Способ диагностики туберкулезного инфицирования



Способ диагностики туберкулезного инфицирования
Способ диагностики туберкулезного инфицирования
Способ диагностики туберкулезного инфицирования

 


Владельцы патента RU 2503006:

Федеральное бюджетное учреждение науки "Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера" (ФБУН НИИ эпидемиологии и микробиологии имени Пастера) (RU)

Изобретение относится к клинической медицине, а именно к способу диагностики туберкулезного инфицирования. Сущность способа состоит в том, что осуществляют взятие периферической крови пациента, проводят инкубацию цельной крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, и без них, центрифугирование проб с отделением плазмы, определение в супернатантах содержание IL-2 и диагностирование наличия заболевания по разнице его концентраций в пробах по сравнению с выбранной пороговой величиной. В качестве пороговой величины устанавливают разницу в концентрации IL-2 между антигениндуцированной и спонтанной его продукцией 36 пг/мл и при разнице в концентрации 36 пг/мл и более делают вывод о туберкулезном инфицировании, а при значении ниже порогового - об отсутствии инфицирования. Использование заявленного способа позволяет сократить число сомнительных результатов и повысить надежность диагностики туберкулезного инфицирования. 2 табл., 3 ил., 5 пр.

 

Изобретение относится к клинической медицине, точнее к фтизиатрии и иммунологии, а именно к ускоренным способам диагностики инфицирования больных туберкулезом легких (ТБ).

В последние годы во многих странах, независимо от уровня их экономического развития, отмечается увеличение заболеваемости и распространения туберкулеза, который все чаще упоминается среди так называемых "возрождающихся" инфекций. Для предотвращения распространения туберкулеза актуальное значение приобретает возможность диагностики этого заболевания, в частности, выявления контингента, больного туберкулезом в активной форме, и представляющего опасность для окружающих. Это особенно актуально в условиях широкого распространения латентной формы туберкулеза, не представляющей серьезной опасности для окружающих и ограниченных возможностях лечебных учреждений.

В настоящее время наиболее широко распространена диагностика заболеваний с использованием пробы Манту и, при наличии положительной реакции, бактериологических методов анализа. Однако, результат постановки внутрикожной аллергической пробы Манту учитывают через 72 часа, причем в связи с высоким процентом инфицированности населения ТБ частота подтверждения диагноза заболевания в разных возрастных группах составляет от 25 до 50% (Бородулина Е.А., Бородулин Б.Е. Дифференциальная диагностика поствакцинальной и инфекционной туберкулиновой аллергии у детей с атопическими заболеваниями. // Проблемы туберкулеза и болезней легких, - №1, 2006, - с.9-12). На результаты пробы Манту оказывают влияние предыдущая вакцинация, неконтролируемый прием антибиотиков широкого спектра действия и наличие сопутствующей патологии, в том числе аллергопатологии (Аксенова В.А., Овсянкина Е.С., Александрова Т.М. Методы контроля качества работы при массовой туберкулинодиагностике. // Проблемы туберкулеза. - 2002, №2. - С.3-5). Недостатками бактериологических методов являются низкая частота выявления Mycobacterium tuberculosis (МБТ) и длительный рост МБТ на питательных средах (до 30 дней). Все перечисленное определяет сложность клинико-лабораторной диагностики туберкулеза и обуславливает необходимость разработки более быстрых и надежных способов лабораторной диагностики туберкулезной инфекции.

Известен ускоренный способ бактериологической диагностики туберкулеза по методу Прайса, позволяющий выделить и идентифицировать МБТ через 7-14 дней (Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. / Под ред. А.А.Воробьева. М.: Медицинское информационное агенство, 2004. - 671 с.), однако и эти сроки также достаточно велики, а надежность метода достаточно низка.

Широко используется для диагностики туберкулеза метод иммуноферментного анализа (ИФА), позволяющий определять наличие туберкулезной инфекции по концентрации (титру) специфических иммуноглобулинов классов А, М, G, Е (Авдеенко В.Г. с соавт. Повышение эффективности иммунодиагностики туберкулеза путем применения моноклональных антител против иммуноглобулина G человека. / Клиническая лабораторная диагностика. - 1999, №6. - С.22-35; Авдеенко В.Г. с соавт. Противотуберкулезные IgE-антитела. Иммунодоминантные антигены. // Проблемы туберкулеза. - 2002, ч.1, №2. - С.30-33). Недостатком данного способа является необходимость повторного исследования сывороток крови через 10-14 дней для выявления нарастания титра антител к МБТ, свидетельствующего об активном инфекционном процессе в организме.

Общим недостатком вышеперечисленных методов является длительность анализа, их недостаточная селективность, невозможность подразделить контингент больных на пациентов с латентной и активной формами туберкулеза, что не позволяет своевременно проводить активные мероприятия с больными второй из вышеперечисленных групп.

Одним из наиболее перспективных направлений диагностики туберкулеза (ТБ) является проведение анализа in vitro с использованием антигенов, специфических для Mycobacterium tuberculosis. Как показывают обобщенные аналитические данные, клеточные тесты in vitro обладают высокой специфичностью: у 99% вакцинированных лиц наблюдаются отрицательные реакции, а у 78% больных туберкулезом - положительные реакции (Menzies Т. Meta-analysis: New tests for the diagnosis of latent tuberculosis infection: areas of uncertainty and recommendations for research march / Т. Menzies, M. Pai, G. Comstock // Annals. Intern. Med. - 2007. - Vol.146 - P.340-354; Pai M. T-cell based assays for the diagnosis of latent tuberculosis infection: an update / M.Pain, A.Zwerling, D.Menzies // Arm. Intern. Med. - 2008. - Vol.149. - P.177-184).

В настоящее время прошел сертификацию тест T-SPOT, являющейся экспресс-аналогом стандартной диагностики туберкулеза на основе кожных реакций замедленного типа (Кожная проба с препаратом "ДИАСКИНТЕСТ"-новые возможности идентификации туберкулезной инфекции / Под ред. Академика РАН и РАМН М.А.Пальцева. Второе издание, переработанное и дополненное. - М.: Издательство "Шико", 2011. 256 с). Способ иммунологической диагностики и мониторинга туберкулезной инфекции Т-SPOT (Oxford Immunotec, USPTO Applicaton №20070196878), основан на определении количества клеток, продуцирующих интерферон-гамма (IFNy) в присутствии таких специфических индукторов, как белки ESAT-6 (ранний секретируемый антиген) и CFP-10 (белок культурального фильтрата), которые отсутствуют у микобактерий вакцинного штамма М. bovis (BCG) и большинства нетуберкулезных микобактерий окружающей среды, за исключением Mycobacterium marinum и Mycobacterim kansasii. При этом предварительная БЦЖ-вакцинация не оказывает значительного влияния на результаты индукции IFNy in vitro, а повышение его количества свидетельтвует о наличии туберкулезной инфекции (Мордовская Л.И Индукция IFNγ в образцах цельной венозной крови in vitro - тест для определения туберкулезного инфицирования детей и подростков / Л.И. Мордовская, М.А. Владимирский, В.А. Аксенова, Е.Е. Ефремов, Г.И. Игнашенкова, Т.Н. Власик // Проблемы туберкулеза и болезней легких - 2009. - №6. - С.19-24).

Основными недостатками этого теста является его сложность и трудоемкость, необходимость культивирования клеток в стерильных условиях, а также невозможность на его основе диагностировать носит ли заболевание латентный или активный характер.

Наиболее близким по своей сущности к методу, предлагаемому в данном изобретении, является способ, основанный на измерении уровня продукции IFNy клетками периферической крови при стимуляции образцов крови антигенами микобактерий (RUBBO P.F. et al Multicytokine detection improves latent tuberculosis diagnosis in health care workers. J. Clin Microbiol. 2012, may, 50(5), p.1711-7). Способ диагностики включает в себя взятие крови у пациента, последующее культивирование образцов цельной крови, стабилизированной гепарином с микобактериальными антигенами, которые представляют собой смесь белков ESAT-6, CFP-10 и ТВ 7.7 и без них методом иммунофер-ментного анализа (ИФА). После окончания культивирования пробирки центрифугируют, отбирают плазму и определяют в них содержание цитокина (IL-2, IFNγ) методом ИФА и диагностируют наличие заболевания по разнице его концентраций в пробах по сравнению с выбранной пороговой величиной.. При этом определение IFNγ проводят с использованием тест-системы "QuantiFERON-TB Gold In-Tube" ("Cellestis", Австралия). Результаты оцениваются с помощью программного обеспечения QFT 2.62. Результаты теста считаются положительными, если разность между антигениндуцированной и спонтанной продукций IFNγ более 0, 35 МЕ/мл.

Основным недостатком этого метода является то, что диапазон измеряемых концентраций IFNγ очень низкий (пороговое значение 0, 35 МЕ/мл или 17,5 пг/мл) и для его количественного обнаружения требуются очень чувствительные и дорогостоящие тест-системы. Кроме того, очень низкое пороговое значение увеличивает количество неопределенных результатов. Так, в недавней публикации [Pai.M Serial testing of Health Care Workers for Tuberculosis using Interferon-Gamma. Assay / M. Pai, R. Joshi, S. Dogra, D.K. Mendiratta, P. Narang, S. Kalantri, A.L. Reingold, J.M. Colford Jr, L.W. Riley, and Menzies // Am. J. Respir. Crit Care Med. - 2006. - Vol.174(3). - P.349-355.], основанной на применении теста "QuantiFERON-TB Gold In-Tube"(QFN-GIT) было показано, что существует значительный риск ложноположительных и ложноотрицательных результатов теста. В свою очередь при использовании IL-2 авторами было выбрано пороговое значение на малой выборке обследуемых.

Задачей изобретения являлась разработка способа диагностики туберкулезного инфицирования, позволяющего повысить его надежность.

Техническая задача решалась в результате нахождения биомаркера ТБ с высоким пороговым значением и его использованием для обеспечения надежности результатов.

Технический результат достигался тем, что цельную кровь инкубировали в пробирках с микобактериальными антигенами - смесью белков ESAT-6, CFP-10 и ТВ 7.7 и без антигенов, определяли содержание интерлейкина-2 (IL-2) в обеих пробах и разность между антигениндуцированной и спонтанной продукцией сопоставляли с пороговым значением и при его достижении или превышении диагностировали наличие туберкулезного инфицирования, а при значении ниже порогового - его отсутствие. В качестве порогового значения, при котором достигается чувствительность выявления инфицированных лиц 86% и 95%, была определена величина 36 пг/мл.

Как показали проведенные эксперименты, использование IL-2 в качестве биомаркера позволяет работать в существенно более широком диапазоне определяемых концентраций IL-2, что позволяет избежать получения сомнительных результатов и повысить надежность диагностики.

Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Образцы цельной крови (1000мкл), стабилизированной гепарином (50ед/мл), культивируют при 37°С в течение 18-24 часов в нулевой контрольной пробирке и в присутствии смеси антигенов микобактерий ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7. (Как правило, используют смесь антигенов из тест-системы "QuantiFERON-TB Gold In-Tube" или других аналогичных тест-систем). После окончания культивирования пробы центрифугируют, отделяют плазму и определяют в ней количество IL-2 с помощью общепринятых методик мультиплексного или иммуноферментного (ИФА) анализа. В частности, определение проводится с помощью технологии хМар при использовании магнитных частиц "Milliplex Mag"n анализатора "MagPix" ("Millipore", США). После чего, вычисляют разность между антигениндуцированной и спонтанной продукцией IL-2 и при значении 36 пг/мл и выше делают вывод о туберкулезном инфицировании. При значении ниже порогового констатируют отсутствие инфицирования микобактериями.

Для оценки надежности заявляемого способа были проведены клинические исследования 54 больных с преимущественно инфильтративным, туберкулезом легких до начала специфической противотуберкулезной терапии (n=54) и 47 лиц с латентной формой туберкулезной инфекции (ЛТБИ), для которых тест с гамма-интерфероном дает, как правило, значения, близкие к пороговой величине. (Последняя группа была представлена в основном сотрудниками стационаров противотуберкулезных учреждений).

У всех лиц, включенных в исследование (n=101) был проведен тест по методике ближайшего аналога (с использованием тест-системы QuantiFERON-TB Gold In-Tube) и оценка инфицирования по концентрации гамма-интерферона. Положительный результат(QFN+) был получен у 36 больных с активной формой ТБ и 26 лиц с ЛТБИ, отрицательный результат (QFN-) был получен у 18 больных и 21 лица с ЛТБИ. На данном этапе больные с активной формой ТБ и лица с ЛТБИ были разбиты на 2 группы в зависимости от результата теста: QFN+ и QFN-.

В плазме крови изучалась спонтанная (NIL) и антигениндуцированная (AG) продукция интерлейкина-2. Для статистических расчетов использовали значения спонтанной (NIL) продукции исследуемых биомаркеров, антигениндуцированной (AG) продукции и разности между ними (AG-NIL). Статистическую обработку проводили с помощью программы SPSS (версия 13.0). Для сравнения групп использовали критерий Манна - Уитни. Для сравнения диагностической значимости были построены характеристические ROC - кривые). Для оценки взаимосвязи между продукцией IL-2AG-NIL и IFNγAG-NIL использовали коэффициент корреляции Спирмена (r=0,86, р<0,005).

На фиг.1 приведены характеристические кривые операционной характеристики при сравнении группы QFN+и QFN-.

На фиг.2 приведена корреляционная зависимость между IL-2 и IFN-y при совместном анализе больных и контактных лиц. (n=101).

На фиг.3 приведены диаграммы значений IFN-γAG-NIL и IL-2AG-NIL в группе QFN+ и QFN-, демонстрирующие разброс количественных значений при использовании обсуждаемых биомаркеров.

Для сравнения тестов с использованием IL-2 и IFNγ по диапазону измеряемых концентраций были рассчитаны медианы с указанием межквартильного расстояния для группы QFN+, QFN-. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1
Количественные значения медиан в обследуемы группах
Показатель Все (n=101) QFN+(n=62) QFN-(n=39)
I.IFN-γAG-NIL (QFN-IT), МЕ/мл
Me [Q1;Q3] 0,74 [0,11;3,70] 2,6 [0,94;8,65] 0,040 [-0,010;-0,170]
Минимальное значение -0,3 0,4 -0,3
Максимальное значение 97,39 97,39 0,34
2. IL-2AG-NIL, пг/мл
Me[Q1;Q3] 48,49 [5,29;156,60] 130,70 [57,73;252,46] 1,4 [0;7,21]
Минимальное значение -3 0 -3
Максимальное значение 2255,78 2255,78 107,28

В связи с тем, что специфичность и чувствительность метода связаны между собой обратной связью, то, используя кривую операционной характеристики, в качестве порогового значения была выбрана оптимальная величина, равная 36пг/мл (таблица 2). При этом значении пороговой величины достигается чувствительность выявления инфицированных лиц 86% (ДИ 74,22-93,14) и специфичность выявления лиц неинфицированных лиц 95% (ДИ 82,68-99,37).

Таблица 2
Пороговые значения IL-2 AG-NIL (пг/мл), значения чувствительности и специфичности при разделении групп QFN+ и QFN-
Специфичность, % Чувствительность, % Пороговое значение, пг/л
97
90 89 28,0
95 86 36
98 66 72

Полученные результаты показали преимущество заявляемого способа по сравнению с аналогами, особенно в случаях, когда разность между антигениндуцированной и спонтанной продукцией (AG-NIL) для IFNγ была близка к пороговому значению. Это обусловлено тем, что для биомаркера IL-2 диапазон измеряемых концентраций существенно выше, чем для IFNγ: от 0,3 до 97,39МЕ/мл для IFNγAG-NIL и от 48,49 до 2255,78 пг/мл для IL-2AG-NIL (фиг.3).

Сущность и преимущества способа иллюстрируются следующими примерами.

Пример 1. Больная Ф. Диагноз: инфильтративный туберкулез верхней доли правого легкого. Результат посева мокроты отрицательный. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный (IFN-γAG-NIL=0,94МЕ/мл при пороговом значении 0,35МЕ/мл). Содержание IL-2AG-NIL в полученном супернатанте 55пг/мл (>36пг/мл). Результат положительный.

Заключение: больной инфицирован М. tuberculosis.

Пример 2. Сотрудник противотуберкулезного диспансера X. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный (IFN-γAG-NIL=0,37МЕ/мл при пороговом значении 0,35МЕ/мл). Полученное значение очень близко к пороговому.

Содержание IL-2AG-NIL В полученном супернатанте 28 пг/мл при пороговом значении 36 пг/мл. Результат отрицательный.

Результаты рентгенологического обследования: изменений в легочной ткани не выявлено. Жалоб нет. Клинические признаки туберкулеза отсутствуют. Заключение: отсутствие инфицирования М. tuberculosis

Пример 3. Сотрудник противотуберкулезного диспансера X. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): положительный (IFN-γag-nil=0,56 МЕ/мл при пороговом значении 0,35 МЕ/мл. Содержание IL-2Ag-nil в полученном супернатанте 175 пг/мл (>36 пг/мл). Результат положительный.

Заключение: вероятность инфицирования M.tuberculosis.

Пример 4. Сотрудник противотуберкулезного диспансера X. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): отрицательный (IFN-γag-nil=0,34 МЕ/мл). Пороговое значение 0,35 МЕ/мл. Полученное значение очень близко к пороговому. Содержание IL-2Ag-nil В полученном супернатанте 72 пг/мл (превышение порогового значения 36 пг/мл в 2 раза). Результат положительный.

Заключение: вероятность инфицирования М. tuberculosis.

Пример 5. Больной 3. Диагноз: диссеминированный ТБ в фазе инфильтрации и распада. Результат посева мокроты положительный. Результат теста на инфицирование М. tuberculosis (QuantiFERON-TB Gold in-tube): отрицательный (IFN-γag-nil=0,21 МЕ/мл при пороговом значении 0,35 МЕ/мл). Содержание IL-2AG-nil в полученном супернатанте 36 пг/мл (равно пороговому значению 36 пг/мл). Результат положительный.

Таким образом, использование IL-2 в качестве биомаркера позволяет работать в расширенном диапозоне определяемых концентраций, что позволяет избежать получения сомнительных результатов. При анализе небольшого количества периферической крови способ обладает высокой диагностической значимостью в диагностике туберкулезной инфекции. Несомненным преимуществом является удобство для пациента, так как для оценки результатов не требуется повторного посещения врача. Заявляемый способ может использоваться как самостоятельно, так и вместе со способом, основанным на диагностировании гамма-интерферона для уточнения диагноза, особенно при его концентрации в пробе близкой к пороговой.

Способ диагностики туберкулезного инфицирования, включающий в себя взятие периферической крови пациента, инкубацию цельной крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, и без них, центрифугирование проб с отделением плазмы, определение в супернатантах содержания IL-2 и диагностирование наличия заболевания по разнице его концентраций в пробах по сравнению с выбранной пороговой величиной, отличающийся тем, что в качестве пороговой величины устанавливают разницу в концентрации IL-2 между антигениндуцированной и спонтанной его продукцией 36 пг/мл и при разнице в концентрации 36 пг/мл и более делают вывод о туберкулезном инфицировании, а при значении ниже порогового - об отсутствии инфицирования.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии, и может быть использовано для определения активности туберкулезного процесса. Для этого проводят инкубацию цельной крови пациента крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, центрифугирование пробы с отделением плазмы и определение в супернатантах содержания антигениндуцированного гамма-интерферона (IFNγ), антигениндуцированного интерлейкина - 6 (IL-6) и спонтанной продукции трансформирующего ростового фактора-α (TGFα).

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложено моноклональное антитело, которое специфически связывает сульфатиды и сульфатированные протеогликаны, а также фармацевтическая композиция для лечения атеросклероза и набор реагентов для диагностики атеросклеротических повреждений, применение антитела для получения лекарственного средства для лечения атеросклероза и в качестве вакцины.

Изобретение предназначено для определения аутоантител, специфичных к мускариновому М2-рецептору, которое может быть использовано для диагностики идиопатических нарушений сердечного ритма.

Группа изобретений относится к медицине и касается калликреина, его варианта или фрагмента, имеющих общие эпитопы, распознаваемые антителами, с калликреином дикого типа, использующегося для получения диагностической композиции для in vitro диагностики аллергии I типа, где калликреин получен у собаки; способа получения композиции аллергенов, включающего стадию добавления калликреина собаки, или его варианта или фрагмента; способа выделения калликреина из мочи собаки.
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и описывает способ оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной определяют содержание эстрадиола (нмоль/л) и содержание TNFα (пг/мл) иммуноферментным методом, составляют дискриминантное уравнение: Dф=-0,868 × Эстрадиол + (+35,194×TNFα).

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и может быть использовано для оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной определяют содержание эстриола (нмоль/л) и содержание TNFα (пг/мл) иммуноферментным методом, составляют дискриминантное уравнение: Dф=-7,539 × Эстриол + (+8,071 × TNFα).
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и касается способа определения адгезивных свойств бактерий рода Enterococcus. Представленный способ включает подготовку бактериальной суспензии, отделение полученной биомассы бактерий центрифугированием, разведение полученной биомассы в физиологическом растворе, подготовку монослоя клеток СаСо-2, внесение бактериальной культуры, культивирование клеток, промывку физраствором, снятие монослоя с бактериальными клетками и подсчитывание количества связанных с 1000 клетками СаСо-2 бактериальных клеток, при этом бактерии относят к высокоадгезивным, если количество связавшихся клеток составляет от 1010 до 3000, к среднеадгезивным - от 210 до 1000, к низкоадгезивным - от 0 до 200.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Сущность способа: при обострении хронического обструктивного бронхита у женщин с гриппом A(H3N2) во втором триместре гестации осуществляют посредством парных сывороток крови, определяют содержание противогриппозных антител в первой сыворотке крови (титр) (А), различия между максимальной температурой в период разгара заболевания на 2-4 день и максимальной температурой тела на 6-8 день заболевания) (В) и различия концентрации среднемолекулярных пептидов в период разгара на 2-4 день и на 6-8 день заболевания (в единицы оптической плотности) (С).
Изобретение относится к медицине, в частности педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пищевой непереносимости у детей. Сущность заявляемого способа заключается в определении генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов фолатного обмена MTHFR C677T и А1298С, MTRR G66A методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим рестрикционным анализом.

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологической лабораторной диагностике, и может быть использовано для постановки диагноза острой ожоговой токсемии у детей.

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки трансаминирования в синцитиотрофобласте. Сущность способа: гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы. Оценивают нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 и снижении активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы ниже 12,5±0,37 усл. ед., что проявляется увеличением алаттрансаминазы до 0,58±0,002 ммоль/л в гомогенате плаценты.
Настоящее изобретение относится к медицине и направлено на прогнозирование эффективности лечения идиопатического бесплодия у мужчин с ожирением препаратами - ингибиторами ароматазы. Способ включает отбор венозной крови и проведение иммунологического анализа, в котором методом твердофазного хемилюминесцентного иммуноанализа на микрочастицах определяют содержание фолликулостимулирующего гормона и эстрадиола в сыворотке крови, вычисляют показатель К=СЭ/СФСГ, где СФСГ - содержание фолликулостимулирующего гормона, мЕд/мл; СЭ - содержание эстрадиола, пмоль/л. При численном значении показателя К, большем или равном 53, применение ингибиторов ароматазы в лечении идиопатического бесплодия у мужчин с ожирением прогнозируют как эффективное. 1 табл., 2 пр.
Изобретение относится к области ветеринарной протозоологии и касается способа получения антигена для серологической диагностики анаплазмоза мелкого рогатого скота. Предложенный способ включает введение спленэктомированному животному заражающей дозы 14·1010 или 16·107 анаплазм/животное, на 15 или 22-24 соответственно день, проведение обескровливания, центрифугирование крови 2-3 раза при 6000 об/мин в течение часа с физиологическим раствором pH 6,8-7,2, получение осадка анаплазм с форменными элементами крови, проведение 2-3 разовой отмывки физиологическим раствором, разрушение эритроцитов путем 2-3 кратного замораживания и оттаивания, концентрирование 2-3 раза центрифугированием при тех же условиях и выделение антигена с титром 1:32-1:64. Способ позволяет получить чувствительный, высокоактивный и специфичный анаплазменный антиген и найдет применение в ветеринарных лабораториях, занимающихся диагностикой инфекционных и протозойных болезней. 4 табл., 4 пр.
Изобретение относится к медицине, в частности к гастроэнтерологии. Способ обеспечивает повышение точности оценки эффективности лечения у больных язвенным колитом (ЯК) в достижении клинической ремиссии после четырехнедельного курса лечения. После индукционного курса стандартной терапии определяют концентрацию лактоферрина в сыворотке крови, и при значениях выше 874,7±21,6 нг/мл судят об отсутствии достижения клинической ремиссии ЯК. Изобретение позволяет быстро и точно оценить эффективность лечения больных язвенным колитом. 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапии, эндокринологии, диабетологии, лабораторной диагностике. Способ диагностики аутоиммунных вариантов сахарного диабета, причем аутоиммунный вариант сахарного диабета диагностируется на основании сравнения показателей выработки фактора некроза опухоли альфа (ФНОα) (пкг/мл) в надосадочной жидкости после культивирования лимфоцитов, полученных из пробы крови пациента в условиях стимуляции аутоантигеном инсулином. Тест считается положительным, если значение показателя ФНОα в пробе после стимуляции инсулином превышает его значение в условиях отсутствия стимуляции. Заявляемое изобретение дает возможность диагностировать аутоиммунный воспалительный процесс в ткани поджелудочной железы, что позволяет также оценить степень аутоиммунной агрессии на ткань поджелудочной железы. 2 пр.

Изобретение относится к области медицины и предназначено для диагностики вторичной иммунологической недостаточности при туберкулезе легких. До назначения специфической химиотерапии проводят иммунологическое исследование периферической крови больных туберкулезом легких и определяют клеточные, гуморальные и молекулярно-генетические параметры иммунного статуса пациента. При содержании в периферической крови CD4+CD25+Foxp3+ регуляторных Т-клеток более чем 2,6%, CD4+CD25-Foxp3+ регуляторных Т-клеток более чем 5,1%, CD3+CD4-CD25+ регуляторных Т-клеток более чем 0,2%, CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток/Т-хелперов активированных менее чем 25,5%, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов менее чем 35,4%, γδТ-лимфоцитов менее чем 4,9%, CD45R0+ Т-клеток памяти менее чем 8,9%; IL-2 менее чем 22,3 пг/мл, IL-4 более чем 40,0 пг/мл, IL-10 более чем 25,3 пг/мл, TGFβ более чем 1109,0 пг/мл одновременно с носительством аллеля G и генотипа GG T-330G гена IL2 и аллеля А и генотипа АА С-592А гена IL10, аллеля Т и генотипа ТТ С-509Т гена TGFB и аллеля Т и генотипа ТТ С-590Т гена IL4 диагностируют вторичную иммунологическую недостаточность. Изобретение позволяет своевременно диагностировать дефекты иммунной системы у больных туберкулезом легких и применять меры коррекции лечебного воздействия с использованием современных методов иммуномодулирующей терапии. 6 ил., 4 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине и иммунологии и представляет собой новый способ проведения диагностики, основанный на определении белковых молекул - антител - к специфичной и чувствительной комбинации опухоле-ассоциированных гликанов на фоне индивидуальных особенностей конкретного больного. Данное изобретение может найти применение в иммунологии и медицине для исследования и диагностики рака молочной железы. В способе диагностики рака молочной железы детектируют в крови человека антитела, направленные к следующим гликанам: Manβ1-4GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-6(Galβ1-3)GalNAcα, HOCH2(HOCH)4CH2NH2, GlcAβ, Galα, 6-O-Su-GlcNAcβ, GalNAcβ1-3Galβ, 6-O-Su-Galβ1-4(6-O-Su)Glcβ, GlcAβ1-3Galβ, Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ, GlcNAcβ1-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcα, Neu5Acα2-3Galβ1-3(Fucα1-4)GlcNAcβ, Galβ1-4GlcNAcβ1-3(GlcNAcβ1-6)Galβ1-4GlcNAcβ, Neu5Acα2-6(Galβ1-3)GlcNAcβ1-3Galβ1-4Glcβ с помощью микрочипа с нанесенными на него указанными гликанами и, по наличию в крови уровня антител выше порогового одновременно ко всем указанным гликанам, диагностируют рак молочной железы. Предлагаемый способ позволяет улучшить чувствительность и специфичность диагностики рака молочной железы. 1 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к урологии и нефрологии, и может быть использовано для диагностики мочекаменной болезни (уролитиаза). Сущность способа: исходную пробу мочи разделяют на два одинаковых образца, получают гистограммы распределения частиц по размерам, по которой определяют процентное содержание олигомерной формы Т&НЕ(7) белка Тамма-Хорсфалла и сравнивают гистограммы образцов. В качестве реагента для идентификации белка Тамма-Хорсфалла используют моноклональные антитела, вступающие с белком Тамма-Хорсфалла в имунно-афинную реакцию. Из второго образца извлекают белок Тамма-Хорсфалла Т&НЕ(28) и в обоих образцах мочи определяют содержание олигомерной формы Т&НЕ(28) белка Тамма-Хорсфалла в свободном состоянии и в агрегатах с микрокристаллами оксалатов (в %). Затем рассчитывают соотношение выявленных олигомерных форм по формулам: С1=Т&НЕ(28)А/Т&НЕ(7) и C2=T&HE(28)F/T&HE(7). При соотношении С1>1.5 и любом значении соотношения С2 диагностируют уролитиаз, при соотношениях С1<0.1 и С2<1.81 диагностируют отсутствие заболевания, а при соотношениях С<1,5 и С2>1.81 пациента относят к группе риска развития уролитиаза. Способ позволяет проводить разграничение обследуемых не только на группы больных уролитиазом и здоровых, но и выделить группу риска развития уролитиаза. Способ обладает высокой точностью, специфичностью и чувствительностью, не требует больших трудозатрат и времени исследования. 3 ил., 4 табл.

Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью у впервые выявленных больных туберкулезом легких (ТБ). Для этого до назначения противотуберкулезной химиотерапии в крови пациента определяют количество CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов. Вычисляют значения линейных классификационных функций по уравнениям: d1=-14,0015-0,0626×x1+0,5181×x2+2,4285×x3+0,2255×x4 и d2=-22,6954-0,1710×x1+0,6689×x2+3,1202×x3+0,3229×x4, где x1, x2, x3, x4 - количество субпопуляций CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов, соответственно. При d1<d2 прогнозируют туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя. Использование данного способа позволяет прогнозировать вариант течения ТБ с вероятностью 83,3% и позволяет применять меры коррекции лечебного воздействия. 5 ил., 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложено антитело, специфичное к TENB2, содержащее легкую и тяжелую цепи. Тяжелая цепь содержит замену на свободный (реакционноспособный) цистеин А121С, что соответствует А114С (нумерация по Кабату) или А118С (нумерация по Eu). Предложены варианты конъюгата для лечения рака предстательной железы, содержащего антитело, ковалентно связанное с ауристатином, в том числе посредством линкера. Описаны: фармацевтическая композиция для лечения рака предстательной железы, использующая в качестве активного начала антитело или его конъюгат; изделие для лечения рака предстательной железы на основе такой композиции. Предложены: способ определения белка TENB2 в образце - на основе антитела, а также анализ для выявления клеток рака предстательной железы у млекопитающего и способ ингибирования клеточной пролиферации - на основе конъюгата антитела и ауристатина. Описан способ получения конъюгата антитела (Аb) и ауристатина (D) с формулой Ab-(L-D)p, где р равно от 1 до 4, а L - линкер. Использование изобретения обеспечивает конъюгаты с повышенной стабильностью в сыворотке по сравнению с такими же конъюгатами без замены А121С в антителе, что может найти применение в медицине. 9 н. и 24 з.п. ф-лы, 18 ил., 2 табл., 4 пр.
Наверх