Способ получения гидантоил1-валил5-ангиотензина п

 

О П И С А Н И Е 2583I4

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалкстичесних

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Кл. 12q, 6/ 01

Заявлено 29Х111.1968 (¹ 1267217/23-4) с присоединением заявки ¹

Приоритет

МПК С 07с

Комитет по делам кзооретеиий и открытий при Совете й1киистрое

СССР

УД1 547.964.4.07 (088.8) Всесовзнал

° атентно-техн -:честеМ

Опубликовано 03.Х11.1969. Бюллетень ¹ 1 за 1970

Дата опубликования описания 28.1Ъ .1970

Авторы изобретения И. А. Грава, А. П. Паварс, П. Я. Романовский и Г. И. Чипенс

Заявитель Ордена Трудового Красного Знамени институт органического синтеза

AH Латвийской CCP

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ

ГИДАНТОИЛт-ВАЛИЛ -АНГИОТЕНЗИHA П

Изобретение относится к области получения гидантоил|-валил.-ангиотензина П вЂ” нового высококачественного аналога природного полипептидного гормона валил5-ангиотензина П, который применяется в медицине так же, как и его производные.

Известны многочисленные способы синтеза ангиотензина П и его аналогов конденсацией защищенных пептидов соответствующей длины карбодиимидным методом с последующим удалением защитных групп. Недостатками всех этих способов получения биологически высокоактивных синтетических аналогов ангиотензина являются: использование таких дорогостоящих оптически активных N-концевых аминокислот, как L-аспарагиновая, D-аспарагиновая, 1 -аспарагин и др.; сложность защиты трифункциональных аминокислот; опасность рацемизации и а — э -транспептидации во время присоединения производного аспарагиновой кислоты и удаления защитных групп.

Предлагается способ получения гидантоилтвалил5-ангиотензина П конденсацией гидантоиновой кислоты с fl-нитробензиловым эфиром то-нитро-аргинил-валил-тирозил-валил-гистидил-пропил-фенилаланина (все аминокислоты 1 -ряда) в присутствии N-гидроксисукцинимида карбодиимидным методом с последующим гидрированием.

Целью изобретения является разработка упрощенного синтеза нового высокоактивного аналога ангиотензипа П с использованием дешевых и легкодоступных исходных материа5 лов. Это достигается применением в качестве

N-концевой аминокислоты оптически неактивной и дешевой гидантоиновой кислоты (карбамоилглицина). Гпдантоиновую кислоту с хорошим выходом и в простых условиях можно

10 получать из глицина и цианата калия. Введение остатка гидантоиновой кислоты в молекулу С-защищенного гептапептида ангиотензина П методом N,N-дициклогексилкарбодиимида с добавкой N-гидроксисукцинимида не тре15 бует применения дополнительных защитных групп. Отпадает также опасность рецемизации и а-+ -транспептидации.

Для удаления защитных групп производное окгапептидз гидрируется над палладие20 вым катализатором, и полученный гидантоилтвалил -ангиотензин П очищается на полимерной смоле «Сефадекс G-15».

Предлагаемый способ получения гидантоил1-валил -ангпотензина апробирован в ла25 бораторных условиях.

Пример. п-Нитробензиловый эфир гидантоил-ñl-нитро - аргинил - валил - тирозил-валилгистидил-пропил-феннлаланина.

0,220 г (0,2 л М) и-нитробензилового эфира

30 (о-нитро-аргинил-валил-тирозил - валил - гисти258314

Предмет изобретения

Составитель А. Акиьиова

Редактор Л. А. Ильина Текред Л. Я. Левина 1(орректор О. И. Усова

Заказ 849 13 Тираж 499 Подписное

ЦЕП4ИПИ 1(омитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва Ж-З5, Раушскаи наб., д, 4(5

Типограсрия, пр. Сапунова, 2 дил-пролил-фенилаланина, 0,036 г (0,3 яМ) гидантоиновой кислоты и 0,069 г (0,6 иМ)

N-гидроксисукцинимида растворяют в 1,0 мл сухого N,N-диметилформамида; к охлажденномуу до — 30 С р а створу добавляют 0,062 г (0,3 лМ) N,N-дициклогексилкарбодиимида.

Смесь перемешивают в течение 15 мин при — 30 С, затем оставляют на 18 час при комнатной температуре. После выдержки отфильтровывают выпавшую N,N-дициклогексилмочевину, к фильтрату добавляют 30 лл насыщенного раствора хлористого натрия, осадок отфильтровывают, на фильтре трижды промывают по 10 л л дистиллированной воды и сушат в вакуумном эксикаторе над пятиокисью фосфора и гидроокисью калия. Полученный продукт на хроматографической бумаге марки «С» Ленинградской бумажной фабрики № 2 в системе и-бутиловый спирт — вода— уксусная кислота (4: 5: 1) при проявлении реагентом Эрлиха, дает одно пятно с Rf 0,85.

Выход 0,186 г (81%), т. пл, 170 — 174 С (разлагается), =18 &2 (с 1,6; диметилформамид).

Найдено, %: С 56,61; Н 6,39; N 17,32.

С5вНтз01з11 ы. НзО.

Вычислено, %: С 56,45; Н 6,46; N 17,95.

Гидантоил1-валил -ангиотензин П.

0,210 г (0,18 мМ) и-нитробензилового эфира гидантоил-со-нитро-аргинил-валил-тирозилвалил-гистидил-пролил-фенилала нина гидрируют в течение 36 час над палладиевой чернью в 5 мл раствора метанол — вода — уксусная кислота (6: 1: 1) при комнатной температуре.

После гидрирования катализатор отфильтровывают, растворитель упаривают в вакууме.

Полученный продукт очищают на полимерной смоле «Сефадекс G-15» в растворе н-бутиловый спирт — вода — уксусная кислота — пиридин (30: 24: 6: 20). Фракции, содержащие гидантоил -валил -ангиотензин П (идентификация при помощи бумажной хроматографии в вышеуказанных условиях, Ке 0,57), объединяют, упаривают в вакууме, растворяют в

5 воде и лиофилизируют. Полученный гидантоил1-валил -ангиотензин П сушат в вакуумном эксикаторе над пятиокисью фосфора.

Выход 0,120 г (65% ), т. пл. 150 — 160 С (разлагается), I „ — — — 42 +4 (с 0,4;

20%-ная уксусная кислота).

Найдено, %: С 54,83; Н 6,81; N 17,91, С4вНвзОт1Хт4 ° СНзСООН ° НзО.

Вычислено, %: С 54,98; Н 6,93; е1 41 17,56.

Аминокислотный состав: глицин 0,93; аргинин 1,01, валин 2,08; тирозин 1,08; гистидин

1,00; пролин 1,00; фенилаланин 1,22.

Гедантоил1-валил -ангиотензин П по своей прессорной и миотропической активности превосходит природный гормон-валил -ангиотензин П вЂ” в 1,3 — 1,4 раза.

25 1. Способ получения гидантоил1-валил -ангиотензина П, отличающийся тем, что гидантоиновую кислоту конденсируют с п-нитробензиловым эфиром <о-нитро-аргинил-валилтирозил-валил - гистидил - пропил-фенилаланиЗО на (все аминокислоты 1 -ряда) в присутствии

N-гидроксисукцинимида кар бодиимидным методом с последующим гидрированием образовавшегося продукта и выделением конечного продукта известными способами.

З5 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что гидрирование проводят в присутствии палладиевого катализатора.

3. Способ по пп. 1 и 2, отлияающиася тем, что конечный продукт выделяют с применени4о ем сефадекса G-15 и последующей лиофилизацией.