Сшивающие реагенты и их применение

Изобретение относится к конъюгатам антитело-лекарственный препарат, содержащим заряженные линкеры, сшивающим реагентам, фармацевтическим композициям, включающим конъюгаты антитело-лекарственный препарат. 7 н. и 44 з.п. ф-лы, 72 ил, 3 табл., 8 пр.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Конъюгат антитело-лекарственный препарат формулы (II):

где СВ означает антитело;
D означает майтансиноид, соединенный с антителом дисульфидной, тиоэфирной, сложнотиоэфирной, пептидной, гидразоновой, эфирной, сложноэфирной, карбаматной или амидной связью;
R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ являются одинаковыми или разными и означают Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил или алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода, заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа SO₃ ^-, X-SO₃ ^-, OPO₃ ^2-, X-OPO₃ ^2-, PO₃ ^2-, X-PO₃ ^2-, и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, либо фенил, причем:
R₁₁, R₁₂ и R₁₃ являются одинаковыми или разными и означают линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, а Х означает фенил или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода;
l, m и n равны 0 или целому числу от 1 до 4;
А означает фенил или замещенный фенил, причем заместителем является линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, или же заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа SO₃ ^-, X-SO₃ ^-, OPO₃ ^2-, X-OPO₃ ^2-, PO₃ ^2-, X-PO₃ ^2-, CO₂ ^- и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, где Х имеет те же значения, что и выше, a g=0 или 1;
Z отсутствует или означает звено полиэтиленокси формулы (OCH₂CH₂)_p, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, либо звено F1-E1-P-E2-F2, в котором Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O, О или NR₁₄, где R₁₄ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил иди алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода; Р означает пептидпое звено длиной от 2 до 20 аминокислот, причем Е1 или Е2 может соединяться с пептидом через концевой азот, концевой углерод или через боковую цепь одной из аминокислот пептида; a F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, при условии, что если Z не F1-E1-P-E2-F2, то по меньшей мере один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, а если g=1, то по меньшей мере один из A, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем; и
Y означает карбонильную, тиоэфирную, амидную, дисульфидную или гидразоновую группу; a q означает целое число от 1 до 20.

2. Конъюгат по п.1, в котором D представляет собой DM4.

3. Конъюгат по п.1, в котором антитело представляет собой одпоцепочечное антитело, фрагмент антитела, который связывается с клетками мишени, моноклональное антитело, одноцепочечное моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела, который связывается с клетками мишени, химерное антитело, фрагмент химерного антитела, который связывается с клетками мишени, доменное антитело, или фрагмент доменного антитела, который связывается с клетками мишени.

4. Конъюгат по п.3, в котором антитело представляет собой перестроенное антитело, перестроенное одноцепочечное антитело или фрагмент перестроенного антитела.

5. Конъюгат по п.3, в котором антитело представляет собой моноклональное антитело, одпоцепочечное моноклональное антитело или фрагмент моноклонального антитела.

6. Конъюгат по п.3, в котором антитело представляет собой человеческое антитело, гуманизованное антитело или перестроенное антитело, гуманизованное одноцепочечное антитело или фрагмент гуманизованного антитела.

7. Конъюгат по п.3, в котором антитело представляет собой химерное антитело, фрагмент химерного антитела, доменное антитело или фрагмент доменного антитела.

8. Конъюгат по п.6, в котором антитело представляет собой антитело Му9-6, В4, С242, N901, DS6, против ЕрСАМ, к рецептору EphA2, CD38, IGF-IR, CNTO 95, В-В4, трастузумаб, пертузумаб, биватузумаб, сибротузумаб или ритуксимаб.

9. Конъюгат по п.1, в котором связанные с антителом опухолевые клетки выбраны из клеток рака молочной железы, рака простаты, рака яичников, рака толстой и прямой кишки, рака желудка, плоскоклеточного рака, мелкоклеточного рака легких или рака яичка.

10. Способ лечения опухолей, включающий введение нуждающемуся в лечении субъекту терапевтически эффективного количества конъюгата по п.1.

11. Сшивающий реагент, представленный формулой (I):

где Y' означает функциональную группу, создающую возможность реакции с антителом;
Q означает функциональную группу, создающую возможность присоединения майтансиноида через дисульфидную, тиоэфирную, сложнотиоэфирную, пептидную, гидразоновую, эфирную, сложноэфирную, карбаматную или амидную связь;
R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ являются одинаковыми или разными и означают Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил иди алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода, заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа , , , , , , и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, либо фенил, причем:
R₁₁, R₁₂ и R₁₃ являются одинаковыми или разными и означают линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, а Х означает фенил или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода;
l, m и n равны 0 или целому числу от 1 до 4;
А означает фенил или замещенный фенил, причем заместителем является линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, или же заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа , , , , , , и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, где Х имеет те же значения, что и выше, a g=0 или 1; и
Z отсутствует или означает звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, либо звено F1-E1-P-E2-F2, в котором Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O, О или NR₁₄, где R₁₄ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил иди алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 20 аминокислот, причем Е1 или Е2 может соединяться с пептидом через концевой азот, концевой углерод или через боковую цепь одной из аминокислот пептида; a F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_p, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, при условии, что если Z не F1-E1-P-E2-F2, то по меньшей мере один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, а если g=1, то по меньшей мере один из A, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем.

12. Соединение формулы (III):

где СВ означает антитело;
Q означает функциональную группу, создающую возможность присоединения майтансиноида через дисульфидную, тиоэфирную, сложнотиоэфирную, пептидную, гидразоновую, эфирную, сложноэфирную, карбаматную или амидную связь;
R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ являются одинаковыми или разными и означают Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил иди алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода, заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа , , , , , , и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, либо фенил, причем:
R₁₁, R₁₂ и R₁₃ являются одинаковыми или разными и означают линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, а Х означает фенил или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода;
l, m и n равны 0 или целому числу от 1 до 4;
А означает фенил или замещенный фенил, причем заместителем является линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, или же заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа , , , , , , и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N+R₁₁R₁₂R₁₃ или Х-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, где Х имеет те же значения, что и выше, a g=0 или 1;
Z отсутствует или означает звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, либо звено F1-E1-P-E2-F2, в котором Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O, О или NR₁₄, где R₁₄ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил или алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 20 аминокислот, причем Е1 или Е2 может соединяться с пептидом через концевой азот, концевой углерод или через боковую цепь одной из аминокислот пептида; a F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, при условии, что если Z не F1-E1-P-E2-F2, то по меньшей мере один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, а если g=1, то по меньшей мере один из А, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем; и
Y означает карбонильную, тиоэфирную, амидную, дисульфидную или гидразоновую группу; a q означает целое число от 1 до 20.

13. Соединение формулы (IV):

где Y' означает функциональную группу, создающую возможность реакции с антителом;
D означает майтансиноид, соединенный с антителом через дисульфидную, тиоэфирную, сложнотиоэфирную, пептидную, гидразоновую, эфирную, сложноэфирную, карбаматную или амидную связь;
R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ являются одинаковыми или разными и означают Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил иди алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода, заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа , , , , , , и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или Х-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, либо фенил, причем:
R₁₁, R₁₂ и R₁₃ являются одинаковыми или разными и означают линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, а Х означает фенил или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода;
l, m и n равны 0 или целому числу от 1 до 4;
А означает фенил или замещенный фенил, причем заместителем является линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, либо разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, или же заряженный заместитель, выбранный из анионов из числа , , , , , , и катионов из числа азотсодержащих гетероциклических соединений, N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ или X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, где Х имеет те же значения, что и выше, a g=0 или 1; и
Z отсутствует или означает звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, либо звено F1-E1-P-E2-F2, в котором Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O, О или NR₁₄, где R₁₄ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода, линейный, разветвленный или циклический алкенил иди алкинил, содержащий 2-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 20 аминокислот, причем Е1 или Е2 может соединяться с пептидом через концевой азот, концевой углерод или через боковую цепь одной из аминокислот пептида; a F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтилснокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 1000, при условии, что если Z не F1-E1-P-E2-F2, то по меньшей мере один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, а если g=1, то по меньшей мере один из А, R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, R₆, R₇, R₈, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем.

14. Фармацевтическая композиция, обладающая цитотоксическим эффектом, включающая эффективное количество конъюгата по п.1 либо его фармацевтически приемлемой соли, а также фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

15. Конъюгат по любому из пп.1 и 3-8, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, выбранным из , , , , N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ и X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1.

16. Конъюгат по любому из пп.1-9, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ представляет собой или , а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; D присоединен через дисульфидную, тиоэфирную или сложнотиоэфирную связь.

17. Конъюгат по любому из пп.1-9, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ представляет собой SO^3- или X-SO^3-, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1.

18. Конъюгат по любому из пп.1-9, в котором Z представляет собой звено F1-E1-P-E2-F2, где Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O или NR¹⁴, где R¹⁴ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, или разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 8 аминокислот.

19. Конъюгат по п.18, где R¹⁴ означает Н или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода; и Р означает пептидное звено длиной от 2 до 5 аминокислот; и F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 24.

20. Конъюгат по п.19, где р=0.

21. Конъюгат по п.20, где Р означает gly-gly-gly.

22. Конъюгат по п.1, который представлен следующей формулой:

где D означает майтансиноид.

23. Конъюгат по п.22, в котором D представляет собой DM4.

24. Фармацевтическая композиция, обладающая цитотоксическим эффектом, включающая эффективное количество конъюгата по любому из пп.1-9 и 15-23 либо его фармацевтически приемлемой соли, а также фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.

25. Сшивающий реагент по п.11, где Y' означает реагирующий с амином реагент.

26. Сшивающий реагент по п.25, где реагирующий с амином реагент выбран из группы, состоящей из сложных эфиров N-гидроксисукцинимида, сложных эфиров п-нитрофенила, сложных эфиров динитрофенила, сложных эфиров пентафторфенила.

27. Сшивающий реагент по п.11, где Y' означает реагирующий с тиолом реагент.

28. Сшивающий реагент по п.27, где реагирующий с тиолом реагент выбран из группы, состоящей из пиридилдисульфидов, нитропиридилдисульфидов, малеимидов, галоацетатов и сложных эфиров карбоновых кислот.

29. Сшивающий реагент по п.11, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄ R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, выбранным из , , , , N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ и X-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; и Q и Y', независимо друг от друга, означают дисульфид, малеимид, галоацетил или сложный эфир N-гидроксисукцинимида.

30. Сшивающий реагент по п.11, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ представляет SO^3- или X-SO^3-, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; Q означает дисульфид, малеимид или галоацетил; и Y' означает малеимид или сложный эфир N-гидроксисукцинимида.

31. Сшивающий реагент по п.30, где Q означает пиридилдитио- или нитропиридилдитиогруппу, группу малеимида или галоацетила; а Y' означает сложный эфир N-гидроксисукцинимида.

32. Сшивающий реагент по п.11, в котором в котором Z представляет собой звено F1-E1-P-E2-F2, где Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O или NR¹⁴, где R¹⁴ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, или разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 8 аминокислот.

33. Сшивающий реагент по п.32, где R¹⁴ означает Н или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода; и Р означает пептидное звено длиной от 2 до 5 аминокислот; и F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_р, где р=0 или целому числу от 2 до 24.

34. Сшивающий реагент по п.33, где р=0.

35. Сшивающий реагент по п.34, где Р означает gly-gly-gly.

36. Сшивающий реагент по п.11, который представлен следующей формулой:
;
;
;
; или
.

37. Соединение по п.12, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, выбранным из , , , , N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ и Х-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; Q означает группу дисульфида, малеимида, галоацетила или сложного эфира N-гидроксисукцинимида; и Y означает тиоэфир, амид или дисульфид.

38. Соединение по п.12, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ является SO^3- или X-SO^3-, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; Q означает группу дисульфида, малеимида или галоацетила; и Y означает тиоэфир, амид или дисульфид.

39. Соединение по п.38, где Q означает пиридилдитио- или нитропиридилдитиогруппу.

40. Соединение по п.12, в котором Z представляет собой звено F1-E1-P-E2-F2, где Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и изначают С=O или NR¹⁴, где R¹⁴ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, или разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 8 аминокислот.

41. Соединение по п.40, где R¹⁴ означает Н или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода; и Р означает пептидное звено длиной от 2 до 5 аминокислот; и F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (ОСН₂СН₂)_p, где р=0 или целому числу от 2 до 24.

42. Соединение по п.41, где р=0.

43. Соединение по п.42, где Р означает gly-gly-gly.

44. Соединение по п.13, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, выбранным из , , , , N⁺R₁₁R₁₂R₁₃ и Х-N⁺R₁₁R₁₂R₁₃, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; Y' означает группу дисульфида, малеимида, галоацетила или сложного эфира N-гидроксисукципимида.

45. Соединение по п.13, в котором один из R₁, R₂, R₃, R₄, R₉ и R₁₀ является заряженным заместителем, выбранным из SO^3- или X-SO^3-, а остальные - Н; l, g и m каждый равен 0; n равен 1; и Y' означает группу малеимида или сложного эфира N-гидроксисукцинимида.

46. Соединение по п.44, где Y' означает сложный эфир N-гидроксисукцинимида.

47. Соединение по п.13, в котором Z представляет собой звено F1-E1-P-E2-F2, где Е1 и Е2 являются одинаковыми или разными и означают С=O или NR¹⁴, где R¹⁴ означает Н, линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода, или разветвленный или циклический алкил, содержащий 3-6 атомов углерода; Р означает пептидное звено длиной от 2 до 8 аминокислот.

48. Соединение по п.47, где R¹⁴ означает Н или линейный алкил, содержащий 1-6 атомов углерода; и Р означает пептидное звено длиной от 2 до 5 аминокислот; и F1 и F2 являются одинаковыми или разными и означают необязательное звено полиэтиленокси формулы (OCH₂CH₂)_p, где р=0 или целому числу от 2 до 24.

49. Соединение по п.48, где р=0.

50. Соединение по п.49, где Р означает gly-gly-gly.

51. Соединение по любому из пп.13 и 44-50, в котором D представляет собой DM4.