Способ ингибирования активности фермента рнк-полимеразы

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ ингибирования активности фермента РНК-полимеразы. Ингибирование осуществляют путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе по крайней мере одного соединения, содержащего органический макроциклический комплекс с инкапсулированным ионом переходного металла, выбранный из группы, включающей 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+); 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диметил-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) кобальт(2+); 1,8-бис(2-фенилбора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12,17,18-гекса(метилтио)-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) рутений(2+); 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-циклогександимеркаптилбицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+); 1,12-бис-(трет-бутилбора)-2,11,13,22,23,32-гексаокса-3,10,14,21,24,31-гексазапентацикло[11,11.11.04.9015,20025.30]дитри-аконта-3,9,14,20,24,30-гексаен(2-) железо(2+). Способ обеспечивает ингибирование активности РНК-полимеразы при микромолярной концентрации ингибитора, а также расширяет арсенал ингибиторов РНК-полимеразы. 22 пр.

 

Изобретение относится к области биохимии и касается способа ингибирования активности фермента РНК-полимеразы, ответственного за проведение транскрипции дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), то есть за формирование в клетке живого организма макромолекул матричной рибонуклеиновой кислоты (РНК), комплементарной исходной ДНК. Данное изобретение может быть использовано, например, в молекулярной биологии, биохимии, фармакологии и т.д.

Известен способ ингибирования активности фермента РНК-полимеразы путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе функционализированного ароматического мета-диамина (Патент США № 6,194,399 B1, 2001, класс 514/155).

Известен способ ингибирования активности фермента РНК-полимеразы путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе производных (азидонафталин-1-сульфамидо)-гексопиранозил-6-трифосфата при облучении красным светом (Патент России №20036903, 1991, класс С07С 311/49).

Наиболее близким к заявляемому является известный способ ингибирования активности фермента РНК-полимеразы путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе соединения, содержащего органический макроциклический фрагмент (Патент США № 2009/0137467 А1, класс 514/12, 2009), - прототип. В данном способе в качестве ингибитора используют производное рифамицина.

Недостатком известного способа является его относительная сложность, обусловленная сравнительно низкой химической устойчивостью известного ингибитора в транскрипционной системе, что неизбежно вызывает определенные трудности при работе с этим ингибитором.

Технической задачей изобретения является расширение арсенала технических средств, которые могут быть использованы для ингибирования активности фермента РНК-полимеразы.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе ингибирования активности фермента РНК-полимеразы путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе соединения, содержащего органический макроциклический фрагмент, в качестве ингибитора используют по крайней мере один макрополициклический комплекс с инкапсулированным ионом переходного металла.

Предлагаемый способ может быть использован для ингибирования любой РНК-полимеразы, присутствующей в клетках любых организмов, включая бактериофаги, бактерии, высшие организмы и т.д.

При реализации предлагаемого способа могут быть использованы различные транскрипционные системы, основными компонентами которых являются РНК-полимераза, матричная ДНК и рибонуклеозидтрифосфаты. Кроме того, транскрипционная система может включать спермидин, соль магния, соль натрия, буферную смесь и т.д.

В предлагаемом изобретении в качестве ингибитора используют по крайней мере один макрополициклический комплекс с инкапсулированным ионом переходного металла. В качестве таких соединений могут быть использованы, например, комплексы металлов с органическими лигандами, содержащие два и более макроциклических фрагмента. Такими лигандами могут быть, например, макрополициклические лиганды, образованные, например, сшивкой кислотами Льюиса оксимов и оксимгидразонов, их полиаминные аналоги и т.д. Если в качестве ингибитора вместо макрополициклических комплексов использовать макромоноциклические комплексы переходных металлов, например дифтороборосшитый бис-альфа-бензилдиоксимат железа(II), то предлагаемый способ становится неработоспособным. Предлагаемый способ также будет неработоспособным, если в качестве ингибитора вместо макрополициклического комплекса с инкапсулированным ионом переходного металла использовать немакроциклический комплекс иона такого металла.

В качестве инкапсулированных, т.е. включенных в трехмерную полость макрополициклического лиганда, ионов переходных металлов могут быть использованы, например, ионы железа(II), кобальта(I, II, III), рутения(II) и т.д. Вышеуказанные соединения описаны в научно-технической литературе (например, Я.З. Волошин, О.А. Варзацкий, Ю.Н. Бубнов. Клеточные комплексы переходных металлов в биохимии и медицине. Изв. АН. Сер. хим., 2007, 56, С.555-582, Y.Z. Voloshin, N.A. Kostromina, R. Krämer, Clathrochelates: synthesis, structure and properties, Elsevier, Amsterdam, 2002, 420 с.), однако использование этих соединений для ингибирования активности фермента РНК-полимеразы в литературе не описано.

В предлагаемом техническом решении ингибирование активности РНК-полимеразы доказывают традиционным методом, включающим инкубирование транскрипционной системы в присутствии ингибитора при 37°C в течение 1 часа (ч) с последующим разделением продуктов при помощи электрофореза в 1,2%-ном агарозном геле и определение количества синтезированной РНК по интенсивности свечения соответствующей полосы. Концентрацию ингибитора (IC50), приводящую к 50%-ной потере активности РНК-полимеразы, определяют путем анализа зависимости выхода синтезированной РНК от концентрации ингибитора по сравнению с контрольной реакцией, проводимой в отсутствие ингибитора. Для каждого ингибитора проводят несколько независимых экспериментов при каждой концентрации ингибитора.

Дополнительно в предлагаемом техническом решении ингибирование активности ферментов биосинтеза нуклеиновых кислот при блокировании интерфейса макромолекулярного комплекса фермент-матричная нуклеиновая кислота макрополициклическим соединением с инкапсулированным ионом переходного металла доказывают традиционным методом на примере РНК-полимеразы как модельного фермента, включающим предварительное инкубирование ингибитора с отдельными компонентами транскрипционной системы при 37°C в течение 15 минут, инкубирование транскрипционной системы в присутствии ингибитора при 37°C в течение 1 часа (ч) с последующим разделением продуктов при помощи электрофореза в 1,2%-ном агарозном геле и определение количества синтезированной РНК по интенсивности свечения соответствующей полосы. Концентрацию ингибитора (IC50), приводящую к 50%-ной потере активности РНК-полимеразы, определяют путем анализа зависимости выхода синтезированной РНК от концентрации ингибитора по сравнению с контрольной реакцией, проводимой в отсутствие ингибитора. Для каждого ингибитора проводят несколько независимых экспериментов при каждой концентрации ингибитора.

Ингибирование активности фермента РНК-полимеразы с помощью предлагаемого способа доказывают следующие примеры.

Пример 1

В 20 микролитрах (мкл) дистиллированной деионизированной воды готовят раствор, содержащий хлорид магния с концентрацией 6 ммоль/л (мМ), хлорид натрия с концентрацией 2 мМ, спермидин с концентрацией 2 мМ, дитиотреитол с концентрацией 2 мМ, каждый из четырех рибонуклеозидтрифосфатов с концентрацией 2 ммоль/л (мМ) и трис-HCl с концентрацией 40 мМ при значении pH 7,9. К полученному раствору прибавляют 0.5 микрограмма (мкг) матричной ДНК (линеаризованная плазмида pTZ19R), ингибитор рибонуклеазы RiboLock (10 единиц активности (ед. акт.)), РНК-полимеразу бактериофага Т7 (12 ед. акт.) и 0.5 мкл раствора ингибитора макробициклического комплекса с инкапсулированным ионом железа(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+) в диметилсульфоксиде с финальной концентрацией ингибитора в реакционной смеси 1 микромоль/литр (мкМ) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 1 часа. Реакцию останавливают путем быстрого охлаждения до -20°C и продукты разделяют при помощи электрофореза в 1,2%-ном агарозном геле в трис-боратной буферной смеси (трис с концентрацией 8.9 мМ, борная кислота с концентрацией 8.9 мМ, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты с концентрацией 0.2 мМ) с добавленным 0.5 мкг/мл бромистого этидия, необходимого для окрашивания электрофореграммы. Полученную электрофореграмму фотографируют при облучении длинноволновым ультрафиолетом (365 нм) и полученные изображения анализируют стандартным способом. Дополнительно проводят 4 эксперимента при следущих концентрациях ингибитора: 5 мкМ, 10 мкМ, 20 мкМ и 30 мкМ с пятикратным повторением каждого эксперимента для повышения точности измерения. Значение IC50 определяют при помощи анализа зависимости процента синтезированной матричной РНК от концентрации ингибитора по сравнению с контрольной реакцией, проводимой в отсутствие ингибитора. Полученное значение IC50 составляет 2.5 мкМ, что свидетельствует о практически полном ингибировании фермента РНК-полимеразы при микромолярной концентрации ингибитора.

Пример 2

Опыт проводят аналогично описанному в Примере 1, однако вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli, а в качестве ингибитора используют макробициклический комплекс с инкапсулированным ионом кобальта(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диметил-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) кобальт(2+) (D.R. Boston and N.J. Rose, Encapsulation reactions. Synthesis and study of clathro chelates derived from dimethylglyoxime, cobalt, and Lewis acids, J. Am. Chem. Soc., 1973, 95, p.4163-4168). Полученное значение IC50 составляет 8,2 мкМ.

Пример 3

Опыт проводят аналогично описанному в Примере 1, однако вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus, а в качестве ингибитора используют макробициклический комплекс с инкапсулированным ионом рутения(II) 1,8-бис(2-фенилбора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12,17,18-гекса(метилтио)-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) рутений(2+) (Y.Z. Voloshin, О.А. Varzatskii, Т.Е. Kron, V.K. Belsky, V.E. Zavodnik, N.G. Strizhakova, V.A. Nadtochenko, V.A. Smirnov, Encapsulation of ruthenium(II) with macrobicyclic dioxime-functionalized ligands: on the way to new types of DNA-cleaving agents and probes, J. Chem. Soc, Dalton Trans., 2002, P.1203-1211). Полученное значение IC50 составляет 9,5 мкМ.

Пример 4

Опыт проводят аналогично описанному в Примере 1, однако в качестве ингибитора используют эквимолярную смесь ингибитора из Примера 1 и макротрициклического комплекса с инкапсулированным ионом железа(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-циклогександимеркаптилбицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+) (Y.Z. Voloshin, О.А. Varzatskii, A.S. Belov, Z.A. Starikova, N.G. Strizhakova, A.V. Dolganov, D.I. Kochubey, Y.N. Bubnov, Synthesis, X-ray structure and redox properties of the macrobicyclic iron(II) N2- and S2-containing vic-dioximates, Inorg. Chim. Acta, 2010, 363, p.134-146). Полученное значение IC50 составляет 4,4 мкМ.

Пример 5

Опыт проводят аналогично описанному в Примере 1, однако в качестве ингибитора используют эквимолярную смесь ингибиторов из Примеров 1, 2 и макропентациклического комплекса с инкапсулированным ионом железа(II) 1,12-бис-(трет-бутилбора)-2,11,13,22,23,32-гексаокса-3,10,14,21,24,31-гексазапентацикло[11,11.11.04.9015,20025.30]дитри-аконта-3,9,14,20,24,30-гексаен(2-)железо(2+) (Я.З. Волошин, О.А. Варзацкий, З.А. Старикова, М.Ю. Антипин, А.Ю. Лебедев, А.С. Белов. Супрамолекулярная организация кристаллов аллилсульфидного клатрохелата: влияние природы сольватных молекул. Изв. АН. Сер. хим., 2004, 53, С.1439-1444). Полученное значение IC50 составляет 5,3 мкМ.

Пример 6

Опыт проводят аналогично Примеру 1, однако в качестве ингибитора используют упомянутый в примере 4 макротрициклический комплекс с инкапсулированным ионом железа(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-циклогександимеркаптилбицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+), а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 5,9 мкМ.

Пример 7

Опыт проводят аналогично Примеру 1, однако в качестве ингибитора используют упомянутый в примере 5 макропентациклический комплекс с инкапсулированным ионом железа(II) 1,12-бис-(трет-бутилбора)-2,11,13,22,23,32-гексаокса-3,10,14,21,24,31-гексазапентацикло[11,11.11.04.9015,20025.30]дитри-аконта-3,9,14,20,24,30-гексаен(2-) железо(2+), а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus. Полученное значение IC50 составляет 2,7 мкМ.

Возможность связывания макрополициклических комплексов с РНК-полимеразой доказывают следующие примеры.

Пример 8

В 20 микролитрах (мкл) дистиллированной деионизированной воды готовят раствор, содержащий хлорид магния с концентрацией 6 ммоль/л (мМ), хлорид натрия с концентрацией 2 мМ, спермидин с концентрацией 2 мМ, дитиотреитол с концентрацией 2 мМ, каждый из четырех рибонуклеозидтрифосфатов с концентрацией 2 ммоль/л (мМ) и трис-HCl с концентрацией 40 мМ при значении pH 7,9. К полученному раствору прибавляют 0.5 микрограмма (мкг) матричной ДНК (линеаризованная плазмида pTZ19R) и 0.5 мкл раствора ингибитора макробициклического комплекса с инкапсулированным ионом железа(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+) в диметилсульфоксиде с финальной концентрацией ингибитора в реакционной смеси 1 микромоль/литр (мкМ) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 15 минут. Затем прибавляют ингибитор рибонуклеазы RiboLock (10 единиц активности (ед. акт.)) и РНК-полимеразу бактериофага Т7 (12 ед. акт.) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 1 часа. Затем опыт завершают аналогично описанному в Примере 1. Полученное значение IC50 составляет 10.2 мкМ, что свидетельствует о значительном снижении активности ингибитора при предварительной инкубации его с матричной ДНК за счет неспецифического связывания ингибитора с нетранскрибируемыми участками матричной ДНК.

Пример 9

В 20 микролитрах (мкл) дистиллированной деионизированной воды готовят раствор, содержащий хлорид магния с концентрацией 6 ммоль/л (мМ), хлорид натрия с концентрацией 2 мМ, спермидин с концентрацией 2 мМ, дитиотреитол с концентрацией 2 мМ, каждый из четырех рибонуклеозидтрифосфатов с концентрацией 2 ммоль/л (мМ) и трис-HCl с концентрацией 40 мМ при значении pH 7,9. К полученному раствору прибавляют РНК-полимеразу бактериофага Т7 (12 ед. акт.), ингибитор рибонуклеазы RiboLock (10 единиц активности (ед. акт.)) и 0.5 мкл раствора ингибитора макробициклического комплекса с инкапсулированным ионом железа(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+) в диметилсульфоксиде с финальной концентрацией ингибитора в реакционной смеси 1 микромоль/литр (мкМ) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 15 минут. Затем прибавляют 0.5 микрограмма (мкг) матричной ДНК (линеаризованная плазмида pTZ19R) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 1 часа. Затем опыт завершают аналогично описанному в Примере 1. Полученное значение IC50 составляет 1.8 мкМ, что свидетельствует о значительном повышении активности ингибитора при предварительной инкубации его с РНК-полимеразой бактериофага Т7.

Пример 10

В 20 микролитрах (мкл) дистиллированной деионизированной воды готовят раствор, содержащий хлорид магния с концентрацией 6 ммоль/л (мМ), хлорид натрия с концентрацией 2 мМ, спермидин с концентрацией 2 мМ, дитиотреитол с концентрацией 2 мМ и трис-HCl с концентрацией 40 мМ при значении pH 7,9. К полученному раствору прибавляют РНК-полимеразу бактериофага Т7 (12 ед. акт.), ингибитор рибонуклеазы RiboLock (10 единиц активности (ед. акт.)), 0.5 микрограмма (мкг) матричной ДНК (линеаризованная плазмида pTZ19R) и 0.5 мкл раствора ингибитора макробициклического комплекса с инкапсулированным ионом железа(II) 1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+) в диметилсульфоксиде с финальной концентрацией ингибитора в реакционной смеси 1 микромоль/литр (мкМ) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 15 минут. Затем прибавляют каждый из четырех рибонуклеозидтрифосфатов с финальной концентрацией в реакционной смеси 2 ммоль/л (мМ) и полученную смесь затем инкубируют при 37°C в течение 1 часа. Затем опыт завершают аналогично описанному в Примере 1. Полученное значение IC50 составляет 1.4 мкМ, что свидетельствует о еще большем повышении активности ингибитора при предварительной инкубации его со смесью РНК-полимеразы бактериофага Т7 и матричной ДНК.

Пример 11

Опыт проводят аналогично Примеру 8, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 2, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 17,4 мкМ.

Пример 12

Опыт проводят аналогично Примеру 9, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 2, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 6,1 мкМ.

Пример 13

Опыт проводят аналогично Примеру 10, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 2, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 5,9 мкМ.

Пример 14

Опыт проводят аналогично Примеру 8, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 3, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S.aureus. Полученное значение IC50 составляет 11,2 мкМ.

Пример 15

Опыт проводят аналогично Примеру 9, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 3, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus. Полученное значение IC50 составляет 8,1 мкМ.

Пример 16

Опыт проводят аналогично Примеру 10, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 3, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus. Полученное значение IC50 составляет 8,0 мкМ.

Пример 17

Опыт проводят аналогично Примеру 8, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 6, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 9,4 мкМ.

Пример 18

Опыт проводят аналогично Примеру 9, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 6, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 5,2 мкМ.

Пример 19

Опыт проводят аналогично Примеру 10, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 6, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу Е.coli. Полученное значение IC50 составляет 5,2 мкМ.

Пример 20

Опыт проводят аналогично Примеру 8, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 7, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus. Полученное значение IC50 составляет 4,9 мкМ.

Пример 21

Опыт проводят аналогично Примеру 9, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 7, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus. Полученное значение IC50 составляет 2,1 мкМ.

Пример 22

Опыт проводят аналогично Примеру 10, однако в качестве ингибитора используют соединение из Примера 7, а вместо РНК-полимеразы бактериофага Т7 используют бактериальную полимеразу S. aureus. Полученное значение IC50 составляет 2,1 мкМ.

Таким образом, из приведенных примеров видно, что предложенный способ ингибирования фермента РНК-полимеразы действительно расширяет арсенал технических средств, которые могут быть использованы для ингибирования активности фермента РНК-полимеразы, и обеспечивает ингибирование фермента РНК-полимеразы даже при микромолярной концентрации ингибитора.

Способ ингибирования активности фермента РНК-полимеразы путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе соединения, содержащего органический макроциклический фрагмент, отличающийся тем, что в качестве ингибитора используют по крайней мере один макрополициклический комплекс с инкапсулированным ионом переходного металла, выбранный из группы, включающей
1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+);
1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диметил-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) кобальт(2+);
1,8-бис(2-фенилбора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12,17,18-гекса(метилтио)-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) рутений(2+);
1,8-бис(2-фторобора)-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-циклогександимеркаптилбицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен(2-) железо(2+);
1,12-бис-(трет-бутилбора)-2,11,13,22,23,32-гексаокса-3,10,14,21,24,31-гексазапентацикло[11,11.11.04.9015,20025.30]дитри-аконта-3,9,14,20,24,30-гексаен(2-) железо(2+).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу синтеза целевого белка с пониженным ксилозилированием, пониженным фукозилированием или их комбинацией.

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу продукции требуемого полипептида (варианты), способу получения фармацевтической композиции, клетке СНО для получения требуемого белка, клетке СНО-реципиенту ДНК, кодирующей требуемый полипептид, способу продукции требуемого полипептида.

Изобретение относится к области биотехнологии и молекулярной генетики. .

Изобретение относится к области молекулярной биологии и биохимии и может быть использовано в молекулярной диагностике, связанной с выявлением РНК-мишеней. .

Изобретение относится к биотехнологии, к способу получения жирных полиненасыщенных кислот в трансгенных растениях. .

Изобретение относится к области биохимии. .

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой способ измерения активности DGAT. .

Изобретение относится к области биотехнологии и биохимии. Предложено применение композиции, включающей фермент трансглюкозидазу (ЕС 2.4.1.24), для разложения полисахарида природной камеди, причем указанный полисахарид природной камеди является субстратом для указанного фермента трансглюкозидазы. Описан способ разрушения природной камеди, включающий контактирование фермента трансглюкозидазы с полисахаридом природной камеди для разрушения указанного полисахарида природной камеди. Также предложен способ очистки, включающий контактирование предмета, загрязненного полисахаридом природной камеди, с чистящей композицией, включающей фермент трансглюкозидазу; и поддержание указанного предмета и чистящей композиции в условиях, достаточных для эффективного разрушения указанного полисахарида природной камеди и тем самым очистки указанного предмета. Изобретение позволяет разлагать природные камеди посредством фермента трансглюкозидазы. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 пр.

Настоящее изобретение относится к области молекулярной биологии и генетической инженерии и может быть использовано в пищевой промышленности. Из нитчатого гриба Mortierella alpina получены новые гены ацилтрансферазы лизофосфатидной кислоты (АТЛК). Определена кодирующая фермент нуклеотидная последовательность, описано конструирование содержащих ее экспрессионных векторов и включающих векторные конструкции по изобретению клеток-хозяев, а также получение рекомбинантных форм АТЛК, кодируемых новыми генами. 4 н.п. ф-лы, 14 табл., 6 ил., 9 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложена композиция для получения душистого сложного эфира. Композиция содержит SGNH-ацилтрансферазу, спиртовой субстрат, содержащий 2-10 атомов углерода, и донор ацила, представляющий собой сложноэфирный субстрат, содержащий ацильную цепь из 2-10 атомов углерода. Спиртовой субстрат и донор ацила выбирают так, чтобы они продуцировали душистый сложный эфир. Указанная SGNH-ацилтрансфераза катализирует перенос ацильной группы от донора ацила на спиртовой субстрат с образованием душистого сложного эфира в водной среде. Также предложен способ получения душистого сложного эфира, согласно которому объединяют SGNH-ацилтрансферазу, спиртовой субстрат и донор ацила в условиях ацилтрансферазной реакции. Также предложен способ одновременного получения отбеливателя, представляющего собой перкислоту, и душистого сложного эфира. Для этого объединяют SGNH-ацилтрансферазу, спиртовой субстрат, донор ацила и водный раствор пероксида водорода в условиях ацилтрансферазной реакции. Композицию по изобретению используют в моющих средствах для выведения пятен, содержащих по меньшей мере один триглицерид, и уменьшения неприятного запаха. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 18 ил., 9 табл., 14 пр.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новую диацилглицерол-ацилтрансферазу. Изобретение относится также к полинуклеотиду, кодирующему диацилглицерол-ацилтрансферазу, вектору экспрессии и трансформанту, такому как дрожжи или грибок, а также к способу получения композиции липидов или жирных кислот с использованием трансформанта. Изобретение позволяет получить новый фермент, пригодный для эффективной продукции липидов и жирных кислот. 6 н. и 7 з.п. ф-лы, 5 ил., 2 табл., 1 пр.

Белки // 2518345
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к варианту фермента липидацилтрансферазы, с повышенной фосфолипидтрансферазной активностью. Полученный фермент содержит аминокислотный мотив GDSX, где Х представляет собой один или несколько из следующих аминокислотных остатков L, A, V, I, F, Y, H, Q, T, N, M или S и модификацию одной или нескольких аминокислот по сравнению с исходным ферментом. Данный фермент используют для получения пищевых продуктов, а также для уменьшения содержания фосфолипидов в пищевом масле. Изобретение позволяет получить эффективный вариант фермента с повышенной фосфолипидтранферазной активностью. 8 н.п. ф-лы, 61 ил., 1 табл., 10 пр.

Изобретение относится к способу определения и количественной оценки необычно модифицированных гликанов, который может использоваться при анализе гликанов. Предложенный способ включает стадии: a) обеспечения препарата гликана, содержащего необычно модифицированные гликаны, выбранные из группы, содержащей сульфатированные гликаны, фосфорилированные гликаны, полиацетилированные сиалированные гликаны и их комбинации, где указанные необычно модифицированные гликаны являются отрицательно заряженными, и где препарат гликана получен путем выделения гликанов и сиаловых кислот из терапевтической композиции гликопротеина, где сиаловые кислоты выделяют путем воздействия на терапевтическую композицию гликопротеина по меньшей мере одного агента, который расщепляет остатки сиаловых кислот, в условиях, обеспечивающих расщепление сиаловых кислот; b) подвергания препарата гликана хроматографическому методу разделения, который разделяет гликаны на основании отношения заряда к массе, посредством чего происходит разделение указанных необычно модифицированных гликанов; и c) количественного определения, по меньшей мере, одного отделенного необычно модифицированного гликана, используя, по меньшей мере, один стандарт количественной оценки. Предложен новый эффективный способ, позволяющий анализировать необычно модифицированные гликаны. 41 з.п. ф-лы, 7 ил., 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Представлены вариантные белки лизофосфолипид-ацилтрансферазы, катализирующие реакцию превращения 18:3(n-6)-PL в 18:3(n-6)-CoA и/или DGLA-CoA в DGLA-PL, имеющие аминокислотные последовательности, по меньшей мере на 95% идентичные SEQ ID NO:2 и 7, представленным в описании. Кроме того, раскрыты нуклеиновые кислоты, кодирующие указанные белки. Также представлены рекомбинантный вектор экспрессии, содержащий указанные нуклеиновые кислоты, и клетка-хозяин для получения композиции жирных кислот, трансформированная указанным вектором. Предложено применение указанного вектора для повышения количественного соотношения арахидоновой кислоты (ARA) в композиции жирных кислот в хозяине. Описан способ получения композиции жирных кислот, включающий культивирование клетки-хозяина для получения композиции жирных кислот с повышенным количеством арахидоновой кислоты по сравнению с ее количеством в композиции жирных кислот, полученной культивированием нетрансформированного хозяина, и сбор композиции жирных кислот из культур трансформированной клетки. Изобретение позволяет получить композицию жирных кислот с повышенным содержанием арахидоновой кислоты. 12 н. и 6 з.п. ф-лы, 8 ил., 8 табл., 3 пр.

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к мутантной O-фосфосеринсульфгидрилазе (OPSS) из Mycobacterium smegmatis с аминокислотной последовательностью, соответствующей последовательности SEQ ID NO: 1, в которой отсутствуют от трех до семи C-концевых аминокислотных остатков. Изобретения относятся также к молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей мутантную OPSS, к экспрессионному вектору, несущему молекулу нуклеиновой кислоты, и к трансформанту, трансформированному экспрессионным вектором. Кроме того, предлагается способ получения цистеина, в котором O-фосфо-L-серин (OPS) вводится в реакцию с сульфидом в присутствии мутантной OPSS. Мутантная OPSS имеет улучшенную ферментативную активность и может применяться для получения L-цистеина в условиях, благоприятных для окружающей среды, путем простой ферментативной реакции превращения. Группа изобретений обеспечивает высокий выход продукции L-цестеина. 8 н. и 8 з.п. ф-лы, 7 ил., 20 табл., 19 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения β-циклодекстрина. Способ предусматривает приготовление суспензии мальтодекстрина, проведение процесса циклизации ферментным препаратом ЦГТ-азы в присутствии комплексанта трихлорэтилена. Далее проводят удаление комплексанта кипячением, очистку полученного продукта активным углем, отделение активного угля фильтрованием и уваривание сиропа и его кристаллизацию при перемешивании и снижении температуры. В завершении осуществляют центрифугирование и промывку холодной водой кристаллов β-циклодекстрина, их сушку и упаковку. Предложенное изобретение может быть использовано для получения циклических комплексообразователей, в частности β-циклодекстрина. 2 ил.

Изобретение относится к области биотехнологии и раскрывает рекомбинантный экспрессионный вектор, включающий: либо последовательность, кодирующую фосфорилазу пуриновых нуклеозидов (ПНФазу из Sulfolobus solfataricus), либо последовательность, кодирующую уридинфосфорилазу (УФазу из Aeropyrum pernix), либо обе указанные последовательности. Каждая из указанных последовательностей функционально связана с одной или более регуляторной последовательностью, которая контролирует продукцию указанных фосфорилаз в хозяине (E.coli). Настоящее изобретение также раскрывает клетку-хозяина, содержащую указанный экспрессионный вектор, а также лизат, полученный путем лизирования указанной клетки-хозяина. Настоящее изобретение раскрывает способ трансгликозилирования между нуклеозидом, который является донором сахара и акцепторным основанием в присутствии фосфат-ионов и любого из указанных ферментов или их комбинации. Настоящее изобретение позволяет получать новые рекомбинантные нуклеозидфосфорилазы с повышенной термостабильностью, высокой каталитической эффективностью, которые можно использовать для проведения реакции трансгликозилирования. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 13 пр.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ ингибирования активности фермента РНК-полимеразы. Ингибирование осуществляют путем введения в транскрипционную систему ингибитора на основе по крайней мере одного соединения, содержащего органический макроциклический комплекс с инкапсулированным ионом переходного металла, выбранный из группы, включающей 1,8-бис-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диамино-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен железо; 1,8-бис-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-диметил-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен кобальт; 1,8-бис-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12,17,18-гекса-бицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен рутений; 1,8-бис-2,7,9,14,15,20-гексаокса-3,6,10,13,16,19-гексааза-4,5,11,12-тетрафенил-17,18-циклогександимеркаптилбицикло[6.6.6]эйкоза-3,5,10,12,16,18-гексаен железо; 1,12-бис--2,11,13,22,23,32-гексаокса-3,10,14,21,24,31-гексазапентацикло[11,11.11.04.9015,20025.30]дитри-аконта-3,9,14,20,24,30-гексаен железо. Способ обеспечивает ингибирование активности РНК-полимеразы при микромолярной концентрации ингибитора, а также расширяет арсенал ингибиторов РНК-полимеразы. 22 пр.

Наверх