Способ прогнозирования неэффективности консервативной терапии язвенного колита

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования неэффективности консервативной терапии тяжелой формы язвенного колита при тотальном поражении толстой кишки. Сущность способа состоит в определении в сыворотке крови больных антител к эпителиальной базальной мембране. Для этого выполняют иммуногистологическое исследование с использованием метода непрямой иммунофлюоресценции. На первом этапе сыворотку больного инкубируют на срезах ткани почек обезьян, на втором этапе проводят инкубацию с антивидовой козлиной флюоресцирующей сывороткой. Реакцию регистрируют методом люминесцентной микроскопии, определяя количество почечных канальцев с флюоресцирующей базальной мембраной и выражая результат в процентах. При показателе выше 15% прогнозируют значительное увеличение вероятности неэффективности консервативной терапии. Способ прост в исполнении, выполняется в течение 2 часов и не требует затрат дорогостоящих реактивов. 4 пр.

 

Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и иммунологии. Целью изобретения является прогнозирование неэффективности медикаментозной терапии при тяжелом течении тотальной формы язвенного колита (ЯК) в стадии обострения заболевания.

Известны клинические, инструментальные и лабораторные методы определения распространенности поражения толстой кишки, степени тяжести течения ЯК и активности воспалительного процесса (1, 7, 12). Однако данные этих исследований, необходимые для установления диагноза и определения лечебной тактики, не позволяют с высокой вероятностью прогнозировать эффективность предстоящей консервативной терапии. Незначительные изменения общепринятых показателей метаболизма (дефицит веса, содержание в крови белка, альбумина и гемоглобина) не гарантируют адекватного ответа на лекарственную терапию, который отсутствует у 25%-30% больных этой группы. С другой стороны, при значительном изменении указанных показателей хороший ответ на лечение мог наблюдаться у 30%-40% пациентов (4).

Известны способы определения степени тяжести ЯК по оценке недостаточности внешнесекреторной функции поджелудочной железы (содержание эластазы-1 в кале) (2) и ультразвуковому исследованию диаметра тонкой кишки и снижения скорости потока содержимого в ней (3). Недостаток этих методов состоит в том, что они регистрируют вторичные по отношению к основному патологическому процессу изменения, которые могут развиваться под влиянием комплекса опосредованных факторов. Результаты этих исследований не содержат данных по прогнозированию эффективности лечения.

Известен способ оценки эффективности лечения ЯК по изменению микроскопической картины высушенной капли крови (направленность линий, наличие трещин и др.) при двухкратной (до начала лечения и через 7 дней) постановке пробы (8). Однако авторы не приводят данных по клинической характеристике обследованной группы больных, их распределению в зависимости от тяжести течения, распространенности поражения, активности процесса в толстой кишке и других факторов, которые являются решающими для выбора тактики лечения и оценке его эффективности.

Содержанием предлагаемого метода является определение наличия антител к эпителиальной базальной мембране (ЭБМ). Компоненты ЭБМ являются аутоантигенами и вызывают продукцию антител при ряде аутоиммунных воспалительных заболеваний почек, легких, кожи и других органов (10, 14). При ЯК в оперированной толстой кишке наблюдаются иммунопатологические изменения ЭБМ, включающие отложение IgG и компонентов классического пути активации комплемента с наличием его терминального мембраноатакующего комплекса (5, 9, 13). При выраженном (деструктивном) воспалительном процессе выявляется увеличение экспрессии антигенов ЭБМ (6), а в крови 20%-40% больных ЯК при использовании различных иммуноферментных тест-систем обнаруживаются антитела к базальной мембране клубочков почек (11).

В соответствии с целью изобретения его задачей является разработка простого доступного количественного метода регистрации взаимодействия антител со стандартизованным материалом, содержащим антигены ЭБМ.

Применен иммуногистологический метод, где в качестве источника ЭБМ использованы срезы замороженной ткани почек обезьян тест-системы фирмы Euroimmun (Германия), предназначенные для диагностики аутоиммунного гломерулонефрита, при котором сыворотки больных реагируют преимущественно с БМ почечных клубочков (гломерул).

Наш способ отличается тем, что морфологической структурой регистрации иммунологической реакции с ЭБМ является стенка почечных канальцев. В отличие от известного метода титрования антител, требующего дополнительных расходов реагентов и времени, учет реакции проводится путем подсчета процента флюоресцирующих канальцев.

Способ осуществляется с использованием вышеупомянутой тест-системы следующим образом. На срезы почки, расположенные на поверхности стандартных биочипов, наносят 25 мкл глицинового буферного раствора.

Осуществляется инкубация в течение 30 минут с последующим промыванием срезов в буферном физиологическом растворе в течение 15 минут. На следующем этапе срезы инкубируют с сыворотками больных в разведении 1:10 в объеме 25 мкл в течение 30 мин. Далее сыворотки смываются со срезов новой порцией физиологического буферного раствора с отмыванием в нем в течение 5 мин. На срезы наносят по 20 мкл иммунной козлиной сыворотки к IgG человека, меченой флуоресцеином. Инкубируют в течении 30 мин, смывают сыворотку физиологическим раствором, промывают срезы в течение 5 мин, покрывают их заключающей средой и покровным стеклом. Подсчет процента флюоресцирующих канальцев выполняют под люминесцентным микроскопом (JENALUMAR-a, Германия; окуляры ×6,6, объектив ×50).

Под наблюдением находились 43 больных ЯК. Всем больным выполнены необходимые клинико-инструментальные (ректоскопия, колоноскопия, гастродуоденоскопия, ультразвуковые исследования органов брюшной полости, рентгенологические исследования и др.) и лабораторные исследования. В качестве контрольной группы исследовали сыворотку крови 15 доноров. Возраст больных ЯК составил 35,5±1,7 (17-67) лет; мужчин было - 23, женщин - 20. Тяжелая форма заболевания наблюдалась у 30 больных, среднетяжелая форма - у 13. Тотальное поражение толстой кишки диагносцировано у 38 пациентов, левостороннее поражение - у 5. Острое течение ЯК наблюдалось у 7 больных, хроническое рецидивирующее течение - у 11 и хроническое непрерывное течение - у 25 больных. Больные ЯК были разделены на 2 подгруппы: 1-19 больных с положительным эффектом лекарственной терапии, и 2-24 больных, у которых ответ на лечение отсутствовал. Гормонорезистентая форма ЯК наблюдалась у 12 больных и гормонозависимая форма - у 8. Осложнения ЯК в виде токсической дилатации ободочной кишки развились у 4 больных; кишечное кровотечение наблюдалось у 1 пациента. Хирургическое лечение по удалению пораженной толстой кишки в связи с неэффективностью консервативной терапии и развившимися осложнениями проведено у 23 больных.

Количество позитивно реагирующих (флюоресцирующих) почечных канальцев составило в группе доноров 5,0±1,4% (0-15,5%); у больных ЯК в группе 1 - 27,5±5,0% (0-94%) (р<0,001 в сравнении с контрольной группой), у больных ЯК в группе 2 - 4,7±1,4% (0-21,8%) (р>0,05 в сравнении с контрольной группой и р<0,001 в сравнении с группой 1).

Таким образом уровень антител к ЭБМ, опосредованный количеством реагирующих почечных канальцев, значительно увеличивается у больных ЯК, резистентных к медикаментозной терапии, по сравнению с больными с адекватным ответом на терапию, у которых уровень антител не увеличен по сравнению с контрольной группой.

Увеличение уровня антител в сравнении с показателем контрольной группы, принятым за норму (М±2SD, 15%), наблюдалось у 15 из 24 (62,5%) больных ЯК в группе 1 и у 1 из 19 (5,2%) больных в группе 2. Из 24 больных ЯК группы 1 21 пациент подвергся оперативному лечению при текущей госпитализации (на момент обследования) и 2 пациента - при следующих госпитализациях через 6 мес.и 1 год. У больных группы 2 хирургическое лечение не применялось. Всего среди пациентов этих групп увеличение уровня антител наблюдалось у 16 больных, из которых в связи с неэффективностью медикаментозной терапии подверглись оперативному лечению 14 (87,5%) человек; из 27 пациентов, у которых уровень антител не был увеличен, операции были выполнены у 9 (33,3%) (р<0,001). Таким образом, повышение уровня антител к ЭБМ почечных канальцев у больных тотальной формой ЯК значительно увеличивает вероятность неэффективности консервативной терапии.

Пример 1. Больной К., 21 г. Находился на лечении в ГНЦ колопроктологии с 20.02 по 29.03.2012 г. с диагнозом: язвенный колит, тотальное поражение, хроническое непрерывное течение, тяжелая гормонозависимая форма. Результат иммуногистологического исследования - 35,8%. В связи с неэффективностью консервативного лечения и принимая во внимание длительную (в течение 1 года) гормональную терапию, больному в качестве первого этапа хирургического лечения выполнена колэктомия с резекцией прямой кишки по типу операции Гартмана, илеостомия по Бруку.

Пример 2. Больная Б., 67 лет. Находилась на лечении в ГНЦ колопроктологии с 26.04 по 28.05.2012 г. с диагнозом: язвенный колит, тотальное поражение, хроническое рецидивирующее течение, тяжелая форма. Анемия. Результат иммуногистологического исследования - 29,5%.

При проведении плановой компьютерной томографии брюшной полости обнаружены признаки прикрытой перфорации восходящего отдела ободочной кишки. В связи с этим выполнена хирургическая операция в объеме колэктомии с резекцией терминального отдела подвздошной кишки; брюшно-анальная резекция прямой кишки, илеостомия по Бруку.

Пример 3. Больной Я., 31 г. Находился на лечении в ГНЦ колопроктологии с 25.06 по 3.08.2007 г. с диагнозом: язвенный колит, тотальное поражение, хроническое непрерывное течение, тяжелая гормонорезистентная форма. Результат иммуногистологического исследования - 2%. На фоне лечения преднизолоном в дозах 180 мг - 80 мг в сутки внутривенно, метотрексатом 30 мг внутривенно 1 раз в неделю наблюдалось стойкое клиническое улучшение с положительной эндоскопической динамикой.

Пример 4. Больная Г., 42 лет. Находилась в ГНЦ колопроктологии с 26.02 по 7.03.2007 г. Поступила с целью обследования и коррекции лечения на фоне приема преднизолона в дозе 60 мг в сутки. Диагноз: язвенный колит, тотальное поражение толстой кишки, клинико-эндоскопическая ремиссия. Результат иммуногистологического исследования - антитела не выявлены.

Литература

1. Белоусова Е.А. Язвенный колит и болезнь Крона. М., Триада. 2002, 10-27.

2. Бурновская В.А., Белобородова Э.И., Глинская О.Н. и др. RU 2339956, Бюллетень №33, 27.11.2008.

3. Бурновская В.А., Белобородова Э.И., Гибадулина И.О. и др. RU 2305495, Бюллетень №25, 10.09.2007.

4. Киркин Б.В. Лечебная тактика при неспецифическом язвенном колите и болезни Крона. Дисс. на соискание ученой степени д.м.н. М. 1989, 252-260.

5. Конович Е.А. Роль местного и системного иммунитета в этиопатогенезе и лечении деструктивных процессов толстой кишки (неспецифический язвенный колит и болезнь Крона). Дисс. на соискание ученой степени д.м.н. М. 1998, 116-121.

6. Конович Е.А., Халиф И.Л., Киркин Б.В. Иммунореактивность эпителиальной базальной мембраны и сосудов при неспецифическом язвенном колите: иммуногистологическое исследование. Иммунология, 1995, 6, 51-54.

7. Халиф И.Л., Лоранская И.Д. Воспалительные заболевания кишечника. Неспецифический язвенный колит и болезнь Крона. Клиника, диагностика и лечение. М., Миклош. 2004, 23-47.

8. Шатохина С.Н., Захарова Н.М., Мишуровская Т.С. и др. RU 2447440, Бюллетень №10, 10.04.2012.

9. Halstensen T.S., Mollnes Т.Е., Garred P. et al. Surfase epithelium related activation of complement differs in Crohn's disease and ulcerative colitis. Gut, 1992, vol.33, p.902-908.

10. Kalluri R., Melendez E., Rumpf K. et al. Specificity of circulating and tissue bound autoantibodies in Goodpasture syndrome. Proc. Assoc. Am. Physicians, 1996, vol.108, p.134-139.

11. Konovich Е.А. Antibodies to glomemlar basal membrane in ulcerative colitis. In book: Inflammatory Bowel Disease - Diagnostic and Therapeutic Strategies. Falk Symposium 154. М., 2006, №16.

12. Schroeder K.W., Tremaine W.J., Ilstrup D.M. Coated oral 5-aminosalicylic acid therapy for mildly to moderately active ulcerative colitis: a randomized study. N Engi J Med. 1987, vol.317, p.1625-1629.

13. Ueki Т., Mizuno М., Uesu T. et al. Distribution of activated complement C3b and its degraded fragments, iC3b/C3dg in the colonic mucosa of ulcerative colitis. Clin. and Experiment. Immunol., 1996, vol.104, p.286-292.

14.. Wong M.M., Giudice G.J., Fairley J.A. Autoimmunity in bullous pemphigoid. G. ital. Dermatol. VeneroL, 2009, vol.144, p.411-421.

Способ прогнозирования неэффективности консервативной терапии язвенного колита при тотальном поражении толстой кишки путем проведения иммуногистологического исследования, отличающийся тем, что в сыворотке крови больного методом непрямой иммунофлюоресценции на срезах почки обезьяны определяют наличие антител к эпителиальной базальной мембране почечных канальцев, выражая результат в проценте флюоресцирующих канальцев, и при показателе более 15% прогнозируют высокую вероятность неэффективности консервативной терапии.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии. Используют липосомы в качестве матрицы для активированного фермента - пероксидазы хрена.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения антител к Mycobacterium leprae. Способ включает выявление в сыворотках крови антител к Mycobacterium leprae с помощью иммуноферментного метода.

Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты антитела или его фрагмента, специфичных в отношении β-амилоидного белка.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано у больных гемобластозами для прогноза развития рецидива заболевания после проведения аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток (АТСКК).

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, может быть использовано для диагностики скрытой активности туберкулеза у детей и подростков. Для этого проводят оценку состояния специфического клеточного иммунитета с помощью модифицированной реакции бластной трансформации лимфоцитов (мРБТЛ) с туберкулином (ППД-Л) и определение уровня интерферона-гамма (ИФН-γ) с ППД-Л с использованием малого объема (200 мкл) цельной крови и 4-х разведении антигена ППД-Л.

Группа изобретений относится к лабораторной диагностике и может быть использована для проведения анализов, основанных на реакции агглютинации частиц. Аналитический наконечник (100), предназначенный для выполнения визуально детектируемой реакции агглютинации после всасывания в него реактивов и образца, включает: первое отверстие (110) для приложения отрицательного или положительного давления к внутреннему объему аналитического наконечника; камеру для образца (120); по меньшей мере, одну боковую камеру (130), которая расположена по периметру камеры для образца; камеру детектирования (150), находящуюся в жидкостной связи с камерой для образца; переходную зону (140) между камерой детектирования и камерой для образца для вращательного перемешивания образца; второе отверстие (160) для всасывания реактивов и образца во внутренний объем аналитического наконечника или для удаления их оттуда.

Заявленная группа изобретений относится к области медицины и предназначена для выявления пациентов с повреждением сердца и оценки эффективности проводимой терапии.

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ ранней диагностики развивающегося пролапса тазовых органов у женщин репродуктивного возраста при отсутствии клинических признаков, заключающийся в отборе материала ткани стенки влагалища, проведении гистохимического анализа, определении количества и состояния эластиновых фибрилл, содержания матриксных белков LOXL1 и FBLN5, в котором развивающийся пролапс тазовых органов диагностируют при снижении количества эластиновых фибрилл и их фрагментации и при одновременном уменьшении содержания матриксных белков LOXL1 и в эпителии, эндотелии сосудов, фибробластах, экстрацеллюлярном матриксе по отношению к одноименным показателям у здоровых женщин.
Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, иммунологии, и может быть применено для определения степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата.
Изобретение относится к областям биологии и медицины. Для диагностики бесплодия позвоночных животных и человека обоего пола сравнивают концентрации иммунореактивности уротензина 2 в крови, определяемой методом реакции прямой гемагглютинации между бесплодными особями и особями, способными к детородной функции.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа.

Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики типа гепаторенального синдрома алкогольного генеза. Определяют уровни креатинина и альбумина в сыворотке крови.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности назначения лазеротерапии пациенту с угревой болезнью (акне).
Изобретение относится к области медицины, а именно к акушерству. Для дифференциальной диагностики гипертензивных состояний при беременности проводят исследование основных параметров гемодинамики, кислородного статуса и уровня лактата крови женщины в третьем триместре беременности.
Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к определению композиционного состава биологических минерализованных тканей. Способ включает исследование образцов в нативном состоянии и на различных этапах деорганификации гистоморфометрическим методом.

Изобретение относится к области медицины и описывает способ оценки функционального состояния аморфной фазы минеральной компоненты костного матрикса. В качестве оценочного критерия используют гистограмму распределения значений I-фактора - разности между интенсивностями светового потока по каналам R и В, причем унимодальное распределение со сдвигом вправо рассматривают как свидетельство подготовки к кристаллизации, со сдвигом влево - как признак подготовки к деминерализации, а близкое к нормальному - как депозит аморфных минералов в качестве резерва, би- и полимодальные распределения рассматривают как признак разнонаправленности функционального предназначения аморфных минералов в той или иной структуре кости.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования распространенного гнойного перитонита (РГП). Сущность способа состоит в том, что с помощью биолюминесцентного метода определяют активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ), малатдегидрогеназы (МДГ), НАДФ-зависимой глутаматдегидрогеназы (НАДФГДГ) и глутатионредуктазы (ГР) в лимфоцитах периферической крови больных РГП.

Изобретение относится к медицинской технике. Устройство содержит источник стабилизированного тока, схему управления, кнопки "Пуск" и "Опрос", ключ, измеритель временных интервалов, три пороговых элемента, устройство записи и считывания информации, блок памяти, формирователь энергетических уровней, токовый корректор, коммутатор, зонд с двумя электродами, один из которых соединен с первым, а другой - со вторым участком цепи, при этом источник стабилизированного тока соединен первым выходом с общей шиной, вторым выходом - с первым входом ключа, выход которого подключен к первым входам первого и второго порогового элемента; первый вход схемы управления подключен к кнопке "Пуск", первый выход - ко второму входу ключа, второй выход - ко второму входу измерителя временных интервалов; выход первого порогового элемента подключен к первому входу измерителя временных интервалов, выход второго порогового элемента соединен с третьим входом измерителя временных интервалов и вторым входом схемы управления; первый вход устройства записи и считывания информации подключен к кнопке "Опрос", второй - к третьему выходу схемы управления, а выход соединен с первым входом блока памяти, связанному информационными шинами с информационными выходами-входами измерителя временных интервалов; первый выход формирователя энергетических уровней соединен со входом источника стабилизированного тока и вторыми входами первого и второго пороговых элементов, второй вход формирователя энергетических уровней соединен с четвертым выходом схемы управления, выход токового корректора соединен с первым входом формирователя энергетических уровней; третий пороговый элемент подключен выходом к третьему входу схемы управления, вторым входом к общей шине, при этом первый выход коммутатора подключен к первому участку цепи, второй выход - ко второму участку цепи, первый и четвертый вход - к общей шине, а второй и третий входы соединены с первым входом первого порогового элемента, а пятый вход - с пятым выходом схемы управления, причем устройство дополнительно снабжено фильтром, вход которого соединен со вторым и третьим входами коммутатора, а выход с первым входом третьего порогового элемента.

Изобретение относится к биохимическим методам исследования с использованием измерения по селективным ионам, характеризующим маркеры микроорганизмов, для молекулярного микробиологического анализа. Способ заключается в том, что проводят качественный и количественный хромато-масс-спектрометрический анализ исследуемого биологического материала на содержание жирных кислот и оксикислот, выделяют и производят идентификацию отдельного таксона микроорганизма по его (таксона) профильным и маркерным признакам, для чего определяют специфические ионы маркеров микроорганизмов методом масс-фрагментографии с последующим выявлением полного сообщества микроорганизмов (возбудителей, таксонов) в исследуемом материале биологического происхождения, используя метод внутреннего стандарта (шаблона) идентифицируют компоненты пробы по жирным кислотам и оксикислотам путем сравнения полученных данных со стандартной базой данных и определяют их количественное содержание, причем перед измерением серии рутинных клинических проб исследуемого материала собирают произвольную пробу фекалий, принимая ее в качестве эталонной смеси, на основе эталонной смеси строят хроматограмму и по полученным качественным и количественным характеристикам сообщества микроорганизмов пробы данной эталонной смеси осуществляют определение пиков специфических ионов на шкале времен удержания для дальнейшего расчета состава сообщества микроорганизмов в последующей серии клинических проб по маркерам этих микроорганизмов, причем качественные и количественные характеристики сообщества микроорганизмов произвольной пробы фекалий принимают за необходимое и достаточное количество, характеризующее любой исследуемый материал биологического происхождения, а идентификацию специфического иона осуществляют на основании детектирования пиков хроматограммы маркеров из стандартной (тестовой) базы данных. Достигается повышение точности и надежности, а также - упрощение калибровки. 12 з.п. ф-лы, 12 ил.
Наверх