной чувствительности (рис.4) и резистентности (рис.5) к действию про- и антиагрегантов больной С.) в программе Image J.

На основании анализа был назначен аспирин, состояние больной постепенно улучшилось, произошла нормализация показателей агрегации тромбоцитов.

Пример 2.

Больная Д., 65 лет, наблюдалась в НЦН РАМН с артериальной гипертонией и дисциркуляторной энцефалопатией. Получала симптоматическую терапию антиагрегантным препаратом аспирин и гипотензивными препаратами с незначительным эффектом на фоне прогрессирования заболевания. Проведенное исследование протеома тромбоцитов пациентки предлагаемым способом выявило, что для данной больной препаратом выбора является тиклопидин (рис.1, дорожка 11), так как наименьшая интенсивность окраски фракции белка актин цитоплазматического 1 была в пробе плазмы, обогащенной тромбоцитами с тиклопидином (рис.1, дорожка 11). На рисунке 1 указаны результаты исследования для больной Д. на дорожках 7-11:

7-дорожка - контроль

8-дорожка - адреналин

9-дорожка - АДФ

10-дорожка- АДФ+аспирин

11-дорожка- АДФ+тиклопидин.

На рисунке 3 представлен результат обработки данных электрофореграммы (определение индивидуальной чувствительности к действию про- и. антиагрегантов больной Д. Компьютерная обработка результатов электрофореграммы (изменение насыщенности цвета окрашенной белковой полосы - актина цитоплазматического) в программе Melanie Viewer 7, которая также подтверждает, что препаратом выбора является тиклопидин.

На основании анализа аспирин был заменен на тиклопидин, состояние больной улучшилось, произошла нормализация показателей агрегации тромбоцитов.

Результаты, полученные с помощью протеомных методов, согласуются с результатами клинических анализов агрегации тромбоцитов, дополняя их. Для пациента 1 препаратом выбора является аспирин. Для пациента 2 препаратом выбора является тиклид. При анализе электрофореграммы видно, что белок с м.в. 45 кДа может являться как маркером тромбообразования, так и лекарственной мишенью.

Протеомная карта является визуальным документом, подтверждающим индивидуальную чувствительность к лекарственным препаратам. По полученным протеомным картам нормальных и патологически измененных клеток можно установить, какие белки важны для развития того или иного патологического состояния и выбрать их в качестве мишеней лекарственных препаратов.

Нами были исследованы протеомные карты 20 больных с различными заболеваниями (ишемические цереброваскулярные заболевания, сердечнососудистые заболевания), требующими лечения антиагрегантными препаратами (аспирин, тиклид, трентал). Анализ данных карт показал, что во всех случаях корректировка лечения на основе указанного анализа приводила к положительному результату - нормализации показателей агрегации тромбоцитов.

Предложенный нами способ лабораторного исследования антиагрегационного действия препаратов с помощью определения экспрессии актина цитоплазматического 1 методом 1-D электрофореза в ПААГ в присутствии SDS по Леммли является более информативным и позволяет визуализировать молекулярную белковую мишень экспрессии, которая изменяется в ответ на действие препаратов, что позволяет осуществлять подбор индивидуально для каждого пациента с учетом особенностей протеома его тромбоцитов и открывает возможность изучения молекулярных механизмов, лежащих в основе лекарственной резистентности.

Способ персонифицированного подбора антиагрегантных препаратов больным, нуждающимся в подобном лечении, включающий забор крови больного, получение богатой тромбоцитами плазмы с помощью центрифугирования крови, разделения ее на пробы и введения в них антиагрегантных препаратов, имеющих различные механизмы антиагрегационного действия на тромбоциты с последующей инкубацией проб плазмы с препаратами при температуре 36,5-37,5°C и с индуктором агрегации тромбоцитов, отличающийся тем, что после инкубации проводят осаждение тромбоцитов из проб плазмы с антиагрегантными препаратами путем повторного центрифугирования при 6000 об/мин в течение 10 мин и температуре 10°C, каждый из полученных клеточных осадков растворяют в 167 мкл буфера TES, который содержит: 2% SDS, 1 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, pH 6,8, и прогревают при 37°C в течение 60 мин при перемешивании, после чего смешивают осадки с краской для нанесения образцов на полиакриламидный гель в соотношении 1:1 и прогревают 20 мин в тех же условиях, затем методом 1-D электрофореза в 14% полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия определяют в каждой из проб актин цитоплазматический 1 по м.м. 45 кДа, выявляют для каждой пробы степень его экспрессии - интенсивность окрашивания белковой полосы м.м. 45 кДа, причем оптимальным для лечения больного антиагретантным препаратом является препарат пробы, в которой фракция белка актин цитоплазматического 1 имеет наименьшую интенсивность окраски.



 

Похожие патенты:

Изобретение применяют для оценки влияния цитомегаловирусной инфекции на содержание метгемоглобина в эритроцитах периферической крови беременной на третьем триместре гестации.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для выявления высокого риска развития нарушения толерантности к глюкозе на фоне приема метопролола у больных стабильной стенокардией напряжения.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и касается способа прогнозирования возникновения рецидивов при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ).
Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ определения содержания в тканях сердечно-сосудистой системы Ti, Al, включающий помещение образца ткани в емкость с добавлением азотной кислоты и выдержкой в течение 3 час при 75°С, последующее приливание перекиси водорода с выдержкой в течение 2 часов при той же температуре, добавление новой порции азотной кислоты с выдержкой 2 часа при температуре 110°С, добавление плавиковой кислоты и выдерживание в течение 18 часов при 20°С с последующим нагревом в течение 6 часов при 75°С и помещением в микроволновую печь, выпариванием и выполнением измерений методикой масс-спектроскопии с индуктивно связанной плазмой, при следующем соотношении компонентов, мас.%: НNО3 35, Н2О2 5, HF 13,3, деионизированная вода - остальное.
Изобретение относится к медицине и касается способа лабораторной диагностики развития инфекции у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) в состоянии индуцированной нейтропении.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ прогнозирования популяционных нарушений биотрансформации чужеродных веществ, обусловленных воздействием техногенных химических факторов среды обитания.
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выбора тактики лечения деструктивной формы острого панкреатита. В сыворотке крови определяют концентрацию прокальцитонина (ПКТ) с помощью количественного иммуноферментного анализа.

Изобретение относится к медицине и предназначено для повышения проницаемости мембран гладкомышечных клеток тонкого кишечника. Проводят обработку клеток в одной пробе пороформирующим гемолизином HlyII из Bacillus cereus в концентрации 3-5 мкг/мл.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ дифференциальной диагностики тяжелой бронхиальной астмы, включающий определение вентиляционной функции легких и исследование мононуклеаров, выделенных из венозной крови больного, с последующим расчетом индекса, характеризующего воспалительный процесс.
Изобретение относится к медицине, а именно к инфектологии, и может быть использовано для прогнозирования развития периваскулярных нарушений у больных гриппом. Сущность способа: у больных гриппом определяют возрастную группу, срок наблюдения и значение ристомицин-агрегации тромбоцитов в сыворотке крови в секундах.

Изобретение относится к области медицины, в частности к молекулярной диагностике. Предложен способ определения чувствительности опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ у пациентов с раком легкого в цитологическом опухолевом материале методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени при помощи праймеров для выявления 8 делеций в 19 экзоне гена EGFR и замены L858R гена EGFR в 21 экзоне. При выявлении любой из этих мутаций определяют чувствительность опухоли легкого к терапии ингибиторами тирозинкиназ как положительную и назначают терапию гефитинибом или эрлотинибом. Способ обладает высокой информативностью и чувствительностью, прост в исполнении и интерпретации результата. 2 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа. При значениях миелопероксидазы в пределах 0,18-0,2 усл.ед. диагностируют гнойный менингит, а при значениях 0,059-0,061 усл.ед. - серозный менингит. Показатель активности цитохромоксидазы в пределах 0,49-0,57 усл.ед. свидетельствует о гнойном менингите, в пределах 0,186-0,174 усл.ед. - о серозном менингите. Показатель активности кислой фосфатазы в ликворе в пределах 0,14-0,18 усл.ед. следует расценивать как гнойный менингит, а в пределах 0,069-0,071 усл.ед. - как серозный менингит. Использование заявленного способа позволяет повысить точность диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце. При наличии липолитической активности наблюдают матовые ореолы вокруг лунки, при отсутствии липолитической активности среда вокруг лунки остается прозрачной. Использование заявленного способа позволяет просто, доступно и экономично определить липолитическую активность субклеточных фракций бактерий. 3 з.п. ф-лы, 6 пр.

Изобретение относится к области медицины. Предложен способ оценки индивидуальной чувствительности генома человека к воздействию повышенных доз излучений радона и продуктов его распада. В буккальных эпителиоцитах определяют предрасполагающие и протективные генотипы: маркер Arg399Gln гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Gln, протективный генотип Arg/Arg; маркер Arg194Trp гена XRCC1 - предрасполагающий генотип Arg/Trp; маркер Glu185Gln гена NBS1 - предрасполагающий генотип Glu/Gln, протективный генотип Glu/Glu; маркер Ser326Cys гена hOGG1 - предрасполагающий генотип Ser/Cys; маркер Asp1853Asn гена ATM - предрасполагающий генотип Asp/Asp, протективный генотип Asp/Asn; маркер Asp1104His гена XPG - протективный генотип His/His. При преобладании предрасполагающих генотипов или равном количестве предрасполагающих и протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной чувствительности к действию повышенных доз радона и о прогнозировании накопления микроядер и протрузий. При количественном преобладании протективных генотипов делают заключение о высокой индивидуальной устойчивости к воздействию радона и о прогнозировании устойчивости к накоплению микроядер и протрузий. Предложенный способ позволяет проводить оценку генетически детерминированной предрасположенности к формированию повышенного уровня микроядер и протрузий еще до воздействия радиационного фактора. 1 з.п. ф-лы, 5 табл., 2 пр.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к определению ферментов в костной и хрящевой тканях при изучении регенераторных процессов, и описывает способ определения щелочной фосфатазы в костной и хрящевой тканях, включающий подготовку образцов исследуемых тканей и гистохимическое исследование срезов полученного материала, где образцы исследуемых костной и хрящевой тканей выдерживают в забуференном растворе нейтрального 10% формалина в течение 1 суток при температуре +4°C, затем обрабатывают в 0,1 М растворе фосфатного буфера сначала в 4 смены по 2 часа каждая, а после в 9 смен по часу с добавлением сахарозы постепенно возрастающей концентрации, после чего исследуемый материал погружают в реагент Tissue-Tek O.C.T. Compound, замораживают при -35°C, готовят срезы и визуально определяют наличие щелочной фосфатазы. Способ прост в исполнении, его возможно использовать для определении щелочной фосфатазы в образцах ткани в каждом учреждении медицинского профиля и научной лаборатории без использования специального оборудования. 5 ил., 1 пр.
Изобретение относится к педиатрии и онкогематологии и может быть использовано для прогнозирования развития нарушений функции миокарда у детей с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) на разных этапах полихимиотерапии (ПХТ). Для чего проводят исследование в крови N-концевого фрагмента предшественника мозгового натрийуретического пептида (NT-pro-BNP), прогормона предсердного натрийуретического пептида (pro-ANP), белка, связывающего жирные кислоты (БСЖК), ферритина, гепсидина, гомоцистеин, неоптерина до начала ПХТ и уровня ферритина 2 после проведения индукции ремиссии. Выявленные значения показателей вышеперечисленных параметров подставляют в уравнения для расчета изменения показателей ЭКГ, ИЖМ, В(Е-Еа), NT-pro-BNP, ФВ после окончания интенсивной ПХТ. Рассчитывают общий коэффициент К по следующей формуле: К=ЭКГ3×ИЖМ3×В(Е-Еа)3×NT-pro-BNP3×ФВ3. При значениях коэффициента К>0,17 прогнозируют развитие кардиальных осложнений. Изобретение позволяет выбрать тактику сопроводительной терапии для коррекции и предупреждения нарушений функции миокарда у детей острым лимфобластным лейкозом. 6 табл.
Предлагаются модели на насекомых, предназначенные отображать проницаемость гематоэнцефалического барьера (ГЭБ) у млекопитающего, в частности, человека. Изобретение касается способа оценки транспорта химического соединения через ГЭБ, а также применения насекомых в скрининге веществ, обладающих биологическим действием на мозг или центральную нервную систему и/или действующих на заболевание или нарушение, затрагивающее мозг или центральную нервную систему. Способ включает: введение химического соединения насекомому, имеющему ГЭБ; выдерживание насекомых; препарирование мозга насекомых и измерение концентрации химического соединения в мозге. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 2 табл., 12 пр.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу оценки функционального состояния эндотелия (ФСЭ) экспериментальных животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. Сущность способа состоит в том, что для оценки ФСЭ осуществляют исходный анализ биохимических показателей крови, таких как оксид азота (II), супероксиддисмутаза (СОД), малоновый диальдегид (МДА), проводят аллопластику брюшной аорты, затем осуществляют биохимический контроль через 6 месяцев, выводят животных из эксперимента, далее проводят гистологическое исследование зоны аллопластики аорты с помощью компьютерной морфометрии и осуществляют расчет корреляции. При увеличении уровня метаболитов NO считают развитие утолщения интимы менее выражено, что не превышает физиологических значений восстановления стенки артерии после операционного воздействия, при уменьшении уровня метаболитов N0 развивается гиперплазия интимы, а при увеличении активности СОД и уровня МДА определяют активное развитие утолщение интимы артерии. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность оценки ФСЭ у животных после реконструктивных операций на брюшной аорте. 3 табл., 5 ил., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ диагностики предрасположенности пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Фибробласты кожи, взятые у пациента, культивируют и обрабатывают вирусными конструкциями, несущими гены Oct4, Sox2 и Klf4 под контролем CMV промотера. Осуществляют направленную дифференцировку фибробластов в клетки ретины. Из клеток ретины выделяют кодирующую РНК гена АВСА4. По наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4 диагностируют предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта. Изобретение позволяет эффективно диагностировать предрасположенность пациента к наследственной макулодистрофии Штаргардта по наличию делеции в экзоне 39-41 гена АВСА4. 3 ил., 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к прогнозированию риска раннего развития атеросклероза у больных хроническим простатитом. Сущность способа состоит в том, что в сыворотке крови больных хроническим простатитом молодой возрастной группы определяют уровень общего тестостерона, секссвязывающего глобулина с последующим расчетом индекса свободного тестостерона, а также определяют содержание липопротеидов высокой плотности, триацилглицеридов и рассчитывают коэффициент атерогенного риска по формуле. При значении коэффициента атерогенного риска <3,7 прогнозируют высокий риск раннего развития атеросклероза. Использование заявленного способа позволяет повысить точность прогнозирования риска раннего развития атеросклероза у больных хроническим простатитом. 1 табл., 2 пр.
Наверх