Способ диагностики туберкулеза легких


 


Владельцы патента RU 2503005:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии, и может быть использовано для определения активности туберкулезного процесса. Для этого проводят инкубацию цельной крови пациента крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, центрифугирование пробы с отделением плазмы и определение в супернатантах содержания антигениндуцированного гамма-интерферона (IFNγ), антигениндуцированного интерлейкина - 6 (IL-6) и спонтанной продукции трансформирующего ростового фактора-α (TGFα). При уровне IFNγ≥6,4 МЕ/мл, или IL-6≥2039 пг/мл, или TGFα≥17,0 пг/мл констатируют активную туберкулезную инфекцию. При значениях ниже пороговых по всем трем показателям - латентную инфекцию. Использование данного способа позволяет проводить дифференциальную диагностику между лицами с активным туберкулезом и латентной туберкулезной инфекцией. 6 пр., 1 ил., 1 табл.

 

Изобретение относится к клинической медицине, точнее к фтизиатрии и иммунологии, а именно к способам оценки состояния больных туберкулезом легких (ТБ).

В последние годы во многих странах, независимо от уровня их экономического развития, отмечается увеличение заболеваемости и распространения туберкулеза, который все чаще упоминается среди так называемых "возрождающихся" инфекций. Для предотвращения распространения туберкулеза актуальное значение приобретает возможность диагностики этого заболевания, в частности выявления контингента, больного туберкулезом в активной форме, и представляющего опасность для окружающих. Это особенно актуально в условиях широкого распространения латентной формы туберкулеза, не представляющей серьезной опасности для окружающих, и ограниченных возможностях лечебных учреждений.

В настоящее время наиболее широко распространена диагностика заболеваний с использованием пробы Манту и, при наличии положительной реакции, бактериологических методов анализа. Однако результат постановки внутрикожной аллергической пробы Манту учитывают через 72 часа, причем в связи с высоким процентом инфицированности населения ТБ частота подтверждения диагноза заболевания в разных возрастных группах составляет от 25 до 50% (Бородулина Е.А., Бородулин Б.Е. Дифференциальная диагностика поствакцинальной и инфекционной туберкулиновой аллергии у детей с атопическими заболеваниями.//Проблемы туберкулеза и болезней легких. - №1, 2006, - с.9-12). На результаты пробы Манту оказывает влияние предыдущая вакцинация, неконтролируемый прием антибиотиков широкого спектра действия и наличие сопутствующей патологии, в том числе аллергопатологии (Аксенова В.А., Овсянкина Е.С., Александрова Т.М. Методы контроля качества работы при массовой туберкулинодиагностике. // Проблемы туберкулеза. - 2002, №2. - С.3-5). Недостатками бактериологических методов являются низкая частота выявления Mycobacterium tuberculosis (МБТ) и длительный рост МБТ на питательных средах (до 30 дней). Все перечисленное определяет сложность клинико-лабораторной диагностики туберкулеза и обуславливает необходимость разработки более быстрых и надежных способов лабораторной диагностики туберкулезной инфекции.

Известен ускоренный способ бактериологической диагностики туберкулеза по методу Прайса, позволяющий выделить и идентифицировать МБТ через 7-14 дней (Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. / Под ред. А.А. Воробьева. М.: Медицинское информационное агенство, 2004. - 671 с.), однако и эти сроки также достаточно велики, а надежность метода достаточно низка.

Широко используется для диагностики туберкулеза метод иммуноферментного анализа (ИФА), позволяющий определять наличие туберкулезной инфекции по концентрации (титру) специфических иммуноглобулинов классов А, М, G, Е (Авдеенко В.Г. с соавт. Повышение эффективности иммунодиагностики туберкулеза путем применения моноклональных антител против иммуноглобулина G человека. / Клиническая лабораторная диагностика. - 1999, №6. - С.22-35; Авдеенко В.Г. с соавт. Противотуберкулезные IgE-антитела. Иммунодоминантные антигены. // Проблемы туберкулеза. - 2002, ч.1, №2. - С.30-33). Недостатком данного способа является необходимость повторного исследования сывороток крови через 10-14 дней для выявления нарастания титра антител к МБТ, свидетельствующее об активном инфекционном процессе в организме.

Общим недостатком вышеперечисленных методов является длительность анализа, их недостаточная селективность, невозможность подразделить контингент больных на пациентов с латентной и активной формами туберкулеза, что не позволяет своевременно проводить активные мероприятия с больными второй из вышеперечисленных групп.

Одним из наиболее перспективных направлений диагностики туберкулеза (ТБ) является проведение анализа in vitro с использованием антигенов, специфических для Mycobacterium tuberculosis. Как показывают обобщенные аналитические данные, клеточные тесты in vitro обладают высокой специфичностью: у 99% вакцинированных лиц наблюдаются отрицательные реакции, а у 78% больных туберкулезом - положительные реакции (Menzies Т. Meta-analysis: New tests for the diagnosis of latent tuberculosis infection: areas of uncertainty and recommendations for research march / Т. Menzies, M. Pai, G. Comstock // Annals. Intern. Med. - 2007. - Vol.146 - P.340-354; Pai M. T-cell based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection: an update / M. Pain, A. Zwerling, D. Menzies // Ann. Intern. Med. - 2008. - Vol.149(3). - P.177-184).

В настоящее время прошел сертификацию тест T-SPOT, являющийся экспресс-аналогом стандартной диагностики туберкулеза на основе кожных реакций замедленного типа (Кожная проба с препаратом "ДИАСКИНТЕСТ" - новые возможности идентификации туберкулезной инфекции. Под ред. Академика РАН и РАМН М.А. Пальцева. Второе издание, переработанное и дополненное. - М.: Издательство "Шико", 2011. 256 с). Способ иммунологической диагностики и мониторинга туберкулезной инфекции Т-SPOT (Oxford Immunotec, USPTO Applicaton №20070196878) основан на определении количества клеток, продуцирующих интерферон-гамма (IFNγ) в присутствии таких специфических индукторов, как белки ESAT-6 (ранний секретируемый антиген) и CFP-10 (белок культурального фильтрата), которые отсутствуют у микобактерий вакцинного штамма М. bovis (BCG) и большинства нетуберкулезных микобактерий окружающей среды, за исключением Mycobacterium marinum и Mycobacterim kansasii. При этом предварительная БЦЖ-вакцинация не оказывает значительного влияния на результаты индукции IFNγ in vitro, а повышение его количества свидетельствует о наличии туберкулезной инфекции (Мордовская Л.И. Индукция IFNγ в образцах цельной венозной крови in vitro - тест для определения туберкулезного инфицирования детей и подростков. / Л.И. Мордовская, М.А. Владимирский, В.А. Аксенова, Е.Е. Ефремов, Г.И. Игнашенкова, Т.Н. Власик // Проблемы туберкулеза и болезней легких. -2009. -№6. - С.19-24).

Основными недостатками этого теста является его сложность и трудоемкость, необходимость культивирования клеток в стерильных условиях, а также невозможность на его основе диагностировать носит ли заболевание латентный или активный характер.

Наиболее близким по своей сущности к методу, предлагаемому в данном изобретении, является способ с использованием тест-системы "QuantiFERON-TB Gold In-Tube" ("Cellestis", Австралия), основанный на измерении уровня продукции IFNγ клетками периферической крови при стимуляции образцов крови антигенами микобактерий. В качестве антигенов используют белки ESAT-6, CFP-10 и ТВ 7.7 (р4) (Мордовская Л.И. Индукция IFNγ в образцах цельной венозной крови in vitro - тест для определения туберкулезного инфицирования детей и подростков. / Л.И. Мордовская, М.А. Владимирский, В.А. Аксенова, Е.Е. Ефремов, Г.И. Игнашенкова, Т.Н. Власик // Проблемы туберкулеза и болезней легких. - 2009. - №6. - С.19-24). Способ диагностики включает в себя взятие крови у пациента, последующее культивирование каждого образца цельной крови, стабилизированной гепарином, при 37°C в течение 18-24 часов в трех пробирках: первая (антигениндуцированная продукция) - в присутствии антигенов микобактерий, вторая (спонтанная продукция) - без антигенов, третья (митогениндуцированная продукция) - в присутствии митогена (последняя проба используется в качестве положительного контроля). После окончания культивирования пробирки центрифугируют, отбирают плазму и определяют в них содержание IFNγ методом иммуноферментного анализа (ИФА). Результаты оцениваются с помощью программного обеспечения QFT 2.62, предоставляемого производителем. Результаты теста считаются положительными, если разность между антигениндуцированной и спонтанной продукций IFNγ более 0,35 МЕ/мл и разница между митогениндуцированной и спонтанной продукцией IFNγ более 0,5 МЕ/мл.

Основным недостатком этого метода является то, что он не позволяет проводить дифференциальную диагностику активного ТБ и латентной туберкулезной инфекции (ЛТБИ), что представляется актуальным в условиях широкого (по разным оценкам до 80%) распространения туберкулезного инфицирования.

Задачей, решаемой авторами, являлась разработка достаточно быстрого и надежного способа диагностики туберкулеза, позволяющего проводить дифференциальную диагностику активного туберкулеза и латентной туберкулезной инфекции. Указанная задача решалась путем установления круга белков, продуцируемых клетками крови у инфицированных туберкулезом больных в присутствии антигенов Mycobacterium tuberculosis, отбора специфичных цитокинов и определения пороговых значений, позволяющих диагностировать наличие у больного активной формы туберкулеза и латентную туберкулезную инфекцию.

Технический результат достигался культивированием крови больных с подозрением на туберкулез в присутствии коммерчески выпускаемой смеси белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7 (из набора "QuantiFERON-TB Gold In-Tube") в качестве антигенов, последующим определением в плазме крови интерферона-гамма (IFNγ), интерлейкина-6 (IL-6) и трансформирующего ростового фактора-альфа (TGFα), и диагностирования активной формы туберкулеза при достижении хотя бы одним из цитокинов порогового значения, которое составляет для: IFNγAG - 6,4 МЕ/мл, для TGFαNIL - 17,0 пг/мл и для IL-6AG - 2039 пг/мл, а при значениях ниже пороговых по всем трем показателям - латентную туберкулезную инфекцию.

Предложенные критерии подобраны на основании клинических исследований 53 пациентов, у которых установлено наличие заражения МБТ. В состав группы входили 27 больных с впервые выявленным, преимущественно инфильтративным туберкулезом легких, подтвержденным культуральным методом до начала специфической противотуберкулезной терапии (13 женщин и 14 мужчин в возрасте от 18 до 64 лет, средний возраст - 36 лет), и 26 лиц с латентной инфекцией (ЛТБИ), которые являлись сотрудниками стационаров противотуберкулезных учреждений (n=26).

Изучалась спонтанная (NIL) и антигениндуцированная (AG) продукция различных цитокинов, в частности эпидермального ростового фактора (EGF), макрофагального воспалительного протеина - 1β (MIP-β), эндотелиального фактора роста (VEGF), интерлейкина-2 (IL-2), интерлейкина-4 (IL-4), интерлейкина-6 (IL-6), интерлейкина-1альфа (IL-1α), интерферона-альфа2 (IFN-α2), трансформирующего ростового фактора-альфа (TGFα), фактора некроза опухоли-альфа (TNFα), а также растворимого рецептора интерлейкина-2-альфа(sIL-2Rα) и растворимой формы лиганда CD40 (sCD40L). Исследования проводились с использованием магнитных частиц "Milliplex Mag" и анализатора "MagPix" ("Millipore", США) по технологии хМар.

Для статистических расчетов использовали значения спонтанной (NIL) продукции исследуемых биомаркеров, антигениндуцированной (AG) продукции и разности между ними (AG-NIL). Статистическую обработку проводили с помощью программы SPSS (версия 15.0). Для сравнения групп использовали критерий Манна-Уитни.

В таблице 1 приведены показатели, характеризующие различия в концентрациях цитокинов для сравниваемых групп.

Таблица 1
Сравнительная характеристика показателей спонтанной и стимулированной секреции цитокинов у больных с активной и латентной формами ТБ
Показатель Больные с активной формой ТБ (n=27), Me (min, max) Лица с латентной формой ТБ (n=26), Me (min, max) р* Пороговое значение Чувствительность, % Специифичность, % AUC**
IFNγAG, МЕ/мл 6.4 (1.6-10.2) 1.7 (1.0-3.6) 0.008 4.3 56 81 0.71
IFNγAG-NIL
МЕ/мл
5.3 (1.2-10.0) 1.6 (0.7-3.5) 0.014 3.9 56 81 0.70
TGFαNIL, пг/мл 12.7 (10.0-18.4) 9.6 (5.6-11.7) 0.002 12.2 60 81 0.75
TGFαAG, пг/мл 17.3 (15.1-20.5) 12.5 (8.0-15.1) 0.000 15.6 67 81 0.80
IFNα2AG, пг/мл 7.4 (3.0-11.5) 3.0 (3.0-3.0) 0.041 6.0 56 81 0.66
TNFαAG, пг/мл 141.7 (86.0-360.2) 94.9 (39.7-195.8) 0.039 223.2 37 81 0.67
sIL2-RαNIL, пг/мл 18.6 (3.0-46.9) 3.0 (3.0-11.0) 0.006 13.7 63 81 0.72
sIL2-RαAG, пг/мл 30.0 (5.9-76.7) 3.0 (3.0-13.2) 0.005 26.3 56 81 0.73
sIL2-RαAG-NIL, пг/мл 6.7 (0.0-13.0) 0.0 (0.0-13.1) 0.041 4.2 52 81 0.66
IL-NIL, пг/мл 627.7 (214.8-1640.8) 212.9 (125.3-827.2) 0.037 887.2 45 81 0.67
IL-АG, пг/мл 1463.0 (650.7-2973.6) 604.7 (306.3-1023.4) 0.018 257.0 56 81 0.69
Примечание: *р - достоверность различия между группой больных и контактных лиц, рассчитанная с использованием критерия Манна-Уитни.
**AUC - площадь под характеристической ROC-кривой.

Для оценки диагностической ценности анализируемых цитокинов с помощью программы SPSS 15.0 был проведен анализ характеристической кривой (receiver-operating-characteristic curve-ROC) при фиксированном значении специфичности (81%). Были рассмотрены графические изображения характеристических кривых и значения площади под кривой - AUC (Area Under Curve). Данные анализа показали, что самостоятельно ни один из выделенных показателей не обладает высокой чувствительностью, что исключает возможность их изолированного использования с диагностической целью. В результате был применен метод построения деревьев решений в программе JMP 9.0, на основе полученных результатов которого было установлено, что совместное определение трех маркеров: IFNγAG, TGFαNIL и IL-6AG при пороговых значениях соответственно 6,4 МЕ/мл; 17,0 пг/мл и 2039 пг/мл является достаточным для отбора лиц в группу больных с активным ТБ и латентной туберкулезной инфекцией (ЛТБИ). Использование данной комбинации биомаркеров позволяет достигнуть 96,3% (26 из 27) селективности выявления случаев активного туберкулеза (Значение площади под ROC кривой в данном случае достигает 0,9.).

На фиг.1 приведена кривая операционной характеристики при использовании комбинации трех биомаркеров (IFNγAG, TGFαNIL и IL-6AG) для разделения лиц, инфицированных МБТ с активной и с латентной туберкулезной инфекцией.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Образцы цельной крови лиц (1000 мкл), инфицированных МБТ, стабилизированной гепарином (50 ед/мл), культивируют при 37°С в течение 18-24 часов в присутствии смеси антигенов микобактерий - белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7 и в нулевой контрольной пробирке (без антигенов). После окончания культивирования пробы центрифугируют, отделяют супернатант и определяют в нем количество IFNγAG, TGFαNIL и IL-6AG с помощью мультиплексного или иммуноферментного анализа по стандартным методикам. Затем сравнивают полученные значения содержаний цитокинов с пороговыми: 6,4 МЕ/мл для IFNγAG-NIL, 17,0 пг/мл для TGFαNIL и 2039 пг/мл для IL-6AG. При достижении пороговых значений хотя бы одним из показателей делают вывод о наличии активной формы ТБ, при значениях ниже пороговых по трем показателям одновременно - констатируют латентную туберкулезную инфекцию.

Сущность и преимущества способа иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1. Больная Ф. Диагноз: инфильтративный туберкулез легких в фазе распада. Результат посева мокроты положительный. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный.

В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров:

IFNγAG - 24 МЕ/мл, TGFαNIL - 14 пг/мл и IL-6AG - 598 пг/мл.

Отмечено превышение уровня концентрации IFNγ по сравнению с

пороговым значением (6,4 МЕ/мл).

Заключение: активный туберкулезный процесс, что подтверждает клинический диагноз.

Пример 2. Больная Т. Диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли левого легкого в фазе распада. Результат посева мокроты положительный. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный.

В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров:

IFNγAG - 22, 6 МЕ/мл, TGFαNIL - 9,75 пг/мл и IL-6AG - 10000 пг/мл.

Сравниваем полученные значения с пороговыми:.

По двум показателям (IFNγAG, IL-6AG) наблюдаем превышение пороговых значений (IFNγ - 6,4 МЕ/мл, 2039 пг/мл для IL-6).

Заключение: активный туберкулезный процесс.

Пример 3. Больная С. Диагноз: инфильтративный туберкулез легких в фазе распада и обсеменения. Результат посева мокроты положительный. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный.

В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров:

IFNγAG - 6,89 МЕ/мл, TGFαNIL - 22,2 пг/мл и IL-6AG - 755 пг/мл

По двум показателям (IFNγAG, TGFαNIL) наблюдаем превышение пороговых

значений (IFNγ - 6,4 МЕ/мл, 17,0 пг/мл для TGFα).

Заключение: активный туберкулезный процесс.

Пример 4. Сотрудник противотуберкулезного диспансера Т. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный.

Результаты рентгенологического обследования: изменений в легочной ткани не выявлено. Жалоб нет. Клинические признаки туберкулеза отсутствуют. В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров:

IFNγAG - 4,9 МЕ/мл, TGFαNIL - 11,6 пг/мл и IL-6AG - 220 пг/мл.

Сравниваем полученные значения с пороговыми: IFNγ - 6,4 МЕ/мл, 17,0

пг/мл для TGFα и 2039 пг/мл для IL-6.

Заключение: латентная инфекция М. tuberculosis без признаков заболевания.

Пример 5. Сотрудник противотуберкулезного диспансера М. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный. Результаты рентгенологического обследования: изменений в легочной ткани не выявлено. Жалоб нет. Клинические признаки туберкулеза отсутствуют.

В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров:

IFNγAG - 3,1 МЕ/мл, TGFαNIL - 0,1 пг/мл и IL-6AG - 162 пг/мл.

Полученные значения ниже пороговых по всем трем показателям.

Заключение: латентная инфекция М. tuberculosis без признаков заболевания.

Пример 6. Больная Т. Диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого. Результат посева мокроты положительный. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный.

В ходе проведения исследований были получены следующие концентрации биомаркеров:

IFNγAG - 2,22 МЕ/мл, TGFαNIL - 25,28 пг/мл и IL-6AG - 3998 пг/мл.

По двум показателям (TGFαNIL, IL-6AG) наблюдали превышение пороговых значений (TGFαNIL - 17 пг/мл, 2039 пг/мл для IL-6).

Заключение: активный туберкулезный процесс.

Преимуществами предлагаемого способа по сравнению с традиционными методами является то, что при анализе небольшого количества периферической крови достигается высокая диагностическая значимость в дифференциации между лицами с активным туберкулезом и лицами с латентной туберкулезной инфекцией. Риск для пациента от применения данного способа сведен к минимуму, так как не требует введения инородных агентов в организм пациента. Способ не влияет на здоровье пациентов и позволяет ускорить, стандартизировать и автоматизировать процесс получения окончательного результата диагностики. Несомненным преимуществом является удобство для пациента, так как для оценки результатов не требуется повторного посещения врача.

Способ диагностики туберкулеза легких, включающий в себя взятие периферической крови пациента, инкубацию цельной крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, и без них, центрифугирование пробы с отделением плазмы, определение в супернатантах гамма-интерферона, отличающийся тем, что в супернатантах лиц, инфицированных микобактериями, кроме антигениндуцированной продукции гамма-интерферона определяют содержание антигениндуцированного интерлейкина-6 и спонтанную продукцию трансформирующего ростового фактора-альфа и при уровне гамма-интерферона ≥6,4 МЕ/мл, или интерлейкина-6 ≥2039 пг/мл, или трансформирующего ростового фактора-альфа ≥17,0 пг/мл констатируют активную туберкулезную инфекцию, а при значениях ниже пороговых по всем трем показателям - латентную инфекцию.



 

Похожие патенты:

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложено моноклональное антитело, которое специфически связывает сульфатиды и сульфатированные протеогликаны, а также фармацевтическая композиция для лечения атеросклероза и набор реагентов для диагностики атеросклеротических повреждений, применение антитела для получения лекарственного средства для лечения атеросклероза и в качестве вакцины.

Изобретение предназначено для определения аутоантител, специфичных к мускариновому М2-рецептору, которое может быть использовано для диагностики идиопатических нарушений сердечного ритма.

Группа изобретений относится к медицине и касается калликреина, его варианта или фрагмента, имеющих общие эпитопы, распознаваемые антителами, с калликреином дикого типа, использующегося для получения диагностической композиции для in vitro диагностики аллергии I типа, где калликреин получен у собаки; способа получения композиции аллергенов, включающего стадию добавления калликреина собаки, или его варианта или фрагмента; способа выделения калликреина из мочи собаки.
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и описывает способ оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной определяют содержание эстрадиола (нмоль/л) и содержание TNFα (пг/мл) иммуноферментным методом, составляют дискриминантное уравнение: Dф=-0,868 × Эстрадиол + (+35,194×TNFα).

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и может быть использовано для оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной определяют содержание эстриола (нмоль/л) и содержание TNFα (пг/мл) иммуноферментным методом, составляют дискриминантное уравнение: Dф=-7,539 × Эстриол + (+8,071 × TNFα).
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и касается способа определения адгезивных свойств бактерий рода Enterococcus. Представленный способ включает подготовку бактериальной суспензии, отделение полученной биомассы бактерий центрифугированием, разведение полученной биомассы в физиологическом растворе, подготовку монослоя клеток СаСо-2, внесение бактериальной культуры, культивирование клеток, промывку физраствором, снятие монослоя с бактериальными клетками и подсчитывание количества связанных с 1000 клетками СаСо-2 бактериальных клеток, при этом бактерии относят к высокоадгезивным, если количество связавшихся клеток составляет от 1010 до 3000, к среднеадгезивным - от 210 до 1000, к низкоадгезивным - от 0 до 200.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Сущность способа: при обострении хронического обструктивного бронхита у женщин с гриппом A(H3N2) во втором триместре гестации осуществляют посредством парных сывороток крови, определяют содержание противогриппозных антител в первой сыворотке крови (титр) (А), различия между максимальной температурой в период разгара заболевания на 2-4 день и максимальной температурой тела на 6-8 день заболевания) (В) и различия концентрации среднемолекулярных пептидов в период разгара на 2-4 день и на 6-8 день заболевания (в единицы оптической плотности) (С).
Изобретение относится к медицине, в частности педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пищевой непереносимости у детей. Сущность заявляемого способа заключается в определении генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов фолатного обмена MTHFR C677T и А1298С, MTRR G66A методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим рестрикционным анализом.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологической лабораторной диагностике, и может быть использовано для постановки диагноза острой ожоговой токсемии у детей.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии и педиатрии, и может быть использовано для определения жизнеспособности новорожденных с экстремально низкой массой тела (ЭНМТ) в первые сутки жизни.

Изобретение относится к клинической медицине, а именно к способу диагностики туберкулезного инфицирования. Сущность способа состоит в том, что осуществляют взятие периферической крови пациента, проводят инкубацию цельной крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, и без них, центрифугирование проб с отделением плазмы, определение в супернатантах содержание IL-2 и диагностирование наличия заболевания по разнице его концентраций в пробах по сравнению с выбранной пороговой величиной. В качестве пороговой величины устанавливают разницу в концентрации IL-2 между антигениндуцированной и спонтанной его продукцией 36 пг/мл и при разнице в концентрации 36 пг/мл и более делают вывод о туберкулезном инфицировании, а при значении ниже порогового - об отсутствии инфицирования. Использование заявленного способа позволяет сократить число сомнительных результатов и повысить надежность диагностики туберкулезного инфицирования. 2 табл., 3 ил., 5 пр.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки трансаминирования в синцитиотрофобласте. Сущность способа: гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы. Оценивают нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 и снижении активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы ниже 12,5±0,37 усл. ед., что проявляется увеличением алаттрансаминазы до 0,58±0,002 ммоль/л в гомогенате плаценты.
Настоящее изобретение относится к медицине и направлено на прогнозирование эффективности лечения идиопатического бесплодия у мужчин с ожирением препаратами - ингибиторами ароматазы. Способ включает отбор венозной крови и проведение иммунологического анализа, в котором методом твердофазного хемилюминесцентного иммуноанализа на микрочастицах определяют содержание фолликулостимулирующего гормона и эстрадиола в сыворотке крови, вычисляют показатель К=СЭ/СФСГ, где СФСГ - содержание фолликулостимулирующего гормона, мЕд/мл; СЭ - содержание эстрадиола, пмоль/л. При численном значении показателя К, большем или равном 53, применение ингибиторов ароматазы в лечении идиопатического бесплодия у мужчин с ожирением прогнозируют как эффективное. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарной протозоологии и касается способа получения антигена для серологической диагностики анаплазмоза мелкого рогатого скота. Предложенный способ включает введение спленэктомированному животному заражающей дозы 14·1010 или 16·107 анаплазм/животное, на 15 или 22-24 соответственно день, проведение обескровливания, центрифугирование крови 2-3 раза при 6000 об/мин в течение часа с физиологическим раствором pH 6,8-7,2, получение осадка анаплазм с форменными элементами крови, проведение 2-3 разовой отмывки физиологическим раствором, разрушение эритроцитов путем 2-3 кратного замораживания и оттаивания, концентрирование 2-3 раза центрифугированием при тех же условиях и выделение антигена с титром 1:32-1:64. Способ позволяет получить чувствительный, высокоактивный и специфичный анаплазменный антиген и найдет применение в ветеринарных лабораториях, занимающихся диагностикой инфекционных и протозойных болезней. 4 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии. Способ обеспечивает повышение точности оценки эффективности лечения у больных язвенным колитом (ЯК) в достижении клинической ремиссии после четырехнедельного курса лечения. После индукционного курса стандартной терапии определяют концентрацию лактоферрина в сыворотке крови, и при значениях выше 874,7±21,6 нг/мл судят об отсутствии достижения клинической ремиссии ЯК. Изобретение позволяет быстро и точно оценить эффективность лечения больных язвенным колитом. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, эндокринологии, диабетологии, лабораторной диагностике. Способ диагностики аутоиммунных вариантов сахарного диабета, причем аутоиммунный вариант сахарного диабета диагностируется на основании сравнения показателей выработки фактора некроза опухоли альфа (ФНОα) (пкг/мл) в надосадочной жидкости после культивирования лимфоцитов, полученных из пробы крови пациента в условиях стимуляции аутоантигеном инсулином. Тест считается положительным, если значение показателя ФНОα в пробе после стимуляции инсулином превышает его значение в условиях отсутствия стимуляции. Заявляемое изобретение дает возможность диагностировать аутоиммунный воспалительный процесс в ткани поджелудочной железы, что позволяет также оценить степень аутоиммунной агрессии на ткань поджелудочной железы. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики вторичной иммунологической недостаточности при туберкулезе легких. До назначения специфической химиотерапии проводят иммунологическое исследование периферической крови больных туберкулезом легких и определяют клеточные, гуморальные и молекулярно-генетические параметры иммунного статуса пациента. При содержании в периферической крови CD4+CD25+Foxp3+ регуляторных Т-клеток более чем 2,6%, CD4+CD25-Foxp3+ регуляторных Т-клеток более чем 5,1%, CD3+CD4-CD25+ регуляторных Т-клеток более чем 0,2%, CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток/Т-хелперов активированных менее чем 25,5%, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов менее чем 35,4%, γδТ-лимфоцитов менее чем 4,9%, CD45R0+ Т-клеток памяти менее чем 8,9%; IL-2 менее чем 22,3 пг/мл, IL-4 более чем 40,0 пг/мл, IL-10 более чем 25,3 пг/мл, TGFβ более чем 1109,0 пг/мл одновременно с носительством аллеля G и генотипа GG T-330G гена IL2 и аллеля А и генотипа АА С-592А гена IL10, аллеля Т и генотипа ТТ С-509Т гена TGFB и аллеля Т и генотипа ТТ С-590Т гена IL4 диагностируют вторичную иммунологическую недостаточность. Изобретение позволяет своевременно диагностировать дефекты иммунной системы у больных туберкулезом легких и применять меры коррекции лечебного воздействия с использованием современных методов иммуномодулирующей терапии. 6 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и иммунологии и представляет собой новый способ проведения диагностики, основанный на определении белковых молекул - антител - к специфичной и чувствительной комбинации опухоле-ассоциированных гликанов на фоне индивидуальных особенностей конкретного больного. Данное изобретение может найти применение в иммунологии и медицине для исследования и диагностики рака молочной железы. В способе диагностики рака молочной железы детектируют в крови человека антитела, направленные к следующим гликанам: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα, HOCH2(HOCH)4CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ с помощью микрочипа с нанесенными на него указанными гликанами и, по наличию в крови уровня антител выше порогового одновременно ко всем указанным гликанам, диагностируют рак молочной железы. Предлагаемый способ позволяет улучшить чувствительность и специфичность диагностики рака молочной железы. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и нефрологии, и может быть использовано для диагностики мочекаменной болезни (уролитиаза). Сущность способа: исходную пробу мочи разделяют на два одинаковых образца, получают гистограммы распределения частиц по размерам, по которой определяют процентное содержание олигомерной формы Т&НЕ(7) белка Тамма-Хорсфалла и сравнивают гистограммы образцов. В качестве реагента для идентификации белка Тамма-Хорсфалла используют моноклональные антитела, вступающие с белком Тамма-Хорсфалла в имунно-афинную реакцию. Из второго образца извлекают белок Тамма-Хорсфалла Т&НЕ(28) и в обоих образцах мочи определяют содержание олигомерной формы Т&НЕ(28) белка Тамма-Хорсфалла в свободном состоянии и в агрегатах с микрокристаллами оксалатов (в %). Затем рассчитывают соотношение выявленных олигомерных форм по формулам: С1=Т&НЕ(28)А/Т&НЕ(7) и C2=T&HE(28)F/T&HE(7). При соотношении С1>1.5 и любом значении соотношения С2 диагностируют уролитиаз, при соотношениях С1<0.1 и С2<1.81 диагностируют отсутствие заболевания, а при соотношениях С<1,5 и С2>1.81 пациента относят к группе риска развития уролитиаза. Способ позволяет проводить разграничение обследуемых не только на группы больных уролитиазом и здоровых, но и выделить группу риска развития уролитиаза. Способ обладает высокой точностью, специфичностью и чувствительностью, не требует больших трудозатрат и времени исследования. 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью у впервые выявленных больных туберкулезом легких (ТБ). Для этого до назначения противотуберкулезной химиотерапии в крови пациента определяют количество CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов. Вычисляют значения линейных классификационных функций по уравнениям: d1=-14,0015-0,0626×x1+0,5181×x2+2,4285×x3+0,2255×x4 и d2=-22,6954-0,1710×x1+0,6689×x2+3,1202×x3+0,3229×x4, где x1, x2, x3, x4 - количество субпопуляций CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов, соответственно. При d1<d2 прогнозируют туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя. Использование данного способа позволяет прогнозировать вариант течения ТБ с вероятностью 83,3% и позволяет применять меры коррекции лечебного воздействия. 5 ил., 2 табл., 2 пр.
Наверх