Способ очистки рибонуклеазы
259 790
О П И С А Н И Е
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Соеетских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Кл. 6а, 22/07
Заявлено 31.Х.1964 (№ 927742/23-4) с присоединением заявки №
Приоритет
МПК С 12d
УДК 663,478.2.663.14. .038.9 (088.8) Комитет оо делам изобретений и открытий лри Сосете тлинистрое
СССР
Опубликовано 22.XII.1969. Бюллетень № 3 за 1970
Дата опубликования описания 11 V.1970
1„, Ф. Ю. Рышка, Л. Б. Полонская, Н. Г. Беленький, В, H. Цигайковц, H. Н. Чамин и А. С. Хохлов
Авчоры изобретения
Заявитель
СПОСОБ ОЧИСТКИ РИБОНУКЛЕАЗЫ
Известен способ очистки рибонуклеазы диализом и кратковременным кипячением. В результате диализа теряется до 50% продукта.
Предлагаемый способ состоит в том, что рибонуклеазу, загрязненную солями, низкомолекулярными веществами и некоторыми ферметпами, обрабатывают фенолом, затем осаждают спиртом, осадок экстрагируют водой, нерастворимую часть отделяют и после лиофильной сушки получают 90 — 98 „рибонуклеазы.
Чтобы получить химически чистый препарат, полученный продукт очищают гелевой фильтрацией на сефадексе G-25 или G-50.
Пример 1. Навески рибонуклеазы 10,5 и
1 г растворяют в 200 мл воды. Добавив по
50 мл водного фенола, перемешивают 15 мин и центрыфугируют. Верхний слой экстрагируют еще два раза 25 мл фенола. Объединенные экстракты повторно центрифугируют, верхний слой удаляют, а нижний осаждают равным объемом спирта. Осадок промывают спиртом и сушат в вакуум-эксикаторе. Выход по весу соответственно 2,93 г, 1,6 г и 0,32 г, составляющий 95% активности исходного, т. е. очистка трехкратная.
Пр им ер 2. Растворяют 10 г рибонуклеазы в 200 мл воды. Экстрагируют аналогично при,меру 1. К полученному экстракту (90 мл) добавляют последовательно 35,10 и 10 мл спирта. Выход соответственно: 3,6 г (360/0), актив,ность 75с/с, 0,6 г (6%), активность 16%; 0,3 г (3 /с), активность 6%; 0,2 г (2%), активность 1%.
5 Прим ер 3. 3 г осадка из примера 1 экстрагируют три раза 15 мл воды. Экстракты центрифугируют и лиофильно сушат. Выход рибонуклеазы соответственно: 2 г (66%), активность 80%; 0,5 г (18%), активность 15%;
10 0,1 г (3%), нерастворимая часть 0,1 г (3%), активность 1.5%. Лиофилизаты 1-го и 2-го экстрактов очень хорошо растворимы B воде без опалесценции.
П р им е ч а н и е. Спирт добавляют до полуl чения отчетливо выраженного осадка.
Пример 4. 2 г лиофичизата (экстракт
1 примера 3) растворяют в 20 лтл 0,2 М уксусной кислоты и наносят на колонку 4Х110 см, 20 наполненную сефадексом G-25. Первые 40 мл элюата отбрасывают, следующие 100 лтл со,держат 1 г высокоочищенной рибонуклеазы в виде ацетата.
Пример 5. 2 г лиофилизата растворяют в
25 0,1 М растворе пиридина или 0,05 растворе аммиака. Первые элюаты отбрасывают (400 мл), а рибонуклеаза выходит в виде свободного основания (100 лтл). Препараты, получаемые в примерах 4 и 5, применяют как химически чи30 стые для биохимических исследований;
259790
Предмет изобретения
Редактор Б. Б. Федотов
Текред Л. Я. Левина
Корректор С. М. Сигал
Заказ 960/2 Тираж 500 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва Я(-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2
Способ очистки рибонуклеазы, отличающийся тем, что, с целью упрощения технологического процесса, повышения выхода и качества делевого продукта, рибонуклеазу подвергают обработке фенолом и спиртом, полученный осадок экстрагируют водой, экстракт лиофильно с ушат и полученный продукт филь5 труют на сефадексе.
