Способ выявления повышенной активированности т-лимфоцитов



Способ выявления повышенной активированности т-лимфоцитов
Способ выявления повышенной активированности т-лимфоцитов

Владельцы патента RU 2502998:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт физиологии природных адаптаций Уральского отделения Российской академии наук (RU)

Изобретение относится к области иммунологии, лабораторной диагностике и предназначено для выявления повышенной активированности Т-лимфоцитов. Сущность способа: у обследуемых лиц производится забор крови из вены и выделение из нее лимфоцитов. В препаратах «толстой капли» лимфоцитарной взвеси определяется уровень розеткообразования лимфоцитов. Обнаружение 5÷7% розеток лимфоцитов на 100% лимфоидных клеток соответствует повышенной активированности CD23+ и CD71+, определение 8÷10% розеток лимфоцитов - CD23+, CD71+ и HLADR+, выявление более 10% розеток лимфоцитов - CD25+, CD23+, CD71+ и HLADR+. Выявление повышенного уровня активированности Т-лимфоцитов необходимо в случаях диагностики аутоиммунных заболеваний, реакций гиперчувствительности замедленного типа, опухолевых процессов, реакций отторжения трансплантата, осложнений послеоперационного периода. Изобретение обеспечивает упрощение способа и снижение затрат на его осуществление. 3 пр., 2 ил.

 

Изобретение относится к области иммунологии, лабораторной диагностике и предназначено для выявления повышенной активированности Т-лимфоцитов с целью уточнения диагностики реакций гиперчувствительности замедленного типа, онкологических процессов, аутоиммунных заболеваний, реакций отторжения трансплантата, осложнений послеоперационного периода.

Активация Т-лимфоцитов характерна для многих иммунодефицитных заболеваний, в т.ч. аутоиммунных, онкологических, аллергических, осложнений при трансплантации в виде реакции отторжения трансплантата. Так, при аутоиммунных заболеваниях, связанных с образованием антител к собственным антигенам, преимущественно реагируют Т-лимфоциты с рецептором к IL-2 (CD25+) и Fc-фрагменту [Zwirska-Korczala К. Influence of thyroxine on serum soluble interleukin-2 receptor alpha levels in thyroid disorders / K.Zwirska-Korczala, A.Berdowska, J.Jochem et al. // J. Clin. Pharm.Therapeut. - 2004. - Vol.29, N 2. - P:151-156; Порядин Г.В. Молекулярные и клеточные механизмы иммунопатологии: состояние проблемы и перспективы исследований // Лечебное дело. - 2008. - №3. - С.3-13]. Гиперчувствительность немедленного и замедленного типа отличается реакцией со стороны CD23+ и HLADR+ [Пыцкий В.И. Аллергические заболевания / В.И. Пыцкий, Н.В. Адрианова, А.В. Артомасова. - М., 1999]. Онкологическая патология наряду с увеличением уровня активизации через IL-2 и посредством HLA DR отличается высоким содержанием лимфоцитов о рецептором к трансферрину (CD71+) [Artamonova E.V. Transferrin receptor (CD71) expression by human breast cancer cells / E.V. Artamonova, M.V.Vasiliev, N.N.Tupitsyn et al. // European Journal of Cancer. - 1996. - Т.32. - №2. - С.12.; Тупицын Н.Н. Клиническое значение оценки экспрессии мономорфных детерминант молекулы HLA I и II классов на клетках рака желудка / Н.Н. Тупицын, А.А. Клименков, З.Г. Кадагидзе и др. // Вестник РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. - 1991. - Т. 2, №1. - С.36-38]. В связи с этим в клинической практике исследуют содержание в периферической крови функционально активных, зрелых Т-клеток (CD3+), клеток е рецепторами активации CD23+, CD25+, HLADR+, CD71+и оценивают количество активированных Т-лимфоцитов.

Известен способ выявления активности интерлейкин-2-опосредованного Т-клеточного звена иммунитета [Титов Л.П., Л.И. Тесевич, О.П.Чудаков, Т.Д. Харитоник Способ определения активности Т-лимфоцитов в организме от 08.09.1988]. Обследуемому пациенту вводят внутривенно фитогемагглютинин и смесь ФГА с циклоспорином. Измеряют зоны гиперемии и вычисляют величину 50%-ной ингибиции ответа на ФГА. При повышении этой величины по сравнению со здоровыми - определяют повышенную активность, а при ее снижении - низкую активность Независимого ответа. Данный способ предполагает введение веществ в организм человека, что может быть не только травмоопасным, но и формировать аллергическую реакцию. Кроме того, выявление активности Т-клеток ведется только относительно CD25+, в то время как в заявленном нами изобретении определяются CD23+, CD25+, CD71+ и HLADR+.

Применение автоматического иммунофенотипирования клеток биосубстратов на проточном лазерном цитофлуориметре является малодоступным для массового внедрения, так как необходим дорогостоящий прибор, стоимость которого составляет несколько миллионов рублей. Учитывая значительные финансовые затраты на приобретение реактивов и текущих расходных материалов, необходимость высокой квалификации исполнителя, указанный метод может использоваться лишь в крупных, центральных медицинских учреждениях.

Прототипом изобретения является способ определения количества активированных Т-лимфоцитов в организме человека, включающих забор крови из вены, выделение лимфоцитов центрифугированием в градиенте плотности, постановку розеткообразования с эритроцитами барана [Патент РФ №2080598 от 03.09.1992]. По количеству лимфоцитов, прикрепивших более 10 эритроцитов барана, определяют активированные Т-лимфоциты в организме. Данное изобретение является многоэтапным процессом со значительным использованием реактивов и рабочего времени, а также не дает возможности установить фенотип активированных клеток.

Предложенное нами изобретение позволяет в обычных условиях гематологической лаборатории без дополнительных затрат на приобретение моноклональных сывороток, аппаратуры и материалов выявить повышение активированности Т-лимфоцитов. Это необходимо в случаях диагностики аутоиммунных заболеваний, реакций гиперчувствительности замедленного типа, опухолевых процессов, реакций отторжения трансплантата, осложнений послеоперационного периода.

Поставленная цель достигается тем, что при выявлении 5÷7% розеток лимфоцитов на 100% лимфоидных клеток делается заключение о патологическом повышении активированности CD23+ и CD71+. Определение 8÷10% розеток лимфоцитов свидетельствует о повышенной активированности CD23+, CD71+ и HLADR+. Выявление более 10% розеток лимфоцитов соответствует активированности CD25+, CD23+, CD71+ и HLADR+. Для выполнения поставленной цели производится забор венозной крови и выделение из нее центрифугированием лимфоцитарной взвеси в градиенте плотности. В полученных препаратах «толстой капли» лимфоцитарной взвеси (предварительно высушенных, фиксированных в спирто-эфирной смеси и окрашенных спиртовым раствором бриллиантового зеленого) подсчитывается % содержание розеток лимфоцитов (с количеством розеткообразующих единиц не менее 3) на 100% лимфоидных клеток. На рисунках 1 и 2 демонстрируется различное содержание розеткообразующих единиц.

Указанным способом были обследованы 192 человека, проживающих в г.Архангельске в возрасте от 21 до 65 лет: 50 практически здоровых лиц; 28 больных аутоиммунным тиреоидитом, 42 больных онкологическими заболеваниями, 55 больных атоническим дерматитом и 17 лиц с метаболическим синдромом. Лица с патологиями проходили реабилитацию в медицинской компании «Биокор». Обследование проводили с соблюдением основных норм биомедицинской этики. Результаты обработаны с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6» («StatSoft», США). Тип исследования ретроспективный, выборки случайные, одномоментные. Генеральная совокупность - жители севера Европейской территории России. Достоверность различий между группами оценивали с помощью параметрического t-критерия Стьюдента для независимых выборок и непараметрического критерия Уилкоксона. Статистическая достоверность присваивалась при значении р<0,05.

Установлено, что обнаружение 5÷7% розеток лимфоцитов совпадает с увеличением абсолютного содержания активированных CD23+ (с 0,27±0,03 до 0.48±0.03×109 кл/л), CD71+ (с 0,28±0,01 до 0,35±0,02×109 кл/л). Определение 8÷10% розеток лимфоцитов ассоциировано с увеличением уровня CD23+ (с 0,27±0,03 до 0,58±0,04×109 кл/л), CD71+ (с 0,28±0,01 до 0,37±0,03×109 кл/л) и HLADR+ (с 0,47±0,03 до 0,81±0,04×109 кл/л). Выявление более 10% розеток лимфоцитов соответствует повышению содержания HLADR+ (с 0,47±0,03 до 0,85±0,04×109 кл/л), CD23+(с 0,27±0,03 до 0,67±0,03×109 кл/л), CD71+ (с 0,28±0,01 до 0,47±0,03×109 кл/л) и CD25+ (с 0,43±0,02 до 0,79±0,03×109 кл/л), р<0,001 по сравнению с данными обследуемых лиц, у которых активность розеткообразования лимфоцитов менее значительна. Наиболее высокие концентрации CD23+ (0,70±0,03×109 кл/л) и CD25+ (0,84±0,03×109 кл/л) характерны для больных аутоиммунным тиреоидитом, высокие уровни содержания HLADR+ (0,89±0,05×109 кл/л) - при опухолевых процессах, CD71+ (0,53±0,02×109 кл/л) - для лиц с метаболическим синдромом и злокачественными новообразованиями. Усиление механизма образования розеток лимфоцитов свидетельствует о повышении контактных взаимодействий клеток, что является одним из признаков их активированности.

Частные примеры использования способа.

1. Пациентка А., возраст 34 года. Диагноз - аутоиммунный тиреоидит Хашимото. В препаратах «толстой капли» лимфоцитарной взвеси обнаружено 6% розеток. При контрольном параллельном исследовании с моноклональными сыворотками выявлены 3 розетки с CD71+, 3 розетки с CD23+, 1 розетка с HLADR+. После абсолютного подсчета клеток в контроле установлено повышенное содержание CD23+ (0,45×109 кл/л) и CD71+ (0,34×109 кл/л). Уровень клеток с остальными фенотипами был физиологическим: CD25+ (0,92×109 кл/л) и HLADR+ (0,72×109 кл/л). Выявленная закономерность подтверждена.

2. Пациент В., возраст 52 года. Диагноз: атопический дерматит. В препаратах «толстой капли» лимфоцитарной взвеси обнаружено 10% розеток. При контрольном параллельном исследовании с моноклональными сыворотками выявлены 2 розетки с CD71+, 3 розетки с HLA DR+, 5 розеток с CD23+ и 1 розетка с CD25+. После абсолютного подсчета клеток в контроле установлено повышенное содержание CD23+ (0,75×109 кл/л), CD71+ (0,43×109 кл/л) и HLADR+ (0,68×109 кл/л). Концентрация лимфоцитов CD25+ была физиологической (0,54×109 кл/л). Выявленная закономерность подтверждена.

3. Пациент С., возраст 59 лет. Диагноз - лимфосаркома желудка. В препаратах «толстой капли» лимфоцитарной взвеси обнаружено 12% розеток. При контрольном параллельном исследовании с моноклональными сыворотками выявлено 6 розеток с CD71+, 5 розеток с HLADR+, 4 розетки с CD23+, 5 розеток с CD25+. После абсолютного подсчета лимфоцитов в контроле установлено повышенное содержание CD71+ (0,71×109 кл/л), CD25+ (1,28×109 кл/л), HLADR+ (0,94×109 /л) и CD23+ (0,52×109 кл/л). Выявленная закономерность подтверждена.

Способ выявления повышенной активированности Т-лимфоцитов, включающий забор крови из вены и выделение из нее лимфоцитов, отличающийся тем, что в препаратах «толстой капли» лимфоцитарной взвеси определяется уровень розеткообразования лимфоцитов; выявление 5÷7% розеток лимфоцитов на 100% лимфоидных клеток соответствует повышенной активированности CD23+ и CD71+, определение 8÷10% розеток лимфоцитов - CD23+, CD71+ и HLADR+, выявление более 10% розеток лимфоцитов - CD23+, CD25+, CD71+ и HLADR+.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. У пациента с острым инфарктом миокарда (ОИМ) при госпитализации снимают ЭКГ, делают клинический и биохимический анализы крови, анализируют анамнез.
Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии. Для прогнозирования неблагоприятного годового исхода у пациентов с острым коронарным синдромом с подъемом сегмента ST, подвергшихся чрескожному коронарному вмешательству, проводят анализ результатов клинических и лабораторных методов исследования.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ оценки морфофункционального состояния индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) больных паркинсонизмом путем проведения их дифференцировки в дофаминергические нейроны, для чего воздействуют на ИПСК факторами, индуцирующими их дифференцировку в дофаминергические нейроны, а затем высаживают их на мультиэлектродную матрицу, обработанную опорным субстратом матригель/фибронектин, после чего, начиная с 3-5 дня вплоть до 8-10 дня, проводят динамическую регистрацию сетевой спонтанной биоэлектрической активности и при наличие к 3-5 дню сетевой спонтанной биоэлектрической активности в виде одиночных спайков, а к 8-10 дню упорядоченной пачечной спайковой активности на сформированном на микроэлектродах монослое оценивают морфофункциональное состояние как нейрональную направленность дифференцировки ИПСК в дофаминергические нейроны.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования невынашивания беременности в ранние сроки. Сущность изобретения состоит в том, что у беременных женщин с выявленной урогенитальной инфекцией в 1 триместре проводят определение в слизи цервикального канала уровня MIP-1α.
Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для диагностики гипоксии плода в родах. Для этого за 30 минут до родов проводят кардиотокографию.

Изобретение относится к биохимическим методам исследования с использованием измерения по селективным ионам, характеризующим маркеры микроорганизмов, для молекулярного микробиологического анализа.
Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования неэффективности консервативной терапии тяжелой формы язвенного колита при тотальном поражении толстой кишки.
Изобретение относится к областям биологии и медицины. Для диагностики бесплодия позвоночных животных и человека обоего пола сравнивают концентрации иммунореактивности уротензина 2 в крови, определяемой методом реакции прямой гемагглютинации между бесплодными особями и особями, способными к детородной функции.

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, а именно к способу дифференциальной диагностики гнойных и серозных менингитов у детей. Способ состоит в определении показателей микробицидной активности нейтрофильных лейкоцитов: ферментов миелопероксидазы, цитохромоксидазы, кислой фосфатазы в ликворе больных гнойным и серозным менингитами с помощью спектрофотометрического анализа.

Изобретение относится к области фармацевтики и биологии и представляет собой способ получения жизнеспособной гетерогенной популяции клеток кожи, включающий забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9% водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°C, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°C. Изобретение обеспечивает разделение клеток кожи с сохранением их жизнедеятельности. 1 з.п. ф-лы, 1 ил.

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ повышения эффективности наступления беременности, заключающийся в том, что осуществляют с учетом состояния системы фибринолиза по индексу активирующей фибринолиз способности эндотелия и при его значениях менее 11,0 ед. применяют последовательную перемежающуюся пневматическую компрессию. Способ обеспечивает повышение информативности наступления беременности при экстракорпоральном оплодотворении (ЭКО), прост в применении, является высокоинформативным и не требует дополнительного дорогостоящего оборудования, уменьшает медикаментозную нагрузку на женщин в программе ЭКО, снижая вероятность полипрагмазии, что позволяет широко использовать его в практическом здравоохранении. 1 пр., 3 ил.
Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно ветеринарной паразитологии. Способ культивирования ооцист эймерий крупного рогатого скота, включающий микроскопирование процесса споруляции, отличающийся тем, что используют флотационный раствор, приготовленный из 1,5 кг технической гранулированной аммиачной селитры и 1 л кипяченой воды, с помощью которого в медицинских стаканчиках суспензируют 3 г исследуемых фекалий с 50 мл раствора, суспензию процеживают через металлическое сито, отстаивают 5 минут, шприцом без иглы отсасывают 12 мл верхнего слоя, переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют 1 минуту при 1500 об/мин, поверхностную пленку (1-2 капли) снимают проволочной петлей и переносят на обезжиренное предметное стекло с овалом, прочерченным восковым карандашом, добавляют 3-4 капли водопроводной воды, предметные стекла кладут на штатив, затем штатив помещается в эксикатор, а далее ставят в термостат с температурой 25-28°C и ежедневно микроскопируют на наличие процессов споруляции. Изобретение обеспечивает упрощение способа.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии. Предложен способ дифференциальной диагностики геморрагического и ишемического типов инсультов в остром периоде. Определяют количество низкомолекулярной фракции ДНК, сравнивая в течение суток электрофореграммы, полученные из плазмы крови больных, со стандартами известной концентрации. При выявлении количества 80-87 нг/мл низкомолекулярной ДНК через 3 часа после начала острого инсульта диагностируют геморрагический тип инсульта. При обнаружении 80-87 нг/мл низкомолекулярной ДНК через сутки после начала острого инсульта диагностируют ишемический тип инсульта. Изобретение обеспечивает эффективный способ дифференциальной диагностики геморрагического и ишемического типов инсультов за счет количественного определения низкомолекулярной фракции ДНК после начала острого инсульта. 1 ил., 1 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки трансаминирования в синцитиотрофобласте. Сущность способа: гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы. Оценивают нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 и снижении активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы ниже 12,5±0,37 усл. ед., что проявляется увеличением алаттрансаминазы до 0,58±0,002 ммоль/л в гомогенате плаценты.

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии, кардиологии, патофизиологии, биохимии и фармакологии. Для оценки развития ишемической болезни сердца рассчитывают значение дискриминантной функции по набору показателей: возраст, рост, вес, индекс Кетле, константа Брока, абдоминальное ожирение, триглицериды, общий холестерин, холестерин липопротеидов высокой плотности, холестерин липопротеидов низкой плотности, холестерин липопротеидов очень низкой плотности, коэффициент атерогенности, артериальное давление, глюкоза, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, лактатдегидрогеназа, α-амилаза, общий белок, альбумин, мочевая кислота, мочевина, креатинин, креатинкиназа, щелочная фосфатаза, билирубин общий, билирубин прямой, АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов, количество тромбоцитов, средний объем тромбоцита, количество эритроцитов, гематокрит, гемоглобин, средний объем эритроцита, коэффициент распределения эритроцитов по объему, среднее содержание гемоглобина в крови, количество лейкоцитов, процент сегментоядерных нейтрофилов, процент эозинофилов, процент базофилов, процент лимфоцитов, процент моноцитов, среднее содержание гемоглобина в эритроците. На основании полученного значения дискриминантной функции делают вывод о наличии начала развития ИБС, 50% риска развития заболевания или 100% развитии ИБС. Способ позволяет провести индивидуальную количественную оценку развития ишемической болезни сердца в зависимости от пола пациента, на основании значения дискриминантной функции. 5 ил., 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области медицины и предназначено для прогнозирования индивидуального риска развития бронхиальной астмы в регионах с высокой и низкой распространенностью гельминтных инфекций. Определяют факт наличия либо отсутствия описторхоза, полиморфные варианты генов и вероятность отнесения индивида к группе с низким или высоким риском развития бронхиальной астмы. При обнаружении одной из комбинаций риска в соответствии с моделью SOCS5-IFNG-описторхоз у пациента диагностируют высокий риск развития бронхиальной астмы. В случае обнаружения одной из протективных комбинаций в соответствии с моделью IL4-TBX21-SOCS5 у пациента диагностируют низкий риск развития бронхиальной астмы. Изобретение позволяет прогнозировать высокий и низкий риск бронхиальной астмы с учетом описторхозной инвазии. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области медицины, в частности к применению молекулярных маркеров ВПЧ ВКР и их качественных и количественных характеристик для прогнозирования течения гиперпролиферативных заболеваний ШМ. Способ осуществляется поэтапно: 1) из соскобов из цервикального канала и биоптатов ШМ выделяют ДНК ВПЧ; 2) определяют генотип вируса; 3) отбирают пациенток с ВПЧ16-позитивной CIN; 4) методом ПНР в реальном времени определяют число копий ДНК вируса и степень интеграции ее в хозяйский геном (физический статус); 5) устанавливают пороговый уровень вирусной нагрузки с учетом физического статуса вируса (6,5 lg копий ДНК ВПЧ 16 на клетку); 6) классифицируют пациенток в зависимости от установленного порогового уровня вирусной нагрузки и физического статуса вируса (эписомальная или интегрированная форма); 7) выявляют пациенток с неблагоприятным прогнозом, имеющих высокую вирусную нагрузку (>6.5 lg копий ДНК на клетку) при эписомальной форме вируса или низкую нагрузку (<6.5 lg копий ДНК на клетку) при интегрированной форме вируса. Способ позволяет провести раннее прогнозирование неблагоприятного течения цервикальных интраэпителиальных неоплазий и возможного перехода их в рак ШМ. 2 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 4 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к онкогинекологии. Определяют иммунологические показатели: абсолютное количество лимфоцитов (лим_аб), TNFα (TNFα_к) и IL-10 (IL-10_к) в периферической крови, а также TNFα (TNFα_c) и IL-4 (IL-4_c) в цервикальной слизи. На основании полученных данных вычисляют показатель F(x): F(x)=9,265+1,749×(лим_аб)+0,013×(IL-4_c)+0,005×(IL-10_к)-0,410×(TNFα_к)-0,206×(TNFα_c). При значении F(x) больше 0,555 прогнозируют неблагоприятное течение опухолевого процесса, а если меньше - благоприятное течение. Способ позволяет повысить достоверность прогноза за счет учета иммунологических показателей как крови, так и цервикального секрета. 3 табл., 2 прим.
Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии. Сущность способа прогнозирования инфекционного воспаления послеоперационной раны при накостном остеосинтезе длинных трубчатых костей состоит в том, что проводят анализ клеточного состава крови и определяют лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) Я.Я. Кальф-Калифа на 3 сутки после перелома. При его значении 1,8 и более при последующем выполнении накостного остеосинтеза прогнозируют развитие инфекционного воспаления в ране. Использование заявленного способа позволяет осуществить раннее прогнозирование инфекционного воспаления в области послеоперационной раны при накостном остеосинтезе переломов длинных трубчатых костей. 1 табл., 3 пр.
© Патентный поиск, поиск патентов на изобретения - FindPatent.RU 2012-2024
Политика конфиденциальности 2013-12-27 2013-12-26T17:54:09
Наверх