Способ получения д-кетоглутаровой кислоты

 

25979I

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Соеетскнк

Социалистическик

Респуйлик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 13.1Ч.1968 (№ 1269238 28-13) Кл. 6b, 16/03 с присоединением заявки №

МПК С 12d

УДК 547.484+ 576.809.33 (088.8) Приоритет

Комитет по делан нвобретеиий и открытий ори Совете Министров

СССР

Опубликовано 22.XII.1969. Бюллетень № 3 за 1970 r.

Дата опубликования описания 14.Х,1970

А. Б. Лозииов, Т. В. Финогенова, М. Е. Бекер, И. T. Ерма ова, P. Я. Карклииьш, Л. Н. Мунтян, Г. К. Лиепиньш, С. М. Цхо ария", "

И. Ж. Пелцмаие, Д. Г. Зариня, 3. А. Калниныц, В. А. Сл ва-, (и Ю. О. Якобсон

Авторы изобретения

Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР и Институт микробиологии имени Августа Кирхенштейна

Заявители

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ,g-КЕТО ГЛУТАРОВОЙ КИСЛОТЫ

Известно, что,при выращивании дрожжей рода Candida на средах, содержащих в качестве источника углерода жидкие парафины или индивидуальные алканы, образуется акетоглутаровая кислота. Однако выход продукта:незначителен.

Для повышения выхода продукта предлагается использовать дрожжевые культуры, дефицитные,по тиамину, в частности Candida lipolutica u Candida rugosa и процесс вести в среде строго определенных количеств тиамина или 4-амино-5-окси-метил-2 - метилпиримидина. Концентрация тиамина в среде должна составлять 0,1 — 1,0 мкг/л; концентрация 4-амин5 - окси - метил - 2 - метилпиримидина 0,05—

1,0 мкг/л.

Осуществляют .предлагаемый способ следующим образом.

Культуру дрожжей Candida Iipolutica или

Candida rugosa культивируют на среде, содержащей жидкий парафин или индивидуальные углеводороды в качестве источника углерода, а также источники азота, фосфора, натрия, калия, микроэлементы и тиамин или

4-амино-5-оксиметил-2-метилпиримидин, в условиях аэрации. рН поддерживают 4,0 — 4,5.

Продолжительность ферментации 3 —.7 суток.

Выход а-кетоглутаровой кислоты составляет

90% от внесенного субстрата (а-кетоглутаровую кислоту определяют в форме.2,4-динитрофенилгидразона) .

Наряду с а-кетоглутаровой кислотой в среде накапливается значительное количество

5 рибофлавина. Полученную дрожжевую биомассу можно использовать для кормовых и пищевых целей.

Процесс можно интенсифицировать, проведя его в две стадии.

10 На первой стадии создают услсвия, благоприятствующие накоплению биомассы (минимальная концентрация тиамина или 4-амино-5-окси-метил-2-метилпиримидина). На второй стадии содействуют интенсивному образова15 нию а-кетоглутаровой кислоты.

В среду можно добавлять бактериостатические вещества (полимиксин, фурацилин и др.) .

П р и и е р 1. Дрожжи Candida lipolutica

20 хранят на агаризованной минеральной среде

Ридера с парафином.

Посевной материал готовят в колбах на ка. чалках на среде состава, %: (NH4)2SO2 0,3;

MpSO4 7Н О 0,07; NaCI 0,05; Ca(NO>)> 0,04;

25 К НР04 0.1; КН Р04 0,11; жидкий парафин—

0,8; вода водопроводная кипяченая — до 100.

Посевной материал (5% от количества среды),высевают на опытную среду. Ее состав, %: мочевина 0,5 — 1,0; MgSO4 7Н О 0,07; NaCI

Зо 0,05; Са (N0>)е-0,04; КзНРО4 О M; КНРО4

Предмет изобретения

Корректор Е. В. Фомйна

Техред Л. Я. Левина

Редактор С. Лазарева

Заказ 2886/6 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ .Комитета по делаем изобретений и открытий при Совете Министров СССР, Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

0,1; жидкий парафин 2,4; вода водопроводная до 100. В среду:вводят тиамин или 4-амин-5оксиметил-2-метилпиримидин в концентрации

0,4 мкг/л.

Процесс ведут при 28 — 30 С, рН 4,0 — 4,5, аэрации 0,25 об. воздуха (об. среды) мин.

Продолжительность ферментации 6 — 7 суток.

Содержание а-кетоглутаровой кислоты в среде в конце процесса равно 21,3 г/л, что соответствует выходу 88% от веса взятого парафина.

Одновременно в среде накапливается 8 мкг, л рибофлавина. Выход биомассы составляет

2,9 г/л (по сухому весу).

Пример 2. Посевной материал дрожжей

Candida rugosa готовят по,примеру 1. Опытная среда имеет следующий состав, (NH4) зЯО4 0,3; MgSO4 7Н90 0,07; NaC1 0,05;

Са(ИОз)з 0,04; КзНРО4 0,01; КНзРО4 0,1; гексадекан 0,8; 1ч авВ407 10 НзО 0,0087;

MnS04 7НзО 0,005; ZnSO4 ° 7НзО 0,031;

CuSO4 5НзО 0,0039; Na Mo04 2НзО 0,0025;

FeSO4 7НзО 0,025; KI 0,01; вода бидистиллированная до 100. Концентрация тиамина в ср еде 0,4 г/л.

Процесс проводят в колбах на качалках в течение 2 суток. Затем биомассу отделяют и помещают в фосфатный буфер с рН 4,0, содержащий 0 4% гексадекана. Все операции проводят с соблюдением мер стерильности.

Прироста биомассы:не происходит, но интепсивно идет биосинтез а-кетоглутаровой кислоты. 3а 12 час содержание ее в биомассе достигает 0,34 г/г биомассы.

Пр имер 3. Процесс ведут по примеру 1, 5 но в присутствии антисептиков::полимиксина (5 мкг/л), биомицина (50 мкг/л) и соединений фуранового ряда (фурацилина, фуразолидона, фуразидина, 15 мкг n).

Содержание а-кетоглутаровой кислоты

Т0 13,5 г/л.

l5 1. Способ получения а-кетоглутаровой кислоты выращиванием дрожжей рода Candida на средах, содержащих в качестве источника углерода жидкие парафины или индивидуальные алканы, отличиющийся тем, что, с

20 целью увеличения выхода продукта, используют дефицитные по тиамину культуры, например Candida lipolutica, Candida rugosa, и процесс ведут в,присутствии строго определенных количеств тиамина или 4-амино-5-оксиме25 тил-2-метилпиримидина.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что концентрация тиамина в среде составляет

0,1 — 1,0 мкг л.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем. что

80 концентрация 4-амико-5-оксиметил-2-метилпиримидина в среде составляет 0,05 — 0,1 мкг/л.

Способ получения д-кетоглутаровой кислоты Способ получения д-кетоглутаровой кислоты 

 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой новую альдолазу, которая катализирует реакцию получения замещенной альфа-кетокислоты из щавелевоуксусной или пировиноградной кислоты и индол-3-пировиноградной кислоты

 // 260570
Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения монокалиевой соли a-кетоглутаровой кислоты (КГК)

Изобретение относится к области технической микробиологии и касается способа получения 2-кето-О-глюкаровой кислоты, которая может быть использована в качестве добавки к корму, для приготовления детергентов , пластификаторов цемента и б качестве реагента при изучении метаболизма сахаридов
Изобретение относится к микробиологической промышленности
Изобретение относится к биотехнологии. Способ получения α-кетоглутаровой кислоты предусматривает аэробное культивирование на питательной среде штамма дрожжей Yarrowia lipolytica BKM Y-2412. Среда имеет следующий состав (г/л): рапсовое масло - 20; (NH4)2SO4 - 6, MgSO4×7H2O - 1,4, Ca(NO3)2 - 0,8, NaCl - 0,5, КН2РО4 - 2,0, K2HPO4 - 0,2, микроэлементы (мг/л): KJ - 0,1, В3+ - 0,01, Mn2+ - 0,01, Zn2+ - 0,01, Cu2+ - 0,01, Мо2+ - 0,01, Fe2+ - 1,2 мг/л, тиамин - 1,2 мкг/л, вода дистиллированная - до 1 л. При этом дополнительно вводят сульфат аммония по 1,2 г/л через каждые 20-30 ч культивирования. Первый этап роста биомассы проводят в течение 44-48 ч, при pH 4,1-5,0, аэрации на уровне 20-25% от насыщения. На втором этапе культивирования в период с 44-48 ч до 70-72 ч pH поддерживают на уровне 4,1-5,0. На третьем этапе культивирования в период с 70-72 ч до 188-192 ч снижают уровень pH до 3,0-4,0. Дополнительно на втором и третьем этапах контролируют уровень концентрации растворенного в среде кислорода pO2, добавляют рапсовое масло по 20 г/л при увеличении концентрации растворенного в среде кислорода pO2 выше 10%, а также увеличивают величину аэрации до 50-55% от уровня насыщения. Изобретение позволяет повысить выход α-кетоглутаровой кислоты до 102,5 г/л. 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способу получения 2,4-дигидроксипентановой кислоты, включающему превращение пирувата в 4-гидрокси-2-оксопентановую кислоту с помощью альдольного присоединения и превращение 4-гидрокси-2-оксопентановой кислоты в 2,4-дигидроксипентановую кислоту посредством химического или ферментативного восстановления. Способ позволяет получить 2,4-дигидроксипентановую кислоту из пирувата с помощью двух стадий. 9 з.п. ф-лы, 13 табл., 9 ил.
Наверх