Способ оценки нарушения трансаминирования в синцитиотрофобласте в третьем триместре беременности при обострении герпес-вирусной инфекции путем определения гистохимическим методом активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы в синцитиотрофобласте плаценты


 


Владельцы патента RU 2503007:

Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания Сибирского отделения РАМН (RU)

Изобретение относится к области медицины и касается способа оценки трансаминирования в синцитиотрофобласте. Сущность способа: гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы. Оценивают нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 и снижении активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы ниже 12,5±0,37 усл. ед., что проявляется увеличением алаттрансаминазы до 0,58±0,002 ммоль/л в гомогенате плаценты.

 

Изобретение относится к области медицины.

Трансаминазы - ферменты, катализирующие реакцию переноса аминогруппы (NH2 - группы) вместе с протоном (ионом водорода) и парой электронов от аминокислот к кетокислотам. Содержание некоторых аминотрансфераз в крови является важным диагностическим признаком ряда заболеваний (вирусные гепатиты и др.). При вирусном гепатите активность алатаминотрансферазы и аспаратаминотрансферазы резко увеличиваются и служат надежным диагностическим тестом, отличающим его от других заболеваний (Браунштейн А.Е., 1987; Мельникова В.В., 1987).

Активная форма аминотрансфераз образуется в результате присоединения пиридоксальфосфата к аминогруппе лизина прочной альдиминной связью:

Пиридоксальфосфат и его производные являются простетическими группами ряда ферментов, участвующих в обмене аминокислот (реакциях трансаминирования). При недостаточной активности пиридоксальфосфата нарушаются функции пиридоксальзависимых ферментов. При выполнении своей функции пиридоксальфосфат работает в тесной связи с пиридоксальфосфатдегидрогеназой, обеспечивающей ему перенос водорода на кислород (Браунштейн А.Е., 1987; Букин Ю.В., Иванова А.Л., 1976; DunathanH., 1966).

Задачей настоящего изобретения является исследование нарушений трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты у беременных при обострении герпес-вирусной инфекции, используя в качестве маркера этого процесса интенсивность гистохимической реакции на пиридоксальфосфатдегидрогеназу при нарастании в организме беременной агрессивности герпес-вирусной инфекции.

Достигаемым техническим результатом, является определение активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении в третьем триместре беременности герпес-вирусной инфекции, приводящее к увеличению в гомогенате плаценты алаттрансаминазы.

Способ осуществляется следующим образом.

В периферической крови беременных во время обострения герпес-вирусной инфекции методом ИФА определяют титр антител к вирусу герпеса. При титре антител к вирусу герпеса 1:3200 определяют снижение содержания пиридоксальфосфатдегидрогеназы, до 8,9±0,25 усл. ед., а при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 - снижение, соответствует 5,2±0,4 усл. ед.; контроль - 12,5±0,37 усл. ед. При этом увеличивается содержание в гомогенате плаценты количество алаттрансаминазы при титре 1:12800 и до 0,58±0,002 ммоль/л (контроль - 0,15±0,003 ммоль/л).

Для подтверждения причин, подтверждающих достоверность результатов предлагаемого метода исследовали синцитиотрофобласт у 20 беременных, перенесших обострение герпес-вирусной инфекции в третьем триместре гестации на предмет выявления гистохимическим методом активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы. Контролем служила плацента от 10 беременных, не болевших на протяжении всего периода гестации.

Реакция выполнялась по следующему плану:

1. На замораживающем микротоме изготовлялись из нефиксированного материала плаценты срезы, которые монтировали на предметное стекло и помещали в инкубационный раствор, состоящий из следующих ингредиентов:

а) 0,1 М фосфатный буфер, рН 7,6;

б) Пиридоксальфосфат (фирмы «Serva») 25 мг / 1 мл фосфатного буфера;

в) Нитросиний тетразолий (фирма «ICN») 1 мг/мл фосфатного буфера (5 ммоль);

г) НАДФ (фирмы «Serva») 1 мг/мл фосфатного буфера (5 ммоль).

2. Инкубация производилась при 37°С в течение 30 мин.

3. Срезы ополаскивались в дистиллированной воде и заключались в глицерин-желатину.

4. Контрольные срезы инкубировались в среде, содержащей вместо пирицоксальфосфата буферный фосфатный раствор рН 7,6.

Прототипом подобного типа реакций на выявление дегидрогеназ нами использована рекомендация, предложенная Lojda Z. (1965).

5. После изготовления срезы просматривались под электрофотомикроскопом «Opton» (Германия), а участки срезов, как контрольных, так и опытных препаратов фотографировали на одну пленку «Kodak color» (USA). После проявки сфотографированные участки цитофотометрировали помощью компьютерной программы, предложенной «Mekos» (цитофотометрическая установка). Регистрационное удостоверение МЗ РФ 29/10010198/1282-01, изделие не подлежит обязательной сертификации. Руководство по эксплуатации 27543786.9443 001 РЭ.

6. Цитофотометрирование производилось при одном и том же зонде - 0,1 мм × 0,1 мм.

7. Титр антител к вирусу герпеса определяли иммуноферментным методом на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA).

8. Содержание алаттрансаминазы в гомогенате плаценты определяли на спектрофотометре «Stat-Fax-2100» (USA) с наборами фирмы «Вектор Бест».

Исследования показали, что при обострении герпес-вирусной инфекции в третьем триместре гестации в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при титре антител к вирусу герпеса 1:3200 интенсивность реакции на пиридоксальфосфатдегидрогеназу снижалась и составляла 8,9±0,25 усл. ед., а при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 интенсивность реакции на пиридоксальфосфатдегидрогеназу снижалась до 5,2±0,4 усл. ед.; контроль - 12,5±0,37 усл. ед. Это приводило к увеличению содержания алаттрансаминазы в гомогенате плаценты при титре антител 1:3200 до 0,25 ммоль/л и при титре антител к вирусу герпеса до 0,58±0,002 ммоль/л; контроль - 0,15±0,003 ммоль/л.

Таким образом, оценивая интенсивность активности пиридоксальфосфатдегидрогеназы в синцитиотрофобласте плаценте беременных при обострении герпес-вирусной инфекции, было установлено, что при обострении герпесной инфекции происходят процессы, нарушающие трансаминирования белков в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, так как снижается активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы, что приводит к увеличению содержания алаттрансаминазы до 0,58±0,002 ммоль/л.

На основании проведенных исследований, установлено, что при обострении во время беременности герпес-вирусной инфекции в третьем триместре гестации интенсивность реакции на пиридоксальфосфатдегидрогеназу в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты снижается по мере нарастания агрессивности инфекции. При титре антител к вирусу герпеса 1:3200 интенсивность реакции на пиридоксальфосфатдегидрогеназу снижается и составляет 8,9±0,25 усл. ед. При титре антител к вирусу герпеса 1:12800 - 5,2±0,4 усл. ед. Контроль - 12,5±0,37 усл. ед.

Таким образом, при активизации герпес-вирусной инфекции в третьем триместре беременности подавляется в синцитиотрофобласте реакция на пиридоксальфосфатдегидрогеназу и при активности ее ниже 12,5±0,37 усл. ед. отмечается нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты, что проявляется увеличением в гомогенате плаценты алаттрансаминазы до 0,58±0,002 ммоль/л; контроль - 0,15±0,003 ммоль/л.

Источники информации

1. Браунштейн А.Е, Шемякин М.М. Теория процессов аминокислотного обмена, катализируемых пиридоксалевыми энзимами. Биохимия. - 1953. - т.18, №4. - 393 с.

2. Браунштейн А.Е. Процессы и ферменты клеточного метаболизма. М., 1987, 250 с.

3. Букин Ю.В., Иванова А.Л. Распределение и активность пиридоксалькиназы в мозге человека в процессе онтогенеза. Биохимия. - 1976, т.41. - 81 с.

4. Мельникова В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. М., 1987. - 186 с.

5. Dunathan H. Conformation and reaction specificity in pyridoxal phosphate enzymes. Proc. nat. Acad. Sci. (Wash), 1966. - vol.55. - 712 p.

6. Lojda Z. Remarks on histochemical detection of dehydrogenases. Intracellular localization. Folia Morphology, 1965, №3, p.84-96.

Способ оценки нарушения трансаминирования в синцитиотрофобласте в третьем триместре беременности при обострении герпес-вирусной инфекции, характеризующийся тем, что гистохимическим методом определяют активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы и при титре антител к вирусу герпеса 1:12800 снижается активность пиридоксальфосфатдегидрогеназы ниже (12,5±0,37) усл. ед. и оценивают нарушение трансаминирования в синцитиотрофобласте плаценты, что проявляется увеличением алаттрансаминазы до (0,58±0,002) ммоль/л в гомогенате плаценты.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к клинической медицине, а именно к способу диагностики туберкулезного инфицирования. Сущность способа состоит в том, что осуществляют взятие периферической крови пациента, проводят инкубацию цельной крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, и без них, центрифугирование проб с отделением плазмы, определение в супернатантах содержание IL-2 и диагностирование наличия заболевания по разнице его концентраций в пробах по сравнению с выбранной пороговой величиной.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии и иммунологии, и может быть использовано для определения активности туберкулезного процесса. Для этого проводят инкубацию цельной крови пациента крови с микобактериальными антигенами, представляющими собой смесь белков ESAT-6, CFP-10, ТВ 7.7, центрифугирование пробы с отделением плазмы и определение в супернатантах содержания антигениндуцированного гамма-интерферона (IFNγ), антигениндуцированного интерлейкина - 6 (IL-6) и спонтанной продукции трансформирующего ростового фактора-α (TGFα).

Настоящее изобретение относится к области иммунологии и биотехнологии. Предложено моноклональное антитело, которое специфически связывает сульфатиды и сульфатированные протеогликаны, а также фармацевтическая композиция для лечения атеросклероза и набор реагентов для диагностики атеросклеротических повреждений, применение антитела для получения лекарственного средства для лечения атеросклероза и в качестве вакцины.

Изобретение предназначено для определения аутоантител, специфичных к мускариновому М2-рецептору, которое может быть использовано для диагностики идиопатических нарушений сердечного ритма.

Группа изобретений относится к медицине и касается калликреина, его варианта или фрагмента, имеющих общие эпитопы, распознаваемые антителами, с калликреином дикого типа, использующегося для получения диагностической композиции для in vitro диагностики аллергии I типа, где калликреин получен у собаки; способа получения композиции аллергенов, включающего стадию добавления калликреина собаки, или его варианта или фрагмента; способа выделения калликреина из мочи собаки.
Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и описывает способ оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной определяют содержание эстрадиола (нмоль/л) и содержание TNFα (пг/мл) иммуноферментным методом, составляют дискриминантное уравнение: Dф=-0,868 × Эстрадиол + (+35,194×TNFα).

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим методам, и может быть использовано для оценки угрозы выкидыша эмбриона у беременной. Способ характеризуется тем, что в первом триместре гестации при обострении цитомегаловирусной инфекции до титра 1:1600 в периферической крови беременной определяют содержание эстриола (нмоль/л) и содержание TNFα (пг/мл) иммуноферментным методом, составляют дискриминантное уравнение: Dф=-7,539 × Эстриол + (+8,071 × TNFα).
Изобретение относится к области микробиологии и биотехнологии и касается способа определения адгезивных свойств бактерий рода Enterococcus. Представленный способ включает подготовку бактериальной суспензии, отделение полученной биомассы бактерий центрифугированием, разведение полученной биомассы в физиологическом растворе, подготовку монослоя клеток СаСо-2, внесение бактериальной культуры, культивирование клеток, промывку физраствором, снятие монослоя с бактериальными клетками и подсчитывание количества связанных с 1000 клетками СаСо-2 бактериальных клеток, при этом бактерии относят к высокоадгезивным, если количество связавшихся клеток составляет от 1010 до 3000, к среднеадгезивным - от 210 до 1000, к низкоадгезивным - от 0 до 200.
Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству. Сущность способа: при обострении хронического обструктивного бронхита у женщин с гриппом A(H3N2) во втором триместре гестации осуществляют посредством парных сывороток крови, определяют содержание противогриппозных антител в первой сыворотке крови (титр) (А), различия между максимальной температурой в период разгара заболевания на 2-4 день и максимальной температурой тела на 6-8 день заболевания) (В) и различия концентрации среднемолекулярных пептидов в период разгара на 2-4 день и на 6-8 день заболевания (в единицы оптической плотности) (С).
Изобретение относится к медицине, в частности педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования развития пищевой непереносимости у детей. Сущность заявляемого способа заключается в определении генотипов и аллелей полиморфных вариантов генов фолатного обмена MTHFR C677T и А1298С, MTRR G66A методом полимеразной цепной реакции синтеза ДНК с последующим рестрикционным анализом.

Изобретение относится к области медицины, в частности к неврологии. Предложен способ дифференциальной диагностики геморрагического и ишемического типов инсультов в остром периоде.
Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно ветеринарной паразитологии. Способ культивирования ооцист эймерий крупного рогатого скота, включающий микроскопирование процесса споруляции, отличающийся тем, что используют флотационный раствор, приготовленный из 1,5 кг технической гранулированной аммиачной селитры и 1 л кипяченой воды, с помощью которого в медицинских стаканчиках суспензируют 3 г исследуемых фекалий с 50 мл раствора, суспензию процеживают через металлическое сито, отстаивают 5 минут, шприцом без иглы отсасывают 12 мл верхнего слоя, переносят в центрифужные пробирки, центрифугируют 1 минуту при 1500 об/мин, поверхностную пленку (1-2 капли) снимают проволочной петлей и переносят на обезжиренное предметное стекло с овалом, прочерченным восковым карандашом, добавляют 3-4 капли водопроводной воды, предметные стекла кладут на штатив, затем штатив помещается в эксикатор, а далее ставят в термостат с температурой 25-28°C и ежедневно микроскопируют на наличие процессов споруляции.

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ повышения эффективности наступления беременности, заключающийся в том, что осуществляют с учетом состояния системы фибринолиза по индексу активирующей фибринолиз способности эндотелия и при его значениях менее 11,0 ед.

Изобретение относится к области фармацевтики и биологии и представляет собой способ получения жизнеспособной гетерогенной популяции клеток кожи, включающий забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9% водном растворе хлорида натрия при температуре +23…+25°C, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23…+25°C.

Изобретение относится к области иммунологии, лабораторной диагностике и предназначено для выявления повышенной активированности Т-лимфоцитов. Сущность способа: у обследуемых лиц производится забор крови из вены и выделение из нее лимфоцитов.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии. У пациента с острым инфарктом миокарда (ОИМ) при госпитализации снимают ЭКГ, делают клинический и биохимический анализы крови, анализируют анамнез.
Изобретение относится к области медицины, а именно к кардиологии. Для прогнозирования неблагоприятного годового исхода у пациентов с острым коронарным синдромом с подъемом сегмента ST, подвергшихся чрескожному коронарному вмешательству, проводят анализ результатов клинических и лабораторных методов исследования.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ оценки морфофункционального состояния индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) больных паркинсонизмом путем проведения их дифференцировки в дофаминергические нейроны, для чего воздействуют на ИПСК факторами, индуцирующими их дифференцировку в дофаминергические нейроны, а затем высаживают их на мультиэлектродную матрицу, обработанную опорным субстратом матригель/фибронектин, после чего, начиная с 3-5 дня вплоть до 8-10 дня, проводят динамическую регистрацию сетевой спонтанной биоэлектрической активности и при наличие к 3-5 дню сетевой спонтанной биоэлектрической активности в виде одиночных спайков, а к 8-10 дню упорядоченной пачечной спайковой активности на сформированном на микроэлектродах монослое оценивают морфофункциональное состояние как нейрональную направленность дифференцировки ИПСК в дофаминергические нейроны.
Изобретение относится к медицине, а именно к способу прогнозирования невынашивания беременности в ранние сроки. Сущность изобретения состоит в том, что у беременных женщин с выявленной урогенитальной инфекцией в 1 триместре проводят определение в слизи цервикального канала уровня MIP-1α.
Изобретение относится к области биохимии и микробиологии и может быть использовано для определения липолитической активности в субклеточных фракциях бактерий. Сущность способа состоит в том, что среда, содержит агарозу или агар (500 мг), неионный детергент (50 мкл), хлористый кальций (12,5 мг), 0,05 М Трис-HCl буфер pH 8,3 (до 100 мл), причем после застывания среды в ней делают лунки, в которые вносят исследуемый образец в объеме 10-50 мкл на одну лунку, затем среду с исследуемым образцом инкубируют при 37°C в течение 12 часов и визуально определяют наличие или отсутствие липолитической активности в исследуемом образце.

Изобретение относится к области медицины, а именно к терапии, кардиологии, патофизиологии, биохимии и фармакологии. Для оценки развития ишемической болезни сердца рассчитывают значение дискриминантной функции по набору показателей: возраст, рост, вес, индекс Кетле, константа Брока, абдоминальное ожирение, триглицериды, общий холестерин, холестерин липопротеидов высокой плотности, холестерин липопротеидов низкой плотности, холестерин липопротеидов очень низкой плотности, коэффициент атерогенности, артериальное давление, глюкоза, аланинаминотрансфераза, аспартатаминотрансфераза, лактатдегидрогеназа, α-амилаза, общий белок, альбумин, мочевая кислота, мочевина, креатинин, креатинкиназа, щелочная фосфатаза, билирубин общий, билирубин прямой, АДФ-индуцированная агрегация тромбоцитов, коллаген-индуцированная агрегация тромбоцитов, количество тромбоцитов, средний объем тромбоцита, количество эритроцитов, гематокрит, гемоглобин, средний объем эритроцита, коэффициент распределения эритроцитов по объему, среднее содержание гемоглобина в крови, количество лейкоцитов, процент сегментоядерных нейтрофилов, процент эозинофилов, процент базофилов, процент лимфоцитов, процент моноцитов, среднее содержание гемоглобина в эритроците. На основании полученного значения дискриминантной функции делают вывод о наличии начала развития ИБС, 50% риска развития заболевания или 100% развитии ИБС. Способ позволяет провести индивидуальную количественную оценку развития ишемической болезни сердца в зависимости от пола пациента, на основании значения дискриминантной функции. 5 ил., 2 табл., 2 пр.
Наверх