Штамм bacillus licheniformis вкм b-2713d, обладающий выраженным антагонизмом по отношению к salmonella typhi, staphyloccus aureus, listeria monocytogenes и резистентностью к стрептомицину и налидиксовой кислоте


 


Владельцы патента RU 2501849:

Общество с ограниченной ответственностью "Нова" (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в ветеринарии. Штамм Bacillus licheniformis BKM B-2713D обладает выраженным антагонизмом по отношению к Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes. Штамм обладает резистентностью к антибиотикам при концентрации стрептомицина 20 мкг/мл, при концентрации налидиксовой кислоты 20 мкг/мл. Штамм обладает α-амилазной активностью 0,015 Ед/мл среды при рН 6,0, протеазной активностью 2,34 Ед/мл среды при рН 7,0. 1 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к пробиотическим бактериальным препаратам, которые могут найти применение в ветеринарии. Пробиотическими являются бактериальные препараты на основе штаммов микроорганизмов, обладающих антагонистической активностью к энтеропатогенным бактериям.

В классических исследованиях И.А.Мечникова эти свойства были изучены на примере молочнокислых бактерий. Затем круг продуцентов пробиотических препаратов был расширен.

Пробиотики на основе штаммов спорообразующих бактерий сравнительно недавно стали применяться в ветеринарии. Антагонистические свойства этих бактерий привлекают к себе внимание многих разработчиков.

Сложность лечения инфекционных заболеваний заключается в возникновении у патогенных микроорганизмов полирезистентности к антибиотикам. Кроме того, сами антибиотики часто оказывают побочное воздействие на организм животных и вызывают дисбактериоз кишечника, отягчающий течение основного заболевания. Это обусловливает необходимость поиска новых подходов к решению данной проблемы.

Препараты-пробиотики на основе бактерий рода Bacillus, подавляющие развитие патогенных микроорганизмов, находят широкое применение в сельском хозяйстве для подавления фитопатогенных бактерий и грибов, в медицине, ветеринарии для лечения различных заболеваний птиц и сельскохозяйственных животных [1].

В настоящее время препараты-пробиотики из бактерий рода Bacillus находят широкое применение в ветеринарии для лечения различных заболеваний птиц и сельскохозяйственных животных. Предложены многочисленные варианты пробиотиков из спорообразующих бактерий: бактиспорин [5], бациллоспорин [6], споролакт [7], споробактерин [8], субалин [9]. Основу вышеперечисленных препаратов-пробиотиков составляют разные штаммы бактерий рода Bacillus, обладающие антагонизмом в отношении патогенных бактерий.

Для повышения эффективности профилактики и лечения дисбактериозов предлагают бациллярные препараты из двух штаммов бактерий рода Bacillus - Bacillus subtilis и Bacillus licheniformis. Считается, что бактерии вида Bacillus subtilis - строгие аэробы, тогда как представители вида Bacillus licheniformis могут расти в микроаэрофильных условиях. Считается также, что эти свойства двух видов усиливают эффективность пробиотической терапии [2-4]. Подавляющее большинство представителей рода Bacillus безвредны для теплокровных животных, проявляют антагонистическую активность к широкому спектру патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, устойчивы к литическим ферментам, технологичны в производстве, стабильны при хранении, экологически безопасны.

Учитывая возможность применения антибиотиков в кормопроизводстве, весьма перспективно использование в составе пробиотических препаратов штаммов, обладающих как высокой антагонистической активностью против энтеропатогенов, так и полирезистентностью к антибиотикам.

В качестве прототипа можно рассматривать штамм Bacillus licheniformis ВКПМ - 2336, входящий в состав ветеринарного препарата Ирилис [11].

Задачей настоящего изобретения является получение штамма Bacillus licheniformis, обладающего антагонистической активностью к широкому спектру патогенных тест-организмов, а также резистентностью к наиболее широко применяемым антибиотикам.

Технический эффект, который может быть получен при использовании полученного штамма, заключается в повышении эффективности лечения за счет возможности сочетанного применения бактериального препарата с антибиотиками.

Для решения указанной проблемы предлагается штамм Bacillus licheniformis BKM B-2713D. Штамм депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов.

Идентификация штамма была осуществлена по «Определителю микроорганизмов» Берги (1997 г.).

Исходный почвенный изолят выделен в Кировской области. Почвенный изолят был подвергнут мутагенному воздействию нитрозогуанидина (доза от 40 до 100 мкг/мл) с последующим скринингом на селективных средах.

Культурально-морфологические и микроскопические особенности штамма: клетки палочковидные прямые, размер: 0,5-0,7×2,0-3,0 мкм, образует термоустойчивые эндоспоры, не более 1 в клетке-спорангии, спорообразование не подавляется экспозицией на воздухе, расположение центральное. Клетки неподвижны. На стандартных плотных питательных средах (МПА, LB, ГРМ-1) образует мелкие прозрачные выпуклые колонии. Колонии врастают в агар. Каталаза: положительный тест, факультативный анаэроб. Используемые источники углерода при аэробном росте: глюкоза, арабиноза, ксилоза, манит, декстроза, казеин, крахмал. Оптимум рН для роста 6,0-8,0, температура: от +4°С до +45°С.

Резистентность к антибиотикам: стрептомицин - 20 мкг/мл, налидиксовая кислота - 20 мкг/мл.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Штамм характеризуется высокой антагонистической активностью в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов. Антагонистическую активность проверяли методом отсроченного антагонизма.

Для этого взвесь клеток, смытых с агаровой среды, высевали штрихом по диаметру чашки Петри с агаризованной средой Гаузе N 2. Посевы инкубировали в термостате при 37°С в течение 48 ч. Затем к выросшей культуре подсевали штрихом тест-микроорганизмы (500-миллионные суспензии суточных культур в физиологическом растворе). Учет результатов проводили через 18-20 часов инкубирования при 37°С по величине зон отсутствия роста тест-культур. Контролем роста тест-культур служило параллельное выращивание их на чашках с агаризованной средой Гаузе N 2 без исследуемой культуры. Результаты приведены в таблице.

Исследование антагонистических свойств культуры.

Задержка роста тест-культур, мм
Е.coli S.typhimurium S.typhi Ps.aeruginosa St.aureus L.monocytogenes
0 0 7 0 12 14

Пример 2. Была изучена резистентность к следующим антибиотикам: канамицин, стрептомицин, гентамицин, триметоприм, налидиксовая кислота, цефазолин, ампициллин, бензилпенициллина натриевая соль. Проверку осуществляли при глубинном культивировании продуцента на глюкозо-пептонной среде с дрожжевым экстрактом при различных концентрациях антибиотиков. Было установлено, что штамм обладает резистентностью к антибиотикам: стрептомицин - 20 мкг/мл, налидиксовая кислота - 20 мкг/мл.

Пример 3.

Активности ферментов в культуральной жидкости определяли при глубинном культивировании продуцента на глюкозо-пептонной среде с дрожжевым экстрактом в течение двух суток. Были определены следующие значения ферментативной активности:

α - амилазная активность - 0,015 Ед/ мл среды при рН 6,0,

протеазная активность - 2,34 Ед/мл среды при рН 7,0.

Следует отметить высокую протеазную активность штамма Bacillus licheniformis BKM B-2713D.

Литература

1. Смирнов В.В., Резник С.Р., Вьюницкая В.О. Современные представления о механизмах лечебно-профилактического действия пробиотиков из бактерий рода Bacillus // Микробиол. журн. - 1993. - №4. - С.92-112.

2. Бакулина Л.Ф., Тимофеев И.В., Перминова Н.Г., Полушкина А.Ф., Печуркина Н.И. Пробиотики на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии // Биотехнология. 2001, №2, с.48-56.

3. Hong, H.A., Due L.H., Cutting S.M. The use of bacterial spore formers as probiotics // FEMS Microbiol. Rev. - 2005. - Vol.29, № 4. - P.813-835.

4. Probiotics Microbes: The Scientific Basis / R.J.Collier, et al. // A Report from American Academy of Microbiology.- Washington, 2006. - 28 p.

5. Патент РФ 2130316. Лечебно-профилактический биопрепарат бактиспорин. А61K 35/74, БИ №14, 1999, приор. 23.01.97.

6. Патент СССР 1710575. Штамм бактерий Bacillus sp - компонент лечебно-профилактического препарата против дисбактериозов и аллергий, C12N 1/20, БИ №5, 1992.

7. Патент РФ 2035186. Профилактический биопрепарат споролакт. А61K 35/66, БИ №14, 1995.

8. Алешкин, А.В., Афанасьев, С.С., Давыдкин, В.Ю., Манько, Т.Н., Давыдкин, И.Ю. Бактерийный препарат нового поколения «Споробактерин» // Мед. картотека. - 2003. - №4.

9. Патент РФ №2035185. Профилактический биопрепарат Субалин. - 1995. Приор. 31.01.1992.

10. Патент РФ 2115725. Штамм Bacillus subtilis, резистентный к рифампицину, ампициллину и стрептомицину, обладающий антибактеральной активностью по отношению к патогенным видам микроорганизмов. Приор. 23.07.1997.

11. Гатауллин А.Г. Биологические свойства штаммов Bacillus subtilis, перспективных для создания новых пробиотиков // Дисс. канд. биол. наук, Москва, 2005 г.

Штамм Bacillus licheniformis BKM B-2713D, обладающий выраженным антагонизмом по отношению к Salmonella typhi, Staphylococcus aureus, Listeria monocytogenes и резистентностью к антибиотикам стрептомицину и налидиксовой кислоте.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии, а именно генной инженерии. Предложены способ получения рекомбинантного капсидного белка вируса гепатита E (rtHEV-ORF2) и рекомбинантная вакцина для профилактики вирусного гепатита E.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus licheniformis ВКПМ В-11302 - продуцент термостабильной липазы. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере активность фермента в культуральной жидкости достигает уровня 500 ЕД/мл.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой штамм бактерий Bacillus subtilis ВКПМ В-11270 - продуцент фермента фосфолипазы C. При ферментации полученного штамма в 3 л лабораторном ферментере в минимальной среде при температуре 30°C, активность фермента в культуральной жидкости достигает уровня 210 ЕД/мл.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению препаратов кератиназы, и может быть использовано для получения препаратов кератиназ, применяемых в медицине, косметологии, легкой промышленности и сельском хозяйстве.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам приготовления биологически активных кормовых добавок для животных, птицы, рыбы. Готовят жидкую культуру штамма Corynebacterium glutamicum ВКПМ В-1959 - продуцента лизина глубинным способом и жидкие культуры штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus subtilis ВКПМ В-4099 и Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм Aspergillus oryzae RCAM01135 - продуцент протеолитических и амилолитических ферментов - обладает способностью продуцировать протеолитические и амилолитические ферменты.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм одноклеточных водорослей Dunaliella salina IPPAS 295 - продуцент биологически активных веществ, обладающих антиоксидантной активностью, депонирован в коллекции культур микроводорослей Института физиологии растений им.

Изобретение относится к области медицинской микробиологии и касается штамма бактериофага Escherichia coli ECD4. Штамм бактериофага Escherichia coli ECD4 выделен из фекалий бройлерных кур на культуре бактерий штамма Escherichia coli О104:Н4 RKI№112027 и депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ-Оболенск» под номером Рh63.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности биодеградации органических соединений с помощью микроорганизмов. Предложен способ биодеградации дротаверина гидрохлорида (спазмолитик НОШПА).

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к новому, высокоэффективному способу получения такролимуса (FK-506) методом микробиологического синтеза. Способ предусматривает приготовление инокулята клеток Streptomyces sp.
Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ очистки водного раствора, содержащего соль меди, от ионов меди.
Изобретение относится к области фармацевтики и представляет собой питательную композицию для младенца или ребенка, содержащую липид или жир; источник белка; источник полиненасыщенных жирных кислот с длинной цепью, который содержит докозагексаеновую кислоту; до 2,5 вес.% источника дополнительного кальция, причем по меньшей мере 20% источника дополнительного кальция представляет собой глюконат кальция, и от 0,015 до 0,1 миллионных долей (пг/мкг) ТРФ-β.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту одного или более бактериальных штаммов Lactobacillus. Экстракт одного или более бактериальных штаммов Lactobacillus, представляющий собой растворимый экстракт, где экстракт содержит химически модифицированные бактериальные молекулы, полученные в результате воздействия щелочной среды на один или более бактериальных штаммов Lactobacillus, экстракт полезен в лечении заболеваний, связанных с дисбалансом продукции противовоспалительных цитокинов.
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам приготовления биологически активных кормовых добавок для животных, птицы, рыбы. Готовят жидкую культуру штамма Corynebacterium glutamicum ВКПМ В-1959 - продуцента лизина глубинным способом и жидкие культуры штаммов Bacillus subtilis ВКПМ В-8130, Bacillus subtilis ВКПМ В-2984, Bacillus subtilis ВКПМ В-4099 и Bacillus licheniformis ВКПМ В-4162.
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для получения изотопно-меченых клеток микроорганизмов. Способ обогащения клеток E.coli изотопами магния предусматривает культивирование клеток E.coli в течение 10-16 ч при температуре 37°C в водном растворе, обогащенном изотопом магния 24Mg или 25Mg, или 26Mg.

Изобретение относится к получению ферментированного молочного продукта. Способ получения ферментированного продукта включает инокулирование молока бактериями, ферментацию молока и упаковывание готового продукта.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при производстве пищевых и кормовых добавок для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности биодеградации органических соединений с помощью микроорганизмов. Предложен способ биодеградации дротаверина гидрохлорида (спазмолитик НОШПА).
Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способу приготовления бактериального препарата ацидофильных культур, и может быть использовано при получении молочнокислых микроорганизмов при производстве биологически активной пищевой добавки для профилактики дисбактериозов, дисфункции кишечника у детей и взрослых, а также у сельскохозяйственных животных.
Изобретение относится к мелиорации почв и может быть использовано при рекультивации почв, загрязненных нефтью. Для снижения токсичности почв и затрат на мелиорацию используют 3 вида глин различного химического состава с добавлением мелассы и биопрепарата Линекс в следующих соотношениях, масс.%: глина диалбекулит - 38-40; глина ирлит 1 - 28-32; глина ирлит 7 - 16-20; меласса - 8-12; биопрепарат Линекс - 2-4.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к экстракту одного или более бактериальных штаммов Lactobacillus. Экстракт одного или более бактериальных штаммов Lactobacillus, представляющий собой растворимый экстракт, где экстракт содержит химически модифицированные бактериальные молекулы, полученные в результате воздействия щелочной среды на один или более бактериальных штаммов Lactobacillus, экстракт полезен в лечении заболеваний, связанных с дисбалансом продукции противовоспалительных цитокинов.
Наверх